CN116087370A - 一种宠物营养液中低聚果糖的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种宠物营养液中低聚果糖的检测方法，包括以下：S1.样品前处理，制备待测液；S2.配制系列梯度标准溶液；S3.高效液相色谱定量检测。本发明的检测方法以阿拉伯糖或丙三醇作为内标物，只需采用过滤或离心操作对宠物营养液中进行前处理，无需进行酶解、吸附及过柱净化等复杂操作，缩短了前处理时间，降低了检测耗时，提高检测效率；以蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖作为外标物，对宠物营养液中低聚果糖的含量进行检测，比以果聚糖作为外标物，检测结果更加准确。本发明的检测方法，能够快速、简便、准确地对宠物营养液中的低聚果糖含量进行批量化检测。
Description
技术领域
本发明涉及分析检测技术领域，特别是涉及一种宠物营养液中低聚果糖的检测方法。
背景技术
低聚果糖又称寡果糖或蔗糖三糖族低聚糖。现在低聚果糖运用在宠物食品，例如宠物营养液补充液中。宠物营养补充液为液体，是直接给予宠物饮用，包含有机酸以及营养成分，在生产过程中添加了一定量的低聚果糖。现有的低聚果糖检测方法包括：（1）《DB 35/T 1737-2018 饲料中低聚果糖的测定 高效液相色谱法》、（2）《GB 5009.255-2016 食品安全国家标准 食品中果聚糖的测定》，但是这些检测方法步骤繁琐，操作复杂，而且不适用于对宠物营养液中的低聚果糖进行快速检测。
《DB 35/T 1737-2018 高效液相色谱法》的检测对象是饲料、配合饲料，因此检测时需采用石墨炭进行吸附；《GB 5009.255-2016 方法》适用于婴幼儿配方米粉、米乳粉以及奶粉中低聚蔗果三糖、四糖、五糖的测定，需经酶解；《GB 5009.255-2016方法》适用于乳及乳制品、婴幼儿配方食品、婴幼儿谷类辅助食品、固体饮料、配制酒中单独添加的低聚果糖、多聚果糖或菊粉含量的测定，也需经酶解以及净化柱净化，其标准物质为果聚糖，而且计算公式中主要表述为果聚糖含量的计算。上述方法存在前处理操作复杂、检测耗时长、标准物质不适用的缺点，不适合用于对宠物营养液中低聚果糖的检测。因此需要研发一种宠物营养液中低聚果糖的检测方法，快速、简便、准确地对宠物营养液中的低聚果糖进行检测。
发明内容
本发明的目的在于提供一种宠物营养液中低聚果糖的检测方法。
根据本发明的一个方面，提供了一种宠物营养液中低聚果糖的检测方法，包括以下：
S1. 样品前处理：取一定量的宠物营养液作为待测样品置于容量瓶中，加入蒸馏水溶解，加入内标液，然后加蒸馏水定容至容量瓶的刻度线，进行过滤，滤液为澄清溶液则直接作为待测液，滤液为浑浊溶液则进行离心，离心后取上清液作为待测液；
S2. 配制标准溶液：取一定量的低聚果糖的标准物质，置于容量瓶内，加入蒸馏水进行溶解并定容至刻度线，得到标准原液，量取标准原液，置于容量瓶内，加入1ml内标液，加蒸馏水定容，得到系列梯度浓度标准溶液；
S3. 定量检测：将待测液、系列梯度浓度标准溶液进行高效液相色谱检测，根据各系列梯度浓度标准溶液中标准物质的峰面积计算得到标准曲线，使用标准曲线计算出待测液中低聚果糖的浓度（μg/mL），并用以下公式计算出样品中低聚果糖的含量（%），公式如下：
低聚果糖含量（%）=
注：A：待测液中蔗果三糖的浓度（μg/mL）；
B：待测液中蔗果四糖的浓度（μg/mL）；
C：待测液中蔗果五糖的浓度（μg/mL）；
V：定容体积（mL）；
N：稀释倍数；
m：待测样品质量（g）。
在一些实施方式中，内标液为质量体积分数5%的阿拉伯糖的乙醇-水溶液。
在一些实施方式中，内标液为质量体积分数5%的丙三醇的乙醇-水溶液。
在一些实施方式中，内标液中的乙醇为体积分数80%的乙醇溶液。
在一些实施方式中，步骤S3中色谱条件为：色谱柱：糖分析柱，流动相：乙腈：水=65:35~70:30，检测器：示差折光检测器，进样量：10μL，流速：1.0mL/min。
在一些实施方式中，步骤S2中低聚果糖的标准物质包括蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖，步骤S1中待测样品量为0.2~2.0g。
在一些实施方式中，步骤S2配制标准溶液，包括以下操作：分别取一定量的蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖，置于容量瓶中，加入蒸馏水进行溶解并定容，得到含有蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖的标准原液，分别量取一定体积的含有蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖的标准原液，置于容量瓶中，加入1mL内标液，加蒸馏水定容，得到含有蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖的系列梯度浓度标准溶液，其浓度梯度为50、100、150、200、250μg/mL。
在一些实施方式中，宠物营养液包括猫用营养液、犬用营养液或猫犬营养液。
本发明的有益效果：本发明的检测方法以阿拉伯糖或丙三醇作为内标物，只需采用过滤或离心操作对宠物营养液中进行前处理，无需进行酶解、吸附及过柱净化等复杂操作，缩短了前处理时间，降低了检测耗时，提高检测效率；以蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖作为外标物，对宠物营养液中低聚果糖的含量进行检测，比以果聚糖作为外标物，检测结果更加准确。本发明的检测方法，能够快速、简便、准确地对宠物营养液中的低聚果糖含量进行批量化检测。
附图说明
图1为本发明中蔗果三糖的标准曲线。
图2为本发明中蔗果四糖的标准曲线。
图3为本发明中蔗果五糖的标准曲线。
图4为实施例1中浓度为50μg/mL的标准溶液中阿拉伯糖、蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖的色谱图。
图5为实施例1的待测样品中低聚果糖的色谱图。
图6为实施例2的待测样品中低聚果糖的色谱图。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明作进一步详细的说明。
实施例1 本发明的一种宠物营养液中低聚果糖的检测方法，包括以下：
S1. 样品前处理：取1.0434 g的猫用营养液作为待测样品置于50mL容量瓶中，加入蒸馏水溶解，加入5ml 质量体积分数5%的阿拉伯糖的乙醇-水溶液，其中乙醇为体积分数80%的乙醇溶液，然后加蒸馏水定容至容量瓶的刻度线，过0.45μm滤膜进行过滤，滤液为澄清溶液，直接作为待测液，进行后续上机测定；
S2. 配制标准溶液，分别取相同量的蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖，置于20mL容量瓶中，加入蒸馏水进行溶解并定容，得到蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖的标准原液，分别量取一定体积的含有蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖的标准原液，置于10mL容量瓶中，加入1mL质量体积分数5%的阿拉伯糖的乙醇-水溶液，其中乙醇为体积分数80%的乙醇溶液，加蒸馏水定容，得到浓度梯度为50、100、150、200、250μg/mL的含有蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖的系列梯度浓度标准溶液，单一浓度的标准溶液中，蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖的浓度相同，例如50μg/mL的标准溶液中，蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖的浓度均为50μg/mL；
S3. 定量检测：将待测液、含有蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖的系列梯度浓度标准溶液进行高效液相色谱检测，液相色谱条件为：色谱柱：糖分析柱，流动相：乙腈：水=65:35，检测器：示差折光检测器，进样量：10μL，流速：1.0mL/min；
根据各系列梯度浓度标准溶液中蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖的峰面积为纵轴，以各系列梯度浓度标准溶液中蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖的浓度为横轴，计算出蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖的标准曲线，得到蔗果三糖的标准曲线为：y1=0.9058x1-8.1093，R2=0.9997，蔗果四糖的标准曲线为：y2=0.8163x2+0.789，R2=0.9995，蔗果五糖的标准曲线为：y3=0.7666x3+0.3975，R2=0.9996，见说明书附图1~3。其中浓度为50μg/mL的标准溶液的液相色谱图如说明书附图4所示。
根据对待测液进行高效液相色谱检测，得到相应的色谱图，见说明书附图5，利用上述蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖的标准曲线，计算得到待测液中蔗果三糖的浓度分别为34.7329μg/mL，蔗果四糖的浓度为36.0406μg/mL，没有检测到蔗果五糖，参照公式计算得到猫用营养液中低聚果糖的含量为0.339%，公式如下：
低聚果糖含量（%）=
注：A：待测液中蔗果三糖的浓度（μg/mL）；
B：待测液中蔗果四糖的浓度（μg/mL）；
C：待测液中蔗果五糖的浓度（μg/mL）；
V：定容体积（mL）；
N：稀释倍数，为1；
m：待测样品质量（g）。
《DB 35/T 1737-2018 高效液相色谱法》对一个试样中低聚果糖的整个检测周期需要412min ，其中样品前处理需要88 min，仪器测定需要324 min；《GB 5009.255-2016 方法》对一个试样中果聚糖的整个检测周期需要762 min ，其中样品前处理需要492min，仪器测定需要270 min；本方法中样品前处理需要时间40 min，仪器测定时间180 min，整个检测周期需要220 min，因此，本方法将前处理时间比地标（DB）节省了54.54%，整个检测周期比地标法（DB）时间节省了 32.10%；本方法将前处理时间比国标（GB）节省了91.87%，整个检测周期比国标法（GB）时间节省了71.13%，极大地提高了检测效率，更适合用于对宠物营养液进行批量化检测。
实施例2 本发明的一种宠物营养液中低聚果糖的检测方法，包括以下：
S1. 样品前处理：称取1.0658g的犬用营养液作为待测样品置于50mL容量瓶中，加入蒸馏水溶解，加入5ml 质量体积分数5%的阿拉伯糖的乙醇-水溶液，其中乙醇为体积分数80%的乙醇溶液，然后加蒸馏水定容至容量瓶的刻度线，过0.45μm滤膜进行过滤，滤液为澄清溶液，直接作为待测液，进行后续上机测定；
S2. 配制标准溶液，分别取相同量的蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖，置于20mL容量瓶中，加入蒸馏水进行溶解并定容，得到蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖的标准原液，分别量取一定体积的含有蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖的标准原液，置于10mL容量瓶中，加入1mL质量体积分数5%的阿拉伯糖的乙醇-水溶液，其中乙醇为体积分数80%的乙醇溶液，加蒸馏水定容，得到浓度梯度为50、100、150、200、250μg/mL的含有蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖的系列梯度浓度标准溶液，单一浓度的标准溶液中，蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖的浓度相同，例如50μg/mL的标准溶液中，蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖的浓度均为50μg/mL；
S3. 定量检测：将待测液、含有蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖的系列梯度浓度标准溶液进行高效液相色谱检测，液相色谱条件为：色谱柱：糖分析柱，流动相：乙腈：水=70:30，检测器：示差折光检测器，进样量：10μL，流速：1.0mL/min；
根据对本实施例中待测液进行高效液相色谱检测，得到相应的色谱图，见说明书附图6，利用实施例1中蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖的标准曲线，计算得到待测液中蔗果三糖的浓度分别为39.3552μg/mL，蔗果四糖的浓度为40.0816μg/mL，没有检测到蔗果五糖，并参照公式计算得到犬用营养液中低聚果糖的含量为0.373%，公式如下：
低聚果糖含量（%）=
注：A：待测液中蔗果三糖的浓度（μg/mL）；
B：待测液中蔗果四糖的浓度（μg/mL）；
C：待测液中蔗果五糖的浓度（μg/mL）；
V：定容体积（mL）；
N：稀释倍数，为1；
m：待测样品质量（g）。
实施例3 本发明的一种宠物营养液中低聚果糖的检测方法，包括以下：
S1. 样品前处理：称取2.0 g的猫犬用营养液作为待测样品置于50mL容量瓶中，加入蒸馏水溶解，加入5ml 质量体积分数5%的丙三醇的乙醇-水溶液，其中乙醇为体积分数80%的乙醇溶液，然后加蒸馏水定容至容量瓶的刻度线，加入硅藻土进行过滤，滤液为澄清溶液，直接作为待测液，进行后续上机测定；
S2. 配制标准溶液，分别取相同量的蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖，置于20mL容量瓶中，加入蒸馏水进行溶解并定容，得到蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖的标准原液，分别量取一定体积的含有蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖的标准原液，置于10mL容量瓶中，加入1mL质量体积分数5%的阿拉伯糖的乙醇-水溶液，其中乙醇为体积分数80%的乙醇溶液，加蒸馏水定容，得到浓度梯度为50、100、150、200、250μg/mL的含有蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖的系列梯度浓度标准溶液，单一浓度的标准溶液中，蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖的浓度相同，例如50μg/mL的标准溶液中，蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖的浓度均为50μg/mL；
S3. 定量检测：将待测液、含有蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖的系列梯度浓度标准溶液进行高效液相色谱检测，液相色谱条件为：色谱柱：糖分析柱，流动相：乙腈：水=67.5:32.5，检测器：示差折光检测器，进样量：10μL，流速：1.0mL/min；
根据对本实施例中待测液进行高效液相色谱检测，得到相应的色谱图及峰面积，利用实施例1中蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖的标准曲线，计算得到待测液中蔗果三糖的浓度分别为90.2656μg/mL，蔗果四糖的浓度为97.4430μg/mL，没有检测到蔗果五糖，并参照公式计算得到猫犬用营养液中低聚果糖的含量为0.469%，公式如下：
低聚果糖含量（%）=
注：A：待测液中蔗果三糖的浓度（μg/mL）；
B：待测液中蔗果四糖的浓度（μg/mL）；
C：待测液中蔗果五糖的浓度（μg/mL）；
V：定容体积（mL）；
N：稀释倍数，为1；
m：待测样品质量（g）。
实施例4 方法的检出限、定量限、精密度和回收率
4.1方法的检出限、定量限测定
本实施例中检出限及定量限测定，向不含有低聚果糖的空白试样中，分别加入2g蔗果三糖、2g蔗果四糖、2g蔗果五糖标准物质，进行加标处理，得到待测加标样品，按照实施例1的方法对上述待测加标样品进行检测，每个标准物质设置10个重复，并得到其S/N值、测定浓度值，根据以下公式计算方法检出限、定量限，公式如下：
，
注：S/N值为检测仪器的信噪比。
计算得到本发明的方法对蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖的检出限分别为0.011%、0.008%、0.010%，定量限分别为0.036%、0.0267%、0.0317%，
见表1、2、3。
表1 方法对蔗果三糖加标样品的检出限、定量限
表2 方法对蔗果四糖加标样品的检出限、定量限
表3 方法对蔗果五糖加标样品的检出限、定量限
《DB 35/T 1737-2018 高效液相色谱法》对低聚果糖的检出限为0.015%，定量限为0.050%，《GB 5009.255-2016 方法》的称样量为5克，检出限位0.04%，定量限为0.2%。本发明对低聚果糖的方法检出限、定量限均低于上述《DB法》，检出限、定量限大大低于《GB法》。本发明较《GB法》检出限提高了72.5%，定量限提高了82%。
4.2 方法的回收率及精密度测定
采用低聚果糖已知含量的宠物营养液样品，进行低、中、高三个不同水平的加标，每组重复三次，计算方法的准确度、回收率及精密度。具体结果见下表4、表5。
表4 宠物营养液样品中低聚果糖含量表
表5 方法准确度、回收率及精密度表
由上表5可以直接得出，本方法对蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖的低、中、高三个水平的平均加标回收率分别为98.38%~99.56%、98.42%~99.52%、99.12%~99.75%，蔗果三糖的低、中、高三个加标水平的相对标准偏差分别为0.35%、0.1%、0.26%，蔗果四糖的低、中、高三个加标水平的相对标准偏差分别为0.16%、0.35%、0.17%，蔗果五糖的低、中、高三个加标水平的相对标准偏差分别为0.19%、0.18%、0.2%。说明本方法的回收率很高，精密度和准确度好，对宠物营养液中低聚果糖的含量进行更准确的测定。
以上所述的仅是本发明的一些实施方式，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明创造构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。
Claims (8)
1.一种宠物营养液中低聚果糖的检测方法，包括以下步骤：
S1. 样品前处理：取一定量的宠物营养液作为待测样品置于容量瓶中，加入蒸馏水溶解，加入内标液，然后加蒸馏水定容至所述容量瓶的刻度线，进行过滤，滤液为澄清溶液则直接作为待测液，滤液为浑浊溶液则进行离心，离心后取上清液作为待测液；
S2. 配制标准溶液：取一定量的低聚果糖的标准物质，置于容量瓶内，加入蒸馏水进行溶解并定容至刻度线，得到标准原液，量取所述标准原液，置于容量瓶内，加入1ml所述内标液，加蒸馏水定容，得到系列梯度浓度标准溶液；
S3. 定量检测：将所述待测液、所述系列梯度浓度标准溶液进行高效液相色谱检测，根据所述系列梯度浓度标准溶液中标准物质的峰面积计算得到标准曲线，使用所述标准曲线计算出所述待测液中低聚果糖的浓度（μg/mL），并用以下公式计算出所述样品中低聚果糖的含量（%），公式如下：
低聚果糖含量（%）=
注：A：待测液中蔗果三糖的浓度（μg/mL）；
B：待测液中蔗果四糖的浓度（μg/mL）；
C：待测液中蔗果五糖的浓度（μg/mL）；
V：定容体积（mL）；
N：稀释倍数；
m：待测样品质量（g）。
2.根据权利要求1所述的一种宠物营养液中低聚果糖的检测方法，其特征在于，所述内标液为质量体积分数5%的阿拉伯糖的乙醇-水溶液。
3.根据权利要求1所述的一种宠物营养液中低聚果糖的检测方法，其特征在于，所述内标液为质量体积分数5%的丙三醇的乙醇-水溶液。
4.根据权利要求2或3所述的一种宠物营养液中低聚果糖的检测方法，其特征在于，所述内标液中的乙醇为体积分数80%的乙醇溶液。
5.根据权利要求1所述的一种宠物营养液中低聚果糖的检测方法，其特征在于，所述步骤S3中色谱条件为：色谱柱：糖分析柱，流动相：乙腈：水=65:35~70:30，检测器：示差折光检测器，进样量：10μL，流速：1.0mL/min。
6.根据权利要求1所述的一种宠物营养液中低聚果糖的检测方法，其特征在于，所述步骤S2中低聚果糖的标准物质包括蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖，所述步骤S1中待测样品量为0.2~2.0g。
7.根据权利要求6所述的一种宠物营养液中低聚果糖的检测方法，其特征在于，所述步骤S2配制标准溶液，包括以下操作：分别取一定量的蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖，置于容量瓶中，加入蒸馏水进行溶解并定容，得到含有蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖的标准原液，分别量取一定体积的所述含有蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖的标准原液，置于容量瓶中，加入1mL所述内标液，加蒸馏水定容，得到含有蔗果三糖、蔗果四糖和蔗果五糖的系列梯度浓度标准溶液，其浓度梯度为50、100、150、200、250μg/mL。
8.根据权利要求1所述的一种宠物营养液中低聚果糖的检测方法，其特征在于，所述宠物营养液包括猫用营养液、犬用营养液或猫犬营养液。
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