CN116114787A - 一种高效脱除蛋白原料中苯丙氨酸的方法 - Google Patents
一种高效脱除蛋白原料中苯丙氨酸的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116114787A CN116114787A CN202310251714.9A CN202310251714A CN116114787A CN 116114787 A CN116114787 A CN 116114787A CN 202310251714 A CN202310251714 A CN 202310251714A CN 116114787 A CN116114787 A CN 116114787A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- phenylalanine
- protein
- ammonia lyase
- efficiently removing
- enzymolysis
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 title claims abstract description 73
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 71
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 70
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 56
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 51
- 239000002994 raw material Substances 0.000 title claims abstract description 28
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 claims abstract description 54
- 108700023158 Phenylalanine ammonia-lyases Proteins 0.000 claims abstract description 53
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 22
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 22
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims abstract description 20
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 16
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 claims abstract description 16
- 235000021119 whey protein Nutrition 0.000 claims abstract description 16
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 claims abstract description 13
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 claims abstract description 13
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 37
- 108090000145 Bacillolysin Proteins 0.000 claims description 16
- 102000035092 Neutral proteases Human genes 0.000 claims description 16
- 108091005507 Neutral proteases Proteins 0.000 claims description 16
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 16
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 12
- 241000209094 Oryza Species 0.000 claims description 12
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 6
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 claims description 6
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 claims description 6
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 claims description 6
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 claims description 6
- 230000035939 shock Effects 0.000 claims description 6
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims description 5
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 claims description 5
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 claims description 4
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 3
- 241001052560 Thallis Species 0.000 claims description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 claims 10
- YHPHXKZGZHPYME-UHFFFAOYSA-N 2-propan-2-yl-2h-thiopyran Chemical compound CC(C)C1SC=CC=C1 YHPHXKZGZHPYME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 125000002519 galactosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 claims 1
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 claims 1
- 239000000047 product Substances 0.000 abstract description 12
- 235000013305 food Nutrition 0.000 abstract description 11
- 201000011252 Phenylketonuria Diseases 0.000 abstract description 8
- 239000000758 substrate Substances 0.000 abstract description 5
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 abstract description 3
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 abstract 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 abstract 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 abstract 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 abstract 1
- 230000000050 nutritive effect Effects 0.000 abstract 1
- 238000003257 protein preparation method Methods 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 9
- WBYWAXJHAXSJNI-VOTSOKGWSA-M .beta-Phenylacrylic acid Natural products [O-]C(=O)\C=C\C1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-VOTSOKGWSA-M 0.000 description 8
- WBYWAXJHAXSJNI-VOTSOKGWSA-N trans-cinnamic acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C1=CC=CC=C1 WBYWAXJHAXSJNI-VOTSOKGWSA-N 0.000 description 8
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- -1 isopropyl thiopyran galactose glycoside Chemical class 0.000 description 5
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 4
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 4
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 4
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 4
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 3
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 3
- 239000010902 straw Substances 0.000 description 3
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010082495 Dietary Plant Proteins Proteins 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 239000012505 Superdex™ Substances 0.000 description 2
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- WXHLLJAMBQLULT-UHFFFAOYSA-N 2-[[6-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]-2-methylpyrimidin-4-yl]amino]-n-(2-methyl-6-sulfanylphenyl)-1,3-thiazole-5-carboxamide;hydrate Chemical compound O.C=1C(N2CCN(CCO)CC2)=NC(C)=NC=1NC(S1)=NC=C1C(=O)NC1=C(C)C=CC=C1S WXHLLJAMBQLULT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 208000003367 Hypopigmentation Diseases 0.000 description 1
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000007696 Kjeldahl method Methods 0.000 description 1
- 108010069013 Phenylalanine Hydroxylase Proteins 0.000 description 1
- 102100038223 Phenylalanine-4-hydroxylase Human genes 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 208000022877 amino acid metabolic disease Diseases 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003542 behavioural effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 1
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 1
- 206010015037 epilepsy Diseases 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000010812 external standard method Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 208000016361 genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 1
- 239000000413 hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 230000003425 hypopigmentation Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 208000004141 microcephaly Diseases 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 208000020016 psychiatric disease Diseases 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- FNKQXYHWGSIFBK-RPDRRWSUSA-N sapropterin Chemical compound N1=C(N)NC(=O)C2=C1NC[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O)C)N2 FNKQXYHWGSIFBK-RPDRRWSUSA-N 0.000 description 1
- 229960004617 sapropterin Drugs 0.000 description 1
- 230000024053 secondary metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000000825 ultraviolet detection Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
- A23J1/00—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites
- A23J1/20—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites from milk, e.g. casein; from whey
- A23J1/205—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites from milk, e.g. casein; from whey from whey, e.g. lactalbumine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
- A23J1/00—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites
- A23J1/12—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites from cereals, wheat, bran, or molasses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
- A23J3/00—Working-up of proteins for foodstuffs
- A23J3/30—Working-up of proteins for foodstuffs by hydrolysis
- A23J3/32—Working-up of proteins for foodstuffs by hydrolysis using chemical agents
- A23J3/34—Working-up of proteins for foodstuffs by hydrolysis using chemical agents using enzymes
- A23J3/341—Working-up of proteins for foodstuffs by hydrolysis using chemical agents using enzymes of animal proteins
- A23J3/343—Working-up of proteins for foodstuffs by hydrolysis using chemical agents using enzymes of animal proteins of dairy proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
- A23J3/00—Working-up of proteins for foodstuffs
- A23J3/30—Working-up of proteins for foodstuffs by hydrolysis
- A23J3/32—Working-up of proteins for foodstuffs by hydrolysis using chemical agents
- A23J3/34—Working-up of proteins for foodstuffs by hydrolysis using chemical agents using enzymes
- A23J3/346—Working-up of proteins for foodstuffs by hydrolysis using chemical agents using enzymes of vegetable proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L5/00—Preparation or treatment of foods or foodstuffs, in general; Food or foodstuffs obtained thereby; Materials therefor
- A23L5/20—Removal of unwanted matter, e.g. deodorisation or detoxification
- A23L5/25—Removal of unwanted matter, e.g. deodorisation or detoxification using enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/88—Lyases (4.)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y403/00—Carbon-nitrogen lyases (4.3)
- C12Y403/01—Ammonia-lyases (4.3.1)
- C12Y403/01024—Phenylalanine ammonia-lyase (4.3.1.24)
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P60/00—Technologies relating to agriculture, livestock or agroalimentary industries
- Y02P60/80—Food processing, e.g. use of renewable energies or variable speed drives in handling, conveying or stacking
- Y02P60/87—Re-use of by-products of food processing for fodder production
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种高效脱除蛋白原料中苯丙氨酸的方法，属于食品领域。本发明所述的方法可脱除蛋白原料中90％的苯丙氨酸，具有用于制备针对苯丙酮尿症患者的特殊医学用途配方食品或保健品的潜力。本发明所述的方法包括：以天然大米蛋白、乳清蛋白等廉价原料为酶解底物，利用蛋白酶对其进行酶解，得到的酶解物经离心除去不溶物后，收集到的上清液中含有游离的苯丙氨酸，再利用苯丙氨酸解氨酶酶解即得低苯丙氨酸蛋白。本发明通过酶法水解蛋白、脱除苯丙氨酸该方法具有产品原料营养价值高、成本低、制备方法简单、苯丙氨酸脱除率高等优点，是一种有效的低苯丙氨酸蛋白制备方法。
Description
技术领域
本发明属于特医食品领域，具有涉及一种高效脱除蛋白原料中苯丙氨酸的方法。
背景技术
苯丙酮尿症是一种氨基酸代谢障碍性疾病，属于常染色体隐性遗传病，由苯丙氨酸羟化酶编码基因的变异或辅酶四氢生物蝶呤的缺乏导致苯丙氨酸无法正常代谢，从而导致严重且不可逆转的智力障碍、行为障碍和临床特征，例如获得性小头畸形、癫痫、心理症状和皮肤(包括头发和眼睛)的普遍色素沉着不足等。治疗苯丙酮尿症最安全、有效的干预方法是给患者提供低苯丙氨酸含量的食品，从而限制血液中苯丙氨酸含量。然而目前市场上的苯丙酮尿症特医用途配方食品仍存在种类少、营养价值低、价格昂贵、口感差、不能满足各个年龄段患者的需求等问题。因此，针对苯丙酮尿症患者开发一种低成本、易操作、苯丙氨酸脱除率高的方法尤为重要。
目前，制备低苯丙氨酸蛋白主要涉及两大步骤，一是蛋白酶解，二是脱除酶解游离出的苯丙氨酸。在第二个步骤中，已报道的方法主要是使用活性炭、大孔树脂和秸秆粉等吸附剂吸附，但其成本高、选择性差，甚至可能造成环境负担，因此，有必要开发适用于脱除苯丙氨酸的新方法。发明专利申请号CN 112080542A，发明名称为“一种低苯丙氨酸蛋清蛋白肽的制备方法”，该方法使用活性炭作为吸附剂除去苯丙氨酸，其成本高、效率低、操作复杂、选择性差，且具有污染环境的风险。发明专利申请号US08295784，发明名称为“Methodforremoving phenylalanine from proteinaceous compositions,a product soobtained and use thereof”，该方法使用吸附树脂除去苯丙氨酸，成本较高。发明专利申请号CN115386614A，发明名称为“一种两步酶解结合秸秆粉吸附制备低苯丙氨酸乳清蛋白肽的方法”，该方法使用秸秆粉作为吸附剂除去苯丙氨酸，操作复杂且专一性较差。
苯丙氨酸解氨酶是植物体内次生代谢的关键酶和限速酶，可催化L-Phe脱氨生成反式肉桂酸和氨，该酶解方法具有绿色环保、低成本、效率高、专一性强等优势，在保健和食品工业等领域的研究具有较大的应用前景。然而，目前尚未有此应用报道。
发明内容
本发明的目的在于提供了一种高效脱除蛋白原料中苯丙氨酸的方法，采用本发明的方法不仅可有效脱除蛋白中90％以上的苯丙氨酸，而且可较大程度地保留其它氨基酸，该方法在一定程度克服了现有技术过程复杂、成本高、污染环境等缺陷。同时，制得的低苯丙氨酸植物蛋白可为苯丙酮尿症特殊医学用途配方食品等提供良好蛋白质来源，在特医食品、保健食品等领域有极大的应用价值。
一种高效脱除蛋白原料中苯丙氨酸的方法，其特征在于具体步骤如下：
(1)将蛋白原料进行溶解、超声细胞粉碎处理，得到预处理液；
(2)将预处理液加入中性蛋白酶，得到酶解液；
(3)将酶解液高温灭活后离心处理，得到上清液；
(4)将获得的上清液加入苯丙氨酸解氨酶酶液中进行酶解，从而脱除蛋白原料中的苯丙氨酸。
所述的一种高效脱除蛋白原料中苯丙氨酸的方法，其特征在于，
所述的蛋白原料指的是乳清蛋白或大米蛋白。
所述的一种高效脱除蛋白原料中苯丙氨酸的方法，其特征在于，步骤(1)
中所述的超声细胞粉碎处理的条件为150-170W，5-7min。
所述的一种高效脱除蛋白原料中苯丙氨酸的方法，其特征在于，当蛋白原料指的是乳清蛋白时，步骤(2)中所述加入中性蛋白酶的酶添加量为1000-1200U/g，酶解条件为pH6.9-7.1、49-51℃，恒温49-51℃水解4.8-5.2h。
所述的一种高效脱除蛋白原料中苯丙氨酸的方法，其特征在于，当蛋白原料指的是大米蛋白时，步骤(2)中所述加入中性蛋白酶的酶添加量为4000-4200U/g，酶解条件为pH6.9-7.1、49-51℃，恒温49-51℃水解4.8-5.2h；
所述的一种高效脱除蛋白原料中苯丙氨酸的方法，其特征在于，
步骤(3)中所述的高温灭活的条件为88-92℃下水浴18-20min；
步骤(3)中所述的离心处理的条件为4000-4200r/min下离心18-20min。
所述的一种高效脱除蛋白原料中苯丙氨酸的方法，其特征在于，步骤(4)中所述的苯丙氨酸解氨酶为Nostocsp.ATCC 53789来源；步骤(4)中所述的苯丙氨酸解氨酶在NCBI数据库中的编号为WP_114081775。
所述的一种高效脱除蛋白原料中苯丙氨酸的方法，其特征在于，步骤(4)中所述的苯丙氨酸解氨酶的制备方法包括：根据苯丙氨酸解氨酶编码基因构建重组质粒，将重组质粒热激转化进入大肠杆菌宿主，得到表达苯丙氨酸解氨酶的基因工程菌，将基因工程菌于36-38℃下培养，当菌液OD600值达到0.7-0.8时，降温至17-19℃，在此温度下，使用异丙基硫代吡喃半乳糖苷IPTG诱导11-13h，用高压均质法破碎菌体，将菌液上清依次经亲和层析柱和分子筛分离纯化，即得苯丙氨酸解氨酶酶液。
所述的一种高效脱除蛋白原料中苯丙氨酸的方法，其特征在于，步骤(4)中所述加入苯丙氨酸解氨酶进行酶解条件为pH7.5-8.5、54-57℃，苯丙氨酸解氨酶添加量为70-80μg/mL，恒温54-57℃水解22-24h。
本发明的第一个目的是提供了一种高效脱除蛋白原料中苯丙氨酸的方法，主要包括以下步骤：
(1)将大米蛋白进行溶解、超声细胞粉碎处理，得到预处理液；
(2)将步骤(1)获得的预处理液加入中性蛋白酶，得到酶解液；
(3)将步骤(2)中的酶解液高温灭活后离心处理，得到上清液；
(4)将步骤(3)获得的上清液加入苯丙氨酸解氨酶，从而高效脱除蛋白原料中的苯丙氨酸。
在本发明的一种实施方式中，步骤(1)中大米蛋白溶解后苯丙氨酸的含量为4.2％。
在本发明的一种实施方式中，步骤(1)中所述超声细胞粉碎处理的条件为150W，5min。
在本发明的一种实施方式中，步骤(2)中所述加入中性蛋白酶的酶解条件为pH7.0、50℃，酶添加量为4000U/g，恒温50℃水解5h。
在本发明的一种实施方式中，步骤(3)中所述高温灭活酶的条件为90℃水浴20min。
在本发明的一种实施方式中，步骤(3)中所述离心条件为4000r/min，20min。
在本发明的一种实施方式中，步骤(4)中所述的苯丙氨酸解氨酶为Nostocsp.ATCC53789来源。
在本发明的一种实施方式中，步骤(4)中所述的苯丙氨酸解氨酶在NCBI数据库中的编号为WP_114081775。
在本发明的一种实施方式中，步骤(4)中所述的苯丙氨酸解氨酶的制备方法包括：根据苯丙氨酸解氨酶编码基因构建重组质粒，将重组质粒热激转化进入大肠杆菌宿主，得到表达苯丙氨酸解氨酶的基因工程菌，将基因工程菌于37℃培养，当菌液OD600值达到0.8时，降温至18℃，在18℃条件下，使用异丙基硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导12h，用高压均质法破碎菌体，将菌液上清依次经亲和层析柱和分子筛分离纯化，得苯丙氨酸解氨酶酶液。
在本发明的一种实施方式中，步骤(4)中所述加入苯丙氨酸解氨酶的酶解条件为pH 8.0、55℃，酶添加量为75μg/mL，恒温55℃水解24h。
本发明的第二个目的是提供了一种高效脱除乳清蛋白中苯丙氨酸的方法，主要包括以下步骤：
(1)将乳清蛋白进行溶解、超声细胞粉碎处理，得到预处理液；
(2)将步骤(1)获得的预处理液加入中性蛋白酶，得到酶解液；
(3)将步骤(2)中的酶解液高温灭活后离心处理，得到上清液；
(4)将步骤(3)获得的上清液加入苯丙氨酸解氨酶，从而高效脱除乳清蛋白中的苯丙氨酸。
在本发明的一种实施方式中，步骤(1)中乳清蛋白溶解后苯丙氨酸的含量为4.2％。
在本发明的一种实施方式中，步骤(1)中所述超声细胞粉碎处理的条件为150W，5min。
在本发明的一种实施方式中，步骤(2)中所述加入中性蛋白酶的酶解条件为pH7.0、50℃，酶添加量为1000U/g，恒温50℃水解5h。
在本发明的一种实施方式中，步骤(3)中所述高温灭活酶的条件为90℃水浴20min。
在本发明的一种实施方式中，步骤(3)中所述离心条件为4000r/min，20min。
在本发明的一种实施方式中，步骤(4)中所述的苯丙氨酸解氨酶为Nostocsp.ATCC53789来源。
在本发明的一种实施方式中，步骤(4)中所述的苯丙氨酸解氨酶在NCBI数据库中的编号为WP_114081775。
在本发明的一种实施方式中，步骤(4)中所述的苯丙氨酸解氨酶的制备方法包括：根据苯丙氨酸解氨酶基因构建重组质粒，将重组质粒热激转化进入大肠杆菌宿主，得到表达苯丙氨酸解氨酶的基因工程菌，将基因工程菌于37℃培养，当菌液OD600值达到0.8时，降温至18℃，在18℃条件下，使用异丙基硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导12h，用高压均质法破碎菌体，将菌液上清依次过亲和层析柱和分子筛，得苯丙氨酸解氨酶酶液。
在本发明的一种实施方式中，步骤(4)中所述加入苯丙氨酸解氨酶的酶解条件为pH 8.0、55℃，酶添加量为75μg/mL，恒温55℃水解24h。
本发明的有益效果为：
(1)本发明中采用中性蛋白酶酶解的主要作用是降解大分子大米蛋白、乳清蛋白，尽可能将苯丙氨酸游离出来；采用高温灭活的方法使中性蛋白酶失去活性，以免对后续酶解实验产生影响；采用离心的目的是为了去除酶解液中的不溶性杂质，提高最终产品纯度；采用苯丙氨酸解氨酶酶解的目的是脱除底物中游离态的苯丙氨酸。
(2)采用本发明使用的苯丙氨酸解氨酶的酶解方法，与现有针对苯丙氨酸的生物吸附剂如活性炭和大孔树脂相比，酶解的方法具有成本低、绿色环保、操作简单、效率高、专一性强等优势，有望缓解针对苯丙酮尿症患者的特殊医学用途配方食品价格昂贵的现状。
(3)采用本发明的方法获得的产品中苯丙氨酸含量约为0.6％～1.0％(占蛋白当量)，易于吸收，且具有为苯丙酮尿症患者制备特殊医学用途配方食品的潜力，为植物蛋白在低苯丙氨酸产品中的应用提供了途径。
附图说明
图1为实施例1中RCJ的蛋白表达纯化凝胶过滤层析结果图；
图2为实施例其中RCJ凝胶过滤层析结果对应的SDS-PAGE蛋白胶图，目的条带以黑色矩形框突出显示；
图3为以大米蛋白、乳清蛋白为底物苯丙氨酸脱除率显示图。
具体实施方法
下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
苯丙氨酸解氨酶酶活测定及方法：将50μL酶溶液加入450μL Tris-HCL缓冲液中(pH:8.5)预孵育5min后加入50μL L-phe(2mM)，反应5min后，在310nm下测定产物吸光值。将每分钟生成1μL的水解产物所需的酶量定义为一个酶活单位U。以灭活的酶液执行相同方法作为空白对照。
反式肉桂酸产物的检测方法：采用高效液相色谱(HPLC)检测反应体系反式肉桂酸的量。色谱条件为：WatersAtlantis d C18色谱柱，柱温为：25℃，流动相溶液为：水(0.1％甲酸)和甲醇(0.1％甲酸)，比例为：70:30(v/v)，流速：1ml/min，检测波长为：310nm。采用外标法，根据保留时间和峰面积确定相应反式肉桂酸的量。
苯丙氨酸底物的检测方法：采用氨基酸分析仪检测反应体系苯丙氨酸的量。样品前处理：取样品5ml，加入5mL 5％磺基水杨酸溶液混匀，6000g离心力离心10min，吸取全部上清液在旋转蒸发仪中蒸干，加入1mL柠檬酸钠缓冲液溶解后用0.45um膜过滤上样。实验条件：分离柱Na型阳离子树脂层析柱(200mm*4.6mm)，紫外检测波长570nm、440nm；柱温：55-65-77℃程序升温，反应槽温度138℃，进样量50μL，缓冲液流速：20mL/h，反应流速：10mL/h。
苯丙氨酸脱除率：采用氨基酸分析仪，具体是：苯丙氨酸含量测定如上所述，苯丙氨酸脱除率按照下式进行计算：
蛋白质含量测定：参照GB5009.5-2016通过凯氏定氮法测得蛋白含量。
实施例1：一种高效脱除大米蛋白中苯丙氨酸的方法，包括以下步骤：
1.苯丙氨酸解氨酶的制备
将以苯丙氨酸解氨酶基因构建的重组质粒pET-28b-RCJ热激转化进入Escherichia coli Transetta(DE3)宿主，构建表达苯丙氨酸解氨酶的基因工程菌。将上述基因工程菌于37℃培养，当菌液OD600值达到0.8时，在18℃条件下，使用异丙基硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导14h，后经高压均质法破碎菌体后，将菌液上清依次过亲和层析柱(镍柱)、阴离子交换柱和凝胶过滤层析(Superdex200)后制得苯丙氨酸解氨酶酶液(5.1mg/mL)，凝胶过滤层析结果图如图1所示，对应的SDS-PAGE如图2所示。苯丙氨酸解氨酶在NCBI数据库中的编号为LWSY01000099。
2.蛋白酶解
(1)大米蛋白的溶解及粉碎处理
称取0.5g大米蛋白溶于10ml水中，震荡混匀，用超声细胞粉碎处理，得到预处理液。
(2)中性蛋白酶处理
将预处理液中加入100U/mg中性蛋白酶0.02g，于pH 7.0、50℃下水解5h，90℃酶灭活20min，冷却后于4000rpm离心20min获得上清液，通过氨基酸分析仪测得苯丙氨酸的含量。
(3)苯丙氨酸解氨酶酶解
向上述所得上清液中加入7.5μg/mL苯丙氨酸解氨酶，在50℃水浴锅中反应24h，获得低苯丙氨酸的酶解液。以灭活的酶液执行相同方法作为空白对照，通过氨基酸分析仪测得苯丙氨酸的含量。
3.苯丙氨酸脱除率分析：经氨基酸分析仪分析，苯丙氨酸最大脱除率可达85％。
4.产物反式肉桂酸分析：经HPLC分析，产物中含反式肉桂酸4.7mg。
实施例2：一种高效脱除乳清蛋白中苯丙氨酸的方法，包括以下步骤：
1.苯丙氨酸解氨酶的制备
将以苯丙氨酸解氨酶基因构建的重组质粒pET-28b-RCJ热激转化进入Escherichia coli Transetta(DE3)宿主，构建表达苯丙氨酸解氨酶的基因工程菌。将上述基因工程菌于37℃培养，当菌液OD600值达到0.8时，在18℃条件下，使用异丙基硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导14h，后经高压均质法破碎菌体后，将菌液上清依次过亲和层析柱(镍柱)、阴离子交换柱和分子筛(Superdex200)后制得苯丙氨酸解氨酶酶液(5.1mg/mL)。苯丙氨酸解氨酶在NCBI数据库中的编号为LWSY01000099。
2.蛋白酶解
(1)乳清蛋白的溶解及粉碎处理
称取0.5g乳清蛋白溶于10ml水中，震荡混匀，用超声细胞粉碎处理，得到预处理液。
(2)中性蛋白酶处理
将预处理液中加入1000U/g中性蛋白酶2g，于pH 7.0、50℃下水解5h，90℃酶灭活20min，冷却后于4000rpm离心20min获得上清液，通过氨基酸分析仪测得苯丙氨酸的含量。
(3)苯丙氨酸解氨酶酶解
向上述所得上清液中加入7.5μg/mL苯丙氨酸解氨酶，在50℃水浴锅中反应24h，获得低苯丙氨酸的酶解液。以灭活的酶液执行相同方法作为空白对照，通过氨基酸分析仪测得苯丙氨酸的含量。
3.苯丙氨酸脱除率分析：经氨基酸分析仪分析，苯丙氨酸最大脱除率可达90％。其中以大米蛋白、乳清蛋白为底物苯丙氨酸脱除率由图3显示；
4.产物反式肉桂酸分析：经HPLC分析，产物中含反式肉桂酸4.7mg。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的实施例。
Claims (9)
1.一种高效脱除蛋白原料中苯丙氨酸的方法，其特征在于具体步骤如下：
(1)将蛋白原料进行溶解、超声细胞粉碎处理，得到预处理液；
(2)将预处理液加入中性蛋白酶，得到酶解液；
(3)将酶解液高温灭活后离心处理，得到上清液；
(4)将获得的上清液加入苯丙氨酸解氨酶酶液中进行酶解，从而脱除蛋白原料中的苯丙氨酸。
2.根据权利要求1所述的一种高效脱除蛋白原料中苯丙氨酸的方法，其特征在于，所述的蛋白原料指的是乳清蛋白或大米蛋白。
3.根据权利要求1所述的一种高效脱除蛋白原料中苯丙氨酸的方法，其特征在于，
步骤(1)中所述的超声细胞粉碎处理的条件为150-170W，5-7min。
4.根据权利要求1所述的一种高效脱除蛋白原料中苯丙氨酸的方法，其特征在于，当蛋白原料指的是乳清蛋白时，步骤(2)中所述加入中性蛋白酶的酶添加量为1000-1200U/g，酶解条件为pH6.9-7.1、49-51℃，恒温49-51℃水解4.8-5.2h。
5.根据权利要求1所述的一种高效脱除蛋白原料中苯丙氨酸的方法，其特征在于，当蛋白原料指的是大米蛋白时，步骤(2)中所述加入中性蛋白酶的酶添加量为4000-4200U/g，酶解条件为pH6.9-7.1、49-51℃，恒温49-51℃水解4.8-5.2h。
6.根据权利要求1所述的一种高效脱除蛋白原料中苯丙氨酸的方法，其特征在于，
步骤(3)中所述的高温灭活的条件为88-92℃下水浴18-20min；
步骤(3)中所述的离心处理的条件为4000-4200r/min下离心18-20min。
7.根据权利要求1所述的一种高效脱除蛋白原料中苯丙氨酸的方法，其特征在于，
步骤(4)中所述的苯丙氨酸解氨酶为Nostocsp.ATCC53789来源；
步骤(4)中所述的苯丙氨酸解氨酶在NCBI数据库中的编号为WP_114081775。
8.根据权利要求1所述的一种高效脱除蛋白原料中苯丙氨酸的方法，其特征在于，步骤(4)中所述的苯丙氨酸解氨酶的制备方法包括：根据苯丙氨酸解氨酶编码基因构建重组质粒，将重组质粒热激转化进入大肠杆菌宿主，得到表达苯丙氨酸解氨酶的基因工程菌，将基因工程菌于36-38℃下培养，当菌液OD600值达到0.7-0.8时，降温至17-19℃，在此温度下，使用异丙基硫代吡喃半乳糖苷IPTG诱导11-13h，用高压均质法破碎菌体，将菌液上清依次经亲和层析柱和分子筛分离纯化，即得苯丙氨酸解氨酶酶液。
9.根据权利要求1所述的一种高效脱除蛋白原料中苯丙氨酸的方法，其特征在于，步骤(4)中所述加入苯丙氨酸解氨酶进行酶解条件为pH7.5-8.5、54-57℃，苯丙氨酸解氨酶添加量为70-80μg/mL，恒温54-57℃水解22-24h。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310251714.9A CN116114787A (zh) | 2023-03-16 | 2023-03-16 | 一种高效脱除蛋白原料中苯丙氨酸的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310251714.9A CN116114787A (zh) | 2023-03-16 | 2023-03-16 | 一种高效脱除蛋白原料中苯丙氨酸的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN116114787A true CN116114787A (zh) | 2023-05-16 |
Family
ID=86299240
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202310251714.9A Pending CN116114787A (zh) | 2023-03-16 | 2023-03-16 | 一种高效脱除蛋白原料中苯丙氨酸的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN116114787A (zh) |
Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4248704A (en) * | 1978-05-12 | 1981-02-03 | Snamprogetti S.P.A. | Phenylalanine ammonia lyase occluded fibers for reducing phenylalanine blood-level |
| US5547687A (en) * | 1992-03-13 | 1996-08-20 | Valio Oy | Method for removing phenylalanine from proteinaceous compositions, a product so obtained and use thereof |
| AU2008263185A1 (en) * | 2007-05-24 | 2008-12-18 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Methods and compositions for treating phenylketonuria |
| CN103468665A (zh) * | 2013-10-08 | 2013-12-25 | 南京林业大学 | 一种玉米苯丙氨酸解氨酶及其应用 |
| CN106497905A (zh) * | 2016-12-14 | 2017-03-15 | 江南大学 | 一株鱼腥藻来源的苯丙氨酸脱氨酶的突变体 |
| CN112080542A (zh) * | 2020-09-21 | 2020-12-15 | 江南大学 | 一种低苯丙氨酸蛋清蛋白肽的制备方法 |
| CN114032272A (zh) * | 2021-11-12 | 2022-02-11 | 中国农业大学 | 一种低苯丙氨酸植物蛋白肽及其制备方法 |
| CN115386615A (zh) * | 2022-09-02 | 2022-11-25 | 江南大学 | 一种两步酶解结合木质素吸附制备低苯丙氨酸乳清蛋白肽的方法 |
-
2023
- 2023-03-16 CN CN202310251714.9A patent/CN116114787A/zh active Pending
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4248704A (en) * | 1978-05-12 | 1981-02-03 | Snamprogetti S.P.A. | Phenylalanine ammonia lyase occluded fibers for reducing phenylalanine blood-level |
| US5547687A (en) * | 1992-03-13 | 1996-08-20 | Valio Oy | Method for removing phenylalanine from proteinaceous compositions, a product so obtained and use thereof |
| AU2008263185A1 (en) * | 2007-05-24 | 2008-12-18 | The Board Of Regents Of The University Of Texas System | Methods and compositions for treating phenylketonuria |
| CN103468665A (zh) * | 2013-10-08 | 2013-12-25 | 南京林业大学 | 一种玉米苯丙氨酸解氨酶及其应用 |
| CN106497905A (zh) * | 2016-12-14 | 2017-03-15 | 江南大学 | 一株鱼腥藻来源的苯丙氨酸脱氨酶的突变体 |
| CN112080542A (zh) * | 2020-09-21 | 2020-12-15 | 江南大学 | 一种低苯丙氨酸蛋清蛋白肽的制备方法 |
| CN114032272A (zh) * | 2021-11-12 | 2022-02-11 | 中国农业大学 | 一种低苯丙氨酸植物蛋白肽及其制备方法 |
| CN115386615A (zh) * | 2022-09-02 | 2022-11-25 | 江南大学 | 一种两步酶解结合木质素吸附制备低苯丙氨酸乳清蛋白肽的方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| MARÍA TERESITA CASTAÑEDA ET AL: "Reduction of L-phenylalanine in protein hydrolysates using L-phenylalanine ammonia-lyase from Rhodosporidium toruloides", JOURNAL OF INDUSTRIAL MICROBIOLOGY AND BIOTECHNOLOGY, vol. 42, no. 10, pages 1299 - 1307 * |
| 崔建东;张亚楠;: "苯丙氨酸解氨酶(PAL)酶法合成L-苯丙氨酸的研究进展", 中国生物工程杂志, vol. 28, no. 1, pages 301 - 305 * |
| 盛晓静;王强;石爱民;刘丽;胡晖;杨颖;刘红芝;: "制备低苯丙氨酸特膳食品的研究进展", 食品科学, vol. 37, no. 21, pages 285 - 290 * |
| 陈星;王璞;姚滢秋;肖白;: "从基因工程乳酸菌中高效提取苯丙氨酸解氨酶的方法研究", 生物技术通报, no. 03, pages 132 - 134 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US10455849B2 (en) | Method for the preparation of a protein peptide, a protein peptide and use thereof | |
| CN100999752B (zh) | 一种源自胶原蛋白的抗氧化肽混合物及其制备方法和用途 | |
| CN107226836B (zh) | 一种具有改善记忆功效的多肽及其分离制备方法和应用 | |
| CN103343153A (zh) | 一种酶水解制备林蛙油肽的方法和林蛙油肽 | |
| CN108047313B (zh) | 鸡血球抗氧化肽及其发酵制备方法 | |
| CN110628859A (zh) | 一种糖基化牡蛎肽及其制备方法 | |
| CN116589533A (zh) | 南极磷虾小分子活性肽及其制备方法和应用 | |
| US20220154239A1 (en) | Peptide for complexing zinc ion, complex thereof and use therefor | |
| CN112080542B (zh) | 一种低苯丙氨酸蛋清蛋白肽的制备方法 | |
| JP4223579B2 (ja) | キシロースおよびキシリトールの製造方法 | |
| CN111748502B (zh) | 一株产纳豆激酶的菌株及利用该菌株制备纳豆激酶产品的方法 | |
| CN116114787A (zh) | 一种高效脱除蛋白原料中苯丙氨酸的方法 | |
| CN111418700A (zh) | 一种金枪鱼肽、其提取方法及作为降压剂的应用 | |
| JP5399468B2 (ja) | 脂肪分解活性を呈する組成物 | |
| CN107446980B (zh) | 一种沙棘叶多肽及其制备方法 | |
| Li et al. | Identification of angiotensin‐converting enzyme inhibitory peptides from peanut meal (Arachis hypogaea Linn) fermented by Lactobacillus pentosus using MALDI‐TOF–MS and LC–MS/MS | |
| CN114032272A (zh) | 一种低苯丙氨酸植物蛋白肽及其制备方法 | |
| CN1032925C (zh) | 蚯蚓的酶工程技术 | |
| CN103549435A (zh) | 乳清蛋白肽口服液的制作方法 | |
| Kareem et al. | Purification and characterization of α-galactosidase isolated from Klebsiella pneumoniae in the human oral cavity | |
| JP2000245493A (ja) | ポリアミン組成物の製造法 | |
| CN100383239C (zh) | 从小麦麸皮中提取草酸氧化酶的方法 | |
| CN101654693A (zh) | 微生物发酵制备菜籽肽的方法 | |
| JP2006254876A (ja) | Ｌ−トリプトファン製造法 | |
| CN110229858A (zh) | 用于苯丙酮尿症药用食物的生物多肽的制备方法及其用途 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |