CN116068073A - 一种吡啶-2-甲醛样品中杂质的检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种吡啶‑2‑甲醛样品中杂质的检测方法，包括如下步骤：将含有吡啶‑2‑甲醛的待测物用溶剂溶解后，得到待测液；将吡啶‑2‑甲醛标准品和杂质对照品采用溶剂溶解，分别配置得到相应浓度的参照物对照品溶液；采用高效液相色谱法，在相同的检测条件下分别获得所述待测液和所述参照物对照品溶液中化学成分的色谱图；根据所述参照物的浓度、所述参照物对照品溶液在色谱图中的峰面积以及含有吡啶‑2‑甲醛的待测物与所述参照物对照品溶液相对应的成分在色谱图中的峰面积，且基于步骤C)中的检测条件，以外标法计算吡啶‑2‑甲醛杂质的含量。利用本发明的方法可以准确地进行吡啶‑2‑甲醛有关物质分析，检测效果良好。

Description

一种吡啶-2-甲醛样品中杂质的检测方法
技术领域
本发明涉及分析检测技术领域，尤其是涉及一种吡啶-2-甲醛样品中杂质的检测方法。
背景技术
吡啶-2-甲醛(2-Pyridinecarboxaldehyde)是一种重要的医药中间体及精细化工原料，它主要用于合成比沙可啶、匹可硫酸钠。另外，还用于合成新型烟碱类杀虫剂和某些具有特殊功能的分子如荧光螯合剂等。目前，在合成吡啶-2-甲醛主要方法有在催化剂作用下用O2、过氧化氢、过氧化叔丁醇等化学氧化剂氧化2-吡啶甲醇制备吡啶-2-甲醛，在检测吡啶-2-甲醛时，目前普遍采用气相方法进行监控各种杂质，但是在气相条件下，由于过高的温度气化导致一些杂质发生降解，未能完全检测到各个杂质，因此该方法的适用性极差，吡啶-2-甲醛的化学结构式为：
Figure BDA0003881241480000011
现有技术中没有关于吡啶-2-甲醛有关物质检测方法的报道，而各个厂家的方法均以气相作为单纯检测主成分，并没有过多涉及合成过程中的工艺及降解杂质的关注，再加上气相色谱法用于检测有关物质会产生许多不可避免的杂质及主成分降解无法真实反应出物料质量。
因此，本发明提供一种简单可操作性强、重现性好的采用液相监控吡啶-2-甲醛有关物质分析方法是非常必要的。
发明内容
有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种吡啶-2-甲醛样品中杂质的检测方法，本发明的方法简单可操作性强、重现性好，结果准确可靠。
本发明提供了一种吡啶-2-甲醛样品中杂质的检测方法，包括如下步骤：
A)将含有吡啶-2-甲醛的待测物用溶剂溶解后，得到待测液；
B)将和杂质对照品采用溶剂溶解，分别配置得到相应浓度的参照物对照品溶液；
C)采用高效液相色谱法，在相同的检测条件下分别获得步骤A)中所述待测液和步骤B)中所述参照物对照品溶液中化学成分的色谱图，色谱参数如下：
流动相A为柠檬酸盐缓冲液，流动相B为乙腈；所述流动相A：流动相B＝90:10，等度洗脱；
D)根据所述参照物的浓度、所述参照物对照品溶液在色谱图中的峰面积以及含有吡啶-2-甲醛的待测物与所述参照物对照品溶液相对应的成分在色谱图中的峰面积，且基于步骤C)中的检测条件，以外标法计算吡啶-2-甲醛杂质的含量。
优选的，步骤C)所述柠檬酸盐缓冲液的制备步骤具体为：无水柠檬酸钾3.06g加水1000mL溶解，再加入磷酸3mL。
优选的，步骤A)或步骤B)中所述溶剂为柠檬酸盐缓冲液。
优选的，所述高效液相色谱的色谱柱填料为磺酸基阳离子交换键合硅胶；所述色谱柱型号为Venusil SCX，规格为4.6×250mm，5μm。
优选的，所述高效液相色谱的检测波长为263nm。
优选的，所述流动相流速为0.9～1.1ml/min，柱温为27～33℃；所述洗脱时间为50min。
优选的，所述杂质对照品包括杂质I、杂质II、杂质III、杂质IV、杂质V、杂质VI；
Figure BDA0003881241480000021
优选的，所述吡啶-2-甲醛的浓度为0.25mg/mL；所述杂质I、杂质II、杂质III、杂质IV、杂质V、杂质VI的浓度各自为1.25μg/mL。
本发明提供了一种吡啶-2-甲醛的和杂质的分离方法，吡啶-2-甲醛的和杂质采用上述技术方案任意一项所述的方法进行分离。
优选的，所述杂质包括杂质I、杂质II、杂质III、杂质IV、杂质V、杂质VI；
Figure BDA0003881241480000031
与现有技术相比，本发明提供了一种吡啶-2-甲醛样品中杂质的检测方法，包括如下步骤：A)将含有吡啶-2-甲醛的待测物用溶剂溶解后，得到待测液；B)将和杂质对照品采用溶剂溶解，分别配置得到相应浓度的参照物对照品溶液；C)采用高效液相色谱法，在相同的检测条件下分别获得步骤A)中所述待测液和步骤B)中所述参照物对照品溶液中化学成分的色谱图，色谱参数如下：流动相A为柠檬酸盐缓冲液，流动相B为乙腈；所述流动相A：流动相B＝90:10，等度洗脱；D)根据所述参照物的浓度、所述参照物对照品溶液在色谱图中的峰面积以及含有吡啶-2-甲醛的待测物与所述参照物对照品溶液相对应的成分在色谱图中的峰面积，且基于步骤C)中的检测条件，以外标法计算杂质的含量。利用本发明的方法可以准确地进行吡啶-2-甲醛有关物质分析，专属性、检测限与定量限、重复性、精密度、线性、回收率、耐用性均符合要求，检测效果良好。
附图说明
图1为本发明实施例1的溶剂空白的HPLC图谱；
图2为本发明实施例1的供试品溶液的HPLC图谱；
图3为本发明实施例1的系统适用性溶液的HPLC图谱；
图4为本发明对比例1的色谱图。
具体实施方式
本发明提供了一种吡啶-2-甲醛的检测方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都属于本发明保护的范围。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明提供了一种吡啶-2-甲醛样品中杂质的检测方法，包括如下步骤：
A)将含有吡啶-2-甲醛的待测物用溶剂溶解后，得到待测液；
B)将杂质对照品采用溶剂溶解，分别配置得到相应浓度的参照物对照品溶液；
C)采用高效液相色谱法，在相同的检测条件下分别获得步骤A)中所述待测液和步骤B)中所述参照物对照品溶液中化学成分的色谱图，色谱参数如下：
流动相A为柠檬酸盐缓冲液，流动相B为乙腈；所述流动相A：流动相B＝90:10，等度洗脱；
D)根据所述参照物的浓度、所述参照物对照品溶液在色谱图中的峰面积以及含有吡啶-2-甲醛的待测物与所述参照物对照品溶液相对应的成分在色谱图中的峰面积，且基于步骤C)中的检测条件，以外标法计算杂质的含量。
本发明吡啶-2-甲醛的化学结构式为：
Figure BDA0003881241480000041
本发明所述杂质对照品包括杂质I、杂质II、杂质III、杂质IV、杂质V、杂质VI；
Figure BDA0003881241480000042
本发明提供的一种吡啶-2-甲醛的检测方法首先将含有吡啶-2-甲醛的待测物用溶剂溶解后，得到待测液。
本发明对于含有吡啶-2-甲醛的待测物不进行限定，只要包括吡啶-2-甲醛即可。
本发明所述溶剂为柠檬酸盐缓冲液；所述柠檬酸盐缓冲液的制备步骤具体为：无水柠檬酸钾3.06g加水1000mL溶解，再加入磷酸3mL。
将吡啶-2-甲醛标准品和杂质对照品采用溶剂溶解，分别配置得到相应浓度的参照物对照品溶液。
取吡啶-2-甲醛适量，加适量溶剂溶解并稀释制成每1ml含0.25mg的溶液；
取杂质I、杂质II、杂质III、杂质IV、杂质V、杂质VI对照品各适量，分别加适量乙腈溶解并稀释制成每1ml含62.5μg的溶液，作为杂质对照品贮备液；
分别取各杂质对照品贮备液适量，加适量溶剂溶解并稀释制成每1ml含1.25μg杂质I、杂质II、杂质III、杂质IV、杂质V、杂质VI的混合溶液。
采用高效液相色谱法，在相同的检测条件下分别获得步骤A)中所述待测液和步骤B)中所述参照物对照品溶液中化学成分的色谱图。
本发明高效液相色谱仪可以选择岛津LC-2030plus；
按照本发明，色谱参数如下：
流动相A为柠檬酸盐缓冲液，流动相B为乙腈；所述流动相A：流动相B＝90:10，等度洗脱；
所述高效液相色谱的色谱柱填料为磺酸基阳离子交换键合硅胶；所述色谱柱型号为Venusil SCX，规格为4.6×250mm，5μm。
具体的，所述高效液相色谱的检测波长为263nm。
所述流动相流速优选为0.9～1.1ml/min，更优选为1.0ml/min；柱温优选为27～33℃；更优选为28～32℃；最优选为30℃。
本发明所述洗脱时间为50min。
本发明所述吡啶-2-甲醛的浓度为0.25mg/mL；所述杂质I、杂质II、杂质III、杂质IV、杂质V、杂质VI的浓度各自为1.25μg/mL。
进样量为10～20μL，优选为20μL。
本发明优选采用上述洗脱流动相，结合特定的色谱柱以及流速等分离条件，属于整体的技术方案，相互配合使得色谱图的成分和杂质的分离度较好；同时采用本发明的方法，结果准确、可靠，稳定性和重现性好。
本发明涉及的分析检测方法，可以有效将吡啶-2-甲醛及杂质I、杂质II、杂质III、杂质IV、杂质V、杂质VI分开，主成分与相邻杂质分离度大于1.5，各个杂质之间分离度大于1.2，在经过进行破坏性试验时，也保证了吡啶-2-甲醛不受干扰。该方法操作简单，重复性及耐用性好，结果稳定可靠，从而可用于吡啶-2-甲醛质量控制，为最终成品的质量提供有效保障。
本发明提供了一种吡啶-2-甲醛的和杂质的分离方法，吡啶-2-甲醛的和杂质采用上述技术方案任意一项所述的方法进行分离。
本发明对于上述检测方法已经有了清楚的描述，采用上述方案，可以将吡啶-2-甲醛的和杂质进行很好的分离。
本发明的方法可以用于监控质量。该方法具有分离度高，操作简单，分析时间短，重复性及耐用性良好，结果稳定可靠的优点。
本发明所述杂质包括杂质I、杂质II、杂质III、杂质IV、杂质V、杂质VI；
Figure BDA0003881241480000061
本发明上述分离方法专属性、检测限与定量限、重复性、精密度、耐用性均符合要求，检测效果良好。
本发明提供了吡啶-2-甲醛有关物质测定方法，吡啶-2-甲醛和杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F进行分离检测的方法，本发明采用不同于现有技术的色谱条件，从HPLC图谱中以看出它们之间有一定距离，能够准确测定吡啶-2-甲醛有关物质。
采用对照品的检测方法，其专属性、精密度、重复性、线性、回收率、耐用性等方面均经详细验证，且各项验证结果均符合相关法规和指导原则的要求，实际检测效果良好。
本发明实用性强，检测过程简单、快捷。
本发明所述的高效液相色谱法，其测定条件中所包含的范围内均为有效值，即：在各参数范围内取任意值后，也能准确的检测出吡啶-2-甲醛有关物质，且能对杂质I、杂质II、杂质III、杂质IV、杂质V、杂质VI进行有效分离。在实际检测过程中，便于检测人员对参数的调整和避免人为误差对检测结果产生的影响，适宜推广使用。
为了进一步说明本发明，以下结合实施例对本发明提供的一种吡啶-2-甲醛的检测方法进行详细描述。
以下8个典型实施例均选取相同批号(BH-B61111-210301批，样品来源于(上海瀚鸿科技股份有限公司)的吡啶-2-甲醛进行检测。
本发明实施例所用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。本发明实施例所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
同时本发明的杂质I、杂质II、杂质III、杂质IV、杂质V、杂质VI可以分别依次记为杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F。
实施例1
选取批号为BH-B61111-210301批的吡啶-2-甲醛的进行有关物质方法学验证，包括如下步骤：
实验仪器与条件：
高效液相色谱仪：岛津LC-2030plus；
色谱柱：Venusil SCX(4.6×250mm，5μm)；
检测器：DAD；
检测波长：263nm；
柱温：30℃；
流速：1.0ml/min；
流动相：柠檬酸盐缓冲液和乙腈体系优选为柠檬酸盐缓冲液(称取无水柠檬酸钾3.06g加水1000ml溶解，再加磷酸3ml)与乙腈按体积比90:10形成流动相。
实验步骤：
A、以柠檬酸盐缓冲液为溶剂；
B、取吡啶-2-甲醛适量，加适量溶剂溶解并稀释制成每1ml含0.25mg的溶液；
C、取杂质A、B、C、D、E、F(即为杂质I、杂质II、杂质III、杂质IV、杂质V、杂质VI)对照品各适量，分别加适量乙腈溶解并稀释制成每1ml含62.5μg的溶液，作为杂质对照品贮备液；
D、分别取吡啶-2-甲醛、各杂质对照品贮备液适量，加适量溶剂溶解并稀释制成每1ml含0.25mg吡啶-2-甲醛，1.25μg杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F的混合溶液；
D、取A、B、C、D溶液各20μl注入高效液相色谱仪；
附图1和附图2表明，溶剂空白无干扰吡啶-2-甲醛峰检测，在附图3表明，在该色谱条件下，吡啶-2-甲醛峰及其杂质峰可以完全分离，且吡啶-2-甲醛峰保留时间在17.132min、分离度为2.124，杂质A峰保留时间在40.605min、分离度为2.708，杂质B峰保留时间在15.600min、分离度为24.900，杂质C峰保留时间在4.429min、分离度为4.194，杂质D峰保留时间在26.821min、分离度为11.644，杂质E峰保留时间在26.821min、分离度为11.644，杂质F峰保留时间在34.248min、分离度为8.533，吡啶-2-甲醛峰、各已知杂质的分离度均大于1.5。
实施例2
专属性试验
高效液相色谱仪：岛津LC-2030plus；
色谱柱：Venusil SCX(4.6×250mm，5μm)；
检测器：DAD；
检测波长：263nm；
柱温：30℃；
流速：1.0ml/min；
流动相：柠檬酸盐缓冲液和乙腈体系优选为柠檬酸盐缓冲液(称取无水柠檬酸钾3.06g加水1000ml溶解，再加磷酸3ml)按体积比90:10形成流动相。
实验步骤：
A、取吡啶-2-甲醛，加适量溶剂溶解，在各个条件下进行破坏，再加溶剂稀释制成每1ml含0.2mg的溶液；
B、取杂质A、B、C、D、E、F对照品各适量，分别加适量乙腈溶解并稀释制成每1ml含62.5μg的溶液，作为杂质对照品贮备液；
C、分别取吡啶-2-甲醛、各杂质对照品贮备液适量，加适量溶剂溶解并稀释制成每1ml含0.25mg吡啶-2-甲醛，1.25μg杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F的混合溶液；
B、取A、C溶液各20μl注入高效液相色谱仪,考察主成分峰纯度及分离度；
Figure BDA0003881241480000081
Figure BDA0003881241480000091
各破坏条件下降解已知杂质
Figure BDA0003881241480000092
系统适用性溶液指标
名称 分离度 峰纯度
PIC-SM1-imC 6.439 0.999308
PIC-SM1-imE 3.963/25.127 0.999960
PIC-SM1-imB 6.439/2.128 不能计算
PIC-SM1 25.127/6.368 0.999829
PIC-SM1-imD 6.368/8.374 不能计算
PIC-SM1-imF 6.334/3.044 不能计算
PIC-SM1-imA 3.044 不能计算
由上表数据可知，在各个条件破坏下，主成分的峰纯度均大于0.999，其分离度大于均1.5，其降解杂质并无干扰检测，系统适用性溶液中各杂质及主成分的纯度均大于0.999，说明其方法的专属性良好。
实施例3
精密度试验
实验仪器与条件：
高效液相色谱仪：岛津LC-2030plus；
色谱柱：Venusil SCX(4.6×250mm，5μm)；
检测器：UV；
检测波长：263nm；
柱温：30℃；
流速：1.0ml/min；
流动相：柠檬酸盐缓冲液和乙腈体系优选为柠檬酸盐缓冲液(称取无水柠檬酸钾3.06g加水1000ml溶解，再加磷酸3ml)按体积比90:10形成流动相。
实验步骤：
A、取杂质A、B、C、D、E、F对照品各适量，分别加适量乙腈溶解并稀释制成每1ml含62.5μg的溶液，作为杂质对照品贮备液；
B、分别取吡啶-2-甲醛、各杂质对照品贮备液适量，加适量溶剂溶解并稀释制成每1ml含0.25mg吡啶-2-甲醛，1.25μg杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F的混合溶液；
C、取B溶液各20μl注入高效液相色谱仪，连续进样五次，计算出吡啶-2-甲醛及杂质的峰面积、保留时间的相对标准偏差；
Figure BDA0003881241480000111
由上表数据结果可知，主峰峰面积及保留时间的RSD值均小于1.0％％，说明该方法精密度良好可靠。
实施例4
重复性试验
实验仪器与条件：
高效液相色谱仪：岛津LC-2030plus；
色谱柱：Venusil SCX(4.6×250mm，5μm)；
检测器：UV；
检测波长：263nm；
柱温：30℃；
流速：1.0ml/min；
流动相：柠檬酸盐缓冲液和乙腈体系优选为柠檬酸盐缓冲液(称取无水柠檬酸钾3.06g加水1000ml溶解，再加磷酸3ml)按体积比90:10形成流动相。
实验步骤：
A、取吡啶-2-甲醛适量，加适量溶剂溶解并稀释制成每1ml含0.25mg的溶液；
B、取杂质A、B、C、D、E、F对照品各适量，分别加适量乙腈溶解并稀释制成每1ml含62.5μg的溶液，作为杂质对照品贮备液；
C、分别取各杂质对照品贮备液适量，加适量溶剂溶解并稀释制成每1ml含1.25μg杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F的混合溶液；
D、取A适量，用适量溶剂稀释制成每1ml含0.25μg的溶液；
E、取A、C、D溶液各20μl注入高效液相色谱仪，分别配制供试品配制六份，按外标法测定已知杂质含量，以自身对照法测定未知杂质含量，并计算6份供试品中杂质含量相对标准偏差；
Figure BDA0003881241480000121
Figure BDA0003881241480000131
由上表数据可知，6份供试品溶液杂质含量相对标准偏差为0.5％小于5.0％，可见该方法的重复性良好。
实施例5
耐用性试验
高效液相色谱仪：岛津LC-2030plus；
色谱柱：Venusil SCX(4.6×250mm，5μm)；
检测器：UV；
检测波长：263nm；
柱温：30℃；
流速：1.0ml/min；
流动相：柠檬酸盐缓冲液和乙腈体系优选为柠檬酸盐缓冲液(称取无水柠檬酸钾3.06g加水1000ml溶解，再加磷酸3ml)按体积比90:10形成流动相。
实验步骤：
A、取杂质A、B、C、D、E、F对照品各适量，分别加适量乙腈溶解并稀释制成每1ml含62.5μg的溶液，作为杂质对照品贮备液；
B、分别取吡啶-2-甲醛、各杂质对照品贮备液适量，加适量溶剂溶解并稀释制成每1ml含0.25mg吡啶-2-甲醛，1.25μg杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F的混合溶液；
C、取B溶液各20μl注入高效液相色谱仪，考察其系统适用性；
Figure BDA0003881241480000132
Figure BDA0003881241480000141
由上表数据可知，在改变柱温(±3℃)及流速(±0.1ml/min)，各个杂质与相邻峰分离度均大于1.5，说明方法的耐用性良好。
实施例6
检测限与定量限试验
实验仪器与条件：
高效液相色谱仪：岛津LC-2030plus；
色谱柱：Venusil SCX(4.6×250mm，5μm)；
检测器：UV；
检测波长：263nm；
柱温：30℃；
流速：1.0ml/min；
流动相：柠檬酸盐缓冲液和乙腈体系优选为柠檬酸盐缓冲液(称取无水柠檬酸钾3.06g加水1000ml溶解，再加磷酸3ml)按体积比90:10形成流动相。
实验步骤：
A、取杂质A、B、C、D、E、F及吡啶-2-甲醛对照品各适量，分别加适量乙腈溶解并稀释制成每1ml含62.5μg的溶液，作为对照品贮备液；
B、取A溶液中各对照品溶液进行稀释，取20μl注入高效液相色谱仪，以S/N大于10作为定量限，以S/N大于3作为检测限；
Figure BDA0003881241480000142
Figure BDA0003881241480000151
由上表数据结果可知，其各组分检测限浓度远比0.5％小，其灵敏度满足分析要求。
实施例7
线性关系试验
实验仪器与条件：
高效液相色谱仪：岛津LC-2030plus；
色谱柱：Venusil SCX(4.6×250mm，5μm)；
检测器：UV；
检测波长：263nm；
柱温：30℃；
流速：1.0ml/min；
流动相：柠檬酸盐缓冲液和乙腈体系优选为柠檬酸盐缓冲液(称取无水柠檬酸钾3.06g加水1000ml溶解，再加磷酸3ml)按体积比90:10形成流动相。
实验步骤：
A、取杂质A、B、C、D、E、F及吡啶-2-甲醛对照品各适量，分别加适量乙腈溶解并稀释制成每1ml含62.5μg的溶液，作为对照品贮备液；
B、分别取吡啶-2-甲醛、各杂质对照品贮备液适量，加适量溶剂溶解并稀释制成每1ml含1.25μg吡啶-2-甲醛、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F的混合溶液，作为100％线性溶液，同时按比例分别配制50％、80％、150％、200％线性溶液，根据检测限与定量限试验项下，各组分定量限溶液；
C、取B各溶液，取20μl注入高效液相色谱仪；
Figure BDA0003881241480000161
Figure BDA0003881241480000171
由上表数据结果可知，各组分在定量限～200％线性浓度范围内，其相关系数r＞0.99，满足线性要求。
实施例8
回收率试验
实验仪器与条件：
高效液相色谱仪：岛津LC-2030plus；
色谱柱：Venusil SCX(4.6×250mm，5μm)；
检测器：UV；
检测波长：263nm；
柱温：30℃；
流速：1.0ml/min；
流动相：柠檬酸盐缓冲液和乙腈体系优选为柠檬酸盐缓冲液(称取无水柠檬酸钾3.06g加水1000ml溶解，再加磷酸3ml)按体积比90:10形成流动相。
实验步骤：
A、取杂质A、B、C、D、E、F对照品各适量，分别加适量乙腈溶解并稀释制成每1ml含62.5μg的溶液，作为对照品贮备液；
B、分别取各杂质对照品贮备液适量，加适量溶剂溶解并稀释制成每1ml含1.25μg杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F的混合溶液；作为对照品溶液，
C、取吡啶-2-甲醛适量，加适量溶剂溶解并稀释制成每1ml含0.25mg吡啶-2-甲醛；作为本底溶液，
D、分别取吡啶-2-甲醛、各杂质对照品贮备液适量，加适量溶剂溶解并稀释制成每1ml含0.25mg吡啶-2-甲醛、1.25μg杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F的混合溶液；作为100％回收率溶液，
E、分别取吡啶-2-甲醛、各杂质对照品贮备液适量，加适量溶剂溶解并稀释制成每1ml含0.25mg吡啶-2-甲醛、1.0μg杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F的混合溶液；作为80％回收率溶液，
F、分别取吡啶-2-甲醛、各杂质对照品贮备液适量，加适量溶剂溶解并稀释制成每1ml含0.25mg吡啶-2-甲醛、1.5μg杂质A、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质F的混合溶液；作为120％回收率溶液，
G、取B、C、D、E、F各溶液，取20μl注入高效液相色谱仪；
Figure BDA0003881241480000181
Figure BDA0003881241480000191
由上表数据结果可知，各组分回收率在92～100％范围内，其RSD小于5.0％，说明回收率良好。
对比例1
与实施例1的区别在于采用流动相为柠檬酸盐缓冲液和乙腈92:8；其余相同，结果如图4所示，图4为本发明对比例1的色谱图；由图4可以看出，41分钟杂质没有分开。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种吡啶-2-甲醛的样品中杂质检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
A)将含有吡啶-2-甲醛的待测物用溶剂溶解后，得到待测液；
B)将杂质对照品采用溶剂溶解，分别配置得到相应浓度的参照物对照品溶液；
C)采用高效液相色谱法，在相同的检测条件下分别获得步骤A)中所述待测液和步骤B)中所述参照物对照品溶液中化学成分的色谱图，色谱参数如下：
流动相A为柠檬酸盐缓冲液，流动相B为乙腈；所述流动相A：流动相B＝90:10，等度洗脱；
D)根据所述参照物的浓度、所述参照物对照品溶液在色谱图中的峰面积以及含有吡啶-2-甲醛的待测物与所述参照物对照品溶液相对应的成分在色谱图中的峰面积，且基于步骤C)中的检测条件，以外标法计算杂质的含量。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤C)所述柠檬酸盐缓冲液的制备步骤具体为：无水柠檬酸钾3.06g加水1000mL溶解，再加入磷酸3mL。
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤A)或步骤B)中所述溶剂为柠檬酸盐缓冲液。
4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱的色谱柱填料为磺酸基阳离子交换键合硅胶；所述色谱柱型号为Venusil SCX，规格为4.6×250mm，5μm。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱的检测波长为263nm。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述流动相流速为0.9～1.1ml/min，柱温为27～33℃；所述洗脱时间为50min。
7.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述杂质对照品包括杂质I、杂质II、杂质III、杂质IV、杂质V、杂质VI；
Figure FDA0003881241470000011
8.根据权利要求7所述的分离方法，其特征在于，所述吡啶-2-甲醛的浓度为0.25mg/mL；所述杂质I、杂质II、杂质III、杂质IV、杂质V、杂质VI的浓度各自为1.25μg/mL。
9.一种吡啶-2-甲醛的和杂质的分离方法，其特征在于，吡啶-2-甲醛的和杂质采用1～8任意一项所述的方法进行分离。
10.根据权利要求9所述的分离方法，其特征在于，所述杂质包括杂质I、杂质II、杂质III、杂质IV、杂质V、杂质VI；
Figure FDA0003881241470000021
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