CN1159832A - 核酸片段及由其衍生的产物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及为植物酰基转移酶编码的DNA序列以及将这些序列用于改变脂质中脂肪酸谱。

Description

核酸片段及由其衍生的产物
本发明涉及为植物酰基转移酶编码的DNA序列以及这种序列在改变脂质的脂肪酸谱(fatty acid spectrum)中的应用。
油和脂肪(三酰甘油)广泛用于食品和石油工业领域中，然而对其质量(即脂肪酸谱)提出了不同的要求。在化学领域中，需要脂肪酸谱尽可能相同的三酰甘油，即所有三个甘油部位应尽可能地被相同的脂肪酸酯化。视使用目的的不同，所需的脂肪酸(如月桂酸、油酸、蓖麻油酸或芥酸)是完全不同的。
使用这种纯原料时，产生的副产物较少，结果大大减少了提纯和加工的成本，因此提高了投资收益比。只要能获得质量高而稳定且足量的油，就可开发从经济学观点来看目前还不能实现的新的销路和应用可能性。
为了使植物油的质量满足化学工业的需求，一般有如下方法：一种方法是从，其野生植物中开发新的人工培植植物(如某些Cuphea或旱金莲属)，其种子油具有均匀的脂肪酸谱；另一种方法是用经典的培植法或用定向基因工程法使现有培植植物(如油菜、向日葵、或大豆)的脂肪酸谱标准化(Vereinheitlichen)。因为驯化野生植物需花费大量的时间，而且一般需要改变许多不同的特性，所以世界上大部分的研究都集中在对现有植物的改良上。目前已知通过转移有义或反义取向中的基因，可以明显改变油菜籽油中的脂肪酸谱。另外，用经典培植或基因工程方法已成功地使各种种子油的油酸的脂肪酸谱标准化。
当然至今还没有对工业上感兴趣的、链长为18个碳原子以上或明显少于18个碳原子的其它脂肪酸的脂肪酸谱的实现标准化。下文中将上述的脂肪酸称为非常规脂肪酸，如芥酸(顺-13-二十二烯酸，22∶1)或月桂酸(十二烷酸，12∶0)。油中脂肪酸的分析数据以及合成油时的酶分析结果表明，油中脂肪酸的含量不仅受参与合成脂肪酸的酶活性限制，而且还受催化脂肪酸与油化合的酶活性限制。特别重要的是1-酰基甘油-3-磷酸-酰基转移酶，这种酶能催化脂肪酸结合到油的中间甘油位置。这种酶存在于人工培植的植物(如油茶、大豆或玉米)的成熟种子或果实中。这种酶对不饱和C18-脂肪酸具有非常独特的特异性和选择性，但它对非常规脂肪酸没有活性，特别是当sn-1-位已被这种脂肪酸酯化时。因此，  1-酰基甘油-3-磷酸-酰基转移酶的这种特性，使它成为非常规脂肪酸同时占据所有三个甘油位置的决定性障碍。
这可能是虽然有精耕细作的培植计划而且天然的油菜籽油中也富含很长链的脂肪酸(与其它Brassicaceen一样)，但仍不能明显地将油菜籽油的脂肪酸混合物中的芥酸含量提高到60％以上的原因。因此，很久以来在用于油类化学工业上以前，必须先花很大的代价提纯芥酸。这样就明显限制了芥酸在塑料工业上的应用可能性及其销路。1993年德国市场上富含芥酸的油菜籽油(芥酸含量≥45％)的销售量约为28000吨。人们预料，只要能提供芥酸含量约为90％的油菜籽油，它的销售量可增加10倍。
用基因工程方法，如通过用编码具有所需性质的1-酰基甘油-3-磷酸-酰基转移酶的基因构建物进行转化，可以使人工培植的植物油(如油菜籽油)中的所有三个甘油位置都能被芥酸以及其它非常规脂肪酸均一地占据。这种基因存在于某些的野生植物中，并种子特异性地表达。这些基因编码将非常规脂肪酸转移到中间甘油位置上的酰基转移酶，特别是当sn-1-位已被这种脂肪酸酯化时。为对长链酰基特异的1-酰基甘油-3-磷酸-酰基转移酶编码的、种子特异性表达的基因存在于池花属中，所述的基因适于使芥酸之类的脂肪酸谱标准化。
为1-酰基甘油-3-磷酸-酰基转移酶编码的基因已从大肠杆菌和鼠伤寒沙门氏菌中分离得到，其氨基酸序列94％相同(表1)。另外已描述了从酵母和玉米中分离得到的cDNA，所述cDNA与一个大肠杆菌突变体互补，该突变体1-酰基甘油-3-磷酸-酰基转移酶有缺陷。这些cDNA编码多肽，它们的序列之间以及与细菌酰基转移酶的氨基酸序列间有高达30％相同(表1)。当然还没有这种cDNA编码1-酰基甘油-3-磷酸-酰基转移酶的确切证据。
本发明的一个任务是提供一种核酸片段，通过它在植物体系中的表达可以改变植物的油和脂肪的质量，从而提高和扩大所述油和脂肪作为油类化学原料的适用性和应用范围。这个任务可用权利要求1所述的核酸片段解决，图1显示这种核酸片段的序列。
因此还发明了一种控制脂质的脂肪酸组成的方法。制备为1-酰基甘油-3-磷酸-酰基转移酶(AGPAT)编码的核酸片段以产生嵌合基因。这种嵌合基因可用于转化植物或微生物，并由此改变脂肪酸的组成和甘油脂(特别是三酰基甘油脂)中脂肪酸分布。
本发明涉及一种分离的核酸片段，这种核酸片段含有为植物的AGPAT或类似酶编码的DNA序列，所述酶的氨基酸序列与比从池花属道格拉氏草中分离得到的和图2中表示的序列相比，具有至少35％或更高的同源性。另外，所述分离的核酸片段的特征还在于，它已从属于双子叶植物纲类的植物中分离得到，它已从如下一组植物中分离得到：池花属、油菜属和拟南芥属。
一方面令人惊奇的是，就所衍生的氨基酸序列而言，用这种方法从植物中获得的核酸片段相对于已知的、仅从植物(即源自玉米)中获得的其它序列的相似性，并不明显高于与另外三个从细菌和酶母获得的已知序列的相似性，相反其与酵母的相似性甚至稍大于与玉米的相似性(参见表2)。
另一方面令人惊奇的是，用这种方法可以获得来源于植物(即真核生物)并为参与贮存脂质合成和对很长链脂肪酸(即碳原子数超过18的脂肪酸)特异的AGPAT编码的cNDA克隆，因为用于互补步骤的突变体是一种细菌(亦即一种原核生物)，而且在膜生物合成中有缺陷。
从池花属道格拉氏草(limnanthes donglasii)中分离得到的核酸片段(图1)的特征在于，所述基因不仅是种子特异性表达的，而且为对很长链酰基有特异性的AGPAT编码。下文中将这种酶称为L-AGPAT。
所述分离的核酸片段的特征还在于，用它可以提高转基因植物油中的三芥酸酯的含量，并因此提高所述油的工业适用性。三芥酸酯的科学名称为三芥酰基甘油酯。
本发明还涉及核酸片段在分离为其它植物酰基转移酶编码的基因或cDNA中的应用，例如将该核酸片段或其部分用作杂交探针、将来源于该核酸片段序列的低聚核苷酸用于聚合酶链反应(PCR)和采用于针对所述核酸片段或其衍生物所编码的多肽的抗体。
本发明也涉及含有所述分离核酸片段或其部分的所有质粒、病毒和其它介质、以及所有生物(特别是含有这种构建物的植物或植物部分)、由上述转基因生物所产生的所有产物。所述产物的物质组成在上述序列或其部分的作用下已被改变。特别感兴趣的是能够在宿主细胞(特别是植物细胞)中进行植物酰基转移酶的转录、或转录和翻译(表达)的质粒(嵌合基因)。这种嵌合基因包括为植物AGPAT或类似酶编码的核酸片段和合适的控制序列，所述酶的氨基酸序列与图2中表示的序列的同源性至少为35％或更高，所述的控制序列在功能上与该核酸片段相连，并且本身可按有义或反义方式进行插入。权利要求书也要求保护含有这种嵌合基因的微生物、细胞培养物、植物和植物部分、以及由其获得的、在这种嵌合基因的作用下已特异性地改变了物质组成的产物，特别是三酰甘油。
本发明也涉及生产很长链脂肪酸(特别是芥酸)含量和分布已改变了的脂质的方法。这种方法包括如下步骤：
(a)用上述的嵌合基因转化细胞，
(b)分离步骤(a)中所述的转基因细胞系(克隆)，
(c)从步骤(b)中选择脂质具有所需脂肪酸谱的细胞系，
(d)加工步骤(c)中得到的细胞，从而获得具有所需脂肪酸谱的脂质。
优选的细胞选自大肠杆菌、酿酒酵母、植物细胞。用这种方法获得的细胞系及其产物也是本发明的主题。
本发明也涉及脂肪酸谱中很长链脂肪酸(特别是芥酸)的含量和分布改变了的植物油和脂肪的生产方法。本发明中特别感兴趣的是三芥酸酯含量改变了的植物油和脂肪的生产方法。
这种包括如下步骤：
(a)用上述的嵌合基因转化植物细胞，
(b)由步骤(a)中所述细胞培育出能繁殖的植物，
(c)从步骤(b)中选择种子油具有所需脂肪酸谱的后代种子，
(d)加工步骤(c)中获得的种子，得到具有所需脂肪酸谱的油。
油类植物(如油菜、向日葵或亚麻)的植物细胞是优选的。转化植物细胞的优选方法是使用土壤杆菌属的Ti和Ri质粒的间接DNA转化、直接DNA转化、电穿孔或DNA轰击式转化。
本发明也涉及用这种方法获得的转基因植物和植物部分，以及用压榨和/或萃取方法从转基因植物和植物部分中得到的脂肪酸谱已改变了的油和脂肪。
本发明也包括培育植物的方法，以便得到质量已改变了的油料果实中的油和脂肪。
该方法包括如下步骤：
(a)将上述的转基因植物与不同的其它品种进行杂交，
(b)将用限制性内切核酸酶酶解的(a)中基因组与为所要求保护的AGPAT编码的标记核酸片段进行Southern印迹杂交，
本发明也涉及所有用本方法获得的植物及其后代、部分和产品(特别是三酰甘油)，只要它们的物质组成在插入核酸片段的作用下发生了改变。
最后，本发明包括一种分离为AGPAT和相关酶编码的其它核酸片段的方法。
该方法包括如下步骤：
将图2中的序列与其它酰基转移酶的氨基酸序列进行比较；
鉴别保守区(a)；和
按照依该序列而异的方案，制备区域特异性低聚核苷酸有义探针，以产生上述核酸片段
用该方法制得的核酸片段及其部分、所有含上述核酸片段或其部分的嵌合基因、所有含上述核酸片段的转基因微生物、细胞系和转基因植物及其部分、以及所有由这些转基因物质产生的且其物质组成在插入核酸片段的作用下改变了的产物，都是本发明的一部分。
附图和表用于解释本发明的目的，它们表示：
图1.是核酸片段pCH21的DNA序列，它是从池花属道格拉氏草的发育胚芽的cDNA表达库中分离得到的。该序列的长度为1020碱基对(bp)，再加上一个19bp的多聚A(poly A)序列，其GC含量为41.9％，而且包括由位置1-852的开放阅读框。起始和终止密码子的位置在10-12以及853-855处。
图2.是单字符表示的氨基酸序列，所述的序列衍生自核酸片段pCH21的DNA序列，并为分子量为27.5kDa的L-AGPAT编码。
图3.是核酸片段pCH21的5’-区域与另一个从池花属道格拉氏草的发育胚芽的cDNA表达库中分离得到的核酸片段pCH149的5’-区域的序列比较。标出了位于同一阅读框上游的起始密码子(***)和终止密码子(+++)。
图4.是将大肠杆菌(第1行)和鼠伤寒沙门氏菌(第2行)的AGPAT氨基酸序列以及从酵母(第3行)和玉米(第4行)的cDNA衍生得到的氨基酸序列与图2中表示的氨基酸序列进行比较。在所有序列中，“*”表示相同的氨基酸，“·”表示相似的氨基酸。这种比较可借助于CLUSTAL程序(Higgins & Sharp 1988，“基因”(Gene)73，237-244)进行。
图5.用Northern印迹杂交分析法得到的种子特异性表达的证据。将来自池花属道格拉氏草的叶子(第1道：1μg；第3道：6.3μg)和成熟种子(第2道：1μg；第4和5道：3μg)的、用电泳法分离得到的mRNA进行杂交。其中将图1中表示的核酸片段pCH21的核苷酸10至核苷酸741间的区域标记为放射性样本。
表1：比较已知AGPAT的氨基酸同源性。ECO表示大肠杆菌，SAL表示鼠伤寒沙门氏菌，SAC表示酿酒酵母，ZEA表示玉米。所列的数据用BESTFIT程序(Devereux et al.184，“核酸研究”(Nuc.Acids Res.)12，387-394)测得。
表2：比较已知AGPAT的氨基酸同源性。所用缩写的含义与表1相同，LIM表示池花属道格拉氏草。
以下参照实施例对本发明进行说明。
如果没有另作说明，所有分子生物学方法，如DNA(质粒)分离、琼脂糖凝胶电泳、凝胶洗脱、酚抽提、DNA-填平、连接、转化、克隆、多聚酶链式反应(PCR)以及其它技术按照Sambrook等(分子克隆，CSH Laboratory Press 1989)所著的标准程序进行。
实施例A：用异源互补法分离为L-AGPAT编码的cDNA
1.由池花属道格拉氏草中抽提带polyA的RNA：
为了抽提带polyA的RNA，取4克池花属道格拉氏草胚芽(约10天大)，放在液氮下研碎，然后加入30ml抽提缓冲液(100mM NaCl，50mM Tris pH9.0，10mM EDTA，2％(重量/体积)SDS，200μg/ml蛋白酶K)混合。经37℃孵化10分钟后，分别用等体积的苯酚/氯仿(1∶1)萃取两次，用氯仿萃取一次。6000×g离心使其分相。加入1/5体积的10M LiCl2和在冰上孵化1小时后，6500xg和4℃离心30分钟，然后将上清液与0.2g低聚-dT-纤维素(Boehringer)混合。该纤维素分别用洗涤缓冲液1(400mM NaCl，10mM Tris pH7.5，0.2％(重量/体积SDS)和洗涤缓冲液2(100mM NaCl，10mM Tris pH7.5)洗三次，mRNA用洗脱缓冲液(10mMTris pH7.5)进行洗脱。按上述方法将洗脱后的mRNA用低聚-dT-纤维素上进行第二次纯化。产量为20μg RNA/4g初重。
2.建立池花属道格拉氏草的cDNA-表达基因库：
为了分离为1-酰基甘油-3-磷酸-酰基转移酶编码的cDNA，在噬菌体载体λ-ZAP(Stratagene)中建立池花属道格拉氏草的cDNA-表达基因库。为此使用2μg第一点中所述的从池花属道格拉氏草成熟胚芽中分离得到的mRNA。按照生产商的说明建立基因库。主基因库含有3.7×106独立克隆/500μl。按照制造商的说明将主基因库中的1×106个克隆(＝135μl)扩增。扩增后的基因库含有2×1013克隆/200ml。从中取出1μl(＝108克隆)转移到体积为3ml的噬菌粒中。用5μl噬菌粒悬浮液(＝1.66×105克隆)转化细菌细胞，并从中分离出产生的质粒-DNA。该称为质粒-cDNA-表达库的制剂的DNA浓度为1μg/μl。
3.异源互补
从大量不同的包含基因文库中其他基因的克隆群中分离含AGPAT cDNA的克隆，是一个麻烦的问题。为此，采取相应的异源互补的方法。诱变异源互补基于酶有缺陷的突变体，(其相应cDNA是要寻找的)。采用的突变体一般是有条件的。因此如果条件许可，细胞的生长发育是可能的，而条件不许可时，细胞生长不能发生。如果整个基因文库都通过金属轰击法转入该突变体，并在非许可条件下选择转化细胞，那么某些情况下转化细胞可成话。这在少数情况下开始发育成长：即当引入的cDNA编码AGPAT时，仍能按相对于表达启动子的正确取向及正确的异源阅读框内进行克隆；细菌中来源于异源生物体的异源蛋白是足够稳定的，且在环境条件具有酶活性。据文献记载，在某些情况下已成功地进行这类异源互补。
在本发明使用突变的JC201。这种突变型在温度敏感的AGPAT中有一个缺陷型。30℃时细胞可以生长，31℃以上温度不能生长，体内AGPAT活性消失，在突变细胞中累积1-酰基甘油-3-磷酸酯。这种突变型细胞是根据Inone，H.，Nojima，H.，Okayama，H.等(1990)：大肠杆菌的质粒高效转化，Gene 96，23-86中所述的方法转化成能吸收质粒DNA的感受态。异源互补时，每次用100mg池花属道格拉氏草的质粒-cDNA文库中的质粒DNA转化200ml感受态的突变细胞(Cohen，S.N.，chang，A.C.Y.，Hsu，L等(1972)“细菌中非染色体抗生素抗性：用R-因子DNA遗传转化大肠杆菌”，Proc.Natl.Acad.Sci.69，2110-2114)以及在选择的条件下在含100μg/ml氨苄青霉素的37℃ LB-培养基上培养。这样可分离得到300个能在37℃时生长的克隆，从这些克隆中分离质粒DNA。这种DNA逐个地转化为感受的JC201。检测转化细胞在非许可温度37℃时的生长能力。这就是130个克隆时的情况。将此130个克隆的DNA再转化一次感受态的JC201，并选择一次。此步骤的结果表明仍存在27个克隆可以自我复制，在37℃时生长。继续重复操作，阳性克隆数降为9个。这个数字在进一步的三轮选择中不变。
4.对阳性克隆的cDNA进行分析：
从阳性克隆中提取质粒DNA并进行限制性图谱分析以更精确地定性。根据限制性酶切图的相似性，将克隆(pCH21，pCH147，pCH148，pCH149，pCH170和pCH186)的质粒DNA归为一类，其cDNA长约1kb左右，并从两侧进行测序。结果表明，cDNA存在着核苷酸顺序的同源性，仅仅在其5’和3’-端区域有不同。
5.pCH21：
pCH21的cDNA插入片段在两条链上进行测序。其核苷酸序列示于图1。所含的cDNA长为1039bp。在与LacZ-启动子相同的方向发现有一个长852bp的开放阅读框，与lacZ’处于同一控制区内，从而构成了融合蛋白。包括终止密码子在内的279位碱基对处于3’-非翻译区和19个核苷酸长度的polyA区域。这个核苷酸序列GC含量为41.9％，是典型的植物cDNA。原核生物mRNA的翻译开始于最远的5’起始密码子(AUG＝cDNA中的ATG)。pCH21顺序首先开始于ATG，从而产生如下顺序：含281个氨基酸，分子量为27.5KDa的潜在多肽。其单字符氨基酸顺序示于图2。
6.阅读框的完善性：
因为cDNA克隆群的产生过程，所以位于5′端的是匹配mRNA的不完全拷贝，其5′端的长度有所不同。这造成了上述的6个cDNA序列(其序列已给出)。人们可以肯定地认为，该cDNA是基因mRNA的拷贝。因为pCH21是不完全的，而且其具有位于10位的第一个起始密码子之前的阅读框，所以便产生了这样的问题：在5′方向是否还存在其他的起始密码子，如果这样的话图2中所示的序列便不代表AGPAT的全序列。然而，在5′端进一步延伸的pCH148和pCH149的序列显示了在所讨论的阅读框中有终止密码子(图3)。因此，该阅读框被局限在5′方向，而且人们可以肯定地认为，该起始密码子代表了pCH21中10位的AGPAT的起始密码子。
实施例B：池花属通格拉氏草的1-酰基甘油-3-磷酸-乙酰基转移酶在大肠杆菌中的功能表达
作为pCH21的cDNA插入片段代表了1-酰基甘油-3-磷酸-乙酰基转移酶(即芥酰辅酶A特异性的酶)的证据，在大肠杆菌中进行功能表达研究并对表达产物进行乙酰基辅酶A特异性的分析。
1.表达质粒pQEL21的构建：
pCH21(图1)的cDNA插入片段通过聚合酶链式反应(PCR)进行扩增。5’-端带有NcoI和BglII的限制性酶切位点的引物A和B被用作寡聚核苷酸引物：。
引物A  5’AAGATCTATTTGAGCGATTTGTGC3’，Tm＝66℃
引物B  5’ACCATGGCCAAAACTAGAACTAGC3’  Tm＝70℃
100μl PCR体系中加入10ng pCH21，引物A和B的浓度为1μM，5单位的Taq-DNA聚合酶(Gibco)和100μM dNTPs，混合缓冲液为25mM TAPS(pH9.3)，2mM MgCl2，50mM KCl，1mM DTT，0.5mg/ml鲑精DNA。PCR反应于热循环仪(Bionetra)中进行，其反应温度与时间如下所述：第一次DNA变性为2分钟，95℃：随后是27个循环：95℃变性DNA20秒，与引物复性为20秒，65℃，DNA延伸为1分钟，72℃。最后是72℃，3分钟以完全扩增所有的DNA分子。对852bp的扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳(Sambrook等人，1989)以去除引物及副产物，借助于QIAEX凝胶洗脱试剂盆(QIAGEN)按制造商品的说明将其从凝胶上洗脱出来和利用SURE克隆试剂盒(Pharmacia)，按制造商的说明书，将其连入用SmaI线性化的去磷酸化的pUC19载体。通过限制性和序列分析来检查通过上述步骤而获得的质粒pUCL21。随后取10μg质粒用NcoI和BglII进行酶解，得到NcoI/BglII段携带cDNA插入片段，而后通过琼脂糖凝胶电泳进行分离并与用NcoI和BglII线性化的pQE60(QIAGEN)载体连接，这样便构建了pQEL21。将pQEL21(即pQE60)载体转化突变型大肠杆菌JC201的感受态细胞，JC201缺少含有携带LacIq抑制因子的质粒pREP4(QIAGEN)。
2.转基因的大肠杆菌-JC201细胞的培养：
大肠杆菌-JC201细胞(含有构建物pQEL21，即载体pQE60和质粒抑制因子)，在含氨苄青霉素(100μg/l)和卡那霉素(25μg/l)的LB培养基上，于30℃培养。过夜培养物以1∶40比例稀释，并在30℃进行培养至OD600为0.6。加异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)至终浓度为2mM以诱导表达pQEL21，细菌经过30℃，3小时的培养后，进行4500xg，10分钟的离心收集菌体。
3.来自于转基因大肠杆菌JC201细胞的膜分离物：
在0-4℃下进行下列步骤：通过沉淀得到的细菌细胞用膜缓冲液(50mMTris/HCl pH8.4，5mM MgCl2，5mM二硫苏糖醇)洗两次，并用同样的缓冲液进行悬浮，悬浮体积约为培养体积的1/40。细胞的破碎过程借助于超声波处理，每次处理30秒，共计4次。通过7500g，10分钟的离心而分离出大的细胞碎片和“包涵体”之后，通过10000g 1小时的离心自从细胞匀浆中沉淀出膜成分，用少许膜缓冲液悬浮并用终浓度为50％(V/V)的甘油于-20℃沉淀。蛋白测定根据Bradford(“分析生物化学”(Anal.Bioche).72，248-254(1987))的方法进行。
4.检测1-酰基甘油-3-磷酸乙酰基转移酶的酶活性：
酶活测定以1-酰基-Sn-[U-14C]甘油-3-磷酸酯与带1，2-二乙酰基-Sn-[U-14C]甘油-3-磷酸酯的乙酰辅酶A之间的酶学转化为基础。这种反应体中含0.1MTris/NaOH pH8.8，4至40μM油酰辅酶A(成芥酰辅酶A)，2.5μM 1-油酰-Sn-[U-14C]甘油-3-磷酸酯(353dpm/pmol)和膜组分(0.2-3.5μg蛋白)，总体积为50μl。30℃温育15分钟后，分析物与240μl含50μg磷酸化物的氯仿∶甲醇(1∶1)溶液混合，然后加入100μl 1M KCl，0.2M H3PO4并混和，经1000g 2分钟离心分相，将90μl的氯仿相转移到硅胶制板上，在氯仿∶吡啶∶蚁酸(50∶30∶7)中展开30分钟。通过向硅胶制板上喷洒磷脂试剂(Dittmer& Lester，J.脂类研究杂志(Lipid Res.)5，126-127(1964)来确定磷脂酸的位置，将其刮到液闪计数管中并加5ml Cocktail(Opti Phase 4HISAFE4，Wallec)。用液闪计数器来确定试样的放射性强度。
从这些值可以计算比活性(pmol生成的1，2-二酰基甘油-3-磷酸酯/分钟/mg膜蛋白)。在用含pQE60的JC201细胞的膜碎片作酶学检测时既不能用油酰辅酶A，也不能用芥酰辅酶A证明1-酰基-Sn-[U-14C]甘油-3-磷酸酯向1，2-双酰基-Sn-[U-14C]甘油-3-磷酸酯的转化。而含pQEL21的JC201细胞膜碎片对这种转化具催化作用并且芥酰辅酶A的特异性酶活力较对油酰辅酶A的高(蛋白对芥酰辅酶A为200pmol/min/mg，蛋白对油酰辅酶A为84pmol/min/mg蛋白)。因此，这些结果表明pCH21的cDNA插入片段编码芥酸辅酶A特异性的1-酰基甘油-3-磷酸-酰基转移酶，同时也编码池花属种子特异性表达的酰基转移酶类。这一结果可由Northern-杂交分析来确证图5〕。这说明，种子中的而不是叶子中的pHCH201之类的基因发生了转录。
                    序列记录(1)一般信息：
(i)申请人：
    (A)姓名：北德汉斯-乔治·兰姆克植物培植两合公司
    (B)街道：Hohenlieth
    (C)城市：霍尔脱希
    (E)国家：德国
    (F)邮编：24363
    (A)姓名：德国利普斯塔脱-布来门播利嫁接有限公司
    (B)街道：Weissenburger Scr 5
    (C)城市：利普斯塔脱
    (E)国家：Deutschland
    (F)邮编：59524
    (A)姓名：KWS活性微生播种培植有限公司
    (B)街道：Grimsehlstr.31
    (C)城市：爱恩贝克
    (E)国家：德国
    (F)邮编：37574
(ii)发明名称：核酸片段及由其衍生的产物
(iii)序列数目：10
(iv)计算机可读形式：
    (A)记录介质类型：软盘
    (B)计算机：IBM PC兼容型
    (C)操作系统：PC-DOS/MS-DOS
    (D)软件：PatentIn Release#1.0，版本#1.30(EPA)(2)SEQ ID NO：1的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：1039碱基对
    (B)类型：核酸
    (C)股性：双链
    (D)拓扑结构：未知
(ii)分子类型：cDNA
(ix)特征：
    (A)名称/分类符号：CDS
    (B)位置：10..852
(xi)序列描述：SEQ ID NO：1：GTTCTATTC ATG GCC AAA ACT AGA ACT AGC TCT CTC CGC AAC AGG AGA           48
      Met Ala Lys Thr Arg Thr Ser Ser Leu Arg Asn Arg Arg
        1               5                  10CAA CTA AAG CCG GCT GTA GCT GCT ACT GCT GAT GAT GAT AAA GAT GGG         96Gln Leu Lys Pro Ala Val Ala Ala Thr Ala Asp Asp Asp Lys Asp Gly
 15                  20              25GTT TTT ATG GTA TTG CTA TCG TGT TTT AAA ATT TTT GTT TGC TTT GCC        144Val Phe Met Val Leu Leu Ser Cys Phe Lys Ile Phe Val Cys Phe Ala30                  35                  40                  45ATA GTG TTG ATC ACC GCG GTG GCA TGG GGA CTA ATC ATG GTC TTG CTC        192Ile Val Leu Ile Thr Ala Val Ala Trp Gly Leu Ile Met Val Leu Leu
             50                  55                  60TTA CCT TGG CCT TAT ATG AGG ATT CGA CTA GGA AAT CTA TAC GGC CAT         240Leu Pro Trp Pro Tyr Met Arg Ile Arg Leu Gly Asn Leu Tyr Gly His
         65                  70                  75ATC ATT GGT GGA TTA GTG ATA TGG ATT TAC GGA ATA CCA ATA AAG ATC         288Ile Ile Gly Gly Leu Val Ile Trp Ile Tyr Gly Ile Pro Ile Lys Ile
     80                  85                  90CAA GGA TCC GAG CAT ACA AAG AAG AGG GCC ATT TAT ATA AGC AAT CAT         336Gln Gly Ser Glu His Thr Lys Lys Arg Ala Ile Tyr Ile Set Asn His
 95                 100                 105GCA TCT CCT ATC GAT GCT TTC TTT GTT ATG TGG TTG GCT CCC ATA GGC         384Ala Ser Pro Ile Asp Ala Phe Phe Val Met Trp Leu Ala Pro Ile Gly110                 115                 120                 125ACA GTT GGT GTT GCA AAG AAA GAG GTT ATA TGG TAT CCG CTG CTT GGA         432Thr Val Gly Val Ala Lys Lys Glu Val Ile Trp Tyr Pro Leu Leu Gly
            130                 135                 140CAA CTA TAT ACA TTA GCC CAT CAT ATT CGC ATA GAT CGG TCA AAC CCG         480Gln Leu Tyr Thr Leu Ala His His Ile Arg Ile Asp Arg Ser Asn Pro
        145                 150                 155GCT GCG GCT ATT CAG TCT ATG AAA GAG GCA GTT CGT GTA ATA ACC GAA         528Ala Ala Ala Ile Gln Set Met Lys Glu Ala Val Arg Val Ile Thr Glu
    160                 165                 170AAG AAT CTC TCT CTG ATT ATG TTT CCA GAG GGA ACC AGG TCG AGA GAT         576Lys Asn Leu Set Leu Ile Met Phe Pro Glu Gly Thr Arg Ser Arg Asp
175                 180                 185GGG CGT TTA CTT CCT TTC AAG AAG GGT TTT GTT CAT CTA GCA CTT CAG         624Gly Arg Leu Leu Pro Phe Lys Lys Gly Phe Val His Leu Ala Leu Gln190                 195                 200                 205TCA CAT CTC CCA ATA GTT CCG ATG ATC CTT ACA GGT ACA CAT TTA GCA         672Ser His Leu Pro Ile Val Pro Met Ile Leu Thr Gly Thr His Leu Ala
            210                 215                 220TGG AGG AAA GGT ACC TTC CGT GTC CGG CCA GTA CCC ATC ACT GTC AAG         720Trp Arg Lys Gly Thr Phe Arg Val Arg Pro Val Pro Ila Thr Val Lys
        225                 230                 235TAC CTT CCT CCT ATA AAC ACT GAT GAT TGG ACT GTT GAC AAA ATC GAC         768Tyr Leu Pro Pro Ile Asn Thr Asp Asp Trp Thr Val Asp Lys Ile Asp
    240                 245                 250GAT TAC GTC AAA ATG ATA CAC GAC GTC TAT GTC CGC AAC CTA CCT GCG         816Asp Tyr Val Lys Met Ile His Asp Val Tyr Val Arg Asn Leu Pro Ala
255                 260                 265TCT CAA AAA CCA CTT GGT AGC ACA AAT CGC TCA AAT TGAGTCCCTC              862Ser Gln Lys Pro Leu Gly Ser Thr Asn Arg Ser Asn270                 275                 280TTTGCTCTAA GGTTAGCAGA ATGGATACGT ACTGTTGTCT TGCTGCATGA AAAGTTTAAT       922CCTTTCTTAT GATATTAGAT TACAGCGTAA GACTTTCATG TTAAAATAGT GTAACAGTGC       982TTCTGGTTTG TAACTTTTAC AATAAAAGTA TGCTTTTGAA AAAAAAAAAA AAAAAAA         1039(2)SEQ ID NO：2的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：281氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：蛋白质
(xi)序列描述：SEQ ID NO：2：Met Ala Lys Thr Arg Thr Ser Ser Leu Arg Asn Arg Arg Gln Leu Lys1               5                  10                  15Pro Ala Val Ala Ala Thr Ala Asp Asp Asp Lys Asp Gly Val Phe Met
         20                  25                  30Val Leu Leu Ser Cys Phe Lys Ile Phe Val Cys Phe Ala Ile Val Leu
     35                  40                  45Ile Thr Ala Val Ala Trp Gly Leu Ile Met Val Leu Leu Leu Pro Trp
 50                  55                  60Pro Tyr Met Arg Ile Arg Leu Gly Asn Leu Tyr Gly His Ile Ile Gly65                  70                  75                  80Gly Leu Val Ile Trp Ile Tyr Gly Ils Pro Ile Lys Ile Gln Gly Ser
             85                  90                  95Glu His Thr Lys Lys Arg Ala Ile Tyr Ile Ser Asn His Ala Ser Pro
        100                 105                 110Ile Asp Ala Phe Phe Val Met Trp Leu Ala Pro Ile Gly Thr Val Gly
    115                 120                 125Val Ala Lys Lys Glu Val Ile Trp Tyr Pro Leu Leu Gly Gln Leu Tyr
130                 135                 140Thr Leu Ala His His Ile Arg Ile Asp Arg Ser Asn Pro Ala Ala Ala145                 150                 155                 160Ile Gln Ser Met Lys Glu Ala Val Arg Val Ile Thr Glu Lys Asn Leu
            165                 170                 175Ser Leu Ile Met Phe Pro Glu Gly Thr Arg Ser Arg Asp Gly Arg Leu
        180                 185                 190Leu Pro Phe Lys Lys Gly Phe Val His Leu Ala Leu Gln Ser His Leu
    195                 200                 205Pro Ile Val Pro Met Ile Leu Thr Gly Thr His Leu Ala Trp Arg Lys
210                 215                 220Gly Thr Phe Arg Val Arg Pro Val Pro Ile Thr Val Lys Tyr Leu Pro225                 230                 235                 240Pro Ile Asn Thr Asp Asp Trp Thr Val Asp Lys Ile Asp Asp Tyr Val
            245                 250                 255Lys Met Ile His Asp Val Tyr Val Arg Asn Leu Pro Ala Ser Gln Lys
        260                 265                 270Pro Leu Gly Ser Thr Asn Arg Ser Asn
    275                 280(2)SEQ ID NO：3的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：255碱基对
    (B)类型：核酸
    (C)股性：双链
    (D)拓扑结构：未知
(ii)分子类型：cDNA
(xi)序列描述：SEQ ID NO：3：GTTCTATTCA TGGCCAAAAC TAGAACTAGC TCTCTCCGCA ACAGGAGACA ACTAAAGCCG       60GCTGTAGCTG CTACTGCTGA TGATGATAAA GATGGGGTTT TTATGGTATT GCTATCGTGT      120TTTAAAATTT TTGTTTGCTT TGCCATAGTG TTGATCACCG CGGTGGCATG GGGACTAATC      180ATGGTCTTGC TCTTACCTTG GCCTTATATG AGGATTCGAC TAGGAAATCT ATACGGCCAT      240ATCATTGGTG GATTA                                                       255(2)SEQ ID NO：4的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：300碱基对
    (B)类型：核酸
    (C)股性：双链
    (D)拓扑结构：未知
(ii)分子类型：cDNA
(xi)序列描述：SEQ ID NO：4：CTAAATCTCT CTTACTGAAT TTTAGGTCAA ACAATCTCAT AGCCGGTTCT ATTCATGGCC        60AAAACTAGAA CTAGCTCTCT CCGCAACAGG AGACAACTAA AGCCGGCTGT AGCTGCTACT       120GCTGATGATG ATAAAGATGG GGTTTTTATG GTATTGCTAT CGTGTTTTAA AATTTTTGTT       180TGCTTTGCCA TAGTGTTGAT CACCGCGGTG GCATGGGGAC TAATCATGGT CTTGCTCTTA       240CCTTGGCCTT ATATGAGGAT TCGACTAGGA AATCTATACG GCCATATCAT TGGTGGATTA       300(2)SEQ ID NO：5的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：146氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (C)股性：未知
    (D)拓扑结构：未知
(ii)分子类型：蛋白质
(xi)序列描述：SEQ ID NO：5：Val Lys Val Gln Leu His Ala Asp Glu Glu Thr Tyr Arg Ser Met Gly1               5                   10                  15Lys Glu His Ala Leu Ile Ile Ser Asn His Arg Ser Asp Ile Asp Trp
        20                  25                  30Leu Ile Gly Trp Ile Leu Ala Gln Arg Ser Gly Cys Leu Gly Ser Thr
    35                  40                  45Leu Ala Val His Lys Lys Ser Ser Lys Phe Leu Pro Val Ile Gly Trp
50                  55                  60Ser His Trp Phe Ala Glu Tyr Leu Phe Leu Glu Arg Ser Trp Ala Lys65                  70                  75                  80Asp Glu Lys Thr Leu Lys Trp Gly Leu Gln Arg Leu Lys Asp Phe Pro
            85                  90                  95Arg Pro Phe Trp Leu Ala Leu Phe Val Glu Gly Thr Arg Phe Thr Pro
        100                 105                 110Ala Lye Leu Leu Ala Ala Gln Glu Tyr Ala Ala Ser Gln Gly Leu Pro
    115                 120                 125Ala Pro Arg Asn Val Leu Ile Pro Arg Thr Lys Gly Phe Val Ser Ala
130                 135                 140Val Ser145(2)SEQ ID NO：6的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：303氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (C)股性：未知
    (D)拓扑结构：未知
(ii)分子类型：蛋白质
(xi)序列描述：SEQ ID NO：6：Met Ser Val Ile Gly Arg Phe Leu Tyr Tyr Leu Arg Ser Val Leu Val1               5                   10                  15Val Leu Ala Leu Ala Gly Cys Gly Phe Tyr Gly Val Ile Ala Ser Ile
        20                  25                  30Leu Cys Thr Leu Ile Gly Lys Gln His Leu Ala Gln Trp Ile Thr Ala
    35                  40                  45Arg Cys Phe Tyr His Val Met Lys Leu Met Leu Gly Leu Asp Val Lys
50                  55                  60Val Val Gly Glu Glu Asn Leu Ala Lys Lys Pro Tyr Ile Met Ile Ala65                  70                  75                  80Asn His Gln Ser Thr Leu Asp Ile Phe Met Leu Gly Arg Ile Phe Pro
            85                  90                  95Pro Gly Cys Thr Val Thr Ala Lys Lys Ser Leu Lys Tyr Val Pro Phe
        100                 105                 110Leu Gly Trp Phe Met Ala Leu Ser Gly Thr Tyr Phe Leu Asp Arg Ser
    115                 120                 125Lys Arg Gln Glu Ala Ile Asp Thr Leu Asn Lys Gly Leu Glu Asn Val
130                 135                 140Lys Lys Asn Lys Arg Ala Leu Trp Val Phe Pro Glu Gly Thr Arg Ser145                 150                 155                 160Tyr Thr Ser Glu Leu Thr Met Leu Pro Phe Lys Lys Gly Ala Phe His
            165                 170                 175Leu Ala Gln Gln Gly Lys Ile Pro Ile Val Pro Val Val Val Ser Asn
        180                 185                 190Thr Ser Thr Leu Val Ser Pro Lys Tyr Gly Val Phe Asn Arg Gly Cys
    195                 200                 205Met Ile Val Arg Ile Leu Lys Pro Ile Ser Thr Glu Asn Leu Thr Lys
210                 215                 220Asp Lys Ile Gly Glu Phe Ala Glu Lys Val Arg Asp Gln Met Val Asp225                 230                 235                 240Thr Leu Lys Glu Ile Gly Tyr Ser Pro Ala Ile Asn Asp Thr Thr Leu
            245                 250                 255Pro Pro Gln Ala Ile Glu Tyr Ala Ala Leu Gln His Asp Lys Lys Val
        260                 265                 270Asn Lys Lys Ile Lys Asn Glu Pro Val Pro Ser Val Ser Ile Ser Asn
    275                 280                 285Asp Val Asn Thr His Asn Glu Gly Ser Ser Val Lys Lys Met His
290                 295                 300(2)SEQ ID NO：7的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：245氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (C)股性：未知
    (D)拓扑结构：未知
(ii)分子类型：蛋白质
(xi)序列描述：SEQ ID NO：7：Met Leu Tyr Ile Phe Arg Leu Ile Ile Thr Val Ile Tyr Ser Ile Leu1               5                   10                  15Val Cys Val Phe Gly Ser Ile Tyr Cys Leu Phe Ser Pro Arg Asn Pro
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    35                  40                  45Phe Gly Leu Lys Val Glu Cys Arg Lys Pro Thr Asp Ala Glu Ser Tyr
50                  55                  60Gly Asn Ala Ile Tyr Ile Ala Asn His Gln Asn Asn Tyr Asp Met Val65                  70                  75                   80Thr Ala Ser Asn Ile Val Gln Pro Pro Thr Val Thr Val Gly Lys Lys
            85                  90                  95Ser Leu Leu Trp Ile Pro Phe Phe Gly Gln Leu Tyr Trp Leu Thr Gly
        100                 105                 110Asn Leu Leu Ile Asp Arg Asn Asn Arg Thr Lys Ala His Gly Thr Ile
    115                 120                 125Ala Glu Val Val Asn His Phe Lys Lys Arg Arg Ile Ser Ile Trp Met
130                 135                 140Phe Pro Glu Gly Thr Arg Ser Arg Gly Arg Gly Leu Leu Pro Phe Lys145                 150                 155                 160Thr Gly Ala Phe His Ala Ala Ile Ala Ala Gly Val Pro Ile Ile Pro
            165                 170                 175Val Cys Val Ser Thr Thr Ser Asn Lys Ile Asn Leu Asn Arg Leu His
        180                 185                 190Asn Gly Leu Val Ile Val Glu Met Leu Pro Pro Ile Asp Val Ser Gln
    195                 200                 205Tyr Gly Lys Asp Gln Val Arg Glu Leu Ala Ala His Cys Arg Ser Ile
210                 215                 220Met Glu Gln Lys Ile Ala Glu Leu Asp Lys Glu Val Ala Glu Arg Glu225                 230                 235                 240Ala Ala Gly Lys Val
            245(2)SEQ ID NO：8的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：245氨基酸
    (B)类型：氨基酸
    (C)股性：未知
    (D)拓扑结构：未知
(ii)分子类型：蛋白质
(xi)序列描述：SEQ ID NO：8：Met Leu Tyr Ile Phe Arg Leu Ile Val Thr Val Ile Tyr Ser Ile Leu1               5                   10                  15Val Cys Val Phe Gly Ser Ile Tyr Cys Leu Phe Ser Pro Arg Asn Pro
        20                  25                  30Lys His Val Ala Thr Phe Gly His Met Phe Gly Arg Leu Ala Pro Leu
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50                  55                  60Gly Asn Ala Ile Tyr Ile Ala Asn His Gln Asn Asn Tyr Asp Met Val65                  70                  75                  80Thr Ala Ala Asn Ile Val Gln Pro Pro Thr Val Thr Val Gly Lys Lys
            85                  90                  95Ser Leu Leu Trp Ile Pro Phe Phe Gly Gln Leu Tyr Trp Leu Thr Gly
        100                 105                 110Asn Leu Leu Ile Asp Arg Asn Asn Arg Ala Lys Ala His Ser Thr Ile
    115                 120                 125Ala Ala Val Val Asn His Phe Lys Lys Arg Arg Ile Ser Ile Trp Met
130                 135                 140Phe Pro Glu Gly Thr Arg Ser Arg Gly Arg Gly Leu Leu Pro Phe Lys145                 150                 155                 160Thr Gly Ala Phe His Ala Ala Ile Ala Ala Gly Val Pro Ile Ile Pro
            165                 170                 175Val Cys Val Ser Asn Thr Ser Asn Lys Val Asn Leu Asn Arg Leu Asn
        180                 185                 190Asn Gly Leu Val Ile Val Glu Met Leu Pro Pro Val Asp Val Ser Glu
    195                 200                 205Tyr Gly Lys Asp Gln Val Arg Glu Leu Ala Ala His Cys Arg Ala Leu
210                 215                 220Met Glu Gln Lys Ile Ala Glu Leu Asp Lys Glu Val Ala Glu Arg Glu225                 230                 235                 240Ala Thr Gly Lys Val
            245(2)SEQ ID NO：9的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：24碱基对
    (B)类型：核酸
    (C)股性：未知
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：其他核酸
    (A)描述：/描述＝″合成DNA″
(xi)序列描述：SEQ ID NO：9：AAGATCTATT TGAGCGATTT GTGC(2)SEQ ID NO：10的信息：
(i)序列特征：
    (A)长度：24碱基对
    (B)类型：核酸
    (C)股性：未知
    (D)拓扑结构：线性
(ii)分子类型：其他核酸
    (A)描述：/描述＝″合成DNA″
(xi)序列描述：SEQ ID NO：10：ACCATGGCCA AAACTAGAAC TAGC

Claims (34)

1.分离的核酸片段，其特征在于它含有为1-酰基甘油-3-磷酸-酰基转移酶或类似酶编码的核酸序列，所述酶的氨基酸序列与图2中表示的序列至少有35％的同源性。
2.如权利要求1所述的分离核酸片段，其特征在于与图2中表示的序列的同源性至少为40％，较佳为45％，更佳为50％。
3.如权利要求1所述的分离核酸片段，其特征在于与图2中表示的序列的同源性至少为65％，较好至少为90％。
4.如权利要求1所述的分离核酸片段，其特征在于其氨基酸序列是图2中表示的氨基酸序列。
5.如权利要求1-4中任一项所述的分离核酸片段，其特征在于它是从植物中分离得到的。
6.如权利要求1-4中任一项所述的分离核酸片段，其特征在于它是从双子叶植物中分离得到的。
7.如权利要求1-4中任一项所述的分离核酸片段，其特征在于用于分离的原料是合成三酰甘油的组织。
8.如权利要求1-4中任一项所述的分离核酸片段，其特征在于用于分离的原料是成熟的种子。
9.如权利要求1-4中任一项所述的分离核酸片段，其特征在于用于分离的原料是池花属道格拉氏草的成熟种子。
10.如权利要求1-9中任一项所述的分离核酸片段，其特征在于它是种子特异性表达的。
11.质粒、病毒或其它载体，其特征在于它含有如权利要求1-10中任一项所述的分离核酸片段。
12.基因组克隆，其特征在于它含有为如权利要求1-10中任一项所述的序列或序列部分编码的基因或基因部分。
13.嵌合基因，其特征在于，它能改变转化细胞中的脂肪酸组成，含有如权利要求1-10中任一项所述的核酸片段，并以有效方式与合适的控制序列相连接。
14.嵌合基因，其特征在于，它能改变转化细胞中很长链饱和和/或不饱和脂肪酸的含量，含有如权利要求1-10中任一项所述的核酸片段，并以有效方式与合适的控制序列相连接。
15.嵌合基因，其特征在于，它能改变转化细胞中的芥酸含量，含有如权利要求1-10中任一项所述的核酸片段，并以有效方式与合适的控制序列相连接。
16.嵌合基因，其特征在于，它能改变转化细胞的三酰甘油中脂肪酸组成，含有如权利要求1-10中任一项所述的核酸片段，并以有效方式与合适的控制序列相连接。
17.嵌合基因，其特征在于，它能改变转化细胞的三酰甘油中很长链脂肪酸组成，含有如权利要求1-10中任一项所述的核酸片段，并以有效方式与合适的控制序列相连接。
18.嵌合基因，其特征在于，它能改变转化细胞的三酰甘油中芥酸的含量，含有如权利要求1-10中任一项所述的核酸片段，并以有效方式与合适的控制序列相连接。
19.如权利要求13-18中任一项所述的嵌合基因，其特征在于它能合成转化细胞中的三酰甘油，所述的基因含有如权利要求1-10中任一项所述的核酸片段，并以有效方式与合适的控制序列相连接。
20.如权利要求13-19中任一项所述的嵌合基因，其特征在于存在“有义”和/或“反义”取向的构建物。
21.转化细胞、植物或植物部分，其特征在于它含有权利要求13-20中任一项所述的嵌合基因。
22.如权利要求21所述的转化细胞、植物或植物部分，其特征在于它含有自然界中不存在的、或以其它方式或其它浓度存在的1-酰基甘油-3-磷酸-酰基转移酶(AGPAT)。
23.如权利要求21所述的转化细胞、植物或植物部分，其特征在于它含有自然界中不存在的、或以其它浓度或以其他特异性存在的1-酰基甘油-3-磷酸-酰基转移酶活性。
24.如权利要求21所述的转化细胞、植物或植物部分，其特征在于它含有自然界中不存在的、或以其它量存在的且对很长链酰基有特异性的1-酰基甘油-3-磷酸-酰基转移酶。
25.如权利要求21所述的转化细胞、植物或植物部分，其特征在于它含有自然界中不存在的、或以其它量存在的对芥酸特异性的1-酰基甘油-3-磷酸-酰基转移酶。
26.从植物的种子或果实中获得的油，所述的植物含有如权利要求13-20中任一项所述的嵌合基因。
27.从如权利要求21-25中任一项所述的植物中获得的油。
28. 1-酰基甘油-3-磷酸-酰基转移酶的制造方法，它包括：
(a)用权利要求13-20中任一项所述的嵌合基因转化细胞；
(b)选择生产所需数量蛋白的细胞；
(c)优选将所述的蛋白从其它物质中纯化出来。
29.用权利要求28所述方法获得的1-酰基甘油-3-磷酸-酰基转移酶。
30.很长链脂肪酸含量改变了的植物和/或植物油的生产方法，它包括：
(a)用权利要求13-20中任一项所述的嵌合基因转化产油植物的植物细胞；
(b)由(a)中的转化植物细胞培育出可繁殖的植物；
(c)对步骤(b)中的植物后代进行选择，以获得所需的很长链脂肪酸含量；
(d)加工步骤(c)中所得植物的种子，以获得具有所需很长链脂肪酸含量的植物和/或植物油。
31.如权利要求34所述的方法，其特征在于所述的很长链脂肪酸是芥酸。
32.按权利要求30或31所述方法获得的植物和/或植物油。
33.获得为酰基转移酶和与酰基转移酶相似酶编码的核酸片段的方法，其特征在于，它包括：
(a)将图2中表示的氨基酸序列与其它酰基转移酶的氨基酸序列进行比较；
(b)鉴定具有4或更多个相同氨基酸的一个或多个保守序列区域，作为步骤(a)的结果；
(c)通过对步骤(b)中氨基酸序列进行倒译，制备特异性的低聚核苷酸片段；
(d)利用所述的低聚核苷酸，借助于序列依赖性的方案制备为酰基转移酶和与酰基转移酶相似酶编码的核酸。
34.如权利要求33所述的方法，其特征在于所述核酸片段是从植物，尤其是双子叶植物中分离的。
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