CN116042852B - 一种鸡毛孔直径性状的分子遗传标记 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种鸡毛孔直径性状的分子遗传标记，涉及家禽基因工程育种技术领域。所述鸡的毛孔直径性状的分子遗传标记为鸡无翅型MMTV整合位点家族成员5B基因(WNT5B)外显子3的56717位点SNP即WNT5B(56717：C>T)。该分子遗传标记基因型通过引物F：5’‑TTGTCTTGCAGGTAGCCGAG‑3’；R：5’‑GGGACCACACA CCATTCCAA‑3’进行PCR扩增与测序所得。该分子遗传标记应用于鸡的毛孔直径性状辅助选择育种，可实现对毛孔直径性状的早期选种，早淘汰不需要的种鸡，从而降低饲养成本，并加快鸡毛孔直径性状育种进展。
Description
技术领域
本发明涉及家禽基因工程育种技术领域，具体涉及一种鸡毛孔直径性状的分子遗传标记。
背景技术
近年来，家禽销售方式由活禽交易转为冰鲜销售。因而，胴体美观度已成为鸡的重要包装性状。毛孔粗细是鸡胴体外观重要指标之一，毛孔过粗或过细都会降低胴体美观度，并影响销售价格。毛孔直径大小反映鸡毛孔粗细，毛孔直径小则毛孔细小，毛孔直径大则毛孔粗大。目前，大多数鸡品种内部不同个体毛孔直径存在较大的差异。因此，随着销售方式的转变，迫切需要对鸡毛孔直径开展选择，以对鸡品种进行遗传改良。
目前鸡品种培育过程中对毛孔直径的选择采用的是传统的选育方法，即在继代前利用游标卡尺等度量工具对毛孔直径多次测定，并根据毛孔直径测定表型值，利用BLUP估计育种值进行选择。然而，活鸡毛孔直径难以度量并且度量不够精确。因此，用传统选育方法对鸡毛孔直径性状进行选育时存在表型测定成本高、选择效率低、育种成本高以及育种进展缓慢等问题。
发明内容
针对现有技术不足，本发明提供一种鸡毛孔直径性状的分子遗传标记。利用现代生物技术，通过候选基因分析法，发现鸡无翅型MMTV整合位点家族成员5B基因外显子3的56717位点SNP即WNT5B(56717：C>T)与鸡毛孔直径大小性状密切相关，且不同基因型鸡毛孔直径大小关系为TT型>CT型>CC型，该位点可作为鸡毛孔直径性状的分子标记，用于鸡毛孔直径性状的分子标记辅助选择，实现对毛孔直径的早期选种，早淘汰不适合的种鸡，降低成本，提高选择准确性进而加快毛孔直径性状育种进展。
为实现以上目的，本发明的技术方案通过以下技术方案予以实现：
一种鸡毛孔直径性状的分子遗传标记，所述分子遗传标记为鸡无翅型MMTV整合位点家族成员5B基因外显子3的56717位点SNP即WNT5B(56717：C>T)。
本发明还提供了一种鸡毛孔直径性状基因型鉴定的方法，包括以下步骤：
步骤S1：PCR引物合成：
上游引物F：5’-TTGTCTTGCAGGTAGCCGAG-3’；
下游引物R：5’-GGGACCACACACCATTCCAA-3；
步骤S2：利用鸡DNA模板与引物进行PCR扩增，扩增的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
步骤S3：PCR产物测序后进行SNP分型。
所述步骤S2具体包括PCR反应体系和PCR反应程序；
所述PCR反应体系包括：添加模板DNA 1μL，添加上游引物1μL，添加下游引物1μL，添加2×HieffTM PCR MasterMix 10μL，添加ddH2O7μL；
所述PCR反应程序包括：第一步94℃起始变性5min，第二步94℃解链30s，第三步62℃退火30s，第四步72℃延伸1min，其中解链到延伸循环次数为35次，第五步72℃最终延伸10min，第六步4℃保存。
本发明提供一种鸡毛孔直径性状的分子遗传标记，用于鸡毛孔直径大小性状的分子标记辅助选择，与现有技术相比优点在于：
本发明针对鸡的毛孔直径性状的分子遗传标记设计引物进行PCR扩增，可以达到对鸡毛孔性状进行基因分型的目的，后采用分型结果进行分子标记辅助育种，可实现对毛孔直径的早期选种，早淘汰不适合的种鸡，降低成本，提高选择准确性进而加快毛孔直径性状育种进展。
附图说明
图1为本发明基因分型示例图。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面结合本发明实施例对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：
为研究WNT5B(56717：C>T)位点多态性与鸡毛孔直径的相关性，选取14周龄皖南三黄鸡与天长三黄鸡公鸡各350只，利用游标卡尺测定每个个体背部相同3处皮肤毛孔直径取均值作为该个体毛孔直径。同时每个个体翅静脉采血并提取基因组DNA利用WNT5B(56717：C>T)分型技术方案以及图1对每个个体进行基因分型，结果表明两个品种中不同基因型毛孔直径关系都为TT型>CT型>CC型(表1)。
表1.WNT5B(56717：C>T)位点多态性与鸡毛孔直径相关性
上表中上标字母a，b表示P<0.05。
由上表可知WNT5B(56717：C>T)位点与鸡毛孔直径大小密切相关，可以作为鸡毛孔直径性状的分子标记。
需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。
以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
Claims (2)
1.一种鸡毛孔直径性状的分子遗传标记的应用，其特征在于，所述遗传标记应用于鸡毛孔直径性状的分子标记辅助选择，且所述分子遗传标记为鸡无翅型MMTV整合位点家族成员5B基因外显子3的56717位点SNP，所述SNP位点位于SEQ ID NO：1的第169位，其多态性为C/T，所述SNP分型鉴定包括以下步骤：
步骤S1：PCR引物合成：
上游引物F：5’-TTGTCTTGCAGGTAGCCGAG-3’；
下游引物R：5’-GGGACCACACACCATTCCAA-3’；
步骤S2：利用鸡DNA模板与引物进行PCR扩增，扩增的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；
步骤S3：PCR产物测序后进行SNP分型。
2.如权利要求1的一种鸡毛孔直径性状的分子遗传标记的应用，其特征在于，所述步骤S2具体包括PCR反应体系和PCR反应程序；
所述PCR反应体系包括：添加模板DNA 1μL，添加上游引物1μL，添加下游引物1μL，添加2×HieffTM PCR Master Mix 10μL，添加ddH2O 7μL；
所述PCR反应程序包括：第一步94℃起始变性5min；第二步94℃解链30s；第三步62℃退火30s；第四步72℃延伸1min，其中解链到延伸循环次数为35次；第五步72℃最终延伸10min；第六步4℃保存。
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