CN115948502A - 一种灭活型病毒保存液及其应用 - Google Patents
一种灭活型病毒保存液及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115948502A CN115948502A CN202211708958.7A CN202211708958A CN115948502A CN 115948502 A CN115948502 A CN 115948502A CN 202211708958 A CN202211708958 A CN 202211708958A CN 115948502 A CN115948502 A CN 115948502A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- preservation solution
- virus
- inactivated virus
- present
- virus preservation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims abstract description 49
- 239000003761 preservation solution Substances 0.000 title claims abstract description 44
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 claims abstract description 13
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 claims abstract description 13
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 claims abstract description 13
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 claims abstract description 10
- YQOKLYTXVFAUCW-UHFFFAOYSA-N guanidine;isothiocyanic acid Chemical compound N=C=S.NC(N)=N YQOKLYTXVFAUCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 239000007793 ph indicator Substances 0.000 claims abstract description 8
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 claims abstract description 4
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 claims abstract description 4
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical group C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 claims description 5
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 abstract description 17
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 10
- 238000004321 preservation Methods 0.000 abstract description 8
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 abstract description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 5
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 22
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 22
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 22
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 15
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 13
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 description 10
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 9
- ZJYYHGLJYGJLLN-UHFFFAOYSA-N guanidinium thiocyanate Chemical compound SC#N.NC(N)=N ZJYYHGLJYGJLLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 7
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 4
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 4
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 3
- 150000002357 guanidines Chemical class 0.000 description 3
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 3
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 3
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 3
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000712431 Influenza A virus Species 0.000 description 2
- NIPNSKYNPDTRPC-UHFFFAOYSA-N N-[2-oxo-2-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)ethyl]-2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C(CNC(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)N1CC2=C(CC1)NN=N2 NIPNSKYNPDTRPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 2
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 208000025721 COVID-19 Diseases 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 241001112090 Pseudovirus Species 0.000 description 1
- 241000580858 Simian-Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 1
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 1
- 239000003945 anionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000006177 biological buffer Substances 0.000 description 1
- 238000009924 canning Methods 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000003196 chaotropic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 239000006184 cosolvent Substances 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003398 denaturant Substances 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 1
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 235000011157 hong shi Nutrition 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002563 ionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- -1 salt guanidine thiocyanate Chemical class 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- HFQQZARZPUDIFP-UHFFFAOYSA-M sodium;2-dodecylbenzenesulfonate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCC1=CC=CC=C1S([O-])(=O)=O HFQQZARZPUDIFP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- DAJSVUQLFFJUSX-UHFFFAOYSA-M sodium;dodecane-1-sulfonate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCS([O-])(=O)=O DAJSVUQLFFJUSX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种灭活型病毒保存液及其应用。本发明提供的病毒样本保存液，包括异硫氰酸胍、吐温‑20、三羟甲基氨基甲烷、EDTA、Hanks平衡盐溶液、超纯水以及pH指示剂，通过上述特定组成的组分相互配合，使得本发明提供的病毒样本保存液具有安全、稳定、经济、高效的优点，30秒内即可达到灭活率大于99.99％的效果，灭活效率高，大大缩短了灭活处理的时间，并且解决了当前的病毒保存液容易产生沉淀和气泡的问题。
Description
技术领域
本发明属于生物与医药技术领域，具体涉及到一种灭活型病毒保存液及其应用。
背景技术
病毒是由一种核酸分子与蛋白质构成或仅由蛋白质构成，个体微小、结构简单，常见的流行传染病通常是RNA病毒，如流感病毒、艾滋病毒、甲流病毒以及新冠病毒。由于没有细胞结构，病毒自身不能复制，而是将基因侵入宿主细胞内，借助后者的复制系统复制新的病毒。病毒样本采集后，通常会将采样拭子放入保存液中保存、运输，储存的样本可用于后续的核酸提取或纯化等临床实验。
目前的灭活型病毒保存液一般都需要加入高浓度胍盐、核酸酶抑制剂、离子型表面活性剂和助溶剂，对于胍盐的选择通常为溶解能力和蛋白质变性能力都十分出色的异硫氰酸胍。然而，由于胍盐与阴离子表面活性剂，如十二烷基硫酸钠(SDS)或十二烷基磺酸钠(SDBS)联用时，容易产生沉淀和产生气泡，不利于保存液的罐装、装量精度欠佳，形成的沉淀保存液则会造成材料过多的消耗而增加成本，后续核酸提取实验前对采样管颠倒混匀产生大量气泡也会给使用人员增添不必要的困扰。
并且，市面上的病毒保存液发挥灭活效果都需要10～30分钟不等，有些长达1～2小时。如果保存液中的异硫氰酸胍浓度过低，在样本采集和运输过程中，容易造成灭活效率未达标，发生意外泄露，会给相关采集人员、运输人员、实验人员等造成生物感染风险。但是异硫氰酸胍浓度过高的保存液，异硫氰酸胍容易析出且会影响核酸提取质量，抑制PCR检测。因此，针对以上问题，需要开发一款新型的病毒保存液。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的至少一个不足，提供一种灭活型病毒保存液。
本发明所采取的技术方案是：
第一个方面，本发明提供了一种灭活型病毒保存液，包括以下组分：70～170g/L异硫氰酸胍，6～10mg/L吐温-20，0.7～1.0g/L三羟甲基氨基甲烷，0.1～1.0g/L EDTA，6～12g/LHanks平衡盐溶液，超纯水以及pH指示剂。
在一些实例中，所述的保存液的pH值为8～9。
在一些实例中，所述的异硫氰酸胍的质量浓度为70～120g/L。
在一些实例中，所述的吐温-20的质量浓度为7～9mg/L。
在一些实例中，所述的三羟甲基氨基甲烷的质量浓度为0.7～0.9g/L。
在一些实例中，所述的EDTA的质量浓度为0.1～0.3g/L。
在一些实例中，所述的Hanks平衡盐溶液的质量浓度为8～12g/L。
在一些实例中，所述的pH指示剂为酚红。
在一些实例中，所述的保存液各组分的质量浓度分别为：异硫氰酸胍为80g/L，吐温-20为8mg/L，三羟甲基氨基甲烷为0.8g/L，EDTA为0.2g/L，Hanks平衡盐溶液为10g/L。
上述各技术特征在不冲突的情况下，可以任意结合。
第二个方面，本发明提供的灭活型病毒保存液在保存病毒样本中的应用。
本发明的有益效果是：
(1)本发明能适应多种温度进行存储，实验证明，本发明样本核酸在2～8℃或37℃环境下保存6～7天，未发生明显核酸降解，不影响病毒样本的检测灵敏度。因此，本发明降低了病毒样本采集、运输以及保存对环境温度的依赖，适合野外、流动采样；
(2)本发明加入的异硫氰酸胍能迅速溶解蛋白质，导致其细胞结构破碎，从而抑制RNA的降解；
(3)本发明采用的非离子型表面活性剂吐温-20，解决了目前的病毒保存液在不同的存储温度、高浓度的变性剂存在条件下，容易产生沉淀和气泡的问题；
(4)本发明通过加入的强离子离液盐异硫氰酸胍与金属螯合剂EDTA的作用下，能快速地使病毒蛋白变性，同时在增溶剂吐温-20的作用下，结合的蛋白质能快速均匀分散，不形成沉淀，通过Tris-Base(三羟甲基氨基甲烷)作为生物缓冲剂保持本发明的溶液pH稳定，在以上四种成分的协同作用下，本发明在30秒内即可达到灭活率大于99.99％的效果，灭活效率高，大大缩短了灭活处理的时间，同时该浓度下的异硫氰酸胍和EDTA不会抑制后续PCR实验，不影响试剂盒的最低检出限；
(5)本发明添加了酚红指示剂，若保存液发生了变质等影响pH值的不良事件通过指示剂的颜色便能快速分辨出来，为检测人员提高了效率，易于观察和辨识；
(6)本发明组成材料简单，且为市面上常见采购的物料，进一步地控制了生产成本，提高了生产的可行性，减低了防疫成本。
具体实施方式
本发明提供了一种灭活型病毒保存液，包括以下组分：70～170g/L异硫氰酸胍，6～10mg/L吐温-20，0.7～1.0g/L三羟甲基氨基甲烷，0.1～1.0g/L EDTA，6～12g/L Hanks平衡盐溶液，超纯水以及pH指示剂。
在一些实例中，所述的保存液的pH值为8～9。这一pH值下，保存液具有相对更好的稳定性，也有利于保证核酸的稳定性。
在一些实例中，所述的异硫氰酸胍的质量浓度为70～120g/L。本发明的实验数据表明，在这一浓度下，既具有良好的灭活效果，又可以避免其浓度过高带来的不利影响。
在一些实例中，所述的吐温-20的质量浓度为7～9mg/L。实验数据显示，这一浓度下，具有良好的协同作用。
在一些实例中，所述的三羟甲基氨基甲烷的质量浓度为0.7～0.9g/L。
在一些实例中，所述的EDTA的质量浓度为0.1～0.3g/L。
在一些实例中，所述的Hanks平衡盐溶液的质量浓度为8～12g/L。
pH指示剂可以是周知的指示剂，在一些实例中，所述的pH指示剂为酚红。酚红的指示效果更为明显，更易于观察，同时成本相对较低。
在一些实例中，所述的保存液各组分的质量浓度分别为：异硫氰酸胍为80g/L，吐温-20为8mg/L，三羟甲基氨基甲烷为0.8g/L，EDTA为0.2g/L，Hanks平衡盐溶液为10g/L。
为了对本发明的技术特征，效果更加清楚的展示，下面结合应用对本发明进一步说明。
按照表1进行新型冠状病毒保存液的配置。
表1新型冠状病毒保存液的配置
然后以表1中所述的实施例1和对比例1～3为例，具体阐述本发明的病毒核酸保存能力和灭活效果验证。
实验一：新型冠状病毒保存液核酸保存能力验证
本实验所用的病毒核酸样本为菁良基因2019新型冠状病毒(2019-nCoV)全基因组假病毒冻干珠质控品，靶值为1000copies/颗，该产品覆盖新型冠状病毒核酸全基因组序列(Genbank登记号：MN908947.3)，含人源RNaseP基因序列。核酸检测试剂为硕世生物生产的新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测试剂盒(荧光PCR法)。所述的新冠质控品样本分别加至本发明的新型冠状病毒保存液和对照组(百泰克)的病毒保存液中，混合均匀，分别等量分成36份，一共72份，分别保存于对应的温度；保存时长设置为0天(6小时)、1天、2天、3天、4天、6天、7天；保存温度设置为4℃和37℃；
采用杭州博日科技股份有限公司的全自动核酸提取纯化仪(仪器型号NPA-96T)及MagaBio plus病毒DNA/RNA纯化试剂盒Ⅲ对保存的样本进行提取，按表2进行自动化提取实验。
表2自动化提取实验设置
提取好的样本核酸采用上海宏石医疗科技有限公司荧光定量PCR仪(仪器型号SLAN-96S)及江苏硕世生物科技股份有限公司的新型冠状病毒(2019)核酸检测试剂盒进行荧光定量PCR检测，得到对应的Ct值，具体操作如下：取出试剂盒在室温下融化并震荡混匀后，低速离心10秒，计算需准备反应试剂人份数。每人份反应体系配置如表3：
表3反应体系配置表
| 反应液组分 | 加量/每人份 |
| 核酸扩增反应液 | 7.5μL |
| 酶混合液 | 5μL |
| 新行冠状病毒(2019-nCoV)反应液 | 4μL |
| 去RNA酶水 | 3.5μL |
| 总体积 | 20μL |
在上述准备好试剂的PCR管中分别加入提取好的样本核酸各5μL，总反应体积25μL，盖紧管盖，瞬时低速离心；将反应管放入荧光PCR扩增仪进行扩增检测，程序设置如表4：
表4PCR程序设置表
每组样品做3个重复，实验具体设置如表5，取Ct值平均数；通过比较不同保存时长和不同温度保存下的Ct值变化，评估病毒保存液的核酸保存能力。
表5实验一方案设置
本实验的结果如表6所示。
表6实验一方案结果
表7实验组和对照组Ct值差值
结果显示，无论是实验组还是对照组(已上市产品)保存时间7天与保存0天的CT值相近，表明核酸未存在降解；实验组与对照组的CT值无明显差异，如表7所示，提示两者核酸样本保存能力相近。
实验二：病毒保存液的灭活效率验证
表8实验二方案设置
| 保存时长 | 30秒 | 30分钟 | 1小时 |
| 对照组(无菌水) | 3个重复 | 3个重复 | 3个重复 |
| 实施例1 | 3个重复 | 3个重复 | 3个重复 |
| 对比例1 | 3个重复 | 3个重复 | 3个重复 |
| 对比例2 | 3个重复 | 3个重复 | 3个重复 |
| 对比例3 | 3个重复 | 3个重复 | 3个重复 |
方案按照《消毒技术规范》2.1.1.10病毒灭活试验方法，以甲型流感病毒作试验病毒，MDCK细胞为宿主进行试验；用本发明处理病毒样品作为实验组，经除药处理后检测病毒感染滴度，如表8所示，共设置4个组，其对应的样本保存液配置方式见表1；阳性对照组中，用无菌去离子水代替本产品，对照组病毒感染滴度为105TCID50/mL(或105PFU/mL)以上。具体操作步骤如下：
1)从液氮中取出冻存的试验宿主细胞，在37℃温水中迅速融化，并用细胞维持液洗涤两次后，转种于加有10mL完全培养基培养瓶中。逐日观察细胞生长情况，在细胞长满单层时用于试验；
2)取出低温冻存的毒株，37℃水浴融化，用细胞维持液作10倍稀释，然后接种于含已经长满单层细胞的细胞瓶内，置37℃温箱中，使与细胞吸附、生长。逐日观察病变，待3/4细胞出现病变时，收获病毒；
3)取适量的本发明产品，于20℃±1℃水浴中备用；
4)取100μL有机干扰物质与100μL病毒原液混合，于20℃±1℃水浴中作用5min，加入0.8mL本发明，立即混匀并记时。作用规定时间后立即取出0.1mL，用经鉴定合格的除药方法处理；
5)用细胞维持培养液对待测样本做10倍系列稀释，在96孔培养板上滴定各稀释度样本中残留的病毒量，每个稀释度做4孔，在37℃，放置1h～2h，取出培养板，更换细胞维持培养液；
6)继续放入二氧化碳培养箱中(37℃，5％CO2)培养，逐日在显微镜下观察细胞病变，连续观察3d，逐孔观察并记录细胞病变情况；
7)阳性对照组试验中，用无菌水代替本发明；
8)各组分别进行病毒滴度测定，采用终点稀释法进行。
方案设置每组实验均为3个重复，结果取其平均值；检测得到阳性对照组的病毒感染滴度对数值N0，实施例1和对比例1～3的病毒感染滴度对数值N1，使用病毒活力降低对数值计算实验组病毒活力降低对数值得到病毒灭活效率。实验结果如表9和表10所示。
表9实验二结果(感染滴度平均值对数值lg)
| 保存时长 | 30秒 | 30分钟 | 1小时 |
| 对照组(无菌水)N0 | 5.88 | 5.96 | 6.32 |
| 实施例1-N1 | 1.28 | 1.20 | 1.18 |
| 对比例1-N2 | 2.3 | 1.2 | 2.31 |
| 对比例2-N3 | 2.23 | 2.12 | 2.14 |
| 对比例3-N4 | 2.5 | 2.21 | 2.38 |
表10病毒灭活率结果
结果表明，实施例1在处理病毒样品时只需要30秒就能达到灭活率99.99％的效果，若延长时间到1小时，灭活效率可达到99.999％；对比例1～3的效果相对于实施例1较差些，说明本发明中异硫氰酸胍、吐温-20、EDTA、Tris-Base在灭活病毒有协同促进的作用。
综上，本发明在配方优化后，能使病毒在30秒就能达到99.99％的灭活率，在配方优化的同时，核酸保存能力仍与上市的产品相当。可见，本发明运用场景广，成本控制理想，同时解决了现在的保存液易于起泡和沉淀析出的问题。
以上是对本发明所作的进一步详细说明，不可视为对本发明的具体实施的局限。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的简单推演或替换，都在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种灭活型病毒保存液，其特征在于，包括以下组分：70～170g/L异硫氰酸胍，6～10mg/L吐温-20，0.7～1.0g/L三羟甲基氨基甲烷，0.1～1.0g/L EDTA，6～12g/L Hanks平衡盐溶液，超纯水以及pH指示剂。
2.根据权利要求1所述的灭活型病毒保存液，其特征在于，所述的保存液的pH值为8～9。
3.根据权利要求1所述的灭活型病毒保存液，其特征在于，所述的异硫氰酸胍的质量浓度为70～120g/L。
4.根据权利要求1～3任一项所述的灭活型病毒保存液，其特征在于，所述的吐温-20的质量浓度为7～9mg/L。
5.根据权利要求1～3任一项所述的灭活型病毒保存液，其特征在于，所述的三羟甲基氨基甲烷的质量浓度为0.7～0.9g/L。
6.根据权利要求1～3任一项所述的灭活型病毒保存液，其特征在于，所述的EDTA的质量浓度为0.1～0.3g/L。
7.根据权利要求1～3任一项所述的灭活型病毒保存液，其特征在于，所述的Hanks平衡盐溶液的质量浓度为8～12g/L。
8.根据权利要求1～3任一项所述的灭活型病毒保存液，其特征在于，所述的pH指示剂为酚红。
9.根据权利要求1所述的灭活型病毒保存液，其特征在于，所述的保存液各组分的质量浓度分别为：异硫氰酸胍为80g/L，吐温-20为8mg/L，三羟甲基氨基甲烷为0.8g/L，EDTA为0.2g/L，Hanks平衡盐溶液为10g/L。
10.如权利要求1～9任一项所述的灭活型病毒保存液在保存病毒样本中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211708958.7A CN115948502A (zh) | 2022-12-29 | 2022-12-29 | 一种灭活型病毒保存液及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211708958.7A CN115948502A (zh) | 2022-12-29 | 2022-12-29 | 一种灭活型病毒保存液及其应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115948502A true CN115948502A (zh) | 2023-04-11 |
Family
ID=87287255
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202211708958.7A Pending CN115948502A (zh) | 2022-12-29 | 2022-12-29 | 一种灭活型病毒保存液及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115948502A (zh) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111424031A (zh) * | 2020-03-20 | 2020-07-17 | 浙江安诺优达生物科技有限公司 | 适于冠状病毒提取、纯化和保存的复合缓冲液和试剂盒 |
| CN112522360A (zh) * | 2020-02-06 | 2021-03-19 | 博尔诚（北京）科技有限公司 | 一种组合物、采样装置、试剂盒及居家病毒检测方法 |
| CN113718013A (zh) * | 2021-07-26 | 2021-11-30 | 扬州万禾生物科技有限公司 | 一种含有绿色染料的灭活型病毒核酸保存液 |
| US20220017874A1 (en) * | 2020-06-22 | 2022-01-20 | Guangzhou Dongsheng Biotech Co., Ltd. | Virus preservation solution |
-
2022
- 2022-12-29 CN CN202211708958.7A patent/CN115948502A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112522360A (zh) * | 2020-02-06 | 2021-03-19 | 博尔诚（北京）科技有限公司 | 一种组合物、采样装置、试剂盒及居家病毒检测方法 |
| CN111424031A (zh) * | 2020-03-20 | 2020-07-17 | 浙江安诺优达生物科技有限公司 | 适于冠状病毒提取、纯化和保存的复合缓冲液和试剂盒 |
| US20220017874A1 (en) * | 2020-06-22 | 2022-01-20 | Guangzhou Dongsheng Biotech Co., Ltd. | Virus preservation solution |
| CN113718013A (zh) * | 2021-07-26 | 2021-11-30 | 扬州万禾生物科技有限公司 | 一种含有绿色染料的灭活型病毒核酸保存液 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN111363729B (zh) | 一种rna病毒灭活保存液及其应用 | |
| CN111718908B (zh) | 病毒样本保存液及其制备方法和应用 | |
| CA2985652C (en) | Rapid methods for the extraction of nucleic acids from biological samples | |
| US20200239931A1 (en) | Composition And Method For Stabilizing Nucleic Acids In Biological Samples | |
| Guthrie et al. | Infection of protoplasts of Escherichia coli by subviral particles of bacteriophage ΦX174 | |
| CN105765066B (zh) | 用于定量腺伴随病毒的方法 | |
| CN111690640B (zh) | 一种高度兼容磁珠法病毒核酸提取试剂盒的病毒保存液 | |
| JP2012523851A (ja) | 生物試料回収／輸送組成物および方法 | |
| JP4585123B2 (ja) | 生体材料からのｄｎａの単離方法 | |
| CN111549101A (zh) | 一种用于生物样本核酸检测的保存液及应用 | |
| CN110117675B (zh) | 一种实时荧光定量pcr检测rcl的试剂和方法 | |
| CN114875022B (zh) | 尿液保存液、保存方法和尿液保存管 | |
| US6852495B2 (en) | Process of extracting nucleic acid and process of simultaneously carrying out extraction and purification of nucleic acid | |
| Chen et al. | The transient expression of CHIKV VLP in large stirred tank bioreactors | |
| EP3521447B1 (en) | Nucleic acid extraction method and kit using same | |
| KR20180095082A (ko) | 무세포 생물학적 유체 내 핵산 분해 효소에 대한 숙주 핵산의 접근성의 조절 | |
| JP6713007B2 (ja) | 核酸の単離 | |
| CN116790577B (zh) | 一种rna保存液及其用途 | |
| CN115948502A (zh) | 一种灭活型病毒保存液及其应用 | |
| CN115397453A (zh) | 用于检测病毒核酸的产品和方法 | |
| CN115433763A (zh) | 一种粪便样本中rna病毒核酸保存液及其制备方法 | |
| CN115354068A (zh) | 一种灭活型病毒保存液及其制备方法 | |
| CN117363657A (zh) | 一种慢病毒载体保存液、慢病毒载体制剂及其制备方法 | |
| CN116287122A (zh) | 一种灭活型病毒保存液及其制备方法 | |
| CN112662795A (zh) | 用于感染性病原体检测的阳性对照品及其制备方法与应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |