CN112684074A - 一种甲酸钙含量的测定方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种甲酸钙含量的测定方法，属于含量检测技术领域。其通过样品溶液的制备、对照品溶液的配置和甲酸钙含量测定步骤完成。本发明利用高效液相色谱技术对样品溶液进行测定，得到甲酸钙色谱峰的峰面积，根据标准曲线计算供试品中甲酸钙的含量，并结合样品的质量，经计算得到甲酸钙的含量。该方法可以用于含有甲酸钙动物保健食品、兽药、普通饲料或饲料预混料的含量快速测定，对含甲酸钙的动物保健食品、兽药、普通饲料或饲料预混料的质量进行评价，该含量测定方法准确、快捷、方便、有效。

Description

一种甲酸钙含量的测定方法
技术领域
本发明涉及一种甲酸钙含量的测定方法，具体涉及一种甲酸钙类动物保健食品、兽药、普通饲料或饲料预混料中甲酸钙的含量的测定方法，属于含量检测技术领域。
背景技术
为应对无抗养殖新时代的重大需求，现有市场开发出了混合型饲料添加剂，其主成分之一采用甲酸钙作为添加剂。其在动物体内经生化作用能有利于激活胃蛋白酶源，提高饲料养分的消化率，促进仔猪食欲和降低腹泻率，具有抑菌防腐作用。为保证产品质量，其有效成分的含量测定就不能忽视。
现有部分产品采用EDTA滴定法，该方法不适合复杂组分中低含量甲酸钙的含量测定，并且具有局限性及不确定性。公开文献对饲料中甲酸钙含量测定很少报道，尤其是复杂组分中的甲酸钙的含量测定。
为了控制产品质量，本发明对饲料添加剂中的甲酸钙含量测定进行了研究，为该类产品的质量控制提供了依据。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足之处，提供一种甲酸钙含量的测定方法，具有专属性强、灵敏度高、准确度好、操作简便、快速、应用范围广等特点，适用于各类动物保健食品、兽药、普通饲料或饲料预混料中甲酸钙含量的测定，从而建立一种快速简便的甲酸钙快速测定方法。
本发明的技术方案，一种甲酸钙含量的测定方法，步骤如下：
(1)样品溶液的配制：称取样品于容量瓶中，加入适量水，超声提取，加水至刻度后摇匀，离心后上清液过滤膜，滤液即为样品溶液；
(2)对照品溶液的配置：取甲酸钙对照品制成每1mL分别含0.05mg、0.1mg、0.2mg、0.4mg、0.8mg的对照品溶液；
(3)甲酸钙含量的测定：
a、对步骤(2)所得不同浓度的对照品溶液分别以10μL进样，测得各标准品溶液的高效液相色谱峰面积；以所得各标准对照品峰面积为纵坐标，各对应标准对照品浓度为横坐标分别做标准曲线，分别计算得线性回归方程；
b、对步骤(1)配置的样品溶液进行高效液相色谱测定，得到甲酸钙色谱峰的峰面积，根据标准曲线计算样品中甲酸钙的含量，并结合样品的质量，经计算得到甲酸钙的含量。
一种甲酸钙含量的测定方法，包括以下步骤：
(1)样品溶液的配制：取样品不少于20g，研细；精密称取研磨细粉0.1-10.0g于500mL容量瓶中，加入200-250mL水，28-32℃、40KHz超声提取25-35min后，加水至刻度，摇匀；离心后将上清液过0.45μm滤膜，滤液即为样品溶液；
(2)高效液相色谱实验条件：
色谱柱：JADE-PAK ODS(250×4.6mm，5um)或等效色谱柱；
流速：0.5～1.5ml/min；
检测波长：214nm；
流动相：A：0.5％磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH至3.0)；B：乙腈；
梯度如下表1所示：
表1
时间(min) 流动相A 流动相B
0 97％ 3％
5.0 97％ 3％
10.0 50％ 50％
15.0 50％ 50％
16.0 97％ 3％
20.0 97％ 3％
进样量：10μL；
柱温：20～40℃；
洗脱时间：20min；
(3)对照品溶液的配制：取甲酸钙对照品【CAS号：544-17-2】，制成每1mL分别含0.05mg、0.1mg、0.2mg、0.4mg、0.8mg的对照品溶液；
(4)甲酸钙含量测定：
高效液相色谱测定：不同浓度的对照品溶液分别以10μL进样，测得各标准品溶液的高效液相色谱峰面积；以所得各标准对照品峰面积为纵坐标，各对应标准对照品浓度为横坐标分别做标准曲线，分别计算得线性回归方程；然后对样品溶液进行高效液相色谱测定，得到甲酸钙色谱峰的峰面积，根据标准曲线计算样品中甲酸钙的含量，并结合样品的质量，经计算得到甲酸钙的含量。
所述步骤(4)中的甲酸钙含量的计算公式为：
Figure BDA0002892446030000021
式中
A样：样品溶液的甲酸钙峰面积；
C：对照品溶液的浓度，μg/mL；
A标：对照品溶液的甲酸钙峰面积；
W样：样品称重，g。
所述的样品溶液经0.45um微孔滤膜过滤后再进样。
所述的步骤(1)中的样品为固体样品则需先用研钵及研杵研磨成细粉后使用，若样品为液体样品则直接取用，若样品为胶囊样品则取若干胶囊的内容物，研磨混合均匀后使用。
所述方法适用于含甲酸钙的片剂、甲酸钙类硬胶囊、甲酸钙类粉剂、甲酸钙类软胶囊、甲酸钙类滴剂、甲酸钙类丸剂、甲酸钙类软糖、甲酸钙类饮料。
所述甲酸钙还可以为甲酸钙产品；具体为各类动物保健食品、兽药、普通饲料或饲料预混料。
本发明的有益效果：本发明的色谱温度控制在25～40℃，洗脱时间为20min，该色谱条件在保证含量测定准确性的前提下，梯度洗脱时间仅为20min，有效提高了工作效率；本发明的含量测定方法测试时间短、专属性强、回收率高、仪器试剂简单，整个过程检测成本较低；本发明可以用于含有甲酸钙的动物保健食品、兽药、普通饲料或饲料预混料的含量快速测定，对含甲酸钙的动物保健食品、兽药、普通饲料或饲料预混料的质量进行评价，具有灵敏度高、准确度好、操作简便、快速、应用范围广等特点。
附图说明
图1是实施例1中甲酸钙对照品图谱；
图2是实施例1中样品溶液的HPLC-UV；
图3是实施例2中甲酸钙对照品图谱；
图4是实施例2中样品溶液的HPLC-UV；
图5是实施例3中甲酸钙对照品图谱；
图6是实施例3中样品溶液的HPLC-UV。
具体实施方式
以下通过实施例进一步说明本发明，但不作为对本发明的限制。
实施例1
检测试剂：甲酸钙对照品、磷酸二氢钾(分析纯)、乙腈(HPLC)、磷酸(分析纯)；
检测：
(1)对照品溶液配制：分别精密称取10mg、20mg、40mg、80mg、160mg甲酸钙对照品于200mL容量瓶中，加入100mL水，超声使粉末溶解，用水定容至刻度，制备成含0.05mg、0.1mg、0.2mg、0.4mg、0.8mg的对照品溶液，阴凉保存。
(2)样品溶液配制：称取5.0g样品(产品名称：(单宁酸+甲酸钙)包被，批号：H4202012001，生产单位：江苏康雅生物科技有限公司)于500mL容量瓶中，加入250mL水，30℃、40KHz超声提取30min后，加水至刻度，摇匀，离心后将上清液过0.45μm滤膜，滤液待进样。
(3)HPLC检测条件：
色谱柱：JADE-PAK ODS(250×4.6mm，5um)或等效色谱柱；
流速：0.5mL/min；
检测波长：214nm；
流动相：A为质量浓度为0.5％的磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH至3.0)；B为乙腈。
梯度如下表2所示：
表2
Figure BDA0002892446030000031
Figure BDA0002892446030000041
进样量：10μL；
柱温：40℃；
洗脱时间：20min；
(4)高效液相色谱测定：不同浓度的对照品溶液分别以10μL进样，测得各标准品溶液的高效液相色谱峰面积；以所得各标准对照品峰面积为纵坐标，各对应标准对照品浓度为横坐标分别做标准曲线，分别计算得线性回归方程；然后对样品溶液进行高效液相色谱测定，得到甲酸钙色谱峰的峰面积，根据标准曲线计算样品中甲酸钙的含量，并结合样品的质量，经计算得到甲酸钙的含量22.12mg/g；
(5)计算：
Figure BDA0002892446030000042
式中A样为样品溶液的甲酸钙峰面积；
C为对照品溶液的浓度，μg/mL；
A标为对照品溶液的甲酸钙峰面积；
W样为样品称重，g。
本实施例1中0.2mg的甲酸钙对照品HPLC图谱如图1所示，样品溶液的HPLC-UV如图2所示。
实施例2
称取0.4015g样品(产品名称：(单宁酸+甲酸钙+香芹酚+百里香酚)包被，批号：H5202012001，生产单位：江苏康雅生物科技有限公司)，按照实施例1步骤进行测定。其中HPLC色谱条件为流速1.0mL/min；柱温30℃；其余条件同实施例1。
根据标准曲线计算样品中甲酸钙的含量，并结合样品的质量，经计算得到甲酸钙的含量113.27mg/g。
本实施例2中0.2mg的甲酸钙对照品HPLC图谱如图3所示，样品溶液的HPLC-UV如图4所示。
实施例3
称取0.4025g样品(产品名称：(单宁酸+甲酸钙+香芹酚+百里香酚)包被，批号：H5202012002，生产单位：江苏康雅生物科技有限公司)，按照实施例1步骤进行测定。其中HPLC色谱条件为流速1.5mL/min；柱温20℃；其余条件同实施例1。
根据标准曲线计算样品中甲酸钙的含量，并结合样品的质量，经计算得到甲酸钙的含量112.15mg/g。
本实施例3中0.2mg的甲酸钙对照品HPLC图谱如图5所示，样品溶液的HPLC-UV如图6所示。
实施例4
根据实施例1、2、3的要求，分别称取适量样品各5份，样品溶液制备处理中超声温度和超声提取时间按下表3进行，其它项及色谱条件分别同实施例1、2、3。
表3
序号 温度(℃) 时间(min)
1 25 40
2 28 35
3 30 30
4 32 25
5 35 20
根据标准曲线计算样品中甲酸钙的含量，并结合样品的质量，经计算得到甲酸钙的回收率，具体如表4所示。
表4
Figure BDA0002892446030000051
从表4中可以看出超声温度控制在28-32℃、超声提取时间控制在25-35min范围内甲酸钙样品回收率达98.0％以上，完全满足方法学的相关要求。
根据实施例1-4可知，在本发明方法开发过程采用恒温超声提取和建立新的色谱条件，可以显著反映样品中目标成分的回收率，更加真实反映出样品的甲酸钙的含量。本发明的含量的测定方法测试时间短、准确度高、仪器试剂简单易得，整个过程检测成本较低，该方法的尚无相关文献或专利进行报道过。

Claims (8)

1.一种甲酸钙含量的测定方法，其特征是步骤如下：
(1)样品溶液的配制：称取样品于容量瓶中，加入适量水，超声提取，加水至刻度后摇匀，离心后上清液过滤膜，滤液即为样品溶液；
(2)对照品溶液的配置：取甲酸钙对照品制成每1mL分别含0.05mg、0.1mg、0.2mg、0.4mg、0.8mg的对照品溶液；
(3)甲酸钙含量的测定：
a、对步骤(2)所得不同浓度的对照品溶液分别以10μL进样，测得各标准品溶液的高效液相色谱峰面积；以所得各标准对照品峰面积为纵坐标，各对应标准对照品浓度为横坐标分别做标准曲线，分别计算得线性回归方程；
b、对步骤(1)配置的样品溶液进行高效液相色谱测定，得到甲酸钙色谱峰的峰面积，根据标准曲线计算样品中甲酸钙的含量，并结合样品的质量，经计算得到甲酸钙的含量。
2.如权利要求1所述甲酸钙含量的测定方法，其特征是：步骤(1)中样品为固体样品则需先用研钵及研杵研磨成细粉后使用；样品为液体样品则直接取用；样品为胶囊样品则取若干胶囊的内容物，研磨混合均匀后使用。
3.如权利要求1所述甲酸钙含量的测定方法，其特征是：步骤(1)中取样品不少于20g，研细；精密称取研磨细粉0.1-10.0g于500mL容量瓶中，加入200-250mL水，28-32℃、40KHz超声提取25-35min后，加水至刻度，摇匀；离心后将上清液过滤膜，滤液即为样品溶液。
4.如权利要求3所述甲酸钙含量的测定方法，其特征是：所述滤膜具体为0.45μm的滤膜。
5.如权利要求1所述甲酸钙含量的测定方法，其特征是：步骤(3)中高效液相色谱实验条件如下：进样量10μL；柱温20～40℃；洗脱时间20min；
色谱柱为JADE-PAK ODS(250×4.6mm，5um)或等效色谱柱；
流速0.5～1.5mL/min；
检测波长214nm；
流动相：A 0.5％磷酸二氢钾溶液，用磷酸调节pH至3.0；B乙腈；
梯度如下：
Figure FDA0002892446020000011
Figure FDA0002892446020000021
6.如权利要求1所述甲酸钙含量的测定方法，其特征是：步骤(3)所述甲酸钙含量的计算公式为：
Figure FDA0002892446020000022
式中A样为样品溶液的甲酸钙峰面积；C为对照品溶液的浓度，单位mg/mL；A标为对照品溶液的甲酸钙峰面积；W样为样品称重，单位g。
7.如权利要求1所述甲酸钙含量的测定方法，其特征是：所述甲酸钙具体为甲酸钙类粉剂、甲酸钙的片剂、甲酸钙类硬胶囊、甲酸钙类软胶囊、甲酸钙类滴剂、甲酸钙类丸剂或甲酸钙类软糖。
8.如权利要求1所述甲酸钙含量的测定方法，其特征是：所述甲酸钙具体还可以是动物保健食品、兽药、普通饲料或饲料预混料产品。
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