CN115990218B - 一种具有改善膝骨性关节炎关节功能的瑶药组合物及其制备方法和应用 - Google Patents
一种具有改善膝骨性关节炎关节功能的瑶药组合物及其制备方法和应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了一种具有改善膝骨性关节炎关节功能的瑶药组合物及其制备方法和应用,属于瑶药技术领域。本发明遵循“风亏打盈”的治疗原则,对药物成分进行配伍,提供了能提升膝骨性关节炎关节功能的瑶药组合物。本发明以大鼠膝骨性关节炎模型为实验对象,经毒理试验验证瑶浴组合物未产生明显的毒性反应和皮肤刺激反应。血清学检测发现,该瑶浴组合物通过调控标志性炎症指标延缓病理进程,抑制炎症反应。组织病理显示,该瑶浴组合物改善滑膜炎症及软骨结构破坏。行为学观察,该瑶浴组合物可缓解膝骨性关节炎关节肿胀的情况,有效改善关节活动度与步态。因此,该瑶浴组合物可以起到提升膝骨性关节炎关节功能的作用,为膝骨性关节炎提供新的治疗策略。
Description
技术领域
本发明属于瑶药技术领域,具体涉及一种具有改善膝骨性关节炎关节功能的瑶药组合物及其制备方法和应用。
背景技术
膝骨性关节炎(Kneeosteoarthritis,KOA),中医属膝痹范畴,瑶医称之为松节闷,该病临床表现早期以关节疼痛肿胀为主,逐步表现为关节僵硬、活动障碍、畸形甚至残疾,严重影响患者的生活质量,且易引起患者的焦虑、抑郁。软骨组织的退化是KOA发生和发展的主要原因,通过靶向干预关节软骨可在一定程度上延缓骨关节炎的进展,但是关节内无菌性炎症所造成的肿胀疼痛却是降低患者生活质量的重要因素。KOA关节内无菌性炎症的发生发展与白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素10(IL-10)三种细胞因子的表达水平密切相关。研究认为,白细胞介素1β(IL-1β)及白细胞介素6(IL-6)的表达水平与OA的严重程度正向相关,可作为OA早期诊断中的标志物。IL-1β的分泌会加速滑膜及炎细胞的反应,IL-6可增加滑膜组织中炎症细胞的数量,增加软骨通透性,加重局部组织炎性水肿并引起软骨的吸收降解破坏,在骨性关节炎早期即发挥破坏作用。白细胞介素10(IL-10)作为机体产生的一种抑炎性细胞因子,能通过多种途径抑制血清中IL-1β和IL-6的分泌,调节免疫系统应答,促进细胞外基质合成,减缓软骨的分解代谢,增强软骨组织的修复能力,进而保持软骨的稳态性和完整性。因而,针对关节肿痛与功能障碍的突出问题,通过调节与KOA炎症进展密切相关的因子的表达,研发可有效阻止或延缓KOA疾病发生发展的有效药物,缓解关节疼痛肿胀及改善关节功能,提高患者生存质量,预防残疾的发生,成为了OA研究的热点和难点。
迄今为止,KOA暂时未形成统一的有效治疗方案,KOA的药物治疗多选用口服非甾体类抗炎药、解热镇痛药和软骨保护药物,解热镇痛药如阿司匹林等使用广泛,上述药物短期内服用的确可以起到暂时缓解症状、减轻疼痛的目的,但不能延缓病情发展,如长期服用,易引起胃肠道反应、水杨酸反应、增加出血倾向、甚至导致心血管及肾脏受损。其中,常用的首选药物为双氯芬酸钠,见效快但其副作用大,易引起多脏器损害。关节腔注射玻璃酸钠或者糖皮质激素,可以起到药直达病所的目的,但长期的注射会出现骨质疏松、骨结构遭到破坏的不良影响,故权衡其治疗效果与副作用仍需要进一步临床验证。对于较为严重的KOA晚期患者,一般需采取关节腔清理术和人工关节置换术才能缓解症状,但手术创伤大,费用昂贵,术后关节康复不理想。近年来,中医药领域治疗KOA的研究己取得显著成效,但是其临床上对KOA的辨证分型、具体用药方面难以形成统一的认识,同时对治疗KOA的起效机制尚不明确,不能更有力的提供中医方法医治KOA理论和试验依据。此外,中药质量、地道药材、制作方法等因素也局限了中药的疗效发挥。因此,寻找一种治疗效果好、不良反应小、无需创伤手术的最佳方案,对KOA进行早期干预治疗有着重要意义。
瑶医药浴疗法是在瑶医盈亏平衡理论的指导下进行的温和外治法,作为我国重要的非物质文化遗产,简、便、廉、验,具有良好的临床疗效和优势。瑶医以“盈亏平衡”理论为据,认为人的机体本该统一,保持平衡,认为膝骨性关节炎的发生是由于外感风寒湿交杂为主,本体虚弱为次,定此症为“盈过盛而亏衰”,盈盛乃毒邪内盛,见膝部疼痛、红肿;亏衰乃肝肾亏虚,经络阻滞,致使筋骨失养,不容致痛而见下肢活动受限甚则屈伸不利。“盈则消之,亏则补之”,此症之治盈亏错杂。若纯用风药则闭门延寇,纯用打药又损伤机体。因此,急需开发一种改善膝骨性关节炎关节功能的瑶药组合物。
发明内容
有鉴于此,本发明的目的在于提供一种改善膝骨性关节炎关节功能的瑶药组合物,是遵循“风亏打盈”的治疗原则,对药物成分进行配伍,有效提升膝骨性关节炎关节功能的作用。
本发明提供了一种具有改善膝骨性关节炎关节功能的瑶药组合物,包括以下重量份的组分:
上山虎40~80份、下山虎40~80份、红九牛20~60份、四方钻20~60份、铜钻20~60份、九龙钻20~60份、黑钻20~60份、小钻20~60份、九层风10~40份、白面风10~40份、走血风10~40份、麻骨风10~40份、黑节风10~40份和阴阳风10~40份。
优选的,包括以下重量份的组分:上山虎50~70份、下山虎50~70份、红九牛40~55份、四方钻30~50份、铜钻30~50份、九龙钻30~50份、黑钻30~50份、小钻30~50份、九层风15~30份、白面风15~30份、走血风15~30份、麻骨风15~30份、黑节风15~30份和阴阳风15~30份。
优选的,包括以下重量份的组分:上山虎60份、下山虎60份、红九牛50份、四方钻40份、铜钻40份、九龙钻40份、黑钻40份、小钻40份、九层风20份、白面风20份、走血风20份、麻骨风20份、黑节风20份和阴阳风20份。
本发明提供了一种所述瑶药组合物的制备方法,包括以下步骤:
将瑶药组合物用水浸泡后武火煎煮,分离药液。
优选的,所述瑶药组合物和水的质量体积比为1g:8~12ml;
所述煎煮包括两次,煎煮后分离的药液合并;
所述煎煮的时间为1~1.5h/次。
优选的,所述浸泡的时间为20~40min。
优选的,还包括对得到的药液进行浓缩,得到浓缩膏;
所述浓缩膏的相对质量为4.9g生药/g膏。
本发明提供了所述瑶药组合物或所述制备方法得到的瑶药组合物在制备预防和/或治疗关节炎的药物中的应用。
优选的,所述关节炎包括膝骨性关节炎。
优选的,所述药物以瑶浴浴包的形式存在。
本发明提供了一种具有改善膝骨性关节炎关节功能的瑶药组合物,包括以下重量份的组分:上山虎40~80份、下山虎40~80份、红九牛20~60份、四方钻20~60份、铜钻20~60份、九龙钻20~60份、黑钻20~60份、小钻20~60份、九层风10~40份、白面风10~40份、走血风10~40份、麻骨风10~40份、黑节风10~40份和阴阳风10~40份。瑶医认为膝骨性关节炎的发生是由于外感风寒湿交杂为主,本体虚弱为次,定此症为“盈过盛而亏衰”,盈盛乃毒邪内盛,见膝部疼痛、红肿;亏衰乃肝肾亏虚,经络阻滞,致使筋骨失养,不容致痛而见下肢活动受限甚则屈伸不利。“盈则消之,亏则补之”,此症之治盈亏错杂,治宜遵循“风亏打盈”的原则。二虎(上山虎、下山虎)为主药,上山虎有小毒属于打药,有消肿止痛、活血散瘀功效;下山虎属风打相兼药,其用祛风除湿、舒筋活络、活血祛瘀、止痛。二虎量大力宏功在驱邪止闷(痛)故为主、为重。主温经脉,止闷痛,祛风寒,活气血,行阻滞。又以一牛(红九牛)携六风(九层风、白面风、走血风、麻骨风、黑节风、阴阳风)为配药行“风”(补益),“打”(除湿,活血通络,消肿止痛)之用。最后五钻(四方钻、铜钻、九龙钻、黑钻、小钻)乃是引路药,使诸药直达膝部主要病所。综合全方,风亏打盈,标本兼顾,可填补气血使其充足,疏通血脉行其阻滞,补益肝肾,强壮筋骨,故综合诸药所用可令机体痹除而痛止。因此,本发明选用以上瑶药组合,其临床优势较传统瑶浴更为明显,并进一步通过实验,验证该瑶药组合物的安全性及其对缓解膝骨性关节炎关节功能障碍的作用,为临床治疗KOA提供新的思路和有效方药。
本发明还提供了瑶药组合物的制备方法,对瑶药先浸泡后煎煮的方式提取药效活性成分,具有操作简便,重复性好的特点。
同时,考虑到传统煎煮药液之法为使用者带来了不便,本发明还制备出药液浓缩膏剂,以便储存、控制产品质量。使用者通过稀释浓缩膏,即可投入使用,突破了用法的局限,为使用者提供便利。有望提高患者的用药依从性,保证药物疗效,从而更好地达到治疗目的。
本发明还提供了所述瑶药组合物或所述制备方法得到的瑶药组合物在制备预防和/或治疗关节炎的药物中的应用。瑶浴组合主要通过药液的温热效应、经络传导、瑶药有效成分的透皮吸收发挥治疗作用。热药液的温热效应能扩张皮肤毛细血管、加快血液循环、增强新陈代谢,从而促进药物有效成分的吸收与机体代谢废物的排出。瑶医药浴属外治法范畴,是经皮给药方法的一种。药液沏于皮肤,能刺激经络传导及皮肤的神经末梢感受器,形成新的反射,破坏原有的病理反射,达到治愈疾病的目的。同时药液通过经络系统,在相应组织器官产生较强的药理效应,从而达到活血消肿,通络止痛的治疗目的。实验验证,本产品有效缓解膝骨性关节炎关节肿胀的情况,有效改善关节活动度、步态活动情况。软骨病理学结果也验证该瑶药组合物干预后,膝骨性关节炎大鼠软骨结构趋于正常并见少量软骨细胞增生。因此,该瑶药组合物可以起到提升膝骨性关节炎关节功能的作用,为膝骨性关节炎提供新的治疗策略。
同时,现代医学对膝骨性关节炎的治疗主要是消除或减轻疼痛,保存或改善关节功能,治疗方法包括药物与外科手术。鉴于手术创伤大、术后恢复困难。本发明针对膝骨性关节炎局部反应剧烈,关节功能严重受限的病例特点,采用瑶浴这一外治疗法,可避免肝脏首过效应和胃肠道的影响,迅速渗透入患病组织中。本发明通过经皮急性毒性试验和皮肤刺激性试验,验证该瑶浴药物组合无明显毒性及皮肤刺激性,安全性高。提示所述瑶浴药物组合可作为安全制剂推广使用。
附图说明
图1为关节肿胀度测定现场图;
图2为关节活动度测定现场图;
图3为步态改变现场图;
图4为局部疼痛刺激反应;
图5为造模后两组大鼠膝关节解剖图;
图6为造模后两组大鼠软骨病理图(HE×400);
图7为造模后两组大鼠滑膜病理图(HE×400);
图8为各组大鼠软骨病理图(HE×400);
图9为各组大鼠滑膜病理图(HE×400);
图10为治疗前后各组大鼠关节活动度比较结果图;
图11为治疗后各组大鼠旷场活动距离与平均速度比较结果图;
图12为治疗4周后各组大鼠旷场活动轨迹图。
具体实施方式
本发明提供了一种具有改善膝骨性关节炎关节功能的瑶药组合物,包括以下重量份的组分:上山虎40~80份、下山虎40~80份、红九牛20~60份、四方钻20~60份、铜钻20~60份、九龙钻20~60份、黑钻20~60份、小钻20~60份、九层风10~40份、白面风10~40份、走血风10~40份、麻骨风10~40份、黑节风10~40份和阴阳风10~40份。
在本发明中,所述瑶药组合物包括以下重量份的组分:上山虎50~70份、下山虎50~70份、红九牛40~55份、四方钻30~50份、铜钻30~50份、九龙钻30~50份、黑钻30~50份、小钻30~50份、九层风15~30份、白面风15~30份、走血风15~30份、麻骨风15~30份、黑节风15~30份和阴阳风15~30份,更优选包括以下重量份的组分:上山虎60份、下山虎60份、红九牛50份、四方钻40份、铜钻40份、九龙钻40份、黑钻40份、小钻40份、九层风20份、白面风20份、走血风20份、麻骨风20份、黑节风20份和阴阳风20份。
本发明在保留传统瑶浴的优势的基础上,基于瑶族用药理论,同时,结合瑶药的现代药理研究,发掘出有效治疗膝骨性关节炎的瑶族道地药材,以风药、打药、风打相兼药并施,除邪不伤本,顾本不留邪,对传统瑶浴方药进行处方优化,把握剂量,合理配伍,拟定出改善膝骨性关节炎关节障碍与残疾后遗症的瑶药组合物,包括:上山虎、下山虎、红九牛、四方钻、铜钻、九层风、九龙钻、白面风、黑钻、小钻、走血风、麻古风、黑节风、阴阳风。
在本发明中,所述上山虎(为海桐花科植物少花海桐PittosporumpauciflorumHook.etArn.的干燥茎枝)又名海金子、山栀茶。其味苦,性平,无毒,有清热生津止渴的功效,在临床上,以用于风湿痹痛为主。《广西壮族自治区瑶药材质量标准第一卷(2014版)》记载其可消肿止痛、活血散瘀,主要用于松节闷(相当于现代病名关节痛、风湿骨痛、风湿关节炎、急性关节炎)。现代药理学研究发现该植物挥发油内以月桂醇酯含量最高为41.82%,其次是月桂醛、豆蔻醇、乙酸十四酯、十一烷等醇、酯、醛、烷烃类及烯烃类化合物,该药提取物对小鼠热板实验具有明显镇痛作用、降低小鼠由于腹腔注射醋酸引起的扭体反应频率、明显增加小鼠胃及小肠排空速率、明显减少小鼠由于蓖麻油引起的腹泻。以瑶药“上山虎”为主要成分的膏药贴敷KOA患者患处,认为治疗组在减少关节腔积液及滑膜厚度上较双氯芬钠肠溶片疗效显著增加,且未对患者肝肾造成损伤。
在本发明中,下山虎(为杜鹃花科植物滇白珠GaultherialeucocarpaBl.Var.yunnanensis(Franch.)T.Z.HsuetR.C.Fang的干燥地上部分)又名满山香。其味辛,性温,可祛风除湿、舒经活络、活血祛瘀、止痛,主要用于风湿痹痛、跌打损伤,如于现代病名关节痛、风湿骨痛、风湿关节炎、急性关节炎。现代药理研究发现通过实验证实滇白珠具有如下作用①抑菌:从滇白珠根部所提取的挥发油成分对诸多细菌具有一定抑制作用;②抗炎:滇白珠根提取物显著抑制小鼠腹腔毛细血管通透性而具有抗炎作用,③镇痛:对热致疼痛具有明显的镇痛作用。
在本发明中,红九牛(为夹竹桃科植物红杜仲藤Parabarium chunianum Tsiang、毛杜仲藤Parabarium huaitingii Chun et Tsiang、杜仲藤Parabarium micranthun(A.DC.)Pierre.的干燥树皮)又名红杜仲。其味苦、涩、微辛,性平,具有祛风活络,壮腰膝,强筋骨,消肿的作用,主要用于松节闷(相当于现代病名关节痛、风湿骨痛、风湿关节炎、急性关节炎)、崩闭闷(风湿、类风湿性关节炎)、播冲(跌打损伤)。现代药理学对其研究发现杜仲藤皮中含有诸如生物碱、酚类活性物质。杜仲藤叶含有黄酮类化合物,这类化合物的发现可能提示该药具有降血脂、抗血栓、抗氧化、降糖等一些生物活性作用。
在本发明中,九层风(为豆科植物密花豆Spatholobus suberectus Dunn.的干燥藤茎)又名鸡血藤。其味苦、甘,性温,属风药。有补血,活血,通络作用,可用于松节闷(相当于现代病名关节痛、风湿骨痛、风湿关节炎、急性关节炎)、崩闭闷(风湿、类风湿性关节炎)。现代药理学研究发现该药主要分离化合物成分为黄酮类化合物,其次还有花青素类、酚酸类、三萜类。现代药理研究发现鸡血藤提取物在总黄酮量达55%时,具有明显升高白细胞作用。
在本发明中,白面风(为菊科植物羊耳菊Inula cappa(Buch.-Ham.)DC.的干燥地上部分)又名羊耳菊。其属味苦、微辛,性温,无毒,可行气消肿,舒经活络,祛风止痛,用于松节闷(相当于现代病名关节痛、风湿骨痛、风湿关节炎、急性关节炎)、崩闭闷(风湿、类风湿性关节炎)。现代药理学研究发现该药有多种绿原酸抗炎活性成分,其根部提取物具有抑菌活性。
在本发明中,走血风(为芸香科植物飞龙掌血Toddalia asiatica(L.)Lam.的干燥根)又名飞龙掌血。其味辛、苦,性温,无毒,能祛风除湿,活血散淤,止痛,可用于治疗松节闷(相当于现代病名关节痛、风湿骨痛、风湿关节炎、急性关节炎)、崩闭闷(风湿、类风湿性关节炎)。实验发现,该药物具有较佳镇痛作用,可降低急性痛风性关节炎大鼠炎性因子的。现代药理学研究该药的乙醇提取物具有抑菌作用,该药根部中含有的大叶桉亭成分可抑制白假丝酵母菌活性。
在本发明中,麻骨风(为买麻藤科植物小叶买麻藤Gnetum parvifolium(Warb.)C.Y.Cheng ex Chun的藤茎)又名小叶买麻藤。其味苦,性温,有祛风除湿,解毒散结,化痰止咳作用,可用于松节闷(相当于现代病名关节痛、风湿骨痛、风湿关节炎、急性关节炎)、崩闭闷(风湿、类风湿性关节炎)。其抗炎、抗肿瘤作用已被药理学实验证实。
在本发明中,黑节风(为忍冬科植物接骨草Sambucus chinensis Lindl.的全株)又名走马风。其味甘、酸,性温,可祛风除湿,消肿止痛。用于松节闷(相当于现代病名关节痛、风湿骨痛、风湿关节炎、急性关节炎)、崩闭闷(风湿、类风湿性关节炎)。现代研究发现该药物具有多达55种化合物能够被分离,其中以黄酮类、三萜类等6种为主,作用效果以抗菌、抗炎、镇痛为主。
在本发明中,阴阳风(为五加科植物树参Dendropanax dentiger(Harms exDiels)Merr.的根或全株)又名枫荷桂。其味甘,性温,有祛风湿,活血脉的作用,可用于松节闷(相当于现代病名关节痛、风湿骨痛、风湿关节炎、急性关节炎)、崩闭闷(风湿、类风湿性关节炎)。现代药理学研究发现该药生物活性成分中的松柏醇具有抗细胞分泌一氧化氮(NO)的抗炎效应。
在本发明中,四方钻(为葡萄科植物翼茎白粉藤Cissus pteroclada Hayata的干燥藤茎)又名四方藤。味微酸、涩,平,有祛风除湿、舒经活络作用,可用于松节闷(相当于现代病名关节痛、风湿骨痛、风湿关节炎、急性关节炎)、崩闭闷(风湿、类风湿性关节炎)。研究认为该药所含成分岩白菜素具有一定的镇痛、安定作用。
在本发明中,铜钻(为茶茱萸科植物定心藤Mappianthus iodoides Hand.-Mazz.的干燥藤茎)又名螣蛇总管。味甘、淡、平,具有清热解毒,祛风除湿,通经活血等作用,可用于松节闷(相当于现代病名关节痛、风湿骨痛、风湿关节炎、急性关节炎)、崩闭闷(风湿、类风湿性关节炎)。其主要化学成分包括黄酮类、萜类、甾体类等6种,具有清除自由基、抗炎镇痛、抗氧化作用。
在本发明中,九龙钻(为豆科植物龙须藤Bauhinia championii(Benth.)Benth.的干燥藤茎)又名九龙藤。味苦、涩,性平,舒筋活络,活血散淤,祛风止痛,健脾胃用于松节闷(相当于现代病名关节痛、风湿骨痛、风湿关节炎、急性关节炎)、崩闭闷(风湿、类风湿性关节炎)。现代药理研究表明该药物具有明显消炎、抗菌作用。目前对该药物成分研究集中于总黄酮的含量、作用上,用于治疗大鼠关节炎、大鼠酒精性胃溃疡、大鼠糖尿病肾病、抗凝血功能等方面,可达到的一定疗效。
在本发明中,黑钻(为清风藤科植物柠檬清风藤Sabia limoniacea Wall.的干燥藤茎)又名黑风藤。味苦、涩,性平,有祛风除湿,散瘀止痛,利湿消肿作用,可用于松节闷(相当于现代病名关节痛、风湿骨痛、风湿关节炎、急性关节炎)、崩闭闷(风湿、类风湿性关节炎)。一项早期药理研究[131,132]表明该药粗提总皂苷在对孕兔及产后兔子宫均有收缩作用,且该作用强度与效果具有量效关系。
在本发明中,小钻(为木兰科植物南五味子Kadsura longipedunculata Finet etGagnep.的干燥根及根茎)又名钻骨风。味辛、苦,性温,有理气活血,祛风通络,消肿止痛作用。可用于松节闷(相当于现代病名关节痛、风湿骨痛、风湿关节炎、急性关节炎)、崩闭闷(风湿、类风湿性关节炎)。该药物具有止痛、消炎、抗癌肿、抑HBV、护肝、保肝、抑血小板聚集等作用。
本发明提供了一种所述瑶药组合物的制备方法,包括以下步骤:
将瑶药组合物用水浸泡后武火煎煮,分离药液。
在本发明中,所述瑶药组合物和水的质量体积比优选为1g:8~12ml;更优选为1g:10ml。
在本发明中,所述浸泡的时间优选为20~40min,更优选为30min。所述煎煮包括两次,煎煮后分离的药液合并;所述煎煮的时间为1~1.5h/次。
分离药液后,本发明还优选包括对得到的药液进行浓缩,得到浓缩膏。本发明对所述浓缩的方法没有特殊限制,采用本领域所熟知的浓缩方法即可,例如采用旋转蒸发仪进行药液浓缩。所述浓缩膏的相对质量为4.9g生药/g膏。
本发明提供了所述瑶药组合物或所述制备方法得到的瑶药组合物在制备预防和/或治疗关节炎的药物中的应用。
在本发明中,所述关节炎优选包括膝骨性关节炎。
所述药物优选以瑶浴浴包的形式存在。所述药物的使用方法:以60kg人体使用药液20L为标准,使用时将药液浓缩膏同40~48℃纯净水混合配制到以下浓度(生药/体积):瑶医药浴高剂量组49g/L,中剂量组24.5g/L,低剂量组11.25g/L。药浴主要是通过瑶浴浴包置于水中进行温热刺激,促进皮肤新陈代谢和有效成分的吸收。
在本发明中,瑶药组合物主要通过药液的温热效应、经络传导、瑶药有效成分的透皮吸收发挥治疗作用。热药液的温热效应能扩张皮肤毛细血管、加快血液循环、增强新陈代谢,从而促进药物有效成分的吸收与机体代谢废物的排出。瑶医药浴属外治法范畴,是经皮给药方法的一种。药液沏于皮肤,能刺激经络传导及皮肤的神经末梢感受器,形成新的反射,破坏原有的病理反射,达到治愈疾病的目的。同时药液通过经络系统,在相应组织器官产生较强的药理效应,从而达到活血消肿,通络止痛的治疗目的。实验验证,本产品有效缓解膝骨性关节炎关节肿胀的情况,有效改善关节活动度、步态活动情况。软骨病理学结果也验证该瑶药组合物干预后,膝骨性关节炎大鼠软骨结构趋于正常并见少量软骨细胞增生。因此,所述瑶药组合物可以起到提升膝骨性关节炎关节功能的作用,为膝骨性关节炎提供新的治疗策略。
下面结合实施例对本发明提供的一种具有改善膝骨性关节炎关节功能的瑶药组合物及其制备方法和应用进行详细的说明,但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
1实验材料
1.1实验动物及饲养环境
95只SPF级健康SD雄性大鼠,15只体重SPF级健康SD雌性大鼠,180~220g。购于湖南斯莱克景达实验动物有限公司。许可证号:SCXK(湘)2019-0004。实验方案经经广西中医药大学动物实验伦理委员会批准。饲养于广西中医药大学仙葫校区科学实验中心实验动物大楼六楼屏障环境,室温20~24℃,湿度50%~60%,通风条件良好,明暗各12h。大鼠适应性喂养7天后用于实验。
1.2主要试剂
2主要仪器
实施例1
一种具有改善膝骨性关节炎关节功能的瑶药组合物及其制备方法
1.原料种类:瑶药
2.原料来源:购于广西金秀瑶族自治县瑶医医院
3.原料用量:上山虎60g、下山虎60g、红九牛50g、四方钻40g、铜钻40g、九龙钻40g、黑钻40g、小钻40g、九层风20g、白面风20g、走血风20g、麻骨风20g、黑节风20g、阴阳风20g。
4.工艺流程
药液制备方法:取药方1剂药量按1:10的比例兑入纯水(即1g生药:10ml纯水)浸泡20min后熬煮,以武火持续煮沸1h,倒出药液,药渣同法再煎1次,前后药液混合。
药液浓缩膏提取方法:使用旋转蒸发仪将药液浓缩成浓度为4.9g生药/g膏的膏状提取物。
实验例2
本发明制备的瑶药组合物治疗膝骨性关节炎小鼠模型实验
1试验方法
1.1安全性试验
30只SPF级SD大鼠,雌雄各半,随机分为空白组,完整皮肤组及破损皮肤组,每组10只。于给药前24小时,将大鼠背部脊柱两侧脱毛(电推刀剃毛后,少量短毛采用10%硫化钠脱净),备皮面积为5cm×4cm。试验当日,将破损皮肤组大鼠脱毛区皮肤消毒后,用16#灭菌针头在脱毛处划“#”字,以轻度渗血为度。空白大鼠组脱毛区涂灭菌用水(自来水经高温高压灭菌),完整皮肤组和破损皮肤组给予浓度(生药/体重)为8.17g/kg·BW(bodyweight)的瑶药组合物。(参照国标GBZT240.3-2011,急性经皮毒性试验剂量达到2000mg/kg·BW时未见实验动物急性毒性或死亡,可不必再提高剂量进行实验。)涂抹包扎24h后取下包扎物,用消毒药棉沾灭菌水洗净受试物,进行急性毒性反应及皮肤刺激性观察。
1.1.1急性毒性试验
1.1.1.1中毒及死亡情况观察
给药后,于1h、24h、48h至第14天观察并记录各组大鼠的呼吸、中枢神经系统、四肢活动等大鼠的全身中毒表现和死亡情况。
1.1.1.2各组大鼠体重测定
第14天实验结束后,称量并记录各组大鼠体重变化。
1.1.1.3各组大鼠脏器系数测定
第14天实验结束后,麻醉处死大鼠,取大鼠肝脏、肾脏和脾脏,剔除脂肪和筋膜,生理盐水洗去血液,用滤纸吸干表面的液体,称重(湿重)并按照公式I计算脏器系数。
脏器系数=脏器绝对重(mg)/体重(g)公式I
1.1.2皮肤刺激性试验
给药后,于24h、4天、7天、14天观察各组大鼠的皮肤反应,记录给药处皮肤有无红斑、水肿等情况,并按表1标准进行记录评分,按表2标准判断刺激强度。
表1皮肤刺激反应评分
表2皮肤刺激强度评分
1.2制备大鼠膝骨性关节炎模型的实验方法
1.2.1造模试剂的配制
精密吸取99.5%冰醋酸0.3mL于50mL量瓶中,生理盐水定容,摇匀,得质量浓度为0.1mol/L的醋酸溶液。在无菌避光条件下,在冰水浴中将20mgCⅡ(牛Ⅱ型胶原蛋白末用0.1mol/L醋酸溶液溶解,配置成质量浓度为1mg/mL的20mL胶原溶液,置于4℃冰箱中过夜保存。次日,将20mlCⅡ溶液与完全弗氏佐剂等体积混合,在无菌避光条件下,于冰水浴中充分搅拌乳化,最终配成质量浓度为0.5mg/mL的40mLCⅡ乳剂。
1.2.2动物模型的建立
20只SPF级SD雄性大鼠,随机分为空白组和模型组,每组10只。实验第1、4天,使用10%水合氯醛腹腔麻醉后,于模型组大鼠右膝关节腔内注射0.1mlⅡ型胶原蛋白酶完全弗式佐剂混合乳液,制备膝骨性关节炎模型。所有大鼠于实验第1、7天计量膝关节横向直径。实验第8天,使用浓度为10%水合氯醛于腹腔注射对大鼠进行麻醉,真空采血管抽取腹主动脉血4ml一管,共两管,放置于4℃冰箱过夜,次日使用低温高速离心机3000r/min离心15min,移液枪吸取分离血清置于EP管中,在-80℃保存,以备ELISA法检测。取血完成后,立即解剖大鼠,充分暴露大鼠双侧膝关节,肉眼观察组织形态改变,切开大鼠右侧膝关节皮肤及皮下组织,取大鼠右膝关节,置于预冷的PBS中漂洗掉血污后吸干水分后,将关节标本用4%多聚甲醛溶液固定48小时,EDTA(15%乙二胺四乙酸)脱钙2个月,3-4天换液一次。梯度乙醇脱水,过渡至二甲苯,石蜡包埋,冷却切片。成片后脱蜡进行HE染色。
1.2.3膝关节肿胀度测量
于实验第1、第7天使用电子数显游标卡尺测定空白组及模型组大鼠双侧膝关节横向直径,并肉眼观察两组大鼠右膝关节肿胀程度。
1.2.4膝关节HE染色
观察大鼠右膝关节病理组织学改变,于造模完成后,在实验第10天通过腹腔注射10%水合氯醛麻醉,从腹腔内拨开脏器后进行腹主动脉采血处死,切开大鼠右侧膝关节皮肤及皮下组织,将表皮分离,剥离软骨,将关节标本用4%多聚甲醛溶液固定48小时,EDTA(15%乙二胺四乙酸)脱钙2个月,3-4天换液一次。梯度乙醇脱水,过渡至二甲苯,石蜡包埋,冷却切片。成片后脱蜡进行HE染色。完成后电镜下观察大鼠膝关节组织病理变化。观察光镜下的软骨、滑膜一般形态。
1.2.5血清IL-1β、IL-6和IL-10水平的测定
将在10%水合氯醛麻醉下腹主动脉取得的大鼠血液放置4℃冰箱过夜,次日3000r/min离心15min,分离血清-80℃保存待测,釆用免疫酶联吸附法(ELISA),按试剂盒操作方法检测大鼠血清IL-1β、IL-6和IL-10含量。
1.3药物组合改善膝骨性关节炎大鼠关节功能的实验研究
60只大鼠,随机数字法挑选10只作为空白组。实验第1、4天,于空白组大鼠右膝关节腔内注射0.1mL生理盐水,其余50只大鼠右膝关节腔内注射0.1mL的0.5mg/mLⅡ型胶原蛋白酶完全弗式佐剂混合乳液以制备膝骨性关节炎模型。造模完成后,随机分为模型组、双氯芬酸钠凝胶组(阳性对照组)、瑶医药浴高剂量组、瑶医药浴中剂量组及瑶医药浴低剂量组,每组各10只,其中瑶医药淤高中低剂量组使用的药剂为实施例1制备得到。双氯芬酸钠凝胶组于右侧膝关节造模部位处适量予双氯芬酸钠凝胶。药浴组水位没过大鼠大腿,药液的浓度(生药/体积)分别为瑶医药浴高剂量组为49g/L,中剂量组为24.5g/L,低剂量组为11.25g/L,温度控制在42~45℃,每次30分钟,结束后使用洁净毛巾擦拭全身毛发,再以吹风机暖风吹干大鼠全身毛发。以上方法连续干预4周,每周6次给药。空白组及模型组不做处理,常规饲养。
1.3.1HE染色观察各组大鼠膝关节软骨组织病理变化
实验结束后,次日采用10%水合氯醛于腹腔注射对大鼠进行麻醉,取大鼠右侧膝关节,置于预冷的PBS中漂洗掉血污后吸干水分后,固定于4%多聚甲醛溶液,EDTA(15%乙二胺四乙酸)脱钙2个月,3~4天换液一次。梯度乙醇脱水,过渡至二甲苯,石蜡包埋,冷却切片。成片后脱蜡进行HE染色。完成后,光镜下观察大鼠膝关节软骨组织病理学变化。
1.3.2ELISA法测定各组大鼠血清炎症指标的含量
实验结束后,抽取腹主动脉血,3000r/min离心15min,分离血清,采用厦门仑昌硕生物科技有限公司的大鼠酶联免疫(ELISA)试剂盒(货号ED-30206,ED-30219及ED-30194),分别检测各组大鼠血清中IL-1β、IL-6、IL-10水平,检测方法严格按照试剂盒说明书执行。
1.3.3各组大鼠关节肿胀度测定
分别于模型制备前日、造模结束的次日和治疗4周后对各组大鼠进行关节肿胀度测定(见图1)。在自然屈曲状态下,使用电子数显游标卡尺测定每组大鼠右膝关节横向直径(mm),每次测量均由2位固定人员进行,结果取二者平均值。
1.3.4各组大鼠关节活动度测定
分别于模型制备前日、造模结束的次日和治疗4周后对各组大鼠的关节活动度进行测定(见图2)。由2位对分组情况不知情人员分别采用关节测量尺测量膝关节的最大屈曲角度和最大伸直角度,计算被动关节活动度,被动关节活动度=最大屈曲角度-最大伸直角度,结果取二者平均值,每次评分均由相同人员进行。
1.3.5各组大鼠步态改变观察
分别于模型制备前日、造模结束后的次日和治疗4周后,录制各组大鼠自由活动时的步态(见图3),并由2位对分组情况不知情人员按照如下分级标准分别进行评分:I患肢无跛行,跑动正常,蹬地有力;II患肢奔跑时轻度跛行,蹬地有力;III患肢参与行走,但跛行明显;IV患肢不能参与行走,不能触地、蹬地。结果取二者平均值,每次评分均由相同人员进行。
1.3.6各组大鼠局部疼痛刺激反应观察
分别于模型制备前日、造模结束后的次日和治疗4周后,用棉签接触或挤压各组大鼠患处(见图4),按刺激反应程度不同分为4级:I无异常疼痛反应:II患肢收缩;III患肢收缩,痉挛,伴轻度全身反应,如周身颤抖、回头舔吮等:IV患肢收缩剧烈、痉挛、全身颤抖、乱窜、挣扎。由2位对分组情况不知情人员分别进行评分,结果取二者平均值,每次评分均由相同人员进行。
1.3.7各组大鼠旷场活动情况观测
治疗4周后,旷场实验分析系统记录各组大鼠的平均运动速度和运动总长度以评估其活动情况。测试前用酒精擦拭旷场分析箱。实验时抓住大鼠尾部距离尾根部2/3处轻轻放入旷场分析箱的一角,开启计时、录像,每次测定完成后将大鼠排泄物清除干净,并用酒精擦拭旷场分析箱,再进行下一只大鼠实验观察。整个实验过程保证安静且光线均匀。实验结束后,使用旷场实验分析系统分析各组大鼠旷场活动距离及平均速度。
2统计方法
用SPSS26.0统计学软件进行处理,若每组数据完全符合正态性分布,计量资料以表示,运用单因素方差分析,采用LSD检测方差齐性。若每组数据不完全/不符合正态性分布,则组间比较采用多样本轶和检验。P<0.05为差异具有统计学意义。
3试验结果
3.1急性毒性试验结果
3.1.1各组大鼠中毒及死亡情况
试验期间,各组大鼠活动正常,未出现明显的毒性反应和死亡。观察14天后,解剖大鼠尸体,全部脏器未见病变。
3.1.2各组大鼠体重与脏器系数对比
实验结果(见表3)显示,与空白组比较,经皮给一次性予该瑶药组合物浓缩膏对大鼠的体重以及脾脏系数无明显影响。而完整皮肤组大鼠胸腺系数与空白对照组和破损皮肤组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。说明经皮给药对大鼠的体重及脾脏无影响,无明显毒性,此外,实验结果提示该瑶药组合物浓缩膏有提高免疫器官相对质量,促进非特异性免疫功能的趋势。
表3各组大鼠体重及脏器系数对比(n=10)
注:与完整皮肤组相比,*P<0.05。
3.1.2各组大鼠皮肤刺激性对比
试验期间,空白对照组大鼠皮肤无刺激性反应。给药后,完整皮肤组少数大鼠可见轻度红斑,试验第7天红斑消退;破损皮肤组大鼠皮肤可见中度红斑,并见水肿,试验结束后,皮肤红斑、水肿均消退,考虑皮肤损伤模型对大鼠的影响,可以发现瑶药组合物对大鼠皮肤无长期刺激性,仅见部分可自行消退的轻微红斑(见表4)。
表4各组大鼠皮肤刺激性评分比较(只,n=10)
3.2建立大鼠膝骨性关节炎模型的实验结果
3.2.1两组大鼠膝关节直径比较
模型组大鼠右膝关节腔注射造模剂后,关节肿胀明显,膝关节直径显著大于同时期空白组(P<0.01)(见表5)。
表5两组大鼠右侧膝关节直径对比(n=10,mm)
注:与空白组比较,▼P<0.01。
3.2.2两组大鼠膝关节解剖观察
实验结束后解剖观察各组大鼠,在模型组大鼠的自体左右膝关节对比时发现,右侧膝关节部位有淡黄色无明显特殊臭味粘稠液、周围组织结构混乱,髌韧带粗大,而左侧膝关节组织结构清晰;空白组双侧膝关节均无明显改变,组织结构清晰可辨,符合膝骨性关节炎关节肿胀的病理特征(见图5)。
3.2.3两组大鼠病理组织学观察结果
显微镜下观察两组软骨细胞形态:空白组软骨表面光滑,结构正常,无裂隙,细胞排列规则;软骨细胞可清晰分为4层,潮线明显。模型组软骨表面粗糙,结构紊乱,有裂隙,裂隙周围有坏死软骨细胞;软骨层次混乱,软骨细胞形态较小,呈团状聚集且数量少,形态不规则;潮线双重、在局部有断裂现象,符合膝骨性关节炎软骨形态学的病理表现,提示该实验中大鼠膝骨性关节炎模型制备成功(见图6)。
显微镜下观察两组滑膜细胞形态:空白组膝关节滑膜平滑而薄,滑膜细胞扁平、核呈椭圆形,排列整齐,无炎性细胞浸润。模型组滑膜充血,大量纤维组织覆盖,同时可见大量炎性细胞浸润,细胞多层,且排列不整齐,符合膝骨性关节炎滑膜增生、纤维化的病理表现,提示该实验中大鼠膝骨性关节炎模型制备成功(见图7)。
3.2.4ELSA法检测大鼠血清IL-1β、IL-6、IL-10的含量
通过关节腔注射Ⅱ型胶原蛋白酶完全弗式佐剂混合乳液造模后,模型组的血清IL-1β、IL-6比空白组显著升高(P<0.01),而血清IL-10比空白组低(P<0.01)(见表6)。
表6空白组与模型组大鼠血清IL-1β、IL-6和IL-10水平(n=10,pg/ml)
注:空白组与其他组比较▼P<0.01;模型组与其他组比较⊙P<0.01。
该实验进行过程中通过对模型组的动物行为观察发现:在首次右膝关节腔注射Ⅱ型胶原蛋白酶完全弗式佐剂混合乳液后次日,大鼠开始每日进食量下降,右膝关节呈现肿大状态,不喜运动,常蜷缩于饲养箱中。二次注射造模药后次日,大鼠关节肿大明显,仍不喜活动,强迫其爬行时右足呈跛行状,不能依靠后足站立探索环境,触碰大鼠时烦躁易怒,攻击性强,且肉眼可见自体右膝关节与左膝关节对比明显肿胀。膝关节直径测量结果显示,模型组膝关节明显比空白组肿胀(P<0.01)。两组大鼠膝关节的HE染色法从病理组织学角度验证该造模方法可以成功引起膝关节滑膜炎症及软骨组织破坏。因此,通过对大鼠右膝关节注射Ⅱ型胶原蛋白酶完全弗式佐剂混合乳液的方法,可以成功制造早期膝骨性关节炎大鼠模型。
3.3药物组合改善膝骨性关节炎大鼠关节功能的实验结果
3.3.1瑶药组合物对膝骨性关节炎大鼠滑膜及软骨形态学的影响
HE切片显示,空白组大鼠软骨表面光滑,结构正常,无裂隙,细胞排列规则;软骨细胞可清晰分为4层,潮线明显。模型组软骨表面粗糙,结构紊乱,有裂隙,裂隙周围有坏死软骨细胞;软骨层次混乱,软骨细胞形态较小,呈团状聚集且数量少,形态不规则;潮线双重、在局部有断裂现象,符合膝骨性关节炎软骨形态学的病理表现,提示该实验中大鼠膝骨性关节炎模型制备成功。双氯芬酸钠组软骨排列不整齐,轻度紊乱。瑶医药浴高剂量组软骨表面较规则,裂隙较模型组少,可见少量软骨细胞增生,潮线基本完整,说明该瑶浴组合可减缓膝骨性关节炎病理进程,尤其在缓解膝骨性关节炎软骨退变方面的效果较为显著。瑶医药浴中剂量组关节软骨细胞轻度固缩,排列紊乱;瑶医药浴低剂量组关节软骨层次中度紊乱(见图8)。
空白组膝关节滑膜平滑而薄,滑膜细胞扁平、核呈椭圆形,排列整齐,无炎性细胞浸润。模型组滑膜充血,大量纤维组织覆盖,同时可见大量炎性细胞浸润,细胞多层,且排列不整齐。瑶医药浴高、中、低剂量组滑膜肿胀及充血程度较模型组减轻,细胞略有增生,炎细胞浸润较模型组减少(见图9)。
3.3.2瑶医药对血清炎症因子表达水平的影响
由血清炎症因子的检测结果可知,模型组大鼠血清IL-1β、IL-6含量与各组相比均显著增加(P<0.01及P<0.05),而IL-10与各组相比显著减少(P<0.01),符合膝骨性关节炎炎症指标的特征性改变。与空白组相比,各组大鼠血清IL-1β、IL-6均有不同程度的增加(P<0.01及P<0.05),而IL-10除模型组外也均有不同程度的增加(P<0.01及P<0.05),说明经造模后,大鼠体内有炎症存在,且各治疗组能够通过提高血清IL-10水平,发挥抗炎作用;与模型组比较,可以发现药物治疗干预后,双氯芬酸钠组和药浴各剂量组大鼠血清IL-1β、IL-6含量表达均有一定程度的减少、IL-10含量表达均有一定程度的增加,且瑶医药浴高剂量组的大鼠血清IL-10含量增加最为显著(P<0.01);与双氯芬酸钠组比较,药浴高剂量组大鼠血清中IL-1β含量显著降低(P<0.01),药浴高、中剂量组IL-6含量表达降低(P<0.05),而IL-10表达水平明显提高(P<0.01),提示该瑶浴组合物抗炎效果优于双氯芬酸钠凝胶(见表7)。
表7不同组别大鼠血清中IL-1β、IL-6、IL-10水平检测结果(n=10,pg/ml)
/>
注:空白组与其他组比较▼P<0.01,▼▼P<0.05;模型组与其他组比较⊙P<0.01,⊙⊙P<0.05;双氯芬酸钠组与其他组█P<0.01,██P<0.05.
3.3.3各组大鼠关节肿胀度对比
通过数据对比(见表8),可知,在实验进行到给药第2周时,瑶医药浴高、中剂量组的膝关节肿肿胀度达到与同期空白组相当水平;给药4周后各干预组的膝关节肿胀度均能恢复到与同期空白组相当水平,提示该瑶药组合物可有效改善膝骨性关节炎关节肿胀的症状。
表8瑶医药浴对大鼠膝关节肿胀度的影响(n=10,mm)
注:空白组与其他组比较▼P<0.01,▼▼P<0.05;模型组与其他组比较⊙P<0.01,⊙⊙P<0.05。
3.3.4各组大鼠关节活动度对比
由实验结果(见图10和表9)可知,该瑶浴药物组合治疗4周后,空白组及各治疗组大鼠关节活动度显著高于模型组(P<0.05)。其中,与双氯芬酸钠组相比,药浴高、中剂量组提高关节活动度的效果显著(P<0.05),提示瑶药组合物在改善膝骨性关节炎关节活动受限的效果优于双氯芬酸钠。
表9各组大鼠关节活动度比较(度,n=10)
/>
注:与模型组相比,▼P<0.05;与双氯芬酸钠组比,□P<0.05。
3.3.5各组大鼠步态与局部疼痛刺激反应对比
实验观察发现,治疗4周后,药浴高、中剂量组大鼠步态与空白组无明显差异(P>0.05),且药浴高剂量组步态评分显著优于双氯芬酸钠组(P<0.05),说明药浴高剂量组改善膝骨关节炎步态的效果更具优势(见表10和表11)。
治疗4周后,各治疗组大鼠局部疼痛反应与空白组相比,无明显差异(P>0.05);药浴高、中剂量组与模型组差异显著(P<0.05),提示治疗4周后,膝骨性关节炎大鼠关节疼痛趋于解除,且药浴高、中剂量组改善关节疼痛的疗效较为显著。
表10各组大鼠步态与局部疼痛刺激反应评分比较(只,n=10)
表11各组大鼠步态与局部疼痛刺激反应对比(中位数(P25,P75),n=10)
注:与空白组相比,*P<0.05;与模型组比,●P<0.05;与双氯芬酸钠组比,△P<0.05。
3.3.6各组大鼠旷场活动情况对比
旷场实验可用于评估实验动物因疼痛引发的焦虑情况,并检测实验动物活动距离与速度。根据旷场试验系统分析(见图11、图12和表12),空白组及各治疗组大鼠对陌生环境的探索明显多于模型组,提示瑶药组合物有缓解膝骨性关节炎关节疼痛及其引起的焦虑情绪的作用。药浴高、低剂量组大鼠活动距离及平均速度显著高于模型组(P<0.05),提示该瑶浴药物组合有改善膝骨性关节炎行走质量的效果。且与双氯芬酸钠相比,药浴高剂量组大鼠活动距离及平均速度明显增加(P<0.05),提示高剂量的药浴效果优于双氯芬酸钠凝胶。
表12各组大鼠旷场活动情况比较(n=10)
注:与模型组相比,▲P<0.05;与双氯芬酸钠组相比,■P<0.05。
基于现代临床常用双氯芬酸钠等非甾体药物作为缓解膝骨性关节炎症状的一线药物,本发明实施例选用同为外用制剂的双氯芬酸钠凝胶作为对照。双氯芬酸钠凝胶水合作用强,透皮效应好,有效增加其缓释性能,使药物浓度在短时间内达到作用峰值,快速减轻疼痛,且对通过骨关节炎指数疼痛、僵硬和身体功能量表等具有长期有效性,但由于其天花板效应,不能通过剂量叠加使药效增强。瑶医药浴主要通过药液的温热效应、经络传导、瑶药有效成分的透皮吸收发挥治疗作用,热药液的温热效应能扩张皮肤毛细血管、加快血液循环、增强新陈代谢,从而促进药物有效成分的吸收与机体代谢废物的排出。热药液还可起到刺激经络系统的作用,在相应组织器官产生较强的药理效应,从而达到活血消肿,通络止痛的治疗目的。实验中,相较于双氯芬酸纳凝胶组,瑶医药浴高剂量组较双氯芬酸钠对于改善步态、关节活动度,提高活动距离与速度等方面效果更优。此外,镜下观察大鼠膝关节病理情况可见,双氯芬酸钠组软骨排列不整齐、轻度紊乱,瑶医药浴高剂量组结构趋于正常并见少量软骨细胞增生,说明瑶浴组合物在缓解膝骨性关节炎病理进程中优势明显,提示改瑶浴药物组合可能通过剂量叠加突破双氯芬酸纳凝胶的天花板效应,从而更好地改善膝骨性关节炎患者的关节功能。
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (8)
1.一种瑶药组合物在制备预防和/或治疗膝骨性关节炎的药物中的应用,其特征在于,所述瑶药组合物由以下重量份的原料制成:上山虎40~80份、下山虎40~80份、红九牛20~60份、四方钻20~60份、铜钻20~60份、九龙钻20~60份、黑钻20~60份、小钻20~60份、九层风10~40份、白面风10~40份、走血风10~40份、麻骨风10~40份、黑节风10~40份和阴阳风10~40份。
2.根据权利要求1所述应用,其特征在于,由以下重量份的原料制成:上山虎50~70份、下山虎50~70份、红九牛40~55份、四方钻30~50份、铜钻30~50份、九龙钻30~50份、黑钻30~50份、小钻30~50份、九层风15~30份、白面风15~30份、走血风15~30份、麻骨风15~30份、黑节风15~30份和阴阳风15~30份。
3.根据权利要求2所述应用,其特征在于,由以下重量份的原料制成:上山虎60份、下山虎60份、红九牛50份、四方钻40份、铜钻40份、九龙钻40份、黑钻40份、小钻40份、九层风20份、白面风20份、走血风20份、麻骨风20份、黑节风20份和阴阳风20份。
4.根据权利要求1~3中任意一项所述应用,其特征在于,所述瑶药组合物的制备方法,包括以下步骤:将瑶药组合物中的原料用水浸泡后武火煎煮,分离药液。
5.根据权利要求4所述应用,其特征在于,所述瑶药组合物中的原料和水的质量体积比为1g:8~12ml;所述煎煮包括两次,煎煮后分离的药液合并;所述煎煮的时间为1~1.5h/次。
6.根据权利要求4所述应用,其特征在于,所述浸泡的时间为20~40min。
7.根据权利要求5或6所述应用,其特征在于,所述瑶药组合物的制备方法还包括对得到的药液进行浓缩,得到浓缩膏;所述浓缩膏的相对质量为4.9g生药/g膏。
8.根据权利要求1~3中任意一项所述应用,其特征在于,所述药物以瑶浴浴包的形式存在。
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Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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CN103751427A (zh) * | 2013-12-31 | 2014-04-30 | 柳州市中医院 | 一种治疗桡骨远端骨折的瑶药 |
CN105343359A (zh) * | 2015-12-18 | 2016-02-24 | 邓瑞萍 | 一种治疗肩关节周围炎的药酒 |
CN106421083A (zh) * | 2016-10-27 | 2017-02-22 | 金秀瑶族自治县瑶医医院 | 具有治疗风湿骨痛功效的瑶药保健浴包及其制备方法 |
CN108434271A (zh) * | 2018-05-28 | 2018-08-24 | 胡聪 | 一种治疗风湿的中药及其制备方法 |
-
2023
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Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103751427A (zh) * | 2013-12-31 | 2014-04-30 | 柳州市中医院 | 一种治疗桡骨远端骨折的瑶药 |
CN105343359A (zh) * | 2015-12-18 | 2016-02-24 | 邓瑞萍 | 一种治疗肩关节周围炎的药酒 |
CN106421083A (zh) * | 2016-10-27 | 2017-02-22 | 金秀瑶族自治县瑶医医院 | 具有治疗风湿骨痛功效的瑶药保健浴包及其制备方法 |
CN108434271A (zh) * | 2018-05-28 | 2018-08-24 | 胡聪 | 一种治疗风湿的中药及其制备方法 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
瑶医药浴对改善类风湿关节炎患者临床症状的效果评价;黄玲玲;闫国跃;邓秋兰;李彤;;护士进修杂志;第31卷(第11期);972-974 * |
瑶医药浴的治疗与保健作用;洪宗国;;中南民族大学学报(自然科学版);第30卷(第01期);39-41 * |
瑶医风湿药浴方干预类风湿性关节炎的临床研究;刘莉;中国硕博士论文电子期刊医药卫生科技辑(第3期);第24倒数第1段、第25页第3段、第34页倒数第4段至第36页第3段 * |
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