CN115993457B - 一种用于化学发光免疫分析仪检测光子含量的发光剂及其制配方法 - Google Patents
一种用于化学发光免疫分析仪检测光子含量的发光剂及其制配方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种用于化学发光免疫分析仪检测光子含量的发光剂及其制配方法，包括溶剂和溶于溶剂中的吖啶取代物、第一表面活性剂、第二表面活性剂和其他化合物，吖啶取代物吖啶酯和吖啶磺酰胺，其他化合物包括氯乙酰胺、2‑羟基吡啶‑N‑氧化物和咪唑烷基脲的一种或多种。在纯水中加入吖啶取代物、第一表面活性剂、第二表面活性剂和其他化合物，混合均匀后得到发光剂，置于2～8℃环境中保存。本发明的发光剂有效时间长，克服了发光效率验证难以标准化的一个难点，能够应用于化学发光免疫分析仪的发光效率检测上，使得发光效率可通过具体数值呈现，从而判定仪器性能是否符合出厂要求，对于化学发光免疫分析仪出厂验证标准化工作具有重要意义。
Description
技术领域
本发明属于化学发光免疫分析仪技术领域，具体涉及一种用于化学发光免疫分析仪检测光子含量的发光剂及其制配方法，也涉及发光剂的应用。
背景技术
化学发光免疫分析仪是通过检测患者血清从而对人体进行免疫分析的医学检验仪器，其中，化学发光免疫分析包括两个部分，即免疫反应系统和化学发光分析系统。化学发光系统是利用化学发光物质经N杂环化合物的催化和氧化剂的氧化，形成一个激发态的中间体，当这种激发态中间体回到稳定的基态时，会发射出光子，利用发光信息测量仪器检测光子量，被检测到的光子量越多，发光效率就越高，而发光效率越高，测值的灵敏度就越高，准确性也越高。所以为了保证能检测到足够量的光子，这就需要仪器的性能能够达到所要求的标准。
组装化学发光免疫分析仪所用到的零部件在1000种以上，因此安装精密度是影响化学发光免疫分析仪仪器性能的关键因素之一。为了保证仪器在出厂前性能达到要求，以及出厂后的正常使用，后续仪器的维修以及相关的维护保养，都需要确保仪器的性能能够达到要求。
目前对于生产或使用化学发光免疫分析仪的厂家或企业来说，对化学发光免疫分析仪的检测或校准，是针对一台设备进行检测或校准，但是台间差差异无法把控，比如中国专利CN114137197A 一种化学发光免疫分析仪的校准方法及装置提出，现有比较常见的两种校准方法是：一种方案是内部测试定标获取本批次试剂标线，化学发光免疫分析仪在现场通过录入试剂标线进行测试，这种方案的好处是使用简便，缺点就是影响因素考虑不全面，如物料差异、装配差异、运输差异、环境差异等因素都将影响测试结果；另一种方案是：定期对化学发光免疫分析仪进行定标校准，这种方案的好处是测试结果较准确，仪器之间差异较小，缺点就是需要测试多次校准浓度点，需要新增校准品，增加试剂消耗量，耗费时间，无法满足简单快速的检测需求。该专利虽然提出了新的校准装置，但是装置购买成本较高，而且设备自身在使用时可能也会带来误差，对检测结果也会造成较大的影响。
由此可知，如果可以提出一种便于保存且能减少检测误差的通用检测试剂，将极大地减少化学发光免疫分析仪的发光效率检测步骤，而且有利于降低台间差差异。为了解决这个问题，研发一种可以验证化学发光免疫分析仪仪器发光效率的发光剂就成了当务之急。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明的目的在于提供一种用于化学发光免疫分析仪检测光子含量的发光剂及制配方法，其有效时间长，克服了化学发光免疫分析仪发光效率验证难以标准化的一个难点，通过本发明的发光剂，能够应用于化学发光免疫分析仪的发光效率检测上，使得发光效率可通过具体的数值呈现，从而判定仪器性能是否符合出厂要求，这对于化学发光免疫分析仪的出厂验证标准化工作具有重要意义。
为实现上述发明目的，本发明采取的技术方案如下：
在本发明的第一方面，本发明提供一种用于化学发光免疫分析仪检测光子含量的发光剂，包括溶剂和溶于溶剂中的吖啶取代物、第一表面活性剂、第二表面活性剂和其他化合物，其中，其他化合物包括氯乙酰胺、2-羟基吡啶-N-氧化物和咪唑烷基脲的一种或多种。
在本发明中，吖啶取代物是关键的化学发光标记物，一般分为两类，即吖啶酯和吖啶磺酰胺，两者的发光机理相同，本发明的吖啶取代物优选为吖啶酯。但吖啶取代物存在着发光不稳定的缺陷，本发明通过氯乙酰胺、2-羟基吡啶-N-氧化物和咪唑烷基脲来提高吖啶酯发光的稳定性，氯乙酰胺、2-羟基吡啶-N-氧化物和咪唑烷基脲可以提供一个稳定的液态环境，防止吖啶酯提前释放能量从而导致能量损耗从而发光不稳定。氯乙酰胺、2-羟基吡啶-N-氧化物和咪唑烷基脲还有延长发光剂保存时间的作用。
在本发明的实践中，吖啶取代物的质量分数大于0.05%且小于0.15%。
在本发明的实践中，其他化合物的质量分数大于0.3%且小于1.5%，优选的，其他化合物由氯乙酰胺、2-羟基吡啶-N-氧化物和咪唑烷基脲组成，其中，氯乙酰胺的质量分数大于0.1%且小于0.5%，2-羟基吡啶-N-氧化物的质量分数大于0.1%且小于0.5%，咪唑烷基脲的质量分数大于0.1%且小于0.5%。
优选的，第一表面活性剂包括离子型表面活性剂和非离子型表面活性剂的一种或多种，更优选的，第一表面活性剂包括三乙醇胺单油酸酯、异辛基磷酸酯和十二烷基硫酸钠的一种或多种，更优选的，第一表面活性剂由三乙醇胺单油酸酯、异辛基磷酸酯和十二烷基硫酸钠组成。
在本发明的实践中，三乙醇胺单油酸酯、异辛基磷酸酯和十二烷基硫酸钠作为第一表面活性剂的效果最优，其他表面活性剂会导致发光效率偏低，及有时会产生跳值现象从而导致测值异常。
在本发明中，第一表面活性剂的质量分数大于0.3%且小于3.0%，更优选的，三乙醇胺单油酸酯的质量分数大于0.1%且小于1.0%，异辛基磷酸酯的质量分数大于0.1%且小于1.0%，十二烷基硫酸钠的质量分数大于0.1%且小于1.0%。
优选的，第二表面活性剂是Triton X-100，第二表面活性剂的质量分数大于0.5%且小于1.5%。Triton X-100有增强发光剂提高发光效率的作用。
在本发明的第二方面，本发明提供一种用于化学发光免疫分析仪检测光子含量的发光剂的制配方法，步骤如下：
在溶剂中加入吖啶取代物、第一表面活性剂、第二表面活性剂和其他化合物，具体地，在纯水中加入吖啶酯、三乙醇胺单油酸酯、异辛基磷酸酯、十二烷基硫酸钠、Triton X-100、氯乙酰胺、2-羟基吡啶-N-氧化物和咪唑烷基脲，混合均匀后得到发光剂，置于2～8℃环境中保存。
溶剂优选为纯水，溶剂也可以是其他物质，比如乙醇、丙酮等。
在本发明的第三方面，本发明提供一种用于化学发光免疫分析仪检测光子含量的发光剂的应用，将发光剂用于已组装好但未做出厂检验的化学发光免疫分析仪的发光效率检测、有故障反馈的化学发光免疫分析仪的发光效率检测以及进行维修和保养后的化学发光免疫分析仪的效率检测。
有益效果：
本发明提供了一种专用于化学发光免疫分析仪上检测发光效率的发光剂，易于保存及运输，有效时间长，可作为一种通用的仪器检测校准试剂使用，具有发光稳定及保存时间长的优点，复现性好，能够应用于化学发光免疫分析仪的发光效率检测上，使得发光效率可通过具体的数值呈现，从而判定仪器性能是否符合出厂要求，这对于化学发光免疫分析仪的出厂验证标准化工作具有重要意义，能够保证每台仪器的出厂都是合格的，且保证了每台仪器的发光效率都是接近的从而减少仪器台间差，保证测值的一致性。
具体实施方式
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对照实施例说明本发明的具体实施方式。显而易见地，下面描述中的仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些实施例获得其他的实施方式。
本发明提供一种用于化学发光免疫分析仪检测光子含量的发光剂，包括溶剂和溶于溶剂中的吖啶取代物、第一表面活性剂、第二表面活性剂和其他化合物。吖啶取代物是化学发光标记物，是发光剂的发光成分，发光剂的其他成分则是配合吖啶取代物，其中第二表面活性剂有增强发光及提高发光效率的作用，其他化合物则是使发光剂发光稳定，保证测值正常。
其中，吖啶取代物优选是吖啶酯，吖啶取代物的质量分数大于0.05%且小于0.15%。
其中，第一表面活性剂包括三乙醇胺单油酸酯、异辛基磷酸酯和十二烷基硫酸钠的一种或多种，第一表面活性剂的质量分数大于0.3%且小于3.0%；优选的，第一表面活性剂由三乙醇胺单油酸酯、异辛基磷酸酯和十二烷基硫酸钠组成，三乙醇胺单油酸酯的质量分数大于0.1%且小于1.0%，异辛基磷酸酯的质量分数大于0.1%且小于1.0%，十二烷基硫酸钠的质量分数大于0.1%且小于1.0%。
其中，其他化合物包括氯乙酰胺、2-羟基吡啶-N-氧化物和咪唑烷基脲的一种或多种，其他化合物的质量分数大于0.3%且小于1.5%；优选的，其他化合物由氯乙酰胺、2-羟基吡啶-N-氧化物和咪唑烷基脲组成，氯乙酰胺的质量分数大于0.1%且小于0.5%，2-羟基吡啶-N-氧化物的质量分数大于0.1%且小于0.5%，咪唑烷基脲的质量分数大于0.1%且小于0.5%。
其中，第二表面活性剂是Triton X-100，第二表面活性剂的质量分数大于0.5%且小于1.5%。
目前，化学发光免疫分析仪的发光效率检测一般是厂家自己内部测试定标获取本批次试剂标线，化学发光免疫分析仪在现场通过录入试剂标线进行测试，显然，对于不同厂家之间或同一厂家不同批次的化学发光免疫分析仪，用于检测发光效率的试剂可能是不同的， 台间差差异得不到把控。
本发明提出的发光剂，可作为发光效率检测的通用试剂，发光剂的发光稳定，用于发光效率检测时具有实验重复性好以及避免出现跳值现象的优点，除此之外，本发明的发光剂还具有便于存储运输和有效期长的优点。
下面以具体实施例详细介绍本发明的技术方案。
实施例1
在966.5g纯化水中加入1.0g吖啶酯（质量分数为0.1%）、5.0g三乙醇胺单油酸酯（质量分数为0.5%）、5.0g异辛基磷酸酯（质量分数为0.5%）、5.0g的十二烷基硫酸钠（质量分数为0.5%）、10.0g Triton X-100（质量分数为1.0%）、2.5g氯乙酰胺（质量分数为0.25%），2.5g 2-羟基吡啶-N-氧化物（质量分数为0.25%）、2.5g咪唑烷基脲（质量分数为0.25%），混匀后制得发光剂，置于2-8℃环境中保存。
实施例2
在979.5g纯化水中加入1.0g吖啶酯（质量分数为0.1%）、2.5g三乙醇胺单油酸酯（质量分数为0.25%）、2.5g异辛基磷酸酯（质量分数为0.25%）、2.5g的十二烷基硫酸钠（质量分数为0.25%）、7.5g Triton X-100（质量分数为0.75%）、1.5g氯乙酰胺（质量分数为0.15%），1.5g 2-羟基吡啶-N-氧化物（质量分数为0.15%）、1.5g咪唑烷基脲（质量分数为0.15%），混匀后制得发光剂，置于2-8℃环境中保存。
实施例3
在953.5g纯化水中加入1.0g吖啶酯（质量分数为0.1%）、7.5g三乙醇胺单油酸酯（质量分数为0.75%）、7.5g异辛基磷酸酯（质量分数为0.75%）、7.5g的十二烷基硫酸钠（质量分数为0.75%）、12.5g Triton X-100（质量分数为1.25%）、3.5g氯乙酰胺（质量分数为0.35%），3.5g 2-羟基吡啶-N-氧化物（质量分数为0.35%）、3.5g咪唑烷基脲（质量分数为0.35%），混匀后制得发光剂，置于2-8℃环境中保存。
对比例1
在988.5g纯化水中加入0.5g吖啶酯（质量分数为0.05%）、1.0g三乙醇胺单油酸酯（质量分数为0.1%）、1.0g异辛基磷酸酯（质量分数为0.1%）、1.0g的十二烷基硫酸钠（质量分数为0.1%）、5.0g Triton X-100（质量分数为0.5%）、1.0g氯乙酰胺（质量分数为0.1%），1.0g2-羟基吡啶-N-氧化物（质量分数为0.1%）、1.0g咪唑烷基脲（质量分数为0.1%），混匀后制得发光剂，置于2-8℃环境中保存。
对比例2
在938.5g纯化水中加入1.5g吖啶酯（质量分数为0.15%）、10.0g三乙醇胺单油酸酯（质量分数为1.0%）、10.0g异辛基磷酸酯（质量分数为1.0%）、10.0g的十二烷基硫酸钠（质量分数为1.0%）、15.0g Triton X-100（质量分数为1.5%）、5.0g氯乙酰胺（质量分数为0.5%），5.0g 2-羟基吡啶-N-氧化物（质量分数为0.5%）、5.0g咪唑烷基脲（质量分数为0.5%），混匀后制得发光剂，置于2-8℃环境中保存。
对比例3
与实施例1相比，本对比例的其他化合物缺少氯乙酰胺。
在969g纯化水中加入1.0g吖啶酯（质量分数为0.1%）、5.0g三乙醇胺单油酸酯（质量分数为0.5%）、5.0g异辛基磷酸酯（质量分数为0.5%）、5.0g的十二烷基硫酸钠（质量分数为0.5%）、10.0g Triton X-100（质量分数为1.0%）、2.5g 2-羟基吡啶-N-氧化物（质量分数为0.25%）、2.5g咪唑烷基脲（质量分数为0.25%），混匀后制得发光剂，置于2-8℃环境中保存。
对比例4
与实施例1相比，本对比例的其他化合物缺少2-羟基吡啶-N-氧化物。
在969g纯化水中加入1.0g吖啶酯（质量分数为0.1%）、5.0g三乙醇胺单油酸酯（质量分数为0.5%）、5.0g异辛基磷酸酯（质量分数为0.5%）、5.0g的十二烷基硫酸钠（质量分数为0.5%）、10.0g Triton X-100（质量分数为1.0%）、2.5g氯乙酰胺（质量分数为0.25%）、2.5g咪唑烷基脲（质量分数为0.25%），混匀后制得发光剂，置于2-8℃环境中保存。
对比例5
与实施例1相比，本对比例的其他化合物缺少咪唑烷基脲。
在969g纯化水中加入1.0g吖啶酯（质量分数为0.1%）、5.0g三乙醇胺单油酸酯（质量分数为0.5%）、5.0g异辛基磷酸酯（质量分数为0.5%）、5.0g的十二烷基硫酸钠（质量分数为0.5%）、10.0g Triton X-100（质量分数为1.0%）、2.5g氯乙酰胺（质量分数为0.25%），2.5g2-羟基吡啶-N-氧化物（质量分数为0.25%），混匀后制得发光剂，置于2-8℃环境中保存。
对比例6
与实施例1相比，本对比例的第一表面活性剂是TWEEN-20。
在976.5g纯化水中加入1.0g吖啶酯（质量分数为0.1%）、5.0g的TWEEN-20（质量分数为0.5%）、10.0g Triton X-100（质量分数为1.0%）、2.5g氯乙酰胺（质量分数为0.25%），2.5g 2-羟基吡啶-N-氧化物（质量分数为0.25%）、2.5g咪唑烷基脲（质量分数为0.25%），混匀后制得发光剂，置于2-8℃环境中保存。
将上述实施例及对比例制得的发光剂用于下述两个实验的检测中，具体如下：
实验一：实验组选择已组装好但未做出厂检验的化学发光免疫分析仪2台，编号分别为1号、2号，选择已出厂但有故障反馈的的化学发光免疫分析仪2台，编号分别为3号、4号，测试完后将3号、4号仪器进行维修和保养后，设定编号分别为5号、6号，对照组选择出厂检验合格且仪器性能正常无故障的化学发光免疫分析仪2台，编号分别为7、8号，用上述8台仪器分别测试实施例及对比例配制的发光剂各5次，计算发光效率（测值RLU均值/120000000×100%），发光效率如果在90%~110%内则判定为合格，反之则不合格。
实验二：用出厂检验合格且仪器性能正常无故障的化学发光免疫分析仪7号机对实施例及对比例配制的发光剂进行稳定性验证，分别在0天、1天、3天、7天、14天、31天、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月分别测试5次发光剂，能稳定一年判定为合格，反之则不合格。
测试结果如下表所示。
表1 实验一的测试结果
表2 实验二的测试结果
从上面实验一的结果分析可知，实验组选择已组装好但未做出厂检验的化学发光免疫分析仪2台，编号分别为1号机和2号机都是已组装好但未做出厂检验的化学发光免疫分析仪，发光效率都在90%~110%内，检验合格符合出厂标准；编号分别为3号机和4号机都是已出厂但有故障反馈的的化学发光免疫分析仪，经检测发光效率都偏低需要进行调整，将3号、4号仪器进行维修和保养后的2台仪器设定编号为5号、6号，发光效率都在90%~110%内，符合检验标准，可正常使用。
通过比较实施例及对比例所配制发光剂可以发现，实施例1-3、对比例1及对比例3-5所配制的发光剂重复性较好，不存在跳值现象，而对比例2所配制的发光值存在跳值，导致重复性较差，因此实施例1-3、对比例1所配制的发光剂效果较好。对比例2存在跳值的原因是发光剂中各成分的浓度过于饱和，导致产生空间位阻影响到整个发光反应从而不稳定，容易产生跳值现象，而对比例6的发光效率太低，不符合使用标准。对比例3-5中的其他化合物是由本发明方案中的任意两种其他化合物组成，对于测试结果的准确性都有较好的保障，但对比例6由于第一表面活性剂采用其他种类的表面活性剂，对于检测结果产生极大的影响，由此可见，本发明的第一表面活性剂存在着促进其他化合物发挥作用的效果，本发明第一表面活性剂由三乙醇胺单油酸酯、异辛基磷酸酯和十二烷基硫酸钠组成是最优方案。
从实验二的稳定性验证结果分析可知，对比例1所配制的发光剂在第三个月发光效率就开始下降，到第十二个月已经下降到48.57%，因此对比例1的保存时间短，复现性差，对比例3、对比例4、对比例5所配制的发光剂也有一定的降幅，对比例6的发光效率一直处于较低的水平，变化不大，说明在缺少本发明的第一表面活性剂的情况下，发光剂不能发挥其作用，而实施例1-3所配制的发光剂到第十二个月时候，发光效率能稳定在90%~110%，稳定性符合要求。可见，本发明的发光剂具有稳定性高和复现性好的优点。
以上对本发明所提供的实施例进行了详细阐述。本文中应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明的原理的前提下，还可以本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。
Claims (3)
1.一种用于化学发光免疫分析仪检测光子含量的发光剂，其特征在于，包括溶剂和溶于溶剂中的吖啶取代物、第一表面活性剂、第二表面活性剂和其他化合物；
其中，所述其他化合物由氯乙酰胺、2-羟基吡啶-N-氧化物和咪唑烷基脲组成，其中，氯乙酰胺的质量分数大于0.1%且小于0.5%，2-羟基吡啶-N-氧化物的质量分数大于0.1%且小于0.5%，咪唑烷基脲的质量分数大于0.1%且小于0.5%；
所述第一表面活性剂包括三乙醇胺单油酸酯、异辛基磷酸酯和十二烷基硫酸钠，所述第一表面活性剂的质量分数大于0.3%且小于3.0%；
所述第二表面活性剂是Triton X-100；第二表面活性剂的质量分数大于0.5%且小于1.5%；
所述吖啶取代物包括吖啶酯和吖啶磺酰胺中的一种或两种，所述吖啶取代物的质量分数大于0.05%且小于0.15%。
2.一种用于化学发光免疫分析仪检测光子含量的发光剂的制配方法，其特征在于，用于制备如权利要求1所述的发光剂，步骤如下：
在溶剂中加入吖啶取代物、第一表面活性剂、第二表面活性剂和其他化合物，混合均匀后得到发光剂，置于2～8℃环境中保存。
3.一种用于化学发光免疫分析仪检测光子含量的发光剂的应用，其特征在于，将如权利要求1所述的发光剂用于化学发光免疫分析仪的发光效率检测。
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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