CN115919819A - 6-姜酚在抑制hpv16感染中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提出了一种6‑姜酚在抑制HPV16感染中的应用,属于医药技术领域。本发明的发明人经过长期大量的试验发现,6‑姜酚可抑制HPV16感染人类上皮细胞,抑制作用具有时间及浓度依赖性。本发明开辟了6‑姜酚新的应用领域,可用于高危型HPV持续感染阻断治疗的药物制备,有助于推进宫颈癌等HPV相关肿瘤的早期防治,具有一定的理论意义和临床应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域,具体涉及6-姜酚在抑制HPV16感染中的应用。
背景技术
人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)属于乳头瘤病毒家族,是可感染上皮细胞的小型无包膜DNA病毒,目前已发现了超过100多种亚型。高危型HPV(如HPV16等)的感染和5%的人类肿瘤相关,包括了宫颈、外阴、阴道、肛门、阴茎和口咽部肿瘤。按人群平均感染率10%估算,我国4.3亿的适龄女性中约有4300万高危型HPV感染患者。高危型HPV感染仍将在未来的几十年内造成大量的疾病负担,是我国重大的公共健康挑战。
HPV是极富人类物种特异性和组织特异性的病毒,对子宫颈等处的复层鳞状上皮具有高度组织嗜性。病毒颗粒通过女性生殖道上皮的微小创口进入组织,只有通过感染复层鳞状上皮的基底细胞才能完成其完整生命周期,产生新的HPV病毒颗粒进入再感染过程,通过感染--释放--再感染的循环,造成持续感染。在持续感染期间,高危型HPV的DNA经常整合到宿主细胞的基因组中,最终可导致宿主细胞的恶性转化。然而目前针对HPV持续性感染并无有效药物,临床策略以随访观察为主,给患者造成极大的心理负担,也容易导致过度治疗,增加社会卫生经济压力。因此,有必要研究开发HPV感染宿主细胞的抑制剂,为阻断HPV持续感染发展为宫颈癌前病变和宫颈癌的疾病进程提供干预手段。
干姜是中药临床配伍应用中常见的中药之一,其味辛,性热,具有温中散寒,回阳救逆,温肺化饮的功效。干姜发挥作用的主要成分为姜酚类物质,而6-姜酚(6-gingerol)是生姜辣味物质姜酚的主要成分(大于75%),由一个芳香环与侧链烷基组成,其生物活性也最强。6-姜酚具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化、降血糖、降血脂、降血压、保护心脑血管、防治结肠炎等多种健康效应。同时,6-姜酚也具有一定的抗病毒作用。那么6-姜酚能否抑制高危型HPV(例如HPV16)的感染,目前尚未有此方面的报道。
发明内容
本发明的目的在于提出6-姜酚在抑制HPV16感染中的应用,发明人经过长期大量的试验发现,6-姜酚可抑制HPV16假病毒感染宿主细胞,抑制作用具有时间及浓度依赖性,故6-姜酚可用于制备HPV16感染的抑制剂。
本发明的技术方案是这样实现的:
本发明提供6-姜酚在抑制HPV16感染中的应用。
作为本发明的进一步改进,所述6-姜酚在制备抑制HPV16感染的药物中的应用。
作为本发明的进一步改进,所述6-姜酚在抑制HPV16感染宿主细胞中的应用。
作为本发明的进一步改进,所述6-姜酚的结构式如式Ⅰ所示:
作为本发明的进一步改进,所述6-姜酚的抑制作用具有时间和浓度的依赖性。
第一,本发明的发明人通过6-姜酚作用于HPV16-GFP假病毒感染人永生化角质形成细胞系HaCat细胞的效应实验发现,6-姜酚可抑制HPV16-GFP假病毒感染HaCat细胞。
第二,本发明的发明人通过6-姜酚作用于HPV16-GFP假病毒感染人永生化角质形成细胞系HaCat细胞的时效实验发现,6-姜酚抑制HPV16-GFP假病毒感染HaCat细胞具有时间依赖性。
第三,本发明的发明人通过6-姜酚作用于HPV16-GFP假病毒感染原代人宫颈上皮细胞的时效实验发现,6-姜酚抑制HPV16-GFP假病毒感染原代人宫颈上皮细胞具有时间依赖性。
第四,本发明的发明人通过6-姜酚作用于HPV16-GFP假病毒感染人永生化角质形成细胞系HaCat细胞的量效实验发现,6-姜酚抑制HPV16-GFP假病毒感染HaCat细胞具有浓度依赖性。
第五,本发明的发明人通过6-姜酚作用于HPV16-GFP假病毒感染原代人宫颈上皮细胞的量效实验发现,6-姜酚抑制HPV16-GFP假病毒感染原代人宫颈上皮细胞具有浓度依赖性。
由此可以判定,6-姜酚可通过抑制HPV16假病毒感染宿主细胞,抑制作用具有时间及浓度依耐性,故6-姜酚可用于制备HPV16感染的抑制剂。
本发明具有如下有益效果:
1.本发明的发明人经过长期大量的试验发现,6-姜酚可抑制HPV16假病毒感染宿主细胞,抑制作用具有时间及浓度依耐性,故6-姜酚可用于制备HPV16感染的抑制剂。
2.本发明发现了6-姜酚的新应用,为提升干姜的开发利用提供了参考价值;同时,6-姜酚为天然植物成分,具有良好的生物利用度,而在干姜中含量丰富,毒副作用偏小,来源广泛,在医疗领域具有广阔的应用前景。
3.本发明为高危型HPV持续感染的治疗提供了新方法和新思路,推动了医学进步。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动性的前提下,还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明的实施例1免疫荧光显微镜镜下观察6-姜酚抑制HPV16-GFP假病毒感染人永生化角质形成细胞系HaCat细胞。
图2为本发明的实施例1流式荧光分选检测到6-姜酚抑制HPV16-GFP假病毒感染人永生化角质形成细胞系HaCat细胞。与对照组结果对比,*表示P<0.05差异显著,**表示P<0.01差异极显著。
图3为本发明的实施例2中6-姜酚抑制HPV16-GFP假病毒感染人永生化角质形成细胞系HaCat细胞的时间效应图。与0h结果对比,*表示P<0.05差异显著,**表示P<0.01差异极显著。
图4为本发明的实施例3中6-姜酚抑制HPV16-GFP假病毒感染原代人宫颈上皮细胞的时间效应图。与0h结果对比,*表示P<0.05差异显著,**表示P<0.01差异极显著。
图5为本发明的实施例4中6-姜酚抑制HPV16-GFP假病毒感染人永生化角质形成细胞系HaCat细胞的浓度效应图。与对照组结果对比,*表示P<0.05差异显著,**表示P<0.01差异极显著。
图6为本发明的实施例5中6-姜酚抑制HPV16-GFP假病毒感染原代人宫颈上皮细胞的浓度效应图。与对照组结果对比,*表示P<0.05差异显著,**表示P<0.01差异极显著。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
在美国ATCC细胞库购买的人永生化角质形成细胞系HaCat细胞。HaCat细胞培养条件为:DMEM高糖培养基(ATCC)+10%胎牛血清(Gibco),37℃,5%二氧化碳,PH值7.2-7.4,无菌恒温培养。细胞特性:该细胞源自一位62岁患有黑色素瘤男性的病灶外围正常皮肤,角蛋白、角化细胞交联外膜蛋白、中间丝相关蛋白阳性,贴壁生长。
在MCE公司购买的6-姜酚(目录号:HY-14615。CAS号:23513-14-6),分子量294.39,分子式C17H26O4,纯度99.45%。所述6-姜酚的结构式如式Ⅰ所示:
实施例1 6-姜酚抑制HPV16-GFP假病毒感染人永生化角质形成细胞系HaCat细胞
在人永生化角质形成细胞HaCat细胞中,加入200μM的6-姜酚(实例1-6中均为储存液(DMSO:100mg/mL)溶解);作用8h,MOI=100的HPV16-GFP假病毒感染(感染时不撤药)12h,换液培养72小时后分别通过免疫荧光显微镜镜下观察和流式荧光分选检测HPV16-GFP假病毒对HaCat细胞的感染情况。
由图1可知,免疫荧光显微镜镜下观察到6-姜酚作用后可降低HPV16-GFP假病毒对HaCat细胞的感染率。由图2可知,流式荧光分选检测到6-姜酚作用后可降低HPV16-GFP假病毒对HaCat细胞的感染率(感染率下降76.81%)。由此可知,6-姜酚抑制HPV16-GFP假病毒感染人永生化角质形成细胞系HaCat细胞。
实施例2 6-姜酚抑制HPV16-GFP假病毒感染人永生化角质形成细胞系HaCat细胞的时效实验
在人永生化角质形成细胞HaCat细胞中,加入6-姜酚(100μM)。分别作用0h、1h、2h和4h后,MOI=100的HPV16-GFP假病毒感染(感染时不撤药)12h,换液培养72小时后分别通过免疫荧光显微镜镜下观察和流式荧光分选检测HPV16-GFP假病毒对HaCat细胞的感染情况。
由图3可知,6-姜酚分别作用1h、2h和4h后,HPV16-GFP假病毒对HaCat细胞的感染率依次下降5.41%、21.56%和54.77%。由此可知,6-姜酚对HPV16-GFP假病毒感染HaCat细胞的抑制效果具有时间依赖性。
实施例3 6-姜酚抑制HPV16-GFP假病毒感染原代人宫颈上皮细胞的时效实验
在原代人宫颈上皮细胞中,加入M6-姜酚(100μM)。分别作用0h、1h、2h和4h后,MOI=100的HPV16-GFP假病毒感染(感染时不撤药)12h,换液培养72小时后分别通过免疫荧光显微镜镜下观察和流式荧光分选检测HPV16-GFP假病毒对HaCat细胞的感染情况。
由图4可知,6-姜酚分别作用1h、2h和4h后,HPV16-GFP假病毒对HaCat细胞的感染率依次下降4.13%、20.71%和60.21%。由此可知,6-姜酚对HPV16-GFP假病毒感染原代人宫颈上皮细胞的抑制效果具有时间依赖性。
实施例4 6-姜酚抑制HPV16-GFP假病毒感染人永生化角质形成细胞HaCat细胞的浓度效应实验
在人永生化角质形成细胞HaCat细胞中,分别加入不同浓度6-姜酚(0μM、1μM、10μM和100μM)。分别作用4h后,MOI=100的HPV16-GFP假病毒感染(感染时不撤药)12h,换液培养72小时后分别通过免疫荧光显微镜镜下观察和流式荧光分选检测HPV16-GFP假病毒对HaCat细胞的感染情况。
由图5可知,1μM、10μM和100μM的6-姜酚作用后,HPV16-GFP假病毒对HaCat细胞的感染率依次下降4.59%、20.58%和50.02%。由此可知,6-姜酚对HPV16-GFP假病毒感染原代人宫颈上皮细胞的抑制效果具有时间依赖性。
实施例5 6-姜酚抑制HPV16-GFP假病毒感染原代人宫颈上皮细胞细胞的浓度效应实验
在原代人宫颈上皮细胞中,分别加入不同浓度6-姜酚(0μM、1μM、10μM和100μM)。分别作用4h后6-姜酚。分别作用4h后,MOI=100的HPV16-GFP假病毒感染(感染时不撤药)12h,换液培养72小时后分别通过免疫荧光显微镜镜下观察和流式荧光分选检测HPV16-GFP假病毒对原代人宫颈上皮细胞的感染情况。
由图6可知,1μM、10μM和100μM的6-姜酚作用后,HPV16-GFP假病毒对原代人宫颈上皮细胞的感染率依次下降10.09%、15.60%和44.20%。由此可知,6-姜酚对HPV16-GFP假病毒感染原代人宫颈上皮细胞的抑制效果具有浓度依赖性。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
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CN (1) | CN115919819A (zh) |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2007238559A (ja) * | 2006-03-10 | 2007-09-20 | Nagoya City Univ | 未成熟樹状細胞活性化剤及びその使用 |
WO2016191641A2 (en) * | 2015-05-28 | 2016-12-01 | The Johns Hopkins University | Methods for enhancing antigen-specific immune responses using combination therapy comprising papillomavirus capsid antigens |
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2022
- 2022-11-24 CN CN202211483181.9A patent/CN115919819A/zh active Pending
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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Non-Patent Citations (2)
Title |
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