CN107446980B - 一种沙棘叶多肽及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种沙棘叶多肽及其制备方法的方法，包括如下步骤：(1)预处理：沙棘叶粉碎，按照1g:30‑60mL的料液比与缓冲液混匀，将pH值调至8.0‑12.0，热处理钝化酶的活性，冷却，得预处理液；(2)酶解：将蛋白酶加入预处理液，酶解反应，反应完毕后，热处理钝化酶的活性，冷却室温，得酶解液；(3)澄清：将酶解液离心分离，取上清液，即得多肽溶液。本发明蛋白质水解度高、多肽得率高，具有成本低廉、操作简单、条件温和、耗能低、不破坏营养、不产生有毒物质等优点，能有效制备沙棘叶多肽，具有良好的市场应用前景。

Description

一种沙棘叶多肽及其制备方法

技术领域

本发明涉及食品加工技术领域，具体涉及一种沙棘叶多肽的制备方法。

背景技术

沙棘(Hippophaer hamnoides L.)，为胡颓子科(Elaeagnaceae)酸刺属的灌木或小乔木，其果实是被载入中华人民共和国药典的药物，是被国家认可的药食两用的资源，因此对果实的研究和利用受到大家的关注与重视，用果实加工的饮料、食品、保健品、药品也越来越多。但是目前对沙棘叶的利用却不太多，主要局限于茶剂和黄酮的提取。

据文献报道，沙棘叶和沙棘果一样含有极其丰富的营养成分和生理活性物质，沙棘叶氨基酸含量丰富，有20多种，其中人体必需氨基酸含量较高，尤其是用于肝昏迷抢救药物的精氨酸、用于治疗十二脂肠溃疡的组氨酸，沙棘叶中有可观的含量。然而，相对于沙棘果，沙棘叶却优势显著，具有产量大、易收集、采集周期长、生产加工工艺简单、易贮藏、成本低廉等优点。近年来，多肽作为一种新型原料，其广泛应用于制药工业、食品工业、饮料工业、化妆品工业、饲料工业等产业中。因此，介于沙棘叶具有较高的医疗保健作用，可以预见，将沙棘叶中的蛋白质降解为多肽将具有很高的开发利用价值。

目前，将蛋白质水解为多肽的方法主要包括酸解法、碱解法、酶解法，前两种方法操作简单，但可能存在营养和毒理方面的有害效应，因此其应用受到了一定的限制；然而，酶解法是在温和的条件下通过酶将蛋白质水解产生特定的肽，具有耗能低、不破坏营养、不产生有毒物质等优点，能很好的满足多肽在工业生产上的需要。

现未见沙棘叶多肽制备方法的报道。

发明内容

本发明提供了一种沙棘叶多肽及其制备方法。

本发明提供了一种制备沙棘叶多肽的方法，它采用酶解法，包括如下步骤：

(1)预处理：沙棘叶粉碎，按照1g:30-60mL的料液比与缓冲液混匀，将pH值调至8.0-12.0，热处理钝化酶的活性，冷却，得预处理液；

(2)酶解：将蛋白酶加入预处理液，酶解反应，反应完毕后，热处理钝化酶的活性，冷却室温，得酶解液；

(3)澄清：将酶解液离心分离，取上清液，即得多肽溶液。

其中，所述步骤(1)中，缓冲液为硼酸缓冲液，所述的料液比为1g:50mL；所述的pH值为10.0，所述的冷却温度为55℃以下。

其中，所述步骤(2)中，蛋白酶包括碱性蛋白酶、中性蛋白酶或胰蛋白酶。

优选地，所述的蛋白酶为碱性蛋白酶。

其中，所述步骤(2)中，酶添加量为每g沙棘叶添加酶的量为10000-18000U。

其中，所述的酶添加量为每g沙棘叶添加酶的量为14000U。

其中，所述步骤(2)中，酶解反应为40-55℃的恒温水浴锅中酶解1-4小时。

其中，酶解反应为45℃的恒温水浴锅中酶解2小时。

其中，所述步骤(1)或步骤(2)任意一步中，热处理钝化酶的活性方法为70-100℃的恒温水浴锅中灭酶10min。

其中，所述步骤(3)中，离心条件为转速3000-6000r/min，离心10min。

本发明最后提供前述方法制备的沙棘叶多肽。

本发明蛋白质水解度高、多肽得率高，具有成本低廉、操作简单、条件温和、耗能低、不破坏营养、不产生有毒物质等优点，能有效制备沙棘叶多肽，具有良好的市场应用前景。

显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

具体实施方式

实施例1本发明沙棘叶多肽制备方法

(1)预处理：沙棘叶粉碎，按照1g:50mL的料液比与硼酸缓冲液混匀，将pH值调至10，置于90℃的恒温水浴锅中灭酶10min，冷却至45℃，得预处理液；

(2)酶解：将碱性蛋白酶加入预处理液，酶添加量为14000U/g，置于45℃恒温水浴锅，酶解2小时，反应完毕后，置于90℃水浴锅中灭酶，冷却至室温，得酶解液；

(3)澄清：将酶解液5000r/min离心10min后取上清液于容器中，即得多肽溶液。

实施例2本发明沙棘叶多肽制备方法

(1)预处理：沙棘叶粉碎，按照1g:30mL的料液比与硼酸缓冲液混匀，将pH值调至8，置于70℃的恒温水浴锅中灭酶10min，冷却至55℃，得预处理液；

(2)酶解：将碱性蛋白酶加入预处理液，酶添加量为10000U/g，置于40℃恒温水浴锅，酶解4小时，反应完毕后，置于90℃水浴锅中灭酶，冷却至室温，得酶解液；

(3)澄清：将酶解液5000r/min离心10min后取上清液于容器中，即得多肽溶液。

实施例3本发明沙棘叶多肽制备方法

(1)预处理：沙棘叶粉碎，按照1g:60mL的料液比与硼酸缓冲液混匀，将pH值调至12，置于90℃的恒温水浴锅中灭酶10min，冷却至室温，得预处理液；

(2)酶解：将碱性蛋白酶加入预处理液，酶添加量为18000U/g，置于55℃恒温水浴锅，酶解2小时，反应完毕后，置于100℃水浴锅中灭酶，冷却至室温，得酶解液；

(3)澄清：将酶解液5000r/min离心10min后取上清液于容器中，即得多肽溶液。

以下通过具体实验证明本发明的有益效果：

试验例1本发明沙棘叶多肽的制备

1实验材料

1.1材料与试剂：沙棘叶粉(采自阿坝州小金县)，碱性蛋白酶(北京索莱宝科技有限公司)，其余试剂均为分析纯。

1.2仪器与设备：离心机(SF-TDL-6A，上海菲恰尔分析仪器有限公司)，酸度计(PHS-3C+，成都市世纪方舟科技有限公司)，电热恒温水浴锅(HH-60，北京市永光明医疗器械有限公司)，消化炉(KDT-08C，苏州市天威仪器有限公司)。

2实验方法

2.1沙棘叶多肽水解度的测定分析

采用中性甲醛滴定法对沙棘叶多肽水解度进行测定。

游离氨基(-NH2)的含量计算如下式：

X＝(C×(V₁-V₂)×0.014×1000)/V₃

式中：X：样品中氨基氮的含量(mg/mL)；

V₁：测定用样品加入甲醛稀释后消耗氢氧化钠标准液的体积(mL)；

V₂：试剂空白试验加入甲醛后消耗氢氧化钠标准溶的体积(mL)；

V₃：样品稀释液取用量(mL)；

C：氢氧化钠标准液的浓度(mol/L)；

0.014:1mL浓度为1.0mol/LNaOH标准溶液相当于氮的含量

DH(％)＝N₁/N₂×100％

式中：N₁：水解后生成的氨基态氮的含量(mg)；

N₂：样品总氮含量(mg)；

其中样品总氮含量测定采用凯氏定氮法。

2.2沙棘叶多肽的制备

采用实施例1的方法制备沙棘叶多肽。

3实验结果

实验结果如表1所示：

表1沙棘叶多肽水解度、多肽得率、蛋白质回收率

由表1可知，沙棘叶多肽水解度为19.88％，多肽得率为7.9％，蛋白质回收率为27.78％。本发明方法的沙棘叶多肽制备工艺：酶添加量为14000U/g，料液比(m/V)为1:50，pH＝10.0，温度为45℃，酶解时间为2h；该方法条件温和，蛋白质水解度大，为沙棘叶多肽制备提供了重要依据。

综上，本发明蛋白质水解度高、多肽得率高，具有成本低廉、操作简单、条件温和、耗能低、不破坏营养、不产生有毒物质等优点，能有效制备沙棘叶多肽，具有良好的市场应用前景。

Claims (3)

1.一种制备沙棘叶多肽的方法，它采用酶解法，包括如下步骤：

(1)预处理：沙棘叶粉碎，按照1g:50mL的料液比与硼酸缓冲液混匀，将pH值调至10.0，热处理钝化酶的活性，冷却至55℃以下，得预处理液；

(2)酶解：将蛋白酶加入预处理液，酶解反应，反应完毕后，热处理钝化酶的活性，冷却至室温，得酶解液；

(3)澄清：将酶解液离心分离，取上清液，即得多肽溶液；

所述步骤（2）中，蛋白酶为碱性蛋白酶，所述的酶添加量为每g沙棘叶添加酶 的量为14000U，酶解反应为45℃的恒温水浴锅中酶解 2小时。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)或步骤(2)任意一步中，热处理钝化酶的活性方法为70-100℃的恒温水浴锅中灭酶10min。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中，离心条件为转速3000-6000r/min，离心10min。