CN115337356A - 一种治疗类风湿关节炎的药物组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种治疗类风湿性关节炎的药物组合物及其制备方法。由黄芪，秦艽等十余味药材组成，本发明运用中医络病理论探讨类风湿性关节炎的病因病机，从“风、寒、湿、热、痰、瘀、虚”导致络脉痹阻综合论析中医病机与治疗，结合多年临床经验研制成功，具有祛风散寒除湿、益气化瘀通络功效。

Description

一种治疗类风湿关节炎的药物组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种治疗类风湿性关节炎的中药组合物及其制备方法，属于中草药应用领域，临床上主要用于类风湿性关节炎，症见肢体关节肿胀、疼痛、压痛，晨僵，关节屈伸不利、活动受限，肢体麻木、重着，皮下结节，畏寒恶风，神疲乏力等。

背景技术

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一种以侵蚀性关节炎为主要表现的全身性自身免疫病。本病的患病率为人群的0.8%（范围为0.3%～2.1%），以女性多发，女性患者约为男性的3倍。RA可发生于任何年龄，以30～50岁为发病的高峰。据中华医学会风湿病学会于北京和广州的调查资料，RA的患病率北方为0.34％，南方为0.32％。RA主要临床表现为对称性、持续性关节肿胀和疼痛，常伴有晨僵，受累关节以近端指间关节，掌指关节，腕、肘和足趾关节最为多见；同时，颈椎、颞颌关节、胸锁和肩锁关节也可受累。中、晚期的患者可出现手指的“天鹅颈”及“钮扣花”样畸形，关节强直和掌指关节半脱位，表现为掌指关节向尺侧偏斜。除关节症状外，还可出现皮下结节，称为类风湿结节；部分患者可同时合并肺部、眼部、心血管系统和神经系统等关节外表现。本病病因不明，可能与感染、遗传等因素诱发自身免疫有关，其发病机制比较复杂，研究显示RA是T细胞介导的，巨噬细胞、树突状细胞、B细胞和炎症细胞等共同参与的自身免疫性疾病，其病理表现主要为关节滑膜的慢性炎症、血管翳形成，并出现关节的软骨和骨破坏，最终导致关节畸形和功能丧失。RA危害极大患病群体大，致残率高，病程5～10年的致残率为60％，病程30年的致残率90％，伴关节外表现的5年病死率可达50％，成为我国人群劳动力丧失和致残的主要病因之一，此外多数患者得不到有效及时的治疗，因此积极开展RA的防治研究已刻不容缓。

关于RA 的治疗一直是风湿病学界长期以来研究的难点和热点，目前西医治疗本病的目的主要是减轻或消除患者因关节炎引起的关节肿胀、疼痛、晨僵或关节外的症状；控制疾病的发展，防止和减少关节骨的破坏，达到较长时间的临床缓解，尽可能的保持受累关节的功能；促使已破坏的关节骨的修复，并改善其功能；同时控制系统受累，然而目前应用的治疗RA的药物均被视作是姑息性治疗，旨在缓解临床症状。RA的药物治疗通常包括五种类型：非甾体类抗炎药、改善病情的抗风湿药物、糖皮质激素、抗细胞因子制剂以及免疫调节剂。其中布洛芬、萘普生、吲哚美辛、双氯芬酸为非特异性的对症治疗药物，但这些药物不能阻止疾病的发展及合并症的发生，同时存在一些副作用如：胃肠道刺激、氮质血症、血小板功能障碍、过敏性鼻炎和哮喘加重等，久用这类药物后可出现肾间质性损害。甲氨蝶呤、柳氮磺胺吡啶、来氟米特、青霉胺、硫唑嘌呤、环磷酰胺、环孢素等，改善病情的抗风湿药大多有肝肾功能损害、胃肠道反应、骨髓抑制等不良反应；糖皮质激素长期应用并不能阻止关节结构破坏，不能改善病变的发展，且长期应用耐受量增大，撤药困难，停药后容易导致病情反复，加速关节的破坏。患者经过内科正规治疗，病情仍不能控制，为纠正畸形，改善生活质量可考虑手术治疗，常用的手术主要有滑膜切除术、人工关节置换术、关节融合术以及软组织修复术，但手术治疗并不能根治该病，术后仍需药物治疗。此外自体干细胞移植、T细胞疫苗以及间充质干细胞治疗对RA的缓解可能有效，但仅适用于少数患者，仍需进一步的临床研究。因此，寻求新的治疗方法和措施，研制高效低毒的药物和有效合理的治疗方案，是使患者症状明显改善、减少RA致残发生的重要措施，亦是目前国内外医学界普遍重视的前沿性课题。

目前应用的治疗RA的西药主要包括改善症状的抗风湿性和控制疾病的抗风湿药。后一类药物目前尚在探索和实验阶段，前一类主要包括非甾体抗炎药、改善病情抗风湿药、生物制剂、糖皮质激素。

非甾体抗炎药（NSAIDs）主要通过抑制环氧化酶(COX)活性，减少前列腺素合成而具有抗炎、止痛、退热及减轻关节肿胀的作用，是临床最常用的RA治疗药物，但该类药物存在胃肠道症状、肝和肾功能损害以及可能增加的心血管不良事件，因此对于有上述疾病的患者限制了使用，即使是普通患者也需要最低有效量、短疗程使用。

改善病情抗风湿药(DMARDs)该类药物不具备明显的止痛和抗炎作用，故又称为慢作用抗风湿药，但可延缓或控制病情的进展。该类药物常见胃肠道不适、脱发、皮疹、肝肾损害、白细胞减少、骨髓抑制等不良反应。临床上强调早期使用，对于病情比较复杂，多关节受累或出现关节外症状者，需要多药联合使用。

生物制剂：主要包括肿瘤坏死因子(TNF)-α拮抗剂：依那西普、英夫利西单抗、阿达木单抗；白细胞介素(IL)-l拮抗剂：阿那白滞素；抗CD20单抗：利妥昔单抗；以及T细胞共刺激信号抑制剂等，因多为皮下注射或静脉滴注，存在感染、输液反应和高血压、皮疹、瘙痒、发热、恶心、关节痛以及药物诱导的狼疮样综合征、脱髓鞘病变等不良反应。

糖皮质激素：可迅速改善关节肿痛和全身症状。在重症RA伴有心、肺或神经系统等受累的患者，可给予短效激素，其剂量依病情严重程度而定，应用激素存在撤药困难，停药后容易病情反复等缺陷。

中医药对类风湿关节炎进行辨证论治研究颇多，积累了丰富的经验，对减轻临床症状、提高生活质量、预防/减缓并发症的发生发展有其独到之处，弥补了西药的不足，日益受到国内外医学界的高度重视，目前治疗RA的中成药有许多种，具体作用不一，药性亦不一致，具体包括：祛风除湿温经散寒类药物，如寒湿痹颗粒、寒痹停片、复方雪莲胶囊、追风透骨丸、小活络丸等；滋补肝肾通经活络类药物，包括风湿寒痛片、尪痹颗粒、壮骨关节丸、益肾蠲痹丸等；舒筋活络活血止痛类药物，包括同仁大活络丸、通络开痹片、独活寄生丸、盘龙七片等；清热祛湿类药物，包括湿热痹颗粒。此外还有单味提取药物如雷公藤多苷片、白芍总苷胶囊。

综合分析可知，目前已上市RA中成药产品多数定位在祛风除湿温经散寒、滋补肝肾通经活络、舒筋活络活血止痛以及清热祛湿等方面，但各类药物各有侧重，而从风、寒、湿、热、痰、瘀、虚等多种角度综合考虑针对RA病因与发病的药物不多，且无从络病理论认识该病病因病机及治疗者。

发明内容

本发明药物组合物是由中国工程院院士、中华中医药学会副会长、中国中西医结合学会副会长河北以岭医院名誉院长吴以岭教授，以中医络病理论为指导，从“风、寒、湿、热、痰、瘀、虚”导致络脉痹阻综合论析类风湿性关节炎的中医病机与治疗，并结合多年痹证临床经验创立的治疗类风湿性关节炎的经验方，并在临床应用近20年，具有确切的临床疗效。

本发明药物组合物在立方原则与方药组成上具有创新性，首先，从风、寒、湿、热、痰、瘀、虚等多种致病因素综合考虑疾病的病因与发病；其次以络病理论为指导提出正气亏虚、邪袭络脉是本病的病理基础，痰瘀胶结、痹阻络脉是本病的主要病变环节；最后，提出祛邪宣痹，益气通络为本病的主要治则与祛风散寒除湿、益气化瘀通络的主要治法。该药由黄芪、秦艽、防己、黑顺片、虎杖、鸡血藤、威灵仙、芥子、白芍、地黄、当归、醋没药、香附、桂枝、川牛膝诸药物组成。以黄芪、秦艽为君，共奏祛风散寒除湿，益气通络止痛之功效；同时选用防己加强祛湿通络止痛，黑顺片温经散寒通络，虎杖清热利湿止痛，鸡血藤和血化瘀通络，共为臣药助君药散邪之功；佐以威灵仙祛风湿、通络脉，蠲痹痛，芥子祛痰通络、利气散结，白芍、地黄养血滋阴，当归补血活血通络，醋没药活血通络止痛，香附理气活血；桂枝、川牛膝为使药，引诸药通达上下关节，通络除痹。该方针对类风湿性关节炎内外病因综合施治，不仅有助于改善患者关节局部肿胀疼痛、晨起僵硬、屈伸不利、活动受限等症状，同时可显著改善肢体麻木重着、畏寒恶风，神疲乏力等全身性临床症状表现，提高患者生活质量，显示出本处方的独特优势，与同类产品相比，本发明药物组合物在病因病机、立方原则与方药组成上具有创新性。

类风湿性关节炎外因风寒湿邪痹阻络脉，加之正气亏虚基础上，痰瘀阻络，结聚成形所致的疾患，历代医家对此多有论述，如《素问·痹论》提出：“风寒湿三气杂至，合而为痹也”；《金匮要略》载：“诸肢节疼痛，身体魁羸，脚肿如脱”应用桂枝芍药知母汤治疗；朱丹溪《丹溪心法》指出：“肥人肢节痛，多是风湿与痰饮流注经络而痛”；叶天士在《临证指南医案》则论及：“风寒湿三气合而为痹，然经年累月，外邪留著，气血皆伤，其化为败瘀凝痰，混处经络，盖有诸矣”，故不难发现，本病的发生发展与风、寒、湿、热、痰、瘀、虚等多种病理因素有关，且与络脉密切相关。

纵观两千余年关于痹证病因病机的记载，归纳主要有以下几个方面：

（1）正气不足：《内经》指出“邪之所凑，其气必虛”，“风雨寒热不得虚，邪不独伤人”，正气不足在痹病发病中起到决定性作用。正气不足主要包含先天禀赋不足、年老肾虚、劳逸失度、产后及病后均可损伤正气，正如《证治准绳》所谓“痹病有风、 有湿、有寒、有热……皆标也，肾虚，其本也”。肾主骨，年老肾虚，精髓不足，骨失所养，则可以见腰脊、关节、足跟疼痛等痹病表现。同时年老肾虚，则正气不足，卫外不固，腠理空虚，从而使风、寒、湿等邪易于侵袭肌体引发本病。“夫劳倦之人，表里多虛，血气衰弱，腠理疏泄，风邪易侵，随其所感，而众痹生焉”（宋代王怀隐《太平圣惠方》），指出过度劳倦亦可使得正气不足卫外失利。又如妇人产后气血大亏， 正气衰微，若护理不当，风寒湿等外邪极易侵袭，亦可致痹病发生。此外既病之后，气虚无力驱邪外出，以致外邪留连不去，久羁于肢体关节筋骨血脉，络脉痹阻不通，迁延难愈。

（2）外邪入侵：风寒湿等外那侵袭机体， 正邪交争，邪胜正退则发为病， 故认为风寒湿等外邪是本病发生的直接因素，也是客观条件。体虚固然易于招致外邪入侵，但体质尚好，却不注意摄养，或工作潮湿，餐风露宿；或水中作业，冒雨涉水；或居处潮湿，睡卧当风；或气候骤变，冷热交替；或劳后汗出当风，或汗后冷水淋浴等；此时卫外相对不足，外邪乘机袭人，日久生变，风寒湿邪壅遏痹阻络脉，则导致该病的发生。正如《素问·五脏生成篇》所谓：“卧出而风吹之，血凝于肤则发为痹”，张子和《儒门事亲》载：“此疾之作，多在四时阴雨之时……故草枯寒如甚，或濒水之地，……劳力之人触冒风雨，寝处津湿，则痹从外入”。

（3）痰凝血瘀：痰浊瘀血既是致病因素作用于机体而产生的病理产物，又可单独作为病因作用于机体，正如喻昌《医门法律》言：“风寒湿三痹之邪，每借人胸中之痰为相援”。既病日久，影响气血运行，以致血滞成瘀，津凝为痰，痰瘀互结，阻闭络脉，深入骨骱；或复有外邪不解，内外和邪，羁留胶结于络脉之处，使疾病缠绵难愈。本病晚期常见的关节肿胀、疼痛明显，屈伸不利、活动受限、皮下结节等，如《医学入门》所说：“骨节痛极，久则手足蜷挛……甚则身体块瘰”，正是痰凝血瘀，络脉阻痹之征象，而“痹久必有痰湿败血瘀滞经络”（《类证治裁·痹症论治》），可见罹病日久，气血周流不畅，停而为瘀，又感受外邪，内外相合，经脉痹阻，而发为痹病，又久病体虚，难以袪邪，胶结难愈。

综上所述，历代医家已经认识到痹病病机为正气不足，感受外邪，内外合邪，邪气壅遏，或痰浊瘀血流注肌肉、关节、筋骨，气血运行不畅，络脉痹阻所致，病性属本虚标实，虚实夹杂之证，但各家学说多从虚、邪、痰、瘀、热等某一、或某两个方面认识该病，且从络病论述较少，但痹证病机症状复杂、病势迁延难愈，从络病论析综合“风、寒、湿、热、痰、瘀、虚”多种病机对全面揭示该病具有重要的临床指导价值。

发明人鉴于上述认识，类风湿性关节炎以关节肿胀疼痛为主要表现，其病机为正气亏虚风寒湿邪外袭，痰瘀胶结痹阻络脉所致，本病的发生发展与风、寒、湿、热、痰、瘀、虚等多种病理因素有关，且与络脉密切相关。其证虽有寒、热、虚、实之别，然而总以腠理、筋膜、骨节之络脉气血痹阻不通为共同病变特点，故“通畅络脉”为其总的治则，祛邪宣痹，益气通络为本病主要治则，确立祛风散寒除湿、益气化瘀通络为本病的主要治法。明清医家对此即有阐发，如吴鞠通《温病条辨》认为“杂感混淆，病非一端，乃以气不主宣四字为扼要”，故强调治痹证“唯贵宣通”，叶天士在《临证指南医案·痹》中则指出：“虽汗不解，贵乎宣通，惟通则留邪可拔耳”，总之正强邪祛，气血流通，营卫复常，络脉通畅则痹证自除。

发明人认为，依据类风湿性关节炎中医“风、寒、湿、热、痰、瘀、虚”导致络脉痹阻的中医病机特点，以“祛风散寒除湿、益气化瘀通络”为治法，以复杂之方治复杂之证，故本药组方药味较多，采用君二臣四的配伍原则。

本发明所述的治疗风湿性关节炎的组合物包括如下重量份的组分：黄芪120-190份 、秦艽120-190份 、防己45-80份、附子 45-80份 、虎杖110-180份 、 鸡血藤110-180份、威灵仙110-180份、芥子20-40份、白芍45-80份、地黄120-190份、当归45-80份、没药40-65份、香附40-65份 、桂枝45-80份、牛膝45-80份。

本发明所述的治疗风湿性关节炎的组合物优选包括如下重量份的组分：黄芪120份、秦艽190份 、防己45份、 附子80份 、虎杖110份、鸡血藤180份、威灵仙110份、芥子40份、白芍45份 、地黄190份、当归45份、没药65份、香附40份、桂枝80份、牛膝45份。

本发明所述的治疗风湿性关节炎的组合物优选包括如下重量份的组分：黄芪150份、秦艽160份、防己60份 、附子65份 、虎杖120份、鸡血藤130份、威灵仙135份、芥子35份、白芍50份、地黄160份、当归60份、没药55份、香附45份、桂枝60份、牛膝60份。

本发明所述的治疗风湿性关节炎的组合物优选包括如下重量份的组分：黄芪146份、秦艽139份、防己58份、附子75份、虎杖120份、鸡血藤125份、威灵仙135份、芥子28份、白芍60份、地黄150份、当归70份、没药60份、香附60份 、桂枝70份、牛膝70份。

本发明所述的治疗风湿性关节炎的组合物优选包括如下重量份的组分：黄芪156份、秦艽156份、防己63份、附子63份、虎杖146份、鸡血藤146份、威灵仙146份、芥子31份、白芍63份、地黄156份、当归63份、没药52份、香附52份 、桂枝63份、牛膝63份。

本发明所述的治疗风湿性关节炎的组合物的组分中，附子优选为黑顺片，没药优选为醋没药，牛膝优选为川牛膝。

本发明所述的组合物的制剂剂型可以为胶囊剂、片剂、丸剂、口服液、颗粒剂或散剂。

本发明所述的药物组合物的活性组分是由以下步骤制成：

A、取防己粉碎成细粉，60份o-γ射线辐射灭菌，备用；

B、取桂枝、醋没药、香附加5-8倍量水，水蒸气蒸馏法连续提取挥发油5-10小时，收集挥发油，蒸馏后的水溶液滤过，另器收集，备用；

C、取秦艽、鸡血藤、当归、芥子、白芍、虎杖，加8-12倍量50-80%乙醇，回流提取1-3次，每次1小时，提取液滤过，减压回收乙醇，浓缩至相对密度为1.15±0.05的清膏，备用；

D、取黄芪、黑顺片、威灵仙、地黄、川牛膝，加8-12倍量水，煎煮2-5次，每次1.5小时，煎煮液滤过，减压浓缩至相对密度为1.10±0.05的清膏，再与挥发油蒸馏后水溶液合并，减压浓缩至相对密度为1.15±0.05的清膏，备用；

E、将步骤C、D清膏合并，混匀，干燥，粉碎得混合清膏粉；

步骤A所得的细粉，步骤B所得的挥发油，步骤E所得的清膏粉共同构成了本发明药物组合物的活性组分。

本发明所述的药物组合物制剂中的胶囊剂的制备工艺为：

A、取防己粉碎成细粉，60份o-γ射线辐射灭菌，备用；

B、取桂枝、醋没药、香附加8倍量水，水蒸气蒸馏法连续提取挥发油10小时，收集挥发油，蒸馏后的水溶液滤过，另器收集，备用；

C、取秦艽、鸡血藤、当归、芥子、白芍、虎杖，加10倍量70%乙醇，回流提取3次，每次1小时，提取液滤过，减压回收乙醇，浓缩至相对密度为1.15±0.05的清膏，备用；

D、取黄芪、黑顺片、威灵仙、地黄、川牛膝，加8倍量水，煎煮4次，每次1.5小时，煎煮液滤过，减压浓缩至相对密度为1.10±0.05的清膏，再与挥发油蒸馏后水溶液合并，减压浓缩至相对密度为1.15±0.05的清膏，备用；

E、将步骤C、步骤D所得清膏合并，混匀，干燥，粉碎得混合清膏粉，喷入步骤B所得挥发油，加入步骤A的灭菌粉喷雾制粒，整粒，装胶囊即得。

本发明所述的药物组合物制剂中的片剂的制备工艺为：

A、取防己粉碎成细粉，60份o-γ射线辐射灭菌，备用；

B、取桂枝、醋没药、香附加6倍量水，水蒸气蒸馏法连续提取挥发油8小时，收集挥发油，蒸馏后的水溶液滤过，另器收集，备用；

C、取秦艽、鸡血藤、当归、芥子、白芍、虎杖，加10倍量70%乙醇，回流提取3次，每次1小时，提取液滤过，减压回收乙醇， 浓缩至相对密度为1.15±0.05的清膏，备用；

D、取黄芪、黑顺片、威灵仙、地黄、川牛膝，加11倍量水，煎煮3次，每次1.5小时，煎煮液滤过，减压浓缩至相对密度为1.10±0.05的清膏，再与挥发油蒸馏后水溶液合并，减压浓缩至相对密度为1.15±0.05的清膏，备用；

E、将步骤C、步骤D所得清膏合并，混匀，干燥，粉碎得混合清膏粉；

F、取步骤B所得挥发油进行包合后，包合物备用；

份、将步骤A所得灭菌粉与步骤E所得清膏粉制粒，整粒，加入步骤F所得的包合物，按常规方法压片即得。

本发明药物组合物中挥发油包合的工艺为：取挥发油6-10倍量的环糊精，加入环糊精6-10倍量的水，进行研磨后，加入挥发油与90-95%乙醇等体积的混合物，继续研磨均匀后，干燥即得。

优选的，本发明还保护本发明药物组合物在制备抗炎药物中的应用。

优选的，本发明还保护本发明药物组合物在制备抑制毛细血管通透性增高的药物中的应用。

优选的，本发明还保护本发明药物组合物在制备镇痛药物中的应用。

优选的，本发明还保护本发明药物组合物在制备抑制脾淋巴细胞增殖及血清II型胶原抗体的产生，降低炎症细胞因子IL-1、TNF-α含量，抑制类风湿因子IgG和IgM的产生的药物中的应用。

优选的，本发明药物组合物治疗的类风湿性关节炎优选为佐剂关节炎或II型胶原诱导的关节炎。

本发明药物组合物中，具体的药物配伍为：君药：黄芪、秦艽。黄芪：味甘性微温，功专补气，乃补气之圣药，于内可大补肺脾之气，于外可固表实卫，正如《本草汇言》载：“黄芪，补肺健脾，卫实敛汗，驱风运毒之药也”；《本草正义》云：“（黄耆）其皮味浓质厚，力量皆在皮中，故能直达人之肤表肌肉，固护卫阳，充实表分，是其专长”。该药气薄而味浓，可补三焦而实卫，充腠理，以之为君内补肺脾之气，益气固表以防外邪侵袭最为适宜。秦艽：味辛甘性平，祛风除湿，散寒舒筋，活络止痛。《本草经疏》言：“秦艽，苦能泄，辛能散，微温能通利，故主寒热邪气，寒湿风痹，肢节痛，下水，利小便。性能祛风除湿”。秦艽祛风除湿，合黄芪以益气祛邪，祛邪而不伤正，而黄芪得秦艽补气而不致留邪，内有所依，外邪去而不复来，二药合用，共奏益气祛风除湿散寒，通络止痛之功，用为君药。

臣药：防己、黑顺片、虎杖、鸡血藤。防己：味苦性寒，强于祛湿通络止痛。《药性论》言其：“治湿风口面歪斜，手足疼，散留痰”，助秦艽加强祛湿之效；黑顺片：味辛甘性热，辛温通络，温经散寒。附子性温热，走而不守，能温经脉，散凝寒，除湿邪，止疼痛，具有祛风除湿，散寒止痛之功效，《本草汇言》谓其“回阳气，散阴寒，逐冷痰，通关节之猛药也”；张锡纯认为：“附子味辛……其力能升能降，能内达能外散，凡凝寒痼冷之结于脏腑、着于经络血脉者，皆能开之，通之”，助诸药以通络宣痹散寒。虎杖：味微苦性微寒，散瘀止痛，祛风通络，清热利湿。《本草拾遗》谓其“主风在骨节间及血瘀”，方中用其以清瘀热，用于治疗痹证日久蕴而化热者。鸡血藤：味苦甘性温，活血通络、舒筋活络，《饮片新参》谓其可“去瘀血，生新血，流利经脉”，正所谓补血扶其正，祛瘀通其络。上述四药寒温并用，除湿散寒，清热利湿，和血通络，共助君药散邪之功。

佐药：威灵仙、芥子、白芍、地黄、当归、醋没药、香附。

威灵仙：味辛咸性温，功效祛风除湿，通络止痛。威灵仙能祛风湿，通经络，蠲痹痛，为治疗痹证筋脉拘挛之要药，《本草经疏》云：“威灵仙，主诸风，而为风药之宜导善走者也”，佐秦艽、防己以增强祛风除湿之效，取其善走之性，通络开痹。芥子：味辛性温，搜剔内外痰结，祛痰通络，利气散结，可治疗痰湿流注，肢体肿痛麻木，《本草求真》云：“辛能入肺，温能散表，痰在胁下皮里膜外，得此辛温以为搜剔，则内外宣通，而无阻隔窠囊留滞之患矣”；《本草纲目》言其：“利气豁痰，除寒暖中，散肿止痛，治喘嗽反胃，痹木脚气，筋骨腰节诸痛”，同时该药温里散寒，佐助附子加强散寒之功。白芍：味苦酸性凉，功能养血通脉，缓急止痛。《神农本草经》谓其“除血痹”，《别录》言其：“通顺血脉”。地黄：味甘性寒，养血滋阴，通血脉、逐血痹，其滋阴之效，又可佐制黑顺片、鸡血藤等温热之性，与白芍共奏养血活血之功，祛痹证血瘀之症。当归：味甘辛性温，治风先治血、血行风自灭，功能补血活血通络。《本草正义》：“当归，其味甘而重，故专能补血，其气轻而辛，故又能行血，补中有动，行中有补，诚血中之气药，亦血中之圣药也……佐之以攻则通，故能祛痛通便，利筋骨”，与鸡血藤、地黄相伍，又寓治风先治血，血行风自灭之义。醋没药：味苦性平，活血通络止痛。《本草述》：“久服舒筋膜，通血脉”；《本草衍义》：“没药，大概通滞血”。香附：味辛微甘性平，功能行气解郁，理气止痛。气为血之帅，气行则血行，香附行气以活血，与没药共奏理气活血通络之效。

使药：桂枝、川牛膝。桂枝：味辛甘性温，辛温通络，加强温经通络之功，正如《本经疏证》所谓：“桂枝能利关节，温经通脉，此其体也”，同时可以散风寒，逐表邪，《长沙药解》言其“善解风邪，最调木气舒筋脉之急挛，利关节之壅阻……通经络而开痹涩，甚去湿寒”，方中用其为使，亦取其引药上行之功。川牛膝：味甘微苦性平，功能祛风利湿、通利关节、活血通络、止筋骨痛。《本经》谓其“主寒湿痿痹，四肢拘挛，膝痛不可屈”，方中用其为使，亦取其引药下行之力，二药共用引诸药通达上下关节，通络以除痹痛，故为使药。

诸药同用，寓寒温于一体，冶通补于一炉，汇祛风、散寒、除湿、清热、益气、活血、祛痰、通络等诸品于一方，旨在“祛邪宣痹，益气通络”。俾风寒湿痰瘀热之邪得散，正气恢复，痰瘀得除，痹阻得宣，络脉得通，气血流畅，则疾病自然向愈。

本发明药物组合物具有祛风散寒除湿、益气化瘀通络的功效。主治类风湿性关节炎风寒湿痹，气虚络瘀，痰瘀阻滞证。

传统的汤剂煎制麻烦，口感差，质量不稳定，不便于患者携带和服用，使用受到极大限制。因此会选择制成胶囊剂、片剂、颗粒剂、口服液或其他剂型。其中片剂与其它剂型相比辅料用量少，较易成型，体积小，剂量准确，携带、运输和服用均较方便。

另外，片剂为干燥固体，质量稳定可控，某些易氧化变质及潮解的药物可借包衣加以保护，光线、空气、水分等对其影响较小，还可掩盖中药的不良气味。

再者片剂生产机械化、自动化程度高，宜于产业化推广，为了更好的发挥该药的社会价值和经济价值，我们结合处方中药味性质，优选将片剂作为本处方的剂型。

在制备工艺的研究过程中，我们从多方入手，完成了工艺的选择，首先对构成的药味进行了单独的研究，其中黄芪主要含三萜皂苷、黄酮及多糖等成分。现代研究表明，黄芪煎剂具有明显补益作用，且皂苷、黄酮、多糖均为有效成分，易溶于热水，故采用水煎煮法为宜。秦艽：主要含龙胆苦苷、当药苷等环烯醚萜苷类成分。环烯醚萜苷类成分易溶于水或乙醇等溶液，且秦艽醇提取液具有明显抗炎作用，结合溶剂考察结果，采用70%乙醇提取。防己：主要含粉防己碱、防己诺林碱、轮环藤酚碱等四氢异喹啉类生物碱。防己生物碱具有镇痛、抗炎作用，不易溶于水，易溶于乙醇等有机溶剂，结合溶剂考察结果，易采用醇提取。但考虑到乙醇提取部分中的白芍、虎杖含有大量的鞣质、蒽醌等成分，易和生物碱生成沉淀而损失。经实验考察，防己易于粉碎，且细粉作为赋形剂，制剂成型效果较好；又因防己在方中所占的比例较小，粉碎后投料，不会导致服用量过大；同时，防己粉碎入药既保留了其有效成分，又减少了制剂成型的辅料用量，更利于患者服用，因此本处方中防己采用粉碎入药为宜。附子：主要含二萜双酯类生物碱。附子煎剂对各种急慢性炎症动物模型均呈抑制作用，故采用水煎煮法为宜。鸡血藤：主要含异黄酮、黄酮、三萜类和甾醇等成分。主要为醇溶性成分，采用70%乙醇提取。当归，主要含挥发油、有机酸、多糖类成分。现代研究表明，当归中挥发油具有抑制子宫平滑肌收缩等作用，目前当归挥发油主要用于痛经及月经不调的治疗。而本方中当归主要作用为活血，其中所含阿魏酸具有抑制血小板聚集和抗血栓作用，为活血的主要成分，结合溶剂考察结果，采用70%乙醇提取。威灵仙：主要含齐墩果烷型三萜皂苷。皂苷类成分易溶于水，故采用水煎煮法为宜。芥子：主要含有芥子碱等各种异硫氰酸酯及其糖苷、脂肪酸、含氮化合物及氨基酸等。现代研究表明,芥子碱硫氰酸盐具有抗炎作用，在乙醇中提取率较高，结合溶剂考察结果，采用70%乙醇提取。地黄：主要含环烯醚萜苷类、多糖等成分，易溶于水，故采用水煎煮法为宜。白芍：主要含芍药苷、羟基芍药苷、苯甲酰芍药苷等多种苷类成分和鞣质。芍药苷具有抑制血小板聚集、镇痛、抗炎作用，在乙醇中提取率较高，结合溶剂考察结果，采用70%乙醇提取。没药：主要含有挥发油、树脂和树胶等成分。方中没药用于活血，止痛作用，现代研究表明，没药挥发油及水煎液均具有延长凝血时间作用，没药挥发油具有抗炎作用，故采用水蒸气蒸馏法提取，收取挥发油，蒸馏后水溶液与水煎液合并的提取方法。香附：主要含有挥发油，油中主要含α-香附酮等倍半萜及其氧化物。挥发油及水煎剂具有镇痛作用，故采用水蒸气蒸馏法提取，收取挥发油，蒸馏后水溶液与水煎液合并的提取方法。虎杖：主要含有虎杖苷、蒽醌、鞣质等成分。虎杖苷和蒽醌类成分在乙醇中提取率较高，结合溶剂考察结果，采用70%乙醇提取。桂枝：主要含挥发油和水溶性成分反式桂皮酸、原儿茶醛等，油中主要成分是桂皮醛，具有抗炎等作用，且桂枝配伍黄芪煎剂能明显增强黄芪抗炎镇痛作用，故采用水蒸气蒸馏法提取，收取挥发油，蒸馏后水溶液与水煎液合并的提取方法。川牛膝要含甾醇类成分。煎剂具有明显改善微循环及抗炎等作用。故采用水煎煮法为宜。

对于方中挥发油提取考察如下：

1、桂枝挥发油提取考察：称取3份桂枝饮片各200g，加8倍量水，水蒸气蒸馏法提取挥发油，每隔1小时记录挥发油体积，观察出油情况。

出油情况：淡黄色轻油，分层较慢，伴有白色乳状液蒸出。平均出油率为0.79%。挥发油提取6小时后不再增加，表明基本提取完全。

2、香附挥发油提取考察：取香附饮片适量，粗碎成3-5mm颗粒及3mm以下颗粒。分别称取香附饮片、3-5mm颗粒及3mm以下颗粒200g，各平行三份，加8倍量水，水蒸气蒸馏法提取挥发油，每隔1小时记录挥发油体积，观察出油情况。

出油情况：棕黄色轻油，容易分层。饮片直接提油出油率较低，平均出油率为0.34%；3-5mm颗粒和3mm以下颗粒出油率相差不大，平均出油率为0.54%，因此香附粗碎成约5mm以下颗粒提油为宜。不同粒度香附挥发油提取7小时后不再增加，表明基本提取完全。

3、醋没药挥发油提取考察：称取3份醋没药各200g，加8倍量水，水蒸气蒸馏法提取挥发油，每隔1小时记录挥发油体积，观察出油现象。

出油情况：浅绿色轻油，容易分层。平均出油率为1.35%。挥发油提取7小时后不再增加，表明基本提取完全。

为了说明本发明药物组合物的功效，用实施例制备的样品委托北京中医药大学进行了功能性试验。

试验例

1、 资料与方法

1.1 一般资料

为了鉴定本发明药物组合物的功效，对实施例1压片前颗粒和实施例2装胶囊前的颗粒作为供试样品，以及相同药材超出权利要求保护范围的1个对比例制备的压片前颗粒作为样品，委托北京中医药大学卫生分析检测中心进行功效评价实验。

本发明药物组合物片临床主治类风湿关节炎，本实验通过建立佐剂诱导的大鼠关节模型（adjuvant arthritis，AA）及II型胶原诱导的大鼠关节模型（collagen inducedarthritis，CIA）进行了本发明药物组合物片的疗效学研究。AA是接近人类类风湿性关节炎的一种比较理想的关节炎模型，主要由细胞免疫介导，其症状与病理表现与人类类风湿关节炎相似，但其发病机制并不一致。II型胶原诱导性关节炎动物模型发病机制更接近人类RA。因此，本试验选用以上两种模型进行研究，AA模型中主要研究本发明药物组合物预防给药的药效评价。CIA模型中同时进行了预防及治疗给药的药效评价，并在治疗给药中对本发明药物组合物的疗效机制进行了初步的研究，为本品临床治疗类风湿关节提供实验依据。研究结果根据《新药审批办法》、《中药新药研究指南》及《药品注册管理办法》对资料进行总结。

试验一本发明药物组合物对佐剂诱导的大鼠关节炎的防治作用

在试验一中，采用SD大鼠制备佐剂诱导大鼠关节炎，主要通过观察免疫足趾的对侧足趾容积变化及关节组织学变化评价本发明药物组合物对此模型的防治作用。

实验材料

1、动物：SD大鼠，雌雄兼用，体重为180-200g，购于北京维通利华实验动物技术有限公司。许可证编号SCXK（京）2006-0009。

2、药物与试剂：

（1）受试药物：本发明药物组合物为石家庄以岭药业股份有限公司提供，成人用量为17g生药/天。本发明药物组合物1、2，对比药物组为黄棕色颗粒，每克相当于3.5g生药。本发明药物组合物用0.5%羧甲基纤维素钠配制为所需浓度使用。

（2）阳性对照药：地塞米松片，天津力生制药股份有限公司，批号20090105。规格0.75mg/片。口服，成人开始剂量为一次0.75~3.00mg（1~4片），一日2~4次。维持量约一日0.75mg（1片），视病情而定。

（3）不完全弗氏佐剂（IFA）为sigma产品，批号62K8928。

（4）卡介苗为购于中国药品生物制品检定所，批号20110130。

（5）PRMI1640培养基：GIBCO产品，批号1024455。1640培养液使用前加青霉素100u/ml、链霉素100u/ml、谷氨酰胺2mM，完全1640培养液再加10%灭活胎牛血清。

（6）ConA（批号71K7024）、MTT（批号66H5033）均为Sigma产品。

（7）十二烷基磺酸钠（SDS）：Serva产品，批号20760。

（8）N-N-二甲基甲酰胺（DMF）：Amresco产品。

3、仪器：

（1）YLS-7B足趾容积测量仪为淮北正华生物仪器有限公司产品。

（2）CalaxyS型CO2培养箱，RSBiotech公司。

（3）SCR20BA冷冻离心机，日本日立公司。

（4）生物显微镜，日本Olympus。

（5）DNM型酶标仪，北京普朗新技术有限公司。

（6）樱花推拉式切片机，日本。

方法与结果

（一）本发明药物组合物对佐剂诱导大鼠关节炎足趾容积的影响

1、完全弗氏佐剂（Freund,s Complete adjuvant CFA）的制备：在不完全弗氏佐剂（IFA）加入卡介苗，使之终浓度为10mg/ml，反复抽打成乳剂。

2、大鼠佐剂性关节炎模型（AA）的制备：将上述乳剂以100μl/只注射于每只大鼠左足跖皮下，诱导大鼠佐剂性关节炎。正常对照组不做任何处理。

3、实验动物的分组与给药：SD大鼠随机分为6组。即正常对照组，给等体积溶媒；佐剂关节炎模型组，给等体积溶媒；本发明药物组合物1、本发明药物组合物2、对比药物组，制备模型次日开始灌胃给药，剂量为2.26g/kg，相当于成人日用量的8倍；阳性对照药组，给予地塞米松0.1mg/kg，相当于成人用量的8倍。各组给药容积均为1ml/100g体重。

4、本发明药物组合物对佐剂性关节炎大鼠足趾容积的影响：致炎前用足趾容积测量仪测量每只大鼠的右后足足趾容积，免疫后开始每隔4天测一次该爪的体积，至30天结束。观察各组大鼠足容积的变化。数据分析采用 SPSS10.0软件，所有数据结果均以均数±标准差(

)表示，差异显著性使用单因素方差分析（One-Way ANOVA），组间两两比较采用LSD检验，P<0.05为差异有统计学意义。结果显示免疫后11d开始至实验结束，制备佐剂模型的大鼠对侧爪开始陆续肿胀。足趾容积最大的时间出现在免疫后23d，此后，随着炎症消退，足趾容积逐渐下降。自免疫后15d开始直至实验结束，模型组足趾容积均显著大于正常对照组（p<0.05或p<0.01）。地塞米松组自免疫后15d开始直至实验结束，其足趾容积均显著小于模型对照组（p<0.01）。本发明药物组合物组1在免疫后15d开始能较模型组显著降低大鼠的足趾容积，并持续至30d（p<0.05），本发明药物组合物组2在免疫后15d、19d、27d和30d与模型对照组比较显著减小（p<0.05）。对照药组有抑制足趾肿胀的趋势，但无统计学意义。结果见表1-1和1-2。

（二）本发明药物组合物对佐剂诱导大鼠关节炎大鼠脾T淋巴细胞增殖的影响

1、佐剂性关节炎模型的制备和动物的分组与给药：同试验一（一）。

2、本发明药物组合物对佐剂性关节炎大鼠脾T淋巴细胞增殖的影响：实验结束时，处死各组大鼠，无菌取脾脏，分离成单个细胞，低渗法破坏红细胞，调脾淋巴细胞为5×109/L，加入96孔培养板中，每孔100µl，再加入含ConA（终浓度为5µg/ml）的1640完全培养液，100µl/孔，培养72h。培养结束前4h每孔加入5mg/ml的MTT溶液 20μl，培养结束后，每孔加三联溶解液（20%SDS-45% DMF，HCl调pH为2.0）50μl，室温过夜，待甲瓒颗粒溶解后于570nm波长下比色。数据分析采用 SPSS10.0软件，所有数据结果均以均数±标准差(

)表示，差异显著性使用单因素方差分析（One-Way ANOVA），组间两两比较采用LSD检验，P<0.05为差异有统计学意义。结果显示：佐剂模型组较正常组脾脏T淋巴细胞增殖显著增加（p<0.01）。地塞米松则显著抑制的佐剂模型大鼠脾T淋巴细胞增殖（p<0.01）。本发明药物组合物1、2组也能显著抑制佐剂关节炎模型大鼠脾T淋巴细胞增殖（p<0.01和p<0.05）。见表2。

（三）本发明药物组合物对佐剂关节炎大鼠关节组织病理形态学影响

1、佐剂性关节炎模型的制备和动物的分组与给药：同试验一（一）。

2、本发明药物组合物对佐剂性关节炎大鼠关节组织病理形态学影响：大鼠AA模型于造模后第30天断头处死取右侧踝关节，福尔马林固定，石蜡包埋切片，HE染色方法。结果可见：正常组大鼠关节囊结缔组织的基质呈胶体状态，主要为胶原纤维，鲜见小血管，有少量巨噬细胞、浆细胞、肥大细胞和淋巴细胞。关节滑膜组织可见1-2层滑膜细胞，滑膜下可见有成熟的滑膜组织，并可见少许小血管，滑膜细胞排列整齐，呈扁平状，关节面光滑，关节腔内无渗出物。正常组大鼠关节骨骼肌细胞呈条状或块状，肌细胞之间的结缔组织较少，结缔组织间偶见成纤维细胞和巨噬细胞。模型组大鼠关节关节囊结缔组织的有巨噬细胞、浆细胞、肥大细胞，炎性细胞成群存在，占据很大部分组织空间。模型组的滑膜组织明显增厚，滑膜细胞明显增殖，细胞层明显增多，细胞肿胀，并可见大量淋巴细胞、浆细胞、巨噬细胞及少量多型核白细胞浸润，纤维组织增生，小血管显著增多，滑膜层黏附到软骨上，软骨变性，关节腔内可见纤维性渗出，并有滑膜侵入软骨，造成软骨和骨的破坏，多表现为增生性炎症。骨骼肌细胞肌细胞之间的结缔组织较少，而肌束间较多，束间结缔组织间偶见成纤维细胞和巨噬细胞，但多有炎性细胞成群存在，为渗出性炎症。地塞米松组大鼠关节囊结缔组织基质中有少量炎性细胞散在；骨骼肌细胞间结缔组织较少，未见明显的成纤维细胞和巨噬细胞，为正常组织形态；滑膜组织内的正常滑膜细胞约为1-3层，排列整齐，细胞形态规则，未见炎性细胞侵润和血管翳形成。本发明药物组合物组1关节囊结缔组织基本正常，少见炎性细胞，肌细胞间结缔组织较少，关节两侧软骨组织表面平滑，滑膜细胞约为1-3层，与正常组相似，有少量炎性细胞侵润。本发明药物组合物组2关节囊结缔组织中有炎性细胞散在，有小血管，巨噬细胞、浆细胞、肥大细胞等鲜见；骨骼肌细胞之间的结缔组织较少，而肌束间较多，结缔组织间偶见成纤维细胞和巨噬细胞；关节软骨组织表面附有少量纤维组织，细胞间质中含有大量成束排列的胶原纤维。对照药物组大鼠关节囊结缔组织中有巨噬细胞、浆细胞、肥大细胞，炎性细胞成群存在，占据部分组织空间；骨骼肌细胞之间的结缔组织较少，结缔组织间偶见成纤维细胞和巨噬细胞；关节软骨组织部分区域较薄，染色较深且与骨细胞间质连接处界限不清，滑膜细胞增生，软骨间有纤维组织。

小结

（1）佐剂性关节炎大鼠造模后11d开始对侧爪开始陆续肿胀直至实验结束，足趾容积最大的时间出现在免疫后23d，此后，随着炎症消退，足趾容积逐渐下降。自造模后15d开始直至实验结束，模型组足趾容积均显著大于正常对照组（p<0.05或p<0.01）。佐剂模型组较正常组脾脏T淋巴细胞增殖显著增加（p<0.01），表明模型大鼠T细胞免疫增强。组织学显示佐剂性关节炎大鼠关节囊结缔组织有大量炎性细胞，关节滑膜细胞明显增殖，并可见大量淋巴细胞、浆细胞、巨噬细胞及少量多型核白细胞浸润，纤维组织增生，小血管显著增多。

（2）阳性对照药地塞米松组自免疫后15d开始直至实验结束，其足趾容积均显著小于模型对照组（p<0.01）；并能则显著抑制的佐剂模型大鼠脾T淋巴细胞增殖（p<0.01）。组织学显示关节囊结缔组织有少量炎性细胞散在，滑膜细胞约为1-3层，排列整齐，细胞形态规则，未见明显炎性细胞浸润。

（3）本发明药物组合物组1在免疫后15d开始能较模型组显著降低大鼠的足趾容积，并持续至30d（p<0.05），本发明药物组合物组2在免疫后15d、19d、27d和30d与模型对照组比较显著减小（p<0.05）。本发明药物组合物1、2组也能显著抑制佐剂关节炎模型大鼠脾T淋巴细胞增殖（p<0.01和p<0.05）。组织学显示：本发明药物组合物1、2关节囊结缔组织基本正常，有少量炎性细胞，关节软骨组织表面基本正常或轻度损伤，有少量炎性细胞侵润及纤维组织。

试验二本发明药物组合物预防给药对II型胶原诱导大鼠关节炎的作用

在试验二中，采用SD大鼠制备II型胶原诱导大鼠关节炎模型，主要通过观察免疫关节炎指数、右侧足趾容积变化及关节组织学变化评价本发明药物组合物对此模型的防治作用。

实验材料

1、动物：SD大鼠，雌雄兼用，体重为180-200g，购于北京维通利华实验动物技术有限公司。许可证编号SCXK（京）2006-0009。

2、药物与试剂：

（1）受试药物：本发明药物组合物为石家庄以岭药业股份有限公司提供，成人用量为17g/生药/天。本发明药物组合物1、2，对比药物组为黄棕色颗粒，每克相当于3.5g生药。批号：110301。本发明药物组合物用0.5%羧甲基纤维素钠配制为所需浓度使用。

（2）阳性对照药：地塞米松片， 天津力生制药股份有限公司，批号20090105。规格0.75mg/片。

（3）不完全弗氏佐剂（IFA）（批号62K8928）及酸溶性II型胶原（collagen II，3806）（批号130435）均为sigma产品。

（4）卡介苗为购于中国药品生物制品检定所，批号20110130。

3、仪器：

（1）YLS-7B足趾容积测量仪为淮北正华生物仪器有限公司产品。

（2）樱花推拉式切片机，日本。

方法与结果

（一）本发明药物组合物对II型胶原诱导大鼠关节炎模型关节指数的影响

1、完全弗氏佐剂（Freund,s Complete adjuvant CFA）的制备：在不完全弗氏佐剂（IFA）加入卡介苗，使之终浓度为7.5mg/ml，反复抽打成乳化剂。

2、大鼠胶原关节炎模型的制备：将牛II型胶原溶于0.1M的冰醋酸中，4℃过夜。然后与CFA研磨均匀，制成含II型胶原为2mg/ml的乳剂，将上述乳剂以150μl/只左足及尾根部皮下多点注入模型组及各给药组免疫大鼠（每只大鼠相当于注射150μg的II型胶原），于第10天每只大鼠尾根部注射同种乳剂150μl加强免疫。正常对照组不做任何处理。

3、实验动物的分组与给药：SD大鼠随机分为6组。即正常对照组，给等体积溶媒；胶原关节炎模型组，给等体积溶媒；本发明药物组合物1、本发明药物组合物2、对比药物组，制备模型次日开始灌胃给药，剂量为2.26g/kg，相当于成人日用量的8倍；阳性对照药组，给予地塞米松0.1mg/kg，相当于成人用量的8倍。各组给药容积均为1ml/100g体重。

4、本发明药物组合物对胶原关节炎大鼠关节炎指数的影响：从致炎后第14天开始对每只大鼠采用关节评分法进行评分。耳：结节和发红症状（无0分，有1分）；鼻：红、肿胀（无0分，有1分）；尾：结节（无0分，有1分）；前爪：至少一个关节的炎症（无0分，有1分）；右后爪：肿胀（无0分，轻度1分，中度2分，重度3分）。每组大鼠的平均得分为关节炎指数。数据分析采用 SPSS10.0软件，所有数据结果均以均数±标准差(

)表示，差异显著性使用单因素方差分析（One-Way ANOVA），组间两两比较采用LSD检验，P<0.05为差异有统计学意义。结果显示，首次免疫后约14天开始II型胶原模型大鼠及各给药组大鼠开始出现耳红肿和关节红肿，后足趾关节出现红肿后蔓延到前足和尾部，并日趋严重。有些鼠尾部出现明显的结节。至第35天左右达高峰，随后关节肿胀稍有减轻，持续至第50天。关节炎指数显示，II型胶原模型组自14d开始至50d实验结束均与正常对照组比较均有显著性差异，表明模型制备成功。本发明药物组合物各给药组免疫开始至31d与模型组比较均无显著性差异，从31d开始至43d，本发明药物组合物组1的关节炎指数较模型组显著减轻（p<0.05和p<0.01）；本发明药物组合物组2从35d开始至43d较模型组显著减轻（p<0.05）。表明本发明药物组合物1、2能抑制II型胶原免疫所致的大鼠后期出现的炎症高峰，但随着模型组炎症逐渐消退，本发明药物组合物给药组与模型组之间则无显著性差异。地塞米松组自免疫后18d开始直至实验结束，其关节炎指数均显著低于模型组（p<0.01）。结果见表3-1和3-2。

（二）本发明药物组合物对II型胶原诱导大鼠关节炎模型足趾容积的影响

1、胶原诱导大鼠关节炎模型的制备和动物的分组与给药：同试验二（一）。

2、本发明药物组合物对胶原诱导的关节炎大鼠的足趾容积的影响：致炎前用足趾容积测量仪测量每只大鼠的右后足足趾容积，首次免疫后第11天开始每隔4天测一次该爪的体积，至50天结束。观察各组大鼠足容积的变化。数据分析采用 SPSS10.0软件，所有数据结果均以均数±标准差(

)表示，差异显著性使用单因素方差分析（One-Way ANOVA），组间两两比较采用LSD检验，P<0.05为差异有统计学意义。结果显示首次免疫11d至14d，各组足容积无明显差异（数据未显示）。首次免疫后18d开始至实验结束，胶原关节炎模型组大鼠的足趾容积均显著高于对照组大鼠，表明模型大鼠出现足趾的炎症反应，足趾容积最大的时间出现在免疫后35-39d，此后，随着炎症消退，足趾容积逐渐下降。地塞米松组自首次免疫后18d开始直至实验结束，其足趾容积均显著小于胶原关节炎模型组（p<0.01），因长期使用地塞米松，该组大鼠体重有所减轻，以至于足趾容积甚至小于正常对照组大鼠。本发明药物组合物组1在免疫后22d开始较模型组显著降低大鼠的足趾容积，并持续至43d（p<0.05），本发明药物组合物组2在免疫后26d开始能较模型组显著降低大鼠的足趾容积，并持续至39d（p<0.05），但随着模型组炎症的消退，本发明药物组合物1和2的抑制足趾肿胀的作用与模型组比较则无显著性差异。对比药物组抑制足趾肿胀的作用并不明显。结果见表4-1和4-2。

（三）本发明药物组合物对II型胶原诱导大鼠关节炎模型关节组织病理的影响

1、胶原诱导大鼠关节炎模型的制备和动物的分组与给药：同试验二（一）。

2、本发明药物组合物对胶原诱导的关节炎大鼠的关节组织病理形态学影响：各实验组大鼠模型于造模后第50天断头处死取右侧踝关节，福尔马林固定，石蜡包埋切片，HE染色方法。结果可见：正常组结缔组织有少量巨噬细胞、浆细胞、肥大细胞和淋巴细胞，肌细胞之间的结缔组织较少，关节软骨可见1-2层滑膜细胞，关节面光滑，关节腔内无渗出物。胶原模型组关节结缔组织及肌肉组织可见炎性细胞浸润，关节软骨可见滑膜组织中中性粒细胞、单核细胞，尤其是淋巴细胞浸润、血管增多，血管内膜变形增生，管腔变窄或阻塞，并伴有血管翳形成，滑膜细胞下纤维素大量渗出，胶原纤维沉积。地塞米松组关节结缔组织及肌肉组织基本正常，关节软骨滑膜细胞略有增生，炎性细胞浸润不明显。本发明药物组合,1、2组关节结缔组织有少量炎性细胞浸润，肌肉组织基本正常，关节腔中滑膜细胞轻度增生，可见炎性细胞浸润及少量纤维增生，血管轻度增生。对比药物组关节结缔组织及肌肉组织有较多的炎性细胞浸润，关节滑膜细胞增生并伴有炎性细胞浸润。本发明药物组合物1、2组对胶原关节炎的组织损伤有较好的改善作用。

小结

（1）胶原诱导的关节炎模型大鼠的关节炎指数于首次免疫后第14天左右开始显著高于正常对照组、足趾容积自首次免疫后第18天左右开始显著高于正常对照组，其显著性差异一直维持至实验结束（p<0.01）。模型组的关节炎指数和足趾容积约在首次免疫后的第35至39日左右达到高峰，此后随着炎症消退，其关节炎指数和足趾容积有所下降。病理观察显示：模型大鼠结缔组织及肌肉组织炎性细胞浸润，关节滑膜组织增生及炎性细胞浸润、血管增多并伴有血管翳形成，滑膜细胞下纤维素大量渗出，胶原纤维沉积。说明造模成功。

（2）阳性对照药地塞米松自首次免疫的第18日开始既能显著抑制关节炎指数和降低足趾容积，其抑制作用一直维持至实验结束。与模型组比较均有显著性差异（p<0.01）。病理观察显示：地塞米松组关节结缔组织及肌肉组织基本正常，关节软骨滑膜细胞略有增生，炎性细胞浸润不明显。

（3）本发明药物组合物组1在首次免疫后的31d开始至43d、本发明药物组合物组2在首次免疫后的35d开始至43d均显著降低了关节炎大鼠的关节炎指数（p<0.05和p<0.01），本发明药物组合物组1在首次免疫后22d开始能较模型组显著降低大鼠的足趾容积，并持续至43d（p<0.05），本发明药物组合物组2在首次免疫后26d开始能较模型组显著降低大鼠的足趾容积，并持续至39d（p<0.05）。此后，随着模型的炎症逐渐减轻，对照药物组与模型组之间则无显著性差异。病理结果显示：本发明药物组合物1、2组关节结缔组织有少量炎性细胞浸润，肌肉组织基本正常，关节腔中滑膜细胞轻度增生，可见炎性细胞浸润及少量纤维增生，血管轻度增生。

试验三本发明药物组合物治疗给药对II型胶原诱导大鼠关节炎的影响及机制

在试验三中，采用纯系Lewis大鼠制备II型胶原诱导大鼠关节炎。通过观察关节炎指数及右足趾容积变换评价本发明药物组合物对此模型的治疗作用，通过观察对其治疗机制进行初步的研究。

实验材料

1、动物：Lewis大鼠，雄性，体重为170-190g，购于北京维通利华实验动物技术有限公司。动物合格证号：许可证编号SCXK（京）2006-0009。

2、药物与试剂：

（1）受试药物：本发明药物组合物为石家庄以岭药业股份有限公司提供，成人用量为17g/生药/天。本发明药物组合物1、2，对比药物组为黄棕色颗粒，每克相当于3.5g生药。批号：110301。本发明药物组合物用0.5%羧甲基纤维素钠配制为所需浓度使用。

（2）阳性对照药：地塞米松片，天津力生制药股份有限公司，批号20090105。规格0.75mg/片。

（3）不完全弗氏佐剂（IFA）为sigma产品，批号62K8928。

（4） 酸溶性II型胶原（collagen II，3806）（批号130435）及MTT（66H5033）为Sigma产品。

（5）卡介苗为购于中国药品生物制品检定所，批号20100130。

（6）PRMI1640培养基：GIBCO产品，批号1024455。1640培养液使用前加青霉素100u/ml、链霉素100u/ml、谷氨酰胺2mM，完全1640培养液再加10%灭活胎牛血清。

（7）十二烷基磺酸钠（SDS）：Serva产品，批号20760。

（8）N-N-二甲基甲酰胺（DMF）：Amresco产品。

（9）大鼠IL-1细胞因子ELISA试剂盒（批号1209145）、TNF-α细胞因子ELISA试剂盒（批号1210132）和IL-10细胞因子ELISA试剂盒（批号1210162）购于北京邦定泰克生物技术有限公司。

（10）辣根酶（HRP）标记的羊抗大鼠IgG抗体（批号20111002）和羊抗大鼠IgM（批号20111015）购于北京博雅翔达生物科技有限公司。

3、仪器：

（1）YLS-7B足趾容积测量仪为淮北正华生物仪器有限公司产品。

（2）CalaxyS型CO2培养箱，RSBiotech公司。

（3）SCR20BA冷冻离心机，日本日立公司。

（4）生物显微镜，日本Olympus。

（5）DNM型酶标仪，北京普朗新技术有限公司。

方法与结果

（一）本发明药物组合物治疗给药对胶原诱导大鼠关节炎模型关节指数的影响

1、大鼠II型胶原诱导的关节炎模型的制备：同试验二（一）。

2、实验动物的分组与给药：Lewis大鼠随机分为6组，即正常对照组，给等体积溶媒；胶原诱导关节炎模型组，给等体积溶媒；制备模型后第14日开始灌胃给予本发明药物组合物1、2及对照药物组，剂量为2.26g/kg相当于成人日用量的8倍；阳性对照药地塞米松组，给予地塞米松0.1mg/kg，相当于成人用量的8倍。各组给药容积均为1ml/100g体重。

3、本发明药物组合物对胶原关节炎大鼠关节炎指数的影响：从致炎后第14天开始对每只大鼠采用关节评分法进行评分。耳：结节和发红症状（无0分，有1分）；鼻：红、肿胀（无0分，有1分）；尾：结节（无0分，有1分）；前爪：至少一个关节的炎症（无0分，有1分）；右后爪：肿胀（无0分，轻度1分，中度2分，重度3分）。每组大鼠的平均得分为关节炎指数。数据分析采用 SPSS10.0软件，所有数据结果均以均数±标准差(

)表示，差异显著性使用单因素方差分析（One-Way ANOVA），组间两两比较采用LSD检验，P<0.05为差异有统计学意义。结果显示，II型胶原诱导的关节炎模型大鼠自首次免疫后约14天开始出现关节炎症状，至第35天左右达高峰，随后关节肿胀稍有减轻，并持续至第50天。关节炎指数显示，模型组自14d开始至50d实验结束均与正常对照组比较均有显著性差异，表明模型制备成功。地塞米松自免疫后22d开始直至实验结束，其关节炎指数均显著低于模型组（p<0.05或p<0.01）。本发明药物组合物组1的关节炎指数自35d（给药21d）开始较模型组显著减轻（p<0.05和p<0.01），直至47d。本发明药物组合物组2从39d（给药25d）开始至43d较模型组显著减轻（p<0.05）。对照药物组也有降低趋势，但无显著性差异。表明本发明药物组合物1、2能抑制II型胶原免疫所致的大鼠的后期出现的炎症高峰，但随着模型的炎症逐渐消退，本发明药物组合物1、2组与模型组之间则无显著性差异。结果见表5-1和5-2。

（二）本发明药物组合物对II型胶原诱导大鼠关节炎模型足趾容积的影响

1、胶原诱导大鼠关节炎模型的制备和动物的分组与给药：同试验三（一）。

2、本发明药物组合物对胶原诱导大鼠关节炎模型足趾容积的影响：致炎前用足趾容积测量仪测量每只大鼠的右后足足趾容积，首次免疫后第14天开始每隔4天测一次该爪的体积，至50天结束。观察各组大鼠足容积的变化。数据分析采用 SPSS10.0软件，所有数据结果均以均数±标准差(

)表示，差异显著性使用单因素方差分析（One-Way ANOVA），组间两两比较采用LSD检验，P<0.05为差异有统计学意义。结果显示免疫后14d各组足容积无明显差异（数据未显示）。免疫后18d开始至实验结束，模型组大鼠的足趾容积均显著高于对照组大鼠，表明II型胶原诱导大鼠关节炎模型大鼠出现足趾的炎症反应，足趾容积最大的时间出现在免疫后31-39d，此后，随着炎症消退，足趾容积有所下降。地塞米松自免疫后22d（给药后8d）开始直至实验结束，其足趾容积均显著小于关节炎模型组（p<0.05或p<0.01）。本发明药物组合物组1在免疫后35d（给药后21d）开始能较模型组显著降低大鼠的足趾容积，并持续至47d（p<0.05），本发明药物组合物组2在免疫后39d（给药后25d）开始能较模型组显著降低大鼠的足趾容积，并持续至50d（p<0.05）。对照药物组抑制足趾肿胀的作用并不明显。结果见表6-1和6-2。

（三）本发明药物组合物对胶原诱导关节炎模型II型胶原特异性脾淋巴细胞增殖的影响

1、胶原诱导的关节炎模型的制备和动物的分组与给药：同试验三（一）。

2、本发明药物组合物对胶原诱导大鼠关节炎模型脾淋巴细胞增殖的影响：参考文献实验结束时，处死各组大鼠，无菌取脾脏，分离成单个细胞，低渗法破坏红细胞，调脾淋巴细胞为5×109/L，加入96孔培养板中，每孔100µl，另加入含II型胶原的完全培养液100µl/孔，使II型胶原终浓度为2.5µg/ml，培养72h。培养结束前4h每孔加入5mg/ml的MTT溶液 20µl，培养结束后，每孔加三联溶解液（20%SDS-45% DMF，HCl调pH为2.0）50µl，室温过夜，待甲瓒颗粒溶解后于570nm波长下比色。数据分析采用 SPSS10.0软件，所有数据结果均以均数±标准差(

)表示，差异显著性使用单因素方差分析（One-Way ANOVA），组间两两比较采用LSD检验，P<0.05为差异有统计学意义。结果显示，大鼠脾脏II型胶原刺激的淋巴细胞增殖能力显著高于正常组（p<0.01)，表明模型鼠体内II型胶原特异性淋巴细胞被激活，模型鼠体内存在II型胶原特异性细胞免疫反应。地塞米松则显著抑制了II型胶原诱导的脾淋巴细胞增殖反应（p<0.01）。本发明药物组合,1、2组显著抑制胶原模型大鼠脾脏中针对II型胶原特异性淋巴细胞增殖反应（p<0.05或p<0.01）。

（四）本发明药物组合物对胶原诱导关节炎模型大鼠血清抗II型胶原抗体的影响

1、胶原诱导的关节炎模型的制备和动物的分组与给药：同试验三（一）。

2、本发明药物组合物对胶原诱导大鼠关节炎模型血清中II型胶原抗体的影响：实验结束时，大鼠麻醉后腹主动脉采血，分离血清，采用ELISA方法测定血清中抗II型胶原抗体。血清经加热灭活后用ELISA法检测抗体含量。用2.5µg/ml的II型胶原包被微量96孔板，4℃过夜。用1%BSA封闭，血清经PBS 1:100稀释后加入滴孔，37℃孵育2小时；加入1:8000稀释的辣根酶（HRP）标记的羊抗大鼠IgG抗体，37℃孵育1小时；加入OPD反应底物，30分钟后用2N硫酸中止反应；酶标仪492nm处读取光密度（OD）值。数据分析采用 SPSS10.0软件，所有数据结果均以均数±标准差(

)表示，差异显著性使用单因素方差分析（One-Way ANOVA），组间两两比较采用LSD检验，P<0.05为差异有统计学意义。结果显示，胶原模型组大鼠血清中II型胶原抗体含量显著高于正常组（p<0.01）。地塞米松则显著抑制了胶原模型大鼠中产生II型胶原抗体（p<0.01）。本发明药物组合物1、2以及对照药物组都能显著抑制胶原诱导关节炎大鼠模型血清中II型胶原抗体的产生（p<0.05或p<0.01）。见表8。

（五）本发明药物组合物对胶原诱导关节炎模型大鼠血清中细胞因子的影响

肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-1（IL-1）在类风湿性关节炎的发病和关节损伤中起着重要作用。TNF-α和IL-1可以通过激活内皮细胞、促进炎性因子合成和释放等多种途径参与类风湿的发病和进展。IL-10是重要的抑制性细胞因子，可下调免疫反应而改善关节炎的炎症反应。

1、胶原诱导的关节炎模型的制备和动物的分组与给药：同试验三（一）。

2、本发明药物组合物对胶原诱导的关节炎大鼠血清中细胞因子影响：实验结束时，大鼠麻醉后腹主动脉采血，分离血清，按 ELISA试剂盒说明书操作方法测定血清中细胞因子IL-1、TNF-α和IL-10含量。数据分析采用 SPSS10.0软件，所有数据结果均以均数±标准差(

)表示，差异显著性使用单因素方差分析（One-Way ANOVA），组间两两比较采用LSD检验，P<0.05为差异有统计学意义。结果显示：模型组血清中炎症细胞因子IL-1和TNF-α含量均显著高于正常对照组（p<0.01），地塞米松则显著降低了血清中IL-1和TNF-α含量（p<0.01），本发明药物组合物1、2组也能显著降低血清中IL-1和TNF-α含量（p<0.05）。模型组血清中抑制性细胞因子IL-10则较对照组显著降低（p<0.01），但本发明药物组合物各组及地塞米松对模型大鼠血清中IL-10的降低无明显的改善作用（p>0.05）。见表9。

（六）本发明药物组合物对胶原诱导大鼠关节炎模型血清中IgG和IgM型类风湿因子的影响

类风湿关节炎患者体内产生的类风湿因子（RF）是其多种自身抗体中最常见的一种，是针对IgG Fc段的自身抗体。RF可形成免疫复合物，激活补体并导致血管炎的发生。RF主要有IgG和IgM两类。类风湿病程中首先出现的是IgM类风湿因子，后期则出现IgG类风湿因子。此两类风湿因子的含量与类风湿关节炎的致病过程密切相关。

1、胶原诱导的关节炎模型的制备和动物的分组与给药：同试验三（一）。

2、本发明药物组合物对胶原诱导的关节炎大鼠血清中IgG和IgM类类风湿因子影响：实验结束时，大鼠麻醉后腹主动脉采血，分离血清，将纯化兔IgG溶于PBS液中，63℃热变性20 min，加入0.36 mol/L的Na2SO4盐溶液沉淀，10000r/min离心20 min，弃上清，取沉淀溶于包被液中（20μg/ml），4℃过夜包被聚苯乙烯板。用1%BSA封闭，待测大鼠血清经PBS 1:100稀释后加入滴孔，37℃孵育2小时。再加入1:8000稀释的辣根酶（HRP）标记的羊抗大鼠IgG抗体或羊抗大鼠IgM，37℃孵育1小时；加入OPD反应底物，30分钟后用2N硫酸中止反应；酶标仪492nm处读取光密度（OD）值。数据分析采用 SPSS10.0软件，所有数据结果均以均数±标准差(

)表示，差异显著性使用单因素方差分析（One-Way ANOVA），组间两两比较采用LSD检验，P<0.05为差异有统计学意义。结果显示：胶原诱导的关节炎大鼠血清中IgG和IgM类风湿因子均显著升高，地塞米松则能显著抑制IgG和IgM类风湿因子的生成（p<0.01）。本发明药物组合,1、2组也能显著抑制胶原诱导关节炎模型大鼠血清中IgG和IgM类风湿因子的生成（p<0.05 或p<0.01）。

小结

（1）采用Lewis大鼠建立II型胶原诱导性大鼠关节炎模型发现：模型大鼠自首次免疫后约14天开始出现关节炎症状，并持续至第50天。关节炎指数和足趾容积均显著高于对照组大鼠。模型大鼠II型胶原特异性的脾淋巴细胞增殖显著高于对照组；血清中II型胶原特异性抗体及IgG和IgM类风湿因子、炎症因子IL-1和TNF-α均显著高于对照组（p<0.01），血清中调节性细胞因子IL-10则显著则较对照组显著降低。以上结果表明：II型胶原诱导性大鼠关节模型建立成功，模型大鼠体内有显著地炎症反应及针对II型胶原的特异性免疫反应及炎症反应。

（2）阳性对照药地塞米松自免疫后22d开始直至实验结束，其关节炎指数均显著低于模型组（p<0.05或p<0.01）。自免疫后22d（给药后8d）开始直至实验结束，其足趾容积均显著小于关节炎模型组（p<0.05或p<0.01）。地塞米松也显著抑制了II型胶原诱导的脾淋巴细胞增殖反应（p<0.01）、血清中II型胶原抗体（p<0.01）的生成、血清中炎性细胞因子IL-1和TNF-α（p<0.01）及类风湿因子IgG和IgM的生成（p<0.01），但对调节性细胞因子IL-10则无显著影响。

（3）本发明药物组合物组1的关节炎指数自35d（给药21d）直至47d、本发明药物组合物组2自39d（给药25d）至43d较模型组显著减轻（p<0.05和p<0.01）。本发明药物组合物组1在免疫后35d开始（给药后21d）至47d、本发明药物组合物组1在免疫后39d（给药后25d）至50d较模型组显著降低大鼠的足趾容积（p<0.05）。本发明药物组合物1、2组显著抑制胶原模型大鼠脾脏中针对II型胶原特异性淋巴细胞增殖反应（p<0.05或p<0.01）、血清中II型胶原抗体的产生（p<0.05或p<0.01）、血清中炎症细胞因子IL-1和TNF-α含量（p<0.05）及类风湿因子IgG和IgM的产生（p<0.05 或p<0.01）。但对模型大鼠血清中调节性细胞因子IL-10的降低无明显的改善作用。

结论

类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是一种以累及周围关节为主的多系统炎症性自身免疫病。RA的主要特征是关节炎症反应、滑膜血管新生，进而导致慢性滑膜增生，进一步影响软骨和骨质，导致关节畸形和功能丧失为基本病理改变的疾病。大鼠佐剂性关节炎（adjuvant arthritis，AA），是接近人类类风湿性关节炎的一种比较理想的关节炎模型，基本上可以反映人类的类风湿性关节炎的病理改变，佐剂性关节炎发生的主要机制为结核杆菌致激活T细胞，激活T细胞通过释放细胞因子及活化巨噬细胞等方式参与RA发病。因此AA主要由细胞免疫介导。该模型操作简便、价廉。AA模型在致炎后起病较快，即抗原攻击10天后陆续出现对侧足爪继发性炎症反应，炎症高峰一般出现在20至25天，其后大鼠足爪炎症反应逐渐消退。虽然AA模型的症状与病理表现与人类类风湿关节炎相似，但其发病机制并不一致。II型胶原诱导性关节炎（collagen induced arthritis，CIA）动物模型是目前公认的用于研究RA发病机制和开发治疗RA新药的理想动物模型，该模型由II型胶原（Collagen II，CII）诱导，CII是软骨的主要成分，为类风湿关节炎发病的自身抗原。临床类风湿关节炎病人血清和滑膜液中可查出II型胶原抗体。由于CIA模型发病机制更接近人类RA，因而是近年来研究类风湿性关节炎的首选模型。CIA关节炎在大鼠产生较AA模型缓慢，大约在首次免疫后2-3周后开始产生肿胀的关节，其病理表现为进行性滑膜炎及滑膜增生，炎性细胞浸润，软骨破坏，最终导致关节损伤和僵硬。CIA建立后，大鼠的关节炎症将维持较长时间，在临床、组织学及免疫学改变上均与人RA相似。此外，CIA模型在加强免疫之前，基本未出现明显的病理变化，而加强免疫之后CIA足爪肿胀度、关节炎评分、血清中自身抗体水平均明显升高，提示出现类似临床RA的病理变化。因此我们以此模型进行本发明药物组合物药效学评价时，预防性给药选择在加强免疫之前（首次免疫后次日），治疗性给药选择在加强免疫之后（加强免疫后第4日）。

我们采用以上两种模型研究本发明药物组合物对实验性关节炎的预防与治疗作用，并对其作用机制进行的初步的观察。结果表明本发明药物组合物能显著降低佐剂诱导的关节炎模型大鼠免疫后出现的足趾容积，并能显著抑制模型大鼠脾T淋巴细胞增殖，改善关节病理变化。对II型胶原诱导的关节炎的研究显示，本发明药物组合物预防给药和治疗给药均能显著改善模型大鼠的关节指数及足趾肿胀。此外，本发明药物组合物也能显著改善模型大鼠的关节组织学改变。对其作用机制的研究显示，本发明药物组合物能降低模型大鼠血清中II型胶原抗体及类风湿因子的含量、抑制II型胶原特异性的脾淋巴细胞增殖、抑制血清中炎症细胞因子IL-1和TNF-α的生成。

总上所述，本发明药物组合物对佐剂关节炎和II型胶原诱导的关节炎均有较好的防治作用，其作用机制可能通过抑制过度的淋巴细胞反应、抑制针对II型胶原的特异性免疫反应并减少炎症性细胞因子而实现的。

具体实施方式

实施例1：

原料药配方为：黄芪156g、秦艽156g、防己63g、黑顺片63g、虎杖146g、鸡血藤146g、威灵仙146g、芥子31g、白芍63g、地黄156g、当归63g、醋没药52g、香附52g 、桂枝63g、川牛膝63g

制备方法：

A、取防己粉碎成细粉，60份o-γ射线辐射灭菌，备用；

B、取桂枝、醋没药、香附加6倍量水，水蒸气蒸馏法连续提取挥发油8小时，收集挥发油，蒸馏后的水溶液滤过，另器收集，备用；

C、取秦艽、鸡血藤、当归、芥子、白芍、虎杖，加10倍量70%乙醇，回流提取3次，每次1小时，提取液滤过，减压回收乙醇，浓缩至相对密度为1.15±0.05的清膏，备用；

D、取黄芪、黑顺片、威灵仙、地黄、川牛膝，加11倍量水，煎煮3次，每次1.5小时，煎煮液滤过，减压浓缩至相对密度为1.10±0.05的清膏，再与挥发油蒸馏后水溶液合并，减压浓缩至相对密度为1.15±0.05的清膏，备用；

E、将步骤C、步骤D所得清膏合并，混匀，干燥，粉碎得混合清膏粉；

F、取步骤B所得挥发油进行包合后，包合物备用；

G、将步骤A所得灭菌粉与步骤E所得清膏粉制粒，整粒，加入步骤F所得的包合物，按常规方法压片即得。

实施例2：

原料药配方为：黄芪146g、秦艽139g、防己58g、黑顺片75g、虎杖120g、鸡血藤125g、威灵仙135g、芥子28g、白芍60g、地黄150g、当归70g、醋没药60g、香附60g 、桂枝70g、川牛膝70g。

制备方法：

A、取防己粉碎成细粉，60份o-γ射线辐射灭菌，备用；

B、取桂枝、醋没药、香附加8倍量水，水蒸气蒸馏法连续提取挥发油10小时，收集挥发油，蒸馏后的水溶液滤过，另器收集，备用；

C、取秦艽、鸡血藤、当归、芥子、白芍、虎杖，加10倍量70%乙醇，回流提取3次，每次1小时，提取液滤过，减压回收乙醇，浓缩至相对密度为1.15±0.05的清膏，备用；

D、取黄芪、黑顺片、威灵仙、地黄、川牛膝，加8倍量水，煎煮4次，每次1.5小时，煎煮液滤过，减压浓缩至相对密度为1.10±0.05的清膏，再与挥发油蒸馏后水溶液合并，减压浓缩至相对密度为1.15±0.05的清膏，备用；

E、将步骤C、步骤D所得清膏合并，混匀，干燥，粉碎得混合清膏粉，喷入步骤B所得挥发油，加入步骤A的灭菌粉喷雾制粒，整粒，装胶囊即得。

实施例3：

原料药配方为：黄芪150g、秦艽160g、防己60g 、黑顺片65g 、虎杖120g、鸡血藤130g、威灵仙135g、芥子35g、白芍50g、地黄160g、当归60g、醋没药55g、香附45g、桂枝60g、川牛膝60g。

制备方法：

A、取防己粉碎成细粉，60份o-γ射线辐射灭菌，备用；

B、取桂枝、醋没药、香附加8倍量水，水蒸气蒸馏法连续提取挥发油10小时，收集挥发油，蒸馏后的水溶液滤过，另器收集，备用；

C、取秦艽、鸡血藤、当归、芥子、白芍、虎杖，加10倍量70%乙醇，回流提取3次，每次1小时，提取液滤过，减压回收乙醇，浓缩至相对密度为1.15±0.05的清膏，备用；

D、取黄芪、黑顺片、威灵仙、地黄、川牛膝，加8倍量水，煎煮4次，每次1.5小时，煎煮液滤过，减压浓缩至相对密度为1.10±0.05的清膏，再与挥发油蒸馏后水溶液合并，减压浓缩至相对密度为1.15±0.05的清膏，备用；

E、将步骤C、步骤D所得清膏合并，混匀，干燥，粉碎得混合清膏粉，喷入步骤B所得挥发油，加入步骤A的灭菌粉喷雾制粒，整粒，即得颗粒剂。

实施例4：

原料药配方为：黄芪120g、秦艽190g 、黑顺片45g、 附子80g 、虎杖110g、鸡血藤180g、威灵仙110g、芥子40g、白芍45g 、地黄190g、当归45g、醋没药65g、香附40g、桂枝80g、川牛膝45g。

制备方法：

A、取防己粉碎成细粉，60份o-γ射线辐射灭菌，备用；

B、取桂枝、醋没药、香附加8倍量水，水蒸气蒸馏法连续提取挥发油10小时，收集挥发油，蒸馏后的水溶液滤过，另器收集，备用；

C、取秦艽、鸡血藤、当归、芥子、白芍、虎杖，加10倍量70%乙醇，回流提取3次，每次1小时，提取液滤过，减压回收乙醇，浓缩至相对密度为1.15±0.05的清膏，备用；

D、取黄芪、黑顺片、威灵仙、地黄、川牛膝，加8倍量水，煎煮4次，每次1.5小时，煎煮液滤过，减压浓缩至相对密度为1.10±0.05的清膏，再与挥发油蒸馏后水溶液合并，减压浓缩至相对密度为1.15±0.05的清膏，备用；

E、将步骤C、步骤D所得清膏合并，混匀，干燥，粉碎得混合清膏粉，加入步骤A所得细粉，喷入步骤B所得挥发油，按常规方法制成丸剂即得。

实施例5：

黄芪190g 、秦艽120g 、防己80g、黑顺片 45g 、虎杖180g 、 鸡血藤110g、威灵仙180g、芥子20g、白芍80g、地黄120g、当归80g、醋没药40g、香附65g、桂枝45g、川牛膝80g。

制备方法：

A、取防己粉碎成细粉，60份o-γ射线辐射灭菌，备用；

B、取桂枝、醋没药、香附加8倍量水，水蒸气蒸馏法连续提取挥发油10小时，收集挥发油，蒸馏后的水溶液滤过，另器收集，备用；

C、取秦艽、鸡血藤、当归、芥子、白芍、虎杖，加10倍量70%乙醇，回流提取3次，每次1小时，提取液滤过，减压回收乙醇，浓缩至相对密度为1.15±0.05的清膏，备用；

D、取黄芪、黑顺片、威灵仙、地黄、川牛膝，加8倍量水，煎煮4次，每次1.5小时，煎煮液滤过，减压浓缩至相对密度为1.10±0.05的清膏，再与挥发油蒸馏后水溶液合并，减压浓缩至相对密度为1.15±0.05的清膏，备用；

E、将步骤C、步骤D所得清膏合并，混匀，干燥，粉碎得混合清膏粉，喷入步骤B所得挥发油，加入步骤A的灭菌粉喷雾制粒，整粒，即得颗粒剂。

对比例1：

原料药配方为：黄芪220g、秦艽220g、防己95g、附子85g、虎杖192g、鸡血藤80g、威灵仙90g、芥子60g、白芍50g、地黄100g、当归100g、没药35g、香附80g、桂枝35g、牛膝90g

制备方法：

A、取防己粉碎成细粉，60份o-γ射线辐射灭菌，备用；

B、取桂枝、没药、香附加6倍量水，水蒸气蒸馏法连续提取挥发油8小时，收集挥发油，蒸馏后的水溶液滤过，另器收集，备用；

C、取秦艽、鸡血藤、当归、芥子、白芍、虎杖，加10倍量70%乙醇，回流提取3次，每次1小时，提取液滤过，减压回收乙醇，浓缩至相对密度为1.15±0.05的清膏，备用；

D、取黄芪、附子、威灵仙、地黄、牛膝，加11倍量水，煎煮3次，每次1.5小时，煎煮液滤过，减压浓缩至相对密度为1.10±0.05的清膏，再与挥发油蒸馏后水溶液合并，减压浓缩至相对密度为1.15±0.05的清膏，备用；

E、将步骤C、步骤D所得清膏合并，混匀，干燥，粉碎得混合清膏粉；

F、取步骤B所得挥发油进行包合后，包合物备用；

份、将步骤A所得灭菌粉与步骤E所得清膏粉制粒，整粒，加入步骤F所得的包合物，按常规方法压片即得。

Claims (16)

1.一种治疗风湿性关节炎的组合物，其特征在于该组合物包括如下重量份的组分：黄芪120-190份 、秦艽120-190份 、防己45-80份、附子 45-80份 、虎杖110-180份 、 鸡血藤110-180份、威灵仙110-180份、芥子20-40份、白芍45-80份、地黄120-190份、当归45-80份、没药40-65份、香附40-65份 、桂枝45-80份、牛膝45-80份。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于该组合物包括如下重量份的组分：黄芪120份、秦艽190份 、防己45份、 附子80份 、虎杖110份、鸡血藤180份、威灵仙110份、芥子40份、白芍45份 、地黄190份、当归45份、没药65份、香附40份、桂枝80份、牛膝45份。

3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于该组合物包括如下重量份的组分：黄芪150份、秦艽160份、防己60份 、附子65份 、虎杖120份、鸡血藤130份、威灵仙135份、芥子35份、白芍50份、地黄160份、当归60份、没药55份、香附45份、桂枝60份、牛膝60份。

4.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于该组合物包括如下重量份的组分：黄芪146份、秦艽139份、防己58份、附子75份、虎杖120份、鸡血藤125份、威灵仙135份、芥子28份、白芍60份、地黄150份、当归70份、没药60份、香附60份 、桂枝70份、牛膝70份。

5.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于该组合物包括如下重量份的组分：黄芪156份、秦艽156份、防己63份、附子63份、虎杖146份、鸡血藤146份、威灵仙146份、芥子31份、白芍63份、地黄156份、当归63份、没药52份、香附52份 、桂枝63份、牛膝63份。

6.根据权利要求1-5任一所述的组合物，其特征在于该组合物的组分中，附子优选为黑顺片，没药优选为醋没药，牛膝优选为川牛膝。

7.根据权利要求1-5任一所述的组合物，其特征在于该组合物的制剂剂型为胶囊剂、片剂、丸剂、口服液、颗粒剂或散剂。

8.根据权利要求1-5任一所述的组合物，其特征在于该组合物的活性组分是由以下步骤制成：

A、取防己粉碎成细粉，60份o-γ射线辐射灭菌，备用；

B、取桂枝、没药、香附加5-8倍量水，水蒸气蒸馏法连续提取挥发油5-10小时，收集挥发油，蒸馏后的水溶液滤过，另器收集，备用；

C、取秦艽、鸡血藤、当归、芥子、白芍、虎杖，加8-12倍量50-80%乙醇，回流提取1-3次，每次1小时，提取液滤过，减压回收乙醇，浓缩至相对密度为1.15±0.05的清膏，备用；

D、取黄芪、附子、威灵仙、地黄、牛膝，加8-12倍量水，煎煮2-5次，每次1.5小时，煎煮液滤过，减压浓缩至相对密度为1.10±0.05的清膏，再与挥发油蒸馏后水溶液合并，减压浓缩至相对密度为1.15±0.05的清膏，备用；

E、将步骤C、D清膏合并，混匀，干燥，粉碎得混合清膏粉；

步骤A所得的细粉，步骤B所得的挥发油，步骤E所得的清膏粉共同构成了本发明药物组合物的活性组分。

9.根据权利要求7所述的组合物，其特征在于胶囊剂的制备工艺为：

A、取防己粉碎成细粉，60份o-γ射线辐射灭菌，备用；

B、取桂枝、没药、香附加8倍量水，水蒸气蒸馏法连续提取挥发油10小时，收集挥发油，蒸馏后的水溶液滤过，另器收集，备用；

C、取秦艽、鸡血藤、当归、芥子、白芍、虎杖，加10倍量70%乙醇，回流提取3次，每次1小时，提取液滤过，减压回收乙醇，浓缩至相对密度为1.15±0.05的清膏，备用；

D、取黄芪、附子、威灵仙、地黄、牛膝，加8倍量水，煎煮4次，每次1.5小时，煎煮液滤过，减压浓缩至相对密度为1.10±0.05的清膏，再与挥发油蒸馏后水溶液合并，减压浓缩至相对密度为1.15±0.05的清膏，备用；

E、将步骤C、步骤D所得清膏合并，混匀，干燥，粉碎得混合清膏粉，喷入步骤B所得挥发油，加入步骤A的灭菌粉喷雾制粒，整粒，装胶囊即得。

10.根据权利要求7所述的组合物，其特征在于片剂的制备工艺为：

A、取防己粉碎成细粉，60份o-γ射线辐射灭菌，备用；

B、取桂枝、没药、香附加6倍量水，水蒸气蒸馏法连续提取挥发油8小时，收集挥发油，蒸馏后的水溶液滤过，另器收集，备用；

C、取秦艽、鸡血藤、当归、芥子、白芍、虎杖，加10倍量70%乙醇，回流提取3次，每次1小时，提取液滤过，减压回收乙醇，浓缩至相对密度为1.15±0.05的清膏，备用；

D、取黄芪、附子、威灵仙、地黄、牛膝，加11倍量水，煎煮3次，每次1.5小时，煎煮液滤过，减压浓缩至相对密度为1.10±0.05的清膏，再与挥发油蒸馏后水溶液合并，减压浓缩至相对密度为1.15±0.05的清膏，备用；

E、将步骤C、步骤D所得清膏合并，混匀，干燥，粉碎得混合清膏粉；

F、取步骤B所得挥发油进行包合后，包合物备用；

份、将步骤A所得灭菌粉与步骤E所得清膏粉制粒，整粒，加入步骤F所得的包合物，按常规方法压片即得。

11.根据权利要求9所述的组合物，其特征在于步骤F中包合的工艺为：取挥发油6-10倍量的环糊精，加入环糊精6-10倍量的水，进行研磨后，加入挥发油与90-95%乙醇等体积的混合物，继续研磨均匀后，干燥即得。

12.根据权利要求1-5任一所述的组合物，其特征在于本药物组合物在制备抗炎药物中的应用。

13.根据权利要求1-5任一所述的组合物，其特征在于本药物组合物在制备抑制毛细血管通透性增高的药物中的应用。

14.根据权利要求1-5任一所述的组合物，其特征在于本药物组合物在制备镇痛药物中的应用。

15.根据权利要求1-5任一所述的组合物，其特征在于本药物组合物在制备抑制脾淋巴细胞增殖及血清II型胶原抗体的产生，降低炎症细胞因子IL-1、TNF-α含量，抑制类风湿因子IgG和IgM的产生的药物中的应用。

16.根据权利要求1-5任一所述的组合物，其特征在于所述类风湿性关节炎优选为佐剂关节炎或II型胶原诱导的关节炎。