CN116138384A - 一种利用柚苷酶橙汁脱苦的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及食品加工技术领域，提供了一种利用柚苷酶橙汁脱苦的方法，首先通过原位合成法制备CoTPc‑Fe3O4磁性纳米粒子，然后通过原位聚合法制备有机/无机纳米复合水凝胶，重复冻融处理后将复合凝胶冻干，最后通过交联法得到固定化柚苷酶，将固定化柚苷酶和橙汁混合后搅拌酶解处理一段时间，完成橙汁的脱苦。本发明采用固定化酶对橙汁脱苦，安全高效、成本较低，脱苦率在95％以上，脱苦后的果汁极大程度上保留了营养成分，保持了原果汁的风味；可利用磁性回收固定化酶重复利用，循环使用10次后，脱苦率仍保持在90％以上，具有良好的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及食品加工技术领域，尤其涉及一种利用柚苷酶橙汁脱苦的方法。
背景技术
柑橘类果汁在加工过程中，会出现过度苦味或称为“后苦味”，引起柚汁和葡萄柚汁出现苦味的主要成分是柚皮苷等，引起橙汁苦味的主要成分是柠碱等。柑橘汁在加工过程中，对影响其品质的许多物质必须进行处理，尤其是出现的过度苦味已成为柑橘加工业所面临的严重问题，使产品质量下降，不为消费者所接受。因此果汁在加工过程中必须进行脱苦，以提高产品的质量。通过物理、化学或酶解等降低苦味的方法即称为“脱苦”。
柚苷酶是由α-L-鼠李糖苷酶和β-D-葡萄糖苷酶组成的混合酶，α-L-鼠李糖苷酶将柑橘类果汁中的柚皮甘水解为鼠李糖和普鲁宁(普鲁宁的苦味约为柚皮苷的1/3)，普鲁宁在β-D-葡萄糖苷酶的继续作用下生成无苦味的柚配质和葡萄糖，从而实现柑橘类果汁的脱苦。在使用过程中，游离柚苷酶对周围环境十分铭感，在极端pH值、温度等因素的作用容易失活，因此游离柚苷酶在果汁脱苦过程中存在耐受性差的问题，以及使用后不可重复利用、与果汁难以分离的问题。近年来，研究者们采用了不同材料进行固定化柚苷酶研究，如壳聚糖、海藻酸钠、蚕丝蛋白等天然生物高分子材料，环氧树脂、聚乙烯醇等有机化合物，活性炭、氧化石墨烯等碳材料等，虽然均有一定的研究成果，但在实际脱苦应用中，仍然存在固定化酶与果汁难以分离或脱苦效率较差的问题。
发明内容
本发明旨在至少克服上述现有技术的缺点与不足其中之一，提供一种利用柚苷酶橙汁脱苦的方法。本发明目的基于以下技术方案实现：
本发明提供了一种利用柚苷酶橙汁脱苦的方法，包括以下步骤：
S1、将水溶性钴酞菁溶于水，调节pH为7.5～8.5，依次加入FeCl3溶液和FeCl2溶液混合均匀，加入NaOH溶液或氨水调节混合液的pH为9～10.5，超声1～2h，分离所得固体产物，洗涤，干燥，得到CoTPc-Fe3O4磁性纳米粒子；
S2、将CoTAPc-Fe3O4磁性纳米粒子分散在乙醇中，加入聚乙烯醇、2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯、丙烯酸并分散20～60min，加入引发剂过硫酸钾和亚硫酸氢钠搅拌反应8～15min，真空除泡，然后置于玻璃容器中室温反应20～30h，将所得溶胶用水浸泡一定时间以除去多余的反应物，得到有机/无机纳米复合水凝胶，重复冻融处理后将复合水凝胶进行冷冻干燥，得到冻干的有机/无机纳米复合水凝胶；
S3、将柚苷酶发酵液和缓冲液按照一定的比重混合混合，加入冻干的有机/无机纳米复合水凝胶进行水浴震荡反应，将反应完成的复合水凝胶放入冰箱里冷藏，然后取出并洗去复合水凝胶未结合的柚苷酶，然后将其放入戊二醛溶液中进行交联，交联结束后取出，洗去复合水凝胶表面未结合的物质，得到固定化柚苷酶；
S4、将固定化柚苷酶和橙汁混合，搅拌酶解处理一段时间，完成橙汁的脱苦。
本发明的制备方法简单，CoTPc-Fe3O4磁性纳米粒子呈球形结构，粒子平均尺寸在60nm左右，水溶性钴酞菁与Fe3O4纳米粒子形成了化学键在Fe3O4纳米粒子表面进行复合，形成了包覆型的纳米结构，且接近超顺磁性，很好的保留了Fe3O4纳米粒子的磁性。将水溶性钴酞菁与FeCl3和FeCl2原位合成磁性纳米粒子，有利于水溶性钴酞菁与Fe3O4纳米粒子的复合形成稳定的结构，粒子尺寸分布均匀，且保持了水溶性钴酞菁的催化活性；此外，水溶性钴酞菁在反应过程中只需加入水作为溶剂，杜绝有机溶剂带来的危害。进一步地，通过原位聚合法制备有机/无机纳米复合水凝胶，单体分子小、粘度低，使得磁性纳米粒子容易在水凝胶基体中均匀分散，所得复合水凝胶为较好的球形结构，且具有良好的顺磁性，有利于橙汁脱苦后的分离回收；并且凝胶和磁性纳米粒子之间通过强大的氢键作用力连接，结合强度高。在单体中加入聚乙烯醇，聚合使能形成复杂交错的凝胶结构，增强凝胶的氢键作用，提高溶胶的溶胀比。复合凝胶经过重复冻融处理，其抗张强度和弹性模量增加，有利于柚苷酶的固定和回收。冻干处理使得部分凝胶形成了比较规则的三维微孔结构，且微孔之间互相连通；这是因为凝胶中含有水分，所以在冷冻时形成了小冰晶，再将水凝胶进行冷冻干燥后，这些小冰晶就会挥发而形成微孔结构，使凝胶具有大量的孔洞，柚苷酶分子可以很容易地被固定在凝胶中，可以提高酶负载量和稳定性。最后通过交联法在冻干的复合水凝胶上固定柚苷酶，以交联法固定酶具有稳定性好、不易脱落等优点。本发明所得固定化酶的酶负载量高，并且具有优异的酶活性、热稳定性、贮存稳定性和操作稳定性，可利用其磁性进行回收、操作简便，循环使用性能良好。
优选地，步骤S1中所述水溶性钴酞菁包括丁二酸酰胺基钴酞菁和/或丁二烯酸酰胺基钴酞菁，既溶于水，又具有良好的催化活性，可促进橙汁脱苦反应的进行；尤其是丁二烯酸酰胺基钴酞菁，取代基还有乙烯基，可以和其他含烯基单体共聚或接枝高分子，有利于凝胶与磁性纳米粒子的复合，提高结合强度。
优选地，步骤S1中所述CoTPc-Fe3O4磁性纳米粒子中水溶性钴酞菁的含量为0.1～10wt％。
优选地，步骤S1中所述FeCl3和FeCl2的摩尔比为1：1.8～2.5，所述NaOH溶液的浓度为0.8～1.8mol/L。
优选地，步骤S2中所述有机/无机纳米复合水凝胶中CoTPc-Fe3O4磁性纳米粒子的含量为1～30wt％。
优选地，步骤S2中所述重复冻融处理为-30～-15℃冷冻12～20h，然后室温下解冻6～10h，重复操作2～4次。
优选地，步骤S3中所述缓冲液为柠檬酸-磷酸二氢钠缓冲液，所述缓冲液的pH为3～5.5。
优选地，步骤S3中所述柚苷酶发酵液的给酶量为300～550U/mL，所述水浴震荡反应的温度为30～50℃。
优选地，步骤S3中所述戊二醛溶液的浓度为0.5～1.2wt％，所述交联的时间为1～4h。
优选地，步骤S4中所述搅拌酶解处理包括控制pH为3.5～5.5，反应时间20～40min，反应温度30～60℃。
本发明可至少取得如下有益效果其中之一：
1、本发明通过原位合成法制备CoTPc-Fe3O4磁性纳米粒子，有利于水溶性钴酞菁与Fe3O4纳米粒子的复合形成稳定的结构，粒子尺寸分布均匀，且保持了水溶性钴酞菁的催化活性和Fe3O4的磁性；通过原位聚合法制备有机/无机纳米复合水凝胶，所得复合水凝胶为较好的球形结构，且具有良好的顺磁性，有利于橙汁脱苦后的分离回收；并且凝胶和磁性纳米粒子之间通过强大的氢键作用力连接，结合强度高。复合凝胶经过重复冻融处理，其抗张强度和弹性模量增加，有利于柚苷酶的固定和回收。冻干处理使得部分凝胶形成了比较规则的三维微孔结构，且微孔之间互相连通，柚苷酶分子可以很容易地被固定在凝胶中，可以提高酶负载量和稳定性。最后通过交联法在冻干的复合水凝胶上固定柚苷酶，以交联法固定酶具有稳定性好、不易脱落等优点。
2、本发明所得固定化酶的酶负载量高，并且具有优异的酶活性、贮存稳定性和循环使用性，可利用其磁性进行回收、操作简便，循环使用性能良好。
3、本发明采用固定化酶对橙汁脱苦，安全高效、成本较低，脱苦率在95％以上，脱苦后的果汁极大程度上保留了营养成分，保持了原果汁的风味；可利用磁性回收固定化酶重复利用，循环使用10次后，脱苦率仍保持在90％以上，具有良好的应用前景。
具体实施方式
下面将对本发明的实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
以下实施例中，单体总质量包括2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯和丙烯酸的质量总和。
实施例1
一种利用柚苷酶橙汁脱苦的方法，包括以下步骤：
S1、将丁二酸酰胺基钴酞菁溶于水，调节pH为7.5，依次加入等体积的0.4mol/LFeCl3溶液和0.9mol/L FeCl2溶液混合均匀，加入1.5mol/L NaOH溶液调节混合液的pH为9.5，超声1h，分离所得固体产物，洗涤，干燥，得到CoTPc-Fe3O4磁性纳米粒子，其中水溶性钴酞菁的含量为0.5wt％；
S2、将CoTAPc-Fe3O4磁性纳米粒子分散在乙醇中，加入聚乙烯醇、2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯、丙烯酸(质量比1：1：1)并分散20min，加入单体总质量1.5wt％的过硫酸钾和1.5wt％的亚硫酸氢钠搅拌聚合反应8min，真空除泡，然后置于玻璃容器中室温反应20h，将所得溶胶用水浸泡24h以除去多余的反应物，中途换水2次，得到有机/无机纳米复合水凝胶，其中CoTPc-Fe3O4磁性纳米粒子的含量为2.5wt％；然后进行重复冻融处理：-30℃冷冻12h，然后室温下解冻10h，重复操作2次；将处理后的复合水凝胶进行冷冻干燥，得到冻干的有机/无机纳米复合水凝胶；
S3、将柚苷酶发酵液和pH为3.5的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液混合，柚苷酶发酵液的给酶量为300U/mL，加入冻干的有机/无机纳米复合水凝胶于30℃进行水浴震荡反应，将反应完成的复合水凝胶置于3～6℃冷藏，然后取出并洗去复合水凝胶未结合的柚苷酶，然后将其放入戊二醛溶液中进行交联，戊二醛溶液的浓度为0.5wt％，交联的时间为1h，交联结束后取出，洗去复合水凝胶表面未结合的物质，得到固定化柚苷酶；
S4、将固定化柚苷酶和橙汁混合，控制pH为4～4.2、反应温度30℃，搅拌酶解处理40min，完成橙汁的脱苦。
实施例2
一种利用柚苷酶橙汁脱苦的方法，包括以下步骤：
S1、将丁二烯酸酰胺基钴酞菁溶于水，调节pH为8.5，依次加入等体积的0.5mol/LFeCl3溶液和1mol/L FeCl2溶液混合均匀摩尔比为2～5：5～10，加入浓氨水调节混合液的pH为10.5，超声2h，分离所得固体产物，洗涤，干燥，得到CoTPc-Fe3O4磁性纳米粒子，其中水溶性钴酞菁的含量为10wt％；
S2、将CoTAPc-Fe3O4磁性纳米粒子分散在乙醇中，加入聚乙烯醇、2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯、丙烯酸(质量比2：1：1)并分散60min，加入单体总质量2wt％的过硫酸钾和2wt％的亚硫酸氢钠搅拌聚合反应15min，真空除泡，然后置于玻璃容器中室温反应30h，将所得溶胶用水浸泡24h以除去多余的反应物，中途换水2次，得到有机/无机纳米复合水凝胶，其中CoTPc-Fe3O4磁性纳米粒子的含量为25wt％；然后进行重复冻融处理：-15℃冷冻20h，然后室温下解冻6h，重复操作4次；将处理后的复合水凝胶进行冷冻干燥，得到冻干的有机/无机纳米复合水凝胶；
S3、将柚苷酶发酵液和pH为4的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液混合，柚苷酶发酵液的给酶量为550U/mL，加入冻干的有机/无机纳米复合水凝胶于50℃进行水浴震荡反应，将反应完成的复合水凝胶置于3～6℃冷藏，然后取出并洗去复合水凝胶未结合的柚苷酶，然后将其放入戊二醛溶液中进行交联，戊二醛溶液的浓度为1.2wt％，交联的时间为4h，交联结束后取出，洗去复合水凝胶表面未结合的物质，得到固定化柚苷酶；
S4、将固定化柚苷酶和橙汁混合，控制pH为5.2～5.5、反应温度60℃，搅拌酶解处理20min，完成橙汁的脱苦。
实施例3
一种利用柚苷酶橙汁脱苦的方法，包括以下步骤：
S1、将丁二酸酰胺基钴酞菁和/或丁二烯酸酰胺基钴酞菁溶于水，调节pH为8，依次加入等体积的0.2mol/L FeCl3溶液和0.45mol/L FeCl2溶液，加入浓氨水调节混合液的pH为9.5，超声1.5h，分离所得固体产物，洗涤，干燥，得到CoTPc-Fe3O4磁性纳米粒子，其中水溶性钴酞菁的含量为7.2wt％；
S2、将CoTAPc-Fe3O4磁性纳米粒子分散在乙醇中，加入聚乙烯醇、2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯、丙烯酸(质量比1：2：2)并分散40min，加入单体总质量2.5wt％的过硫酸钾和2.5wt％的亚硫酸氢钠搅拌反应10min，真空除泡，然后置于玻璃容器中室温反应26h，将所得溶胶用水浸泡24h以除去多余的反应物，中途换水2次，得到有机/无机纳米复合水凝胶，其中CoTPc-Fe3O4磁性纳米粒子的含量为5.8wt％；然后进行重复冻融处理：-20℃冷冻15h，然后室温下解冻8h，重复操作3次；将处理后的复合水凝胶进行冷冻干燥，得到冻干的有机/无机纳米复合水凝胶；
S3、将柚苷酶发酵液和pH为4.5的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液混合，柚苷酶发酵液的给酶量为350U/mL，加入冻干的有机/无机纳米复合水凝胶于45℃进行水浴震荡反应，将反应完成的复合水凝胶置于4～6℃冷藏，然后取出并洗去复合水凝胶未结合的柚苷酶，然后将其放入戊二醛溶液中进行交联，戊二醛溶液的浓度为1wt％，交联的时间为2h，交联结束后取出，洗去复合水凝胶表面未结合的物质，得到固定化柚苷酶；
S4、将固定化柚苷酶和橙汁混合，控制pH为3.5～3.8、反应温度50℃，搅拌酶解处理30min，完成橙汁的脱苦。
实施例4
一种利用柚苷酶橙汁脱苦的方法，包括以下步骤：
S1、将丁二酸酰胺基钴酞菁和/或丁二烯酸酰胺基钴酞菁溶于水，调节pH为7.8，依次加入等体积的0.6mol/L FeCl3溶液和1.25mol/L FeCl2溶液混合均匀，加入1.2mol/LNaOH溶液调节混合液的pH为10，超声1.5h，离心分离所得固体产物，洗涤，干燥，得到CoTPc-Fe3O4磁性纳米粒子，其中水溶性钴酞菁的含量为2.5wt％；
S2、将CoTAPc-Fe3O4磁性纳米粒子分散在乙醇中，加入聚乙烯醇、2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯、丙烯酸(质量比1：5：5)并分散50min，加入单体总质量2wt％的过硫酸钾和2.5wt％的亚硫酸氢钠搅拌反应12min，真空除泡，然后置于玻璃容器中室温反应24h，将所得溶胶用水浸泡24h以除去多余的反应物，中途换水2次，得到有机/无机纳米复合水凝胶，其中CoTPc-Fe3O4磁性纳米粒子的含量为20.3wt％；然后进行重复冻融处理：-25℃冷冻18h，然后室温下解冻9h，重复操作3次；将处理后的复合水凝胶进行冷冻干燥，得到冻干的有机/无机纳米复合水凝胶；
S3、将柚苷酶发酵液和pH为5的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液混合，柚苷酶发酵液的给酶量为450U/mL，加入冻干的有机/无机纳米复合水凝胶于35℃进行水浴震荡反应，将反应完成的复合水凝胶置于3～5℃冷藏，然后取出并洗去复合水凝胶未结合的柚苷酶，然后将其放入戊二醛溶液中进行交联，戊二醛溶液的浓度为0.9wt％，交联的时间为2.5h，交联结束后取出，洗去复合水凝胶表面未结合的物质，得到固定化柚苷酶；
S4、将固定化柚苷酶和橙汁混合，控制pH为4.5～5、反应温度40℃，搅拌酶解处理35min，完成橙汁的脱苦。
实施例5
一种利用柚苷酶橙汁脱苦的方法，包括以下步骤：
S1、将丁二酸酰胺基钴酞菁和/或丁二烯酸酰胺基钴酞菁溶于水，调节pH为8，依次加入等体积的0.4mol/L FeCl3溶液和0.9mol/L FeCl2溶液混合均匀，加入1mol/L NaOH溶液调节混合液的pH为10，超声1.5h，离心分离所得固体产物，洗涤，干燥，得到CoTPc-Fe3O4磁性纳米粒子，其中水溶性钴酞菁的含量为4.6wt％；
S2、将CoTAPc-Fe3O4磁性纳米粒子分散在乙醇中，加入聚乙烯醇、2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯、丙烯酸(质量比1：3：3)并分散30min，加入单体总质量2.5wt％的过硫酸钾和2.5wt％的亚硫酸氢钠搅拌反应10min，真空除泡，然后置于玻璃容器中室温反应24h，将所得溶胶用水浸泡24h以除去多余的反应物，中途换水2次，得到有机/无机纳米复合水凝胶，其中CoTPc-Fe3O4磁性纳米粒子的含量为13.8wt％；然后进行重复冻融处理：-20℃冷冻16h，然后室温下解冻8h，重复操作3次；将处理后的复合水凝胶进行冷冻干燥，得到冻干的有机/无机纳米复合水凝胶；
S3、将柚苷酶发酵液和pH为4的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液混合，柚苷酶发酵液的给酶量为410U/mL，加入冻干的有机/无机纳米复合水凝胶于40℃进行水浴震荡反应，将反应完成的复合水凝胶置于3～5℃冷藏，然后取出并洗去复合水凝胶未结合的柚苷酶，然后将其放入戊二醛溶液中进行交联，戊二醛溶液的浓度为0.8wt％，交联的时间为3h，交联结束后取出，洗去复合水凝胶表面未结合的物质，得到固定化柚苷酶；
S4、将固定化柚苷酶和橙汁混合，控制pH为4～4.5、反应温度40℃，搅拌酶解处理30min，完成橙汁的脱苦。
对比例1
不加水溶性钴酞菁，其余步骤同实施例5。
对比例2
去除CoTAPc-Fe3O4磁性纳米粒子，只用凝胶固定柚苷酶，其余同实施例5。
对比例3
去除凝胶，只用CoTAPc-Fe3O4磁性纳米粒子固定柚苷酶，其余同实施例5。
对实施例1～5和对比例1～3的脱苦效果(柚皮苷酶解率)、柚苷酶循环使用性和贮存稳定性进行测定。结果列于表1。
由表1数据可知，本发明具有优良的脱苦效果，柚皮苷酶解率达到95％以上；并且固定化柚苷酶循环使用10次后仍能保持较高的柚皮苷酶解率和酶活力，4℃储存30d的相对酶活力在75％以上，稳定性更高。水溶性钴酞菁、Fe3O4纳米粒子和凝胶三者共同作用，提高了柚苷酶的脱苦效果、酶活性保持率和循环使用性。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种利用柚苷酶橙汁脱苦的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、将水溶性钴酞菁溶于水，调节pH为7.5～8.5，依次加入FeCl3溶液和FeCl2溶液混合均匀，加入NaOH溶液或氨水调节混合液的pH为9～10.5，超声1～2h，分离所得固体产物，洗涤，干燥，得到CoTPc-Fe3O4磁性纳米粒子；
S2、将CoTPc-Fe3O4磁性纳米粒子分散在乙醇中，加入聚乙烯醇、2-甲基-2-丙烯酸-2-(2-甲氧基乙氧基)乙酯、丙烯酸并分散20～60min，加入引发剂过硫酸钾和亚硫酸氢钠搅拌反应8～15min，真空除泡，然后置于玻璃容器中室温反应20～30h，将所得溶胶用水浸泡一定时间以除去多余的反应物，得到有机/无机纳米复合水凝胶，重复冻融处理后将复合水凝胶进行冷冻干燥，得到冻干的有机/无机纳米复合水凝胶；
S3、将柚苷酶发酵液和缓冲液按照一定的比重混合，加入冻干的有机/无机纳米复合水凝胶进行水浴震荡反应，将反应完成的复合水凝胶放入冰箱里冷藏，然后取出并洗去复合水凝胶未结合的柚苷酶，然后将其放入戊二醛溶液中进行交联，交联结束后取出，洗去复合水凝胶表面未结合的物质，得到固定化柚苷酶；
S4、将固定化柚苷酶和橙汁混合，搅拌酶解处理一段时间，完成橙汁的脱苦。
2.根据权利要求1所述的一种利用柚苷酶橙汁脱苦的方法，其特征在于，步骤S1中所述水溶性钴酞菁包括丁二酸酰胺基钴酞菁和/或丁二烯酸酰胺基钴酞菁。
3.根据权利要求1所述的一种利用柚苷酶橙汁脱苦的方法，其特征在于，步骤S1中所述CoTAPc-Fe3O4磁性纳米粒子中水溶性钴酞菁的含量为0.1～10wt％。
4.根据权利要求1所述的一种利用柚苷酶橙汁脱苦的方法，其特征在于，步骤S1中所述FeCl3和FeCl2的摩尔比为1：1.8～2.5，所述NaOH溶液的浓度为0.8～1.8mol/L。
5.根据权利要求1所述的一种利用柚苷酶橙汁脱苦的方法，其特征在于，步骤S2中所述有机/无机纳米复合水凝胶中CoTPc-Fe3O4磁性纳米粒子的含量为1～30wt％。
6.根据权利要求1所述的一种利用柚苷酶橙汁脱苦的方法，其特征在于，步骤S2中所述重复冻融处理为-30～-15℃冷冻12～20h，然后室温下解冻6～10h，重复操作2～4次。
7.根据权利要求1所述的一种利用柚苷酶橙汁脱苦的方法，其特征在于，步骤S3中所述缓冲液为柠檬酸-磷酸二氢钠缓冲液，所述缓冲液的pH为3～5.5。
8.根据权利要求1所述的一种利用柚苷酶橙汁脱苦的方法，其特征在于，步骤S3中所述柚苷酶发酵液的给酶量为300～550U/mL，所述水浴震荡反应的温度为30～50℃。
9.根据权利要求1所述的一种利用柚苷酶橙汁脱苦的方法，其特征在于，步骤S3中所述戊二醛溶液的浓度为0.5～1.2wt％，所述交联的时间为1～4h。
10.根据权利要求1所述的一种利用柚苷酶橙汁脱苦的方法，其特征在于，步骤S4中所述搅拌酶解处理包括控制pH为3.5～5.5，反应时间20～40min，反应温度30～60℃。
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2023
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