CN115976273B - 用于非洲猪瘟病毒基因ⅰ型和ⅱ型鉴别的双重荧光pcr检测试剂盒 - Google Patents
用于非洲猪瘟病毒基因ⅰ型和ⅱ型鉴别的双重荧光pcr检测试剂盒 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了用于非洲猪瘟病毒基因Ⅰ型和Ⅱ型鉴别的双重荧光PCR检测试剂盒，属于非洲猪瘟检测技术领域。该试剂盒含有2×Probe Master Mix，正向引物，反向引物，Ⅰ型探针，Ⅱ型探针，无菌无核酸酶水。使用本发明在提供的试剂盒在一次检测操作后即可鉴别样本中是非洲猪瘟病毒Ⅰ型感染、Ⅱ型感染或两种病毒共同感染，具有灵敏性高、特异性强、重复性好的优点，因此可以为猪场非洲猪瘟防控提供技术支持。
Description
技术领域
本发明属于非洲猪瘟检测技术领域，尤其涉及用于非洲猪瘟病毒基因Ⅰ型和Ⅱ型鉴别的双重荧光PCR检测试剂盒。
背景技术
非洲猪瘟(African swine fever，ASF)是由非洲猪瘟病毒( African swinefever virus，ASFV)引起的猪以呼吸障碍、神经症状和全身出血为主要特征的急性、热性、高度传染性疫病，所有品种和年龄的家猪和野猪均可感染。ASF对养猪业危害巨大，给染疫国家农业生产带来重大的经济损失。世界动物卫生组织 (World Organization forAnimal Health，OIE)将ASF列为必须通报动物疫病，我国将其列为重点防范的一类动物传染病。由于没有有效的疫苗和治疗药物，非洲猪瘟给养猪业带来重大经济损失。
随着非洲猪瘟病毒在国内的传播，科研人员陆续从田间分离到存在不同程度基因缺失且毒力减弱的II型弱毒株。2021年，我国首次报道分离出两株基因Ⅰ型病毒株，与NH/P68和OURT88/3高度相似，属于Ⅰ型弱毒株。与感染II型野毒株不同，感染Ⅰ型弱毒株的猪都没有明显的临床症状和病毒血症，给临床的诊断和疫情的防控带来了极大的困难。因此建立一种快速、准确、灵敏的鉴别非洲猪瘟I型毒株与II型毒株的方法尤为重要。
发明内容
本发明的目的一种高敏感性和高特异性的用于非洲猪瘟病毒鉴别Ⅰ型和Ⅱ型鉴别的双重荧光PCR检测试剂盒。
为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：
第一方面，本发明提供了一种用于区分非洲猪瘟病毒基因Ⅰ型和Ⅱ型的荧光定量PCR引物和探针，其特征在于，所述引物的序列如下：
正向引物：CACGCAGAGATAATCTTTCAGG；
反向引物：GATACCATGAGCAGTTACGGA；
所述探针的序列如下：
Ⅰ型探针：VIC-GTTCATCTATATCGGATATT-MGB；
Ⅱ型探针：FAM-GTTCATCTATATCTGATATT-MGB；
第二方面，本发明提供了用于非洲猪瘟病毒基因Ⅰ型和Ⅱ型鉴别的荧光定量PCR试剂盒，所述试剂盒含有2×Probe Master Mix，正向引物，反向引物，Ⅰ型探针，Ⅱ型探针，无菌无核酸酶水。
优选地，所述正向引物的序列为CACGCAGAGATAATCTTTCAGG；所述反向引物的序列为：GATACCATGAGCAGTTACGGA。
优选地，所述Ⅰ型探针的序列为VIC-GTTCATCTATATCGGATATT-MGB，所述Ⅱ型探针为FAM-GTTCATCTATATCTGATATT-MGB。
优选地，所述PCR试剂盒的反应条件为：95℃预变性3min，95℃变性10s，60℃退火延伸30s，变性与退火延伸过程共40个循环。
优选地，所述PCR试剂盒的反应体系为2×Probe Master Mix 10μL，正向引物0.8μL，反向引物0.8μL，Ⅰ型探针0.8μL，Ⅱ型探针0.2μL，无菌无核酸酶水2.4μL，待测样品DNA 5μL。
本发明的有益效果是：
本发明在一次检测操作后，即可鉴别样本中是非洲猪瘟病毒Ⅰ型感染、Ⅱ型感染或两种病毒共同感染，具有灵敏性高、特异性强、重复性好的优点，为猪场非洲猪瘟防控提供技术支持。
附图说明
图1 非洲猪瘟病毒基因Ⅰ型的敏感性检测结果；
其中，1:2.89E8，2:2.89E7， 3:2.89E6，4:2.89E5，5:2.89E4，6:2.89E3， 7:2.89E2，8:2.89E1，9:2.89E0；图2非洲猪瘟病毒基因Ⅱ型的敏感性检测结果；
其中，1:2.89E8，2:2.89E7， 3:2.89E6，4:2.89E5，5:2.89E4，6:2.89E3， 7:2.89E2，8:2.89E1，9:2.89E0；
图3非洲猪瘟病毒基因Ⅰ型的特异性检测结果；
图4 非洲猪瘟病毒基因Ⅱ型的特异性检测结果。
具体实施方式
所举实施例是为了更好地对本发明进行说明，但并不是本发明的内容仅局限于所举实施例。所以熟悉本领域的技术人员根据上述发明内容对实施方案进行非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。
实施例1
鉴别非洲猪瘟I型毒株与II型毒株的引物和探针
根据非洲猪瘟病毒 (ASFV)B646L基因DNA Star软件序列比对结果，本发明设计出一组特异性引物和探针，详见表1：
表1 引物和探针序列
实施例2
建立鉴别非洲猪瘟I型毒株与II型毒株的PCR检测体系
（1）设计和合成引物和探针
正向引物：CACGCAGAGATAATCTTTCAGG
反向引物：GATACCATGAGCAGTTACGGA
Ⅰ型探针：VIC-GTTCATCTATATCGGATATT-MGB
Ⅱ型探针：FAM-GTTCATCTATATCTGATATT-MGB
（2）制备重组质粒标准品：
合成I型和Ⅱ型靶基因所在片段
Ⅰ型靶基因序列如下：
TACTCACCACGCAGAGATAATCTTTCAGGATAGAGATACAGCTCTTCCAGACGCATGTTCATCTATATCGGATATTAGCCCCGTTACGTATCCGATCACATTACCTATTATTAAAAACATTTCCGTAACTGCTCATGGTATCAATCTTATCGAT,SEQ ID NO.5
Ⅱ型靶基因序列如下：
TACTCTCCACGCAGAGATAATCTTTCAGGATAGAGATACAGCTCTTCCAGACGCATGTTCATCTATATCTGATATTAGCCCCGTTACGTATCCGATCACATTACCTATTATTAAAAACATTTCCGTAACTGCTCATGGTATCAATCTTATCGAT,SEQ ID NO.6；
将合成的片段连接至pUC57载体；
（3）扩增反应体系：2×Probe Master Mix 10μL，正向引物0.8μL，反向引物0.8μL，Ⅰ型探针0.8μL，Ⅱ型探针0.2μL，无菌无核酸酶水2.4μL；
（4）扩增反应条件：取5μl待测样品DNA加入总量为20μl的反应体系中，将配置好反应体系的PCR管于95℃预变性3min，95℃变性10s，60℃退火延伸30s，变性与退火延伸过程共40个循环；
（5）结果检测：通过荧光定量PCR仪自带软件读取相应的Ct值，判定待测样品阳性或阴性；
试验成立条件：
注：阳性对照有明显的指数增长，呈典型的S型曲线；
判定标准：
实施例3
鉴别非洲猪瘟I型毒株与II型毒株的PCR检测试剂盒
（1）该试剂盒包含：2×Probe Master Mix，正向引物，反向引物，Ⅰ型探针，Ⅱ型探针，无菌无核酸酶水；
其中，正向引物：CACGCAGAGATAATCTTTCAGG；
反向引物：GATACCATGAGCAGTTACGGA；
Ⅰ型探针：VIC-GTTCATCTATATCGGATATT-MGB；
Ⅱ型探针：FAM-GTTCATCTATATCTGATATT-MGB；
（2）该试剂盒的反应体系为2×Probe Master Mix 10μL，正向引物0.8μL，反向引物0.8μL，Ⅰ型探针0.8μL，Ⅱ型探针0.2μL，无菌无核酸酶水2.4μL；
（3）该试剂盒的反应条件为取5μl待测样品DNA加入总量为20μl的反应体系中，将配置好反应体系的PCR管于95℃预变性3min，95℃变性10s，60℃退火延伸30s，变性与退火延伸过程共40个循环；
（4）该试剂盒结果的判断标准为：
通过荧光定量PCR仪自带软件读取相应的Ct值，判定待测样品阳性或阴性；
试验成立条件：
注：阳性对照有明显的指数增长，呈典型的S型曲线；
判定标准：
实施例4
敏感性检测
使用优化好的反应条件，将已知浓度的标准品（2.89E8）进行10倍梯度稀释(2.89E8-2.89 copies/μL)，作为模板进行荧光定量PCR，验证敏感性，如图1和图2所示，双重荧光定量PCR对基因I型和基因II型的检测下限均为2.89个拷贝。
实施例5
特异性检测
用核酸提取试剂盒提取猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、轮状病毒（RV）、猪圆环病毒2型（PCV2）和猪伪狂犬病毒（PRV）作为模板进行荧光定量PCR反应，同时设置阴阳性对照。
结果如图3和4所示，只有阳性对照出现了明显的扩增曲线，其它猪源病毒及阴性对照均没有扩增曲线。因此，本发明建立的TaqMan荧光定量PCR检测方法具有良好的特异性。
实施例6
将已知浓度(2.89E6拷贝、2.89E4拷贝、2.89E2拷贝)的质粒作为模板，分别让一名操作人员在同一天重复6次检测，验证方法的组内重复性；分别让两名操作人员在不同时间操作3次，计算组间的重复性。如下表2所示，结果显示该方法的组内和组间重复性好，变异系数在：0.68％～1.97％。
表2荧光定量PCR方法重复性
由表2可知，批间重复的变异系数均小于2％，表明本发明建立的TaqMan荧光定量PCR检测方法具有良好的重复性。
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
Claims (2)
1.一种用于区分非洲猪瘟病毒基因Ⅰ型和Ⅱ型的荧光定量PCR引物和探针，其特征在于，所述引物的序列如下：
正向引物：CACGCAGAGATAATCTTTCAGG；
反向引物：GATACCATGAGCAGTTACGGA；
所述探针的序列如下：
Ⅰ型探针：VIC-GTTCATCTATATCGGATATT-MGB；
Ⅱ型探针：FAM-GTTCATCTATATCTGATATT-MGB。
2.一种用于非洲猪瘟病毒基因Ⅰ型和Ⅱ型鉴别的荧光定量PCR试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有2×Probe Master Mix，正向引物，反向引物，Ⅰ型探针，Ⅱ型探针，无菌无核酸酶水；
所述正向引物的序列为CACGCAGAGATAATCTTTCAGG；所述反向引物的序列为：GATACCATGAGCAGTTACGGA；
所述Ⅰ型探针的序列为VIC-GTTCATCTATATCGGATATT-MGB，所述Ⅱ型探针为FAM-GTTCATCTATATCTGATATT-MGB；
荧光定量PCR的反应条件为：95℃预变性3min，95℃变性10s，60℃退火延伸30s，变性与退火延伸过程共40个循环；
荧光定量PCR的反应体系为：2×Probe Master Mix 10μL，正向引物0.8μL，反向引物0.8μL，Ⅰ型探针0.8μL，Ⅱ型探针0.2μL，无菌无核酸酶水2.4μL，待测样品DNA 5μL。
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Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102206715A (zh) * | 2011-04-22 | 2011-10-05 | 上海市动物疫病预防控制中心 | 一种检测猪圆环病毒2型和分型的试剂盒及方法 |
| CN110438265A (zh) * | 2019-08-13 | 2019-11-12 | 中国动物卫生与流行病学中心 | 一种对非洲猪瘟病毒基因i型和ii型的快速鉴别诊断方法 |
| CN114350848A (zh) * | 2021-11-30 | 2022-04-15 | 福建傲农生物科技集团股份有限公司 | 一种鉴别非洲猪瘟ⅰ型毒株与ⅱ型毒株的双重荧光探针引物组合、试剂盒及其应用 |
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Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102206715A (zh) * | 2011-04-22 | 2011-10-05 | 上海市动物疫病预防控制中心 | 一种检测猪圆环病毒2型和分型的试剂盒及方法 |
| CN110438265A (zh) * | 2019-08-13 | 2019-11-12 | 中国动物卫生与流行病学中心 | 一种对非洲猪瘟病毒基因i型和ii型的快速鉴别诊断方法 |
| CN114350848A (zh) * | 2021-11-30 | 2022-04-15 | 福建傲农生物科技集团股份有限公司 | 一种鉴别非洲猪瘟ⅰ型毒株与ⅱ型毒株的双重荧光探针引物组合、试剂盒及其应用 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Establishment of a Dual Real-Time PCR Assay for the Identification of African Swine Fever Virus Genotypes I and II in China;Qi Gao等;Frontiers in Veterinary Science;第9卷;文献号：882824 * |
| 非洲猪瘟病毒双重荧光PCR检测方法的建立;于新友等;中国兽医科学;第52卷(第06期);第698-703页 * |
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| GR01 | Patent grant | ||
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