CN115902067A - 一种盐酸依匹斯汀中玉米淀粉的含量测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种盐酸依匹斯汀中玉米淀粉的含量测定方法，采用高效液相色谱分离，采用蒸发光散射检测器、电雾式检测器或示差折光检测器检测，包括以下步骤：对照品溶液的制备，取玉米淀粉，加稀释剂溶解制成多个线性浓度的溶液；供试品溶液的制备：取含玉米淀粉的药物制剂，加入稀释剂，离心，取上清液；制作标准曲线，将对照品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，以对照品溶液中玉米淀粉浓度与相应峰面积进行线性回归，计算标准曲线；玉米淀粉的含量测定，将供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，以标准曲线法计算药物制剂粉末中玉米淀粉的含量。专属性好，供试品中无干扰，能够少量化、精细化、准确化、直接化地测定药物制剂中玉米淀粉的含量。
Description
技术领域
本发明是关于生物医药产业的技术领域，特别是关于一种盐酸依匹斯汀中玉米淀粉的含量测定方法。
背景技术
盐酸依匹斯汀，化学名称为3-氨基-9,13b-二氢-1H-二苯[c,f]咪唑并[1,5-a]氮杂卓盐酸盐，是由勃林格殷格翰(Boehringer Ingelheim)研发的抗组胺药和抗变态反应药。
在仿制药开发过程中，需要与原研药品进行生物等效性实验，该实验费用昂贵，一旦失败，将会造成巨大的人力财力损失，带来资源浪费。对原研药品中的处方组成充分的剖析，尽可能的使自研产品接近于原研药品，将有助于提高生物等效性实验的成功率，从而节约研发费用，避免资源浪费。
玉米淀粉作为重要的药品生产物料，常作为填充剂、崩解剂、粘合剂广泛应用于口服药物制剂中，作为黏合剂，一般用量为5％-25％，作为崩解剂，一般用量为3％-15％，是生产药物制剂需要使用的重要原材料，对原研药品中的玉米淀粉用量进行测定，对仿制药的开发具有重要的指导意义。
对于淀粉的含量测试方法，目前通行的为水解法、衍生化法、比色法等化学方法，操作要复杂，费时费力，误差较大，准确度较低，为间接测定，不能直接得出淀粉的直观含量，且多用于食品行业原材料的测定，可用的样品量以公斤级计，而药品中的玉米淀粉的含量为毫克级，二者数量级相差100万倍。
公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
发明内容
本发明的目的在于提供一种盐酸依匹斯汀中玉米淀粉的含量测定方法，其能够少量化、精细化、准确化、直接化地测定药物制剂中玉米淀粉的含量。
为实现上述目的，本发明提供了一种盐酸依匹斯汀中玉米淀粉的含量测定方法，采用高效液相色谱分离，采用蒸发光散射检测器、电雾式检测器或示差折光检测器检测，包括以下步骤：
(1)对照品溶液的制备，取玉米淀粉，精密称定，加稀释剂溶解制成多个浓度范围为0.01～5mg/ml的线性浓度的溶液；
(2)供试品溶液的制备：取含玉米淀粉的药物制剂粉末，加入稀释剂，离心，取上清液；
(3)制作标准曲线，将步骤(1)中的对照品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，以对照品溶液中玉米淀粉浓度与相应峰面积进行线性回归，计算标准曲线；
(4)玉米淀粉的含量测定，将步骤(2)的供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，以标准曲线法计算药物制剂粉末中玉米淀粉的含量。
优选地，所述高效液相色谱的色谱条件为
凝胶色谱柱：Agilent PLgel MIXED-D，规格7.5*300mm，5μm；
柱温：20～50℃；
流动相：二甲基亚砜；
进样量：1～100μl；
流速：0.3～2.0ml/min。
优选地，所述稀释剂为二甲基亚砜。
进一步地，步骤(1)中对照品溶液的制备，具体为取玉米淀粉，精密称定，加稀释剂二甲基亚砜溶解并至量瓶刻度，置80℃水浴中搅拌2h，室温下继续搅拌至室温，13000rpm离心5min，取上清液，再用稀释剂二甲基亚砜稀释制成多个浓度范围为0.01～5mg/ml的线性浓度的溶液。
进一步地，步骤(2)中供试品溶液的制备，具体为取含玉米淀粉的药物制剂粉末，置于量瓶中，加入稀释剂二甲基亚砜溶解并稀释至量瓶刻度，置80℃水浴中搅拌2h，室温下继续搅拌至室温，13000rpm离心5min，取上清液。
与现有技术相比，根据本发明的一种盐酸依匹斯汀中玉米淀粉的含量测定方法，具有如下有益效果：
(1)专属性好，供试品中无干扰，能够少量化、精细化、准确化、直接化地测定药物制剂中玉米淀粉的含量；
(2)取玉米淀粉适量，制成浓度0.2mg/ml的对照品溶液。取该溶液，逐步稀释，进样测定，以信号约为基线噪音的10倍作为定量限，结果该方法玉米淀粉定量限低至0.01mg/ml，方法灵敏度高；
(3)往供试品溶液中加入50％、100％、150％限度水平的玉米淀粉，结果本方法测得回收率为97.3％～102.9％范围内，RSD为1.7％，方法准确度高。
附图说明
图1是根据本实施例1的空白溶液的色谱图；
图2是根据本实施例1的对照品溶液的色谱图；
图3是根据本实施例3的供试品溶液的色谱图。
具体实施方式
下面结合附图，对本发明的具体实施方式进行详细描述，但应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制。
除非另有其它明确表示，否则在整个说明书和权利要求书中，术语“包括”或其变换如“包含”或“包括有”等等将被理解为包括所陈述的元件或组成部分，而并未排除其它元件或其它组成部分。
根据本发明优选实施方式的盐酸依匹斯汀中玉米淀粉的含量测定方法，采用高效液相色谱分离，采用蒸发光散射检测器(ELSD)、电雾式检测器(CAD)或示差折光检测器(RID)检测，该方法定量更加准确，操作更加便捷。
盐酸依匹斯汀中玉米淀粉的含量测定方法，包括以下步骤：
(1)对照品溶液的制备，取玉米淀粉适量，精密称定，加稀释剂二甲基亚砜溶解并至量瓶刻度，置80℃水浴中搅拌2h，室温下继续搅拌至室温，13000rpm离心5min取上清液，再用稀释剂二甲基亚砜稀释制成多个浓度范围0.01～5mg/ml的不同浓度的线性溶液。
(2)供试品溶液的制备：取含玉米淀粉的药物制剂粉末适量，置于10mL量瓶中，加入稀释剂二甲基亚砜溶解并稀释至刻度，置80℃水浴中搅拌2h，室温下继续搅拌至室温，13000rpm离心5min，取上清液即得。
(3)色谱条件设置：
采用凝胶色谱柱：Agilent PLgel MIXED-D，规格7.5*300mm，5μm；
柱温：20～50℃；
流动相：二甲基亚砜，进行等度洗脱；
进样量：1～100μl；
流速：0.3～2.0ml/min；
检测器：示差折光检测器(RID)。
(4)制作标准曲线，将步骤(1)中的对照品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，以对照品溶液中玉米淀粉浓度与相应峰面积进行线性回归，计算标准曲线。
(5)玉米淀粉的含量测定，将步骤(2)的供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，以标准曲线法计算供试品中玉米淀粉的含量。
实施例1，专属性试验
色谱柱：Agilent PLgel MIXED-D，7.5*300mm，5μm
流动相：二甲基亚砜
流速：0.5ml/min
柱温：30℃
进样量：100μl
检测器：示差折光检测器
溶液的配制：
空白溶液：二甲基亚砜。
对照品溶液：取玉米淀粉10～60mg，精密称定，加稀释剂二甲基亚砜溶解并至刻度，置80℃水浴中搅拌2h，室温下继续搅拌至室温，离心取上清液。
测定方法：
精密量取空白溶液和对照品溶液各100μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，空白溶液在玉米淀粉出峰处均无干扰，表明方法专属性良好，空白溶液的色谱图见图1，对照品溶液的色谱图见图2。
实施例2，线性试验
色谱柱：Agilent PLgel MIXED-D，7.5*300mm，5μm
流动相：二甲基亚砜
流速：0.5ml/min
柱温：30℃
进样量：100μl
检测器：示差折光检测器
溶液的配制：
线性溶液：取玉米淀粉10～60mg，精密称定，加稀释剂二甲基亚砜溶解并至刻度，置80℃水浴中搅拌2h，室温下继续搅拌至室温，13000rpm离心5min取上清液，再用稀释剂稀释制成浓度范围0.2～1.5mg/ml的线性溶液。
测定方法：
精密量取上述线性溶液各100μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。以系列线性溶液中玉米淀粉浓度与相应峰面积计算回归方程，结果见表1。
表1线性试验结果
| 编号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
| 浓度(mg/ml) | 0.228 | 0.457 | 0.609 | 0.913 | 1.218 | 1.522 |
| 峰面积(pA*min) | 90826.4 | 201257 | 247660 | 384973 | 510761 | 594434 |
结果表明：玉米淀粉的线性方程为y＝394611x+12995，线性相关系数为0.999，线性关系良好。
实施例3，重复性试验
色谱柱：Agilent PLgel MIXED-D，7.5*300mm，5μm
流动相：二甲基亚砜
流速：0.5ml/min
柱温：30℃
进样量：100μl
检测器：示差折光检测器
溶液的配制：
对照品溶液的制备：取玉米淀粉适量，加稀释剂高温水浴搅拌配制成含玉米淀粉约0.2～1.5mg/ml溶液。
供试品溶液的制备：取本品粉末，精密称定，加稀释剂后超声提取，置80℃水浴中搅拌2h，室温下继续搅拌至室温，将溶液离心，取上清液即得。平行配制6份。
测定方法：精密量取对照品溶液和供试品溶液各100μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。重复性结果见表2。
表2重复性试验结果
结果表明：6份供试品溶液中玉米淀粉含量均值为36.4％，含量的RSD为1.7％，表明方法重复性良好。典型色谱图见图3。
实施例4，盐酸依匹斯汀片中玉米淀粉含量测定试验
色谱柱：Agilent PLgel MIXED-D，7.5*300mm，5μm
流动相：二甲基亚砜
流速：0.5ml/min
柱温：30℃
进样量：100μl
检测器：示差折光检测器
溶液的配制：
对照品溶液的制备：取玉米淀粉适量，加稀释剂二甲基亚砜，置80℃水浴中搅拌2h，室温下继续搅拌至室温，制成含玉米淀粉约0.2～1.5mg/ml溶液。
供试品溶液的制备：取本品盐酸依匹斯汀片粉末，精密称定，加稀释剂后超声提取，置80℃水浴中搅拌2h，室温下继续搅拌至室温，将溶液离心，取上清液即得。平行配制2份。
测定方法：
精密量取对照品溶液和供试品溶液各100μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。玉米淀粉含量测定结果见表3。
表3盐酸依匹斯汀片中玉米淀粉含量测定结果
实施例5，甲钴胺片中玉米淀粉含量测定试验
色谱柱：Agilent PLgel MIXED-D，7.5*300mm，5μm
流动相：二甲基亚砜
流速：0.5ml/min
柱温：30℃
进样量：100μl
检测器：示差折光检测器
溶液的配制：
对照品溶液的制备：取玉米淀粉，加稀释剂二甲基亚砜，置80℃水浴中搅拌2h，室温下继续搅拌至室温，配制成含玉米淀粉约0.01～3.0mg/ml溶液。
供试品溶液的制备：取本品粉末，精密称定，加稀释剂后超声提取，二甲基亚砜，置80℃水浴中搅拌2h，室温下继续搅拌至室温，将溶液离心，取上清液即得。平行配制2份。
测定方法：
精密量取对照品溶液和供试品溶液各100μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。玉米淀粉含量测定结果见表4。
表4甲钴胺片中玉米淀粉含量测定结果
实施例6，阿卡波糖片中玉米淀粉含量测定试验
色谱柱：Agilent PLgel MIXED-D，7.5*300mm，5μm
流动相：二甲基亚砜
流速：0.5ml/min
柱温：30℃
进样量：100μl
检测器：示差折光检测器
溶液的配制：
对照品溶液的制备：取玉米淀粉适量，加稀释剂二甲基亚砜，置80℃水浴中搅拌2h，室温下继续搅拌至室温，配制成含玉米淀粉约0.225～1.5mg/ml溶液。
供试品溶液的制备：取本品粉末，精密称定，加稀释剂后超声提取，置80℃水浴中搅拌2h，室温下继续搅拌至室温，将溶液离心，取上清液即得。平行配制2份。
测定方法：
精密量取对照品溶液和供试品溶液各100μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。玉米淀粉含量测定结果见表5。
表5阿卡波糖片中玉米淀粉含量测定结果-100mg规格
前述对本发明的具体示例性实施方案的描述是为了说明和例证的目的。这些描述并非想将本发明限定为所公开的精确形式，并且很显然，根据上述教导，可以进行很多改变和变化。对示例性实施例进行选择和描述的目的在于解释本发明的特定原理及其实际应用，从而使得本领域的技术人员能够实现并利用本发明的各种不同的示例性实施方案以及各种不同的选择和改变。本发明的范围意在由权利要求书及其等同形式所限定。
Claims (5)
1.一种盐酸依匹斯汀中玉米淀粉的含量测定方法，其特征在于，采用高效液相色谱分离，采用蒸发光散射检测器、电雾式检测器或示差折光检测器检测，包括以下步骤：
(1)对照品溶液的制备，取玉米淀粉，精密称定，加稀释剂溶解制成多个浓度范围为0.01～5mg/ml的线性浓度的溶液；
(2)供试品溶液的制备：取含玉米淀粉的药物制剂粉末，加入稀释剂，离心，取上清液；
(3)制作标准曲线，将步骤(1)中的对照品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，以对照品溶液中玉米淀粉浓度与相应峰面积进行线性回归，计算标准曲线；
(4)玉米淀粉的含量测定，将步骤(2)的供试品溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，以标准曲线法计算药物制剂粉末中玉米淀粉的含量。
2.如权利要求1所述的盐酸依匹斯汀中玉米淀粉的含量测定方法，其特征在于，所述高效液相色谱的色谱条件为
凝胶色谱柱：Agilent PLgel MIXED-D，规格7.5*300mm，5μm；
柱温：20～50℃；
流动相：二甲基亚砜；
进样量：1～100μl；
流速：0.3～2.0ml/min。
3.如权利要求1所述的盐酸依匹斯汀中玉米淀粉的含量测定方法，其特征在于，所述稀释剂为二甲基亚砜。
4.如权利要求1所述的盐酸依匹斯汀中玉米淀粉的含量测定方法，其特征在于，步骤(1)中对照品溶液的制备，具体为取玉米淀粉，精密称定，加稀释剂二甲基亚砜溶解并至量瓶刻度，置80℃水浴中搅拌2h，室温下继续搅拌至室温，13000rpm离心5min，取上清液，再用稀释剂二甲基亚砜稀释制成多个浓度范围为0.01～5mg/ml的线性浓度的溶液。
5.如权利要求1所述的盐酸依匹斯汀中玉米淀粉的含量测定方法，其特征在于，步骤(2)中供试品溶液的制备，具体为取含玉米淀粉的药物制剂粉末，置于量瓶中，加入稀释剂二甲基亚砜溶解并稀释至量瓶刻度，置80℃水浴中搅拌2h，室温下继续搅拌至室温，13000rpm离心5min，取上清液。
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| GR01 | Patent grant | ||
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