CN115895941B - 一株鼠李糖乳杆菌及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一株鼠李糖乳杆菌及其应用，属于生物化工技术领域。该鼠李糖乳杆菌的保藏名称为鼠李糖乳杆菌PC30‑2‑1(LactobacillusrhamnosusPC30‑2‑1)，保藏单位为：中国典型培养物保藏中心，保藏地址为：中国武汉大学，保藏日期为：2022年1月17日，保藏中心编号为：CCTCCNO:M2022083。本发明还提供上述鼠李糖乳杆菌在制备复方中药渣发酵液中的应用，本发明通过鼠李糖乳杆菌得到的发酵液能提高畜禽的增重效果和抗病力，减少或一定程度替代常规抗菌药物的使用，降低药物残留。
Description
技术领域
本发明属于生物化工技术领域，具体涉及一株鼠李糖乳杆菌及其应用。
背景技术
近年来，使用兽用中药减少或替代常规兽用抗菌药物已成为行业研究热点、畜牧业绿色健康发展的新方向。
中药具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤、免疫调节等多种生物学活性，因其成分多样，不易产生耐药性，对于有效防治畜禽疾病、提高生产性能、保障人类健康和生态环境都具有重要意义。此外，中药复方还具有无残留、无毒副作用等优势，因而成为药物研发领域的热点。尽管如此，一些天然生药造价高、不易获得、加工炮制复杂、药效不理想、有效成分含量低等诸多问题，极大限制了中药在畜禽养殖业中的广泛应用。
据不完全统计，目前我国中药材年产量约7000万吨，制药企业进行工业化加工生产过程中，产生的药渣等固体废弃物可达3500万吨，约为药材总产量的一半，其中约有30％～50％有效成分未被提取利用，造成中药资源的巨大浪费，也阻碍了中医药事业的快步发展。中药企业制备中成药的过程主要针对提取有效部位或有效成分进行，因此药材中其他的功能性成分仍残留在药渣中，这些活性成分经加工后可作为兽药或饲料添加剂使用，极大地提高了原药利用率和附加值，降低生产成本。
大量的实验证明鼠李糖乳杆菌能够耐受动物消化道环境，并能够在人和动物肠道内定植，起到调节肠道菌群、预防和治疗腹泻、排除毒素、预防龋齿和提高机体免疫力等作用。其具有耐酸、耐氧、定植力强的特性，是目前接受度较高的益生菌。
综上，在传统炮制方法的基础上，利用乳酸菌发酵中药技术，使微生物发挥生物转化功能，不仅能提高中药活性成分含量、改变或产生一些中药中原不具有的活性成分，还能使中药大分子物质转变为能够被机体直接吸收利用的小分子，进而提高动物机体的抗病能力、生产性能和经济效益。
发明内容
本发明的目的是提供一株鼠李糖乳杆菌及其应用，该鼠李糖乳杆菌对中药渣进行发酵，得到的发酵液能提高畜禽的增重效果和抗病力，减少或一定程度替代常规抗菌药物的使用，降低药物残留。
本发明首先提供一株鼠李糖乳杆菌，保藏名称为鼠李糖乳杆菌PC30-2-1(Lactobacillus rhamnosus PC30-2-1)，保藏单位为：中国典型培养物保藏中心，保藏地址为：中国武汉大学，保藏日期为：2022年1月17日，保藏中心编号为：CCTCC NO:M 2022083.
本发明还提供上述鼠李糖乳杆菌在制备复方中药渣发酵液中的应用。
优选的是，所述的复方中药渣发酵液的制备方法，包括：
步骤一：从市售泡菜叶中分离获得鼠李糖乳杆菌PC30-2-1，通过16S rDNA 进行菌种鉴定，获得采用保藏号为CCTCC NO:M 2022083的鼠李糖乳杆菌 PC30-2-1(Lactobacillus rhamnosus PC30-2-1)，将鼠李糖乳杆菌PC30-2-1接种于培养基中，于37℃，150r/min,振荡培养12-18h，获得种子培养液；
步骤二：将麦冬、半夏、人参、甘草、石膏和淡竹叶切片后，加水煎煮，合并滤液；
步骤三：将步骤二得到的药渣进行烘干，得到的干药渣加入蒸馏水，进行灭菌后冷却至室温，得到药渣培养液；
步骤四：将步骤二的种子培养液接种于步骤三的药渣培养液中，于37℃， 150r/min,振荡培养12-18h，离心收集发酵上清，得到复方中药渣发酵液。
优选的是，所述的步骤一的培养基为MRS液体培养基。
优选的是，所述的步骤二中中药原料配比为：麦冬30-50份、半夏15-25份、人参10-15份、甘草50-100份、石膏20-30份、淡竹叶10-15份。
优选的是，所述的步骤二中中药原料配比为：麦冬30份、半夏15份、人参15份、甘草100份、石膏20份、淡竹叶15份。
优选的是，所述的步骤二中煎煮次数为2次，第一次煎煮时间为1h，第二次煎煮时间为30min，料液比为1:20。
优选的是，所述的步骤三的烘干温度为室温，晾晒烘干时间为48h。
优选的是，所述的步骤三中药渣和蒸馏水的料液比为1:10。
优选的是，所述的步骤三中灭菌温度为121℃，压力为103.4kPa。
优选的是，所述的步骤四离心收集包括：将药渣发酵液于4℃，8000r/min，离心10min，将离心后所得上清液通过0.45μm滤膜进行真空抽滤，后将滤液于旋转蒸发仪(45℃，75r/min)，旋蒸浓缩至体积比为1:4。
本发明的有益效果
本发明提供一株鼠李糖乳杆菌及其应用，该菌株保藏名称为鼠李糖乳杆菌 PC30-2-1(Lactobacillus rhamnosus PC30-2-1)，经MRS分离培养基纯化后，得到圆形，乳白色，边缘整齐，表面光滑，直径1-1.5mm，成对或成链排列菌落，革兰氏染色镜检可见分散、成链排列短杆状菌体，16S rDNA序列比对结果显示，该菌与L.rhamnosus序列一致性达99％。
本发明还提供上述鼠李糖乳杆菌在制备复方中药渣发酵液中的应用，本发明利用鼠李糖乳杆菌PC30-2-1发酵复方中药渣，利用发酵液益生特性提高畜禽的增重效果和抗病力，牛津杯实验结果显示，本发明的中药渣浓缩发酵上清液对大肠杆菌ATCC25922株抑菌圈直径约为13-14mm，具有一定抑菌效果，该复方中药渣发酵液能减少或一定程度替代常规抗菌药物的使用，降低药物残留，降低抗菌药物选择压力，抑制或减缓临床致病菌耐药性产生。
附图说明
图1为牛津杯法测试复方中药发酵液对大肠杆菌标准株ATCC25922抑菌活性照片；
图2为灌服实施例2的制备药渣发酵液的试验鸡的早重曲线图；
图3为灌服实施例2的制备药渣发酵液的试验鸡的晚重曲线图
图4为灌服实施例2的制备药渣发酵液的试验鸡的周增重柱状图；
图5为血清IL-6含量的细胞因子柱状图；
图6为血清IL-8含量的细胞因子柱状图；
图7为血清IL-10含量的细胞因子柱状图；
图8为血清IFN-γ含量的细胞因子柱状图。
具体实施方式
实施例1鼠李糖乳杆菌PC30-2-1的分离鉴定
(1)分离纯化
将购置的市售泡菜置于无菌超净工作台中，使用生理盐水将样品10倍梯度稀释，取100μL适宜梯度的稀释液均匀涂布在含有2％碳酸钙的MRS培养基上，将涂布好的培养基置于厌氧罐中，37℃培养48h。挑取有明显溶钙环的不同形态菌落接种在相应的液体培养基中增菌培养24h后，再次划线接种在MRS 固体培养基上，经分离纯化3次后，挑取单个菌落，进行革兰氏染色。将革兰氏染色为阳性的菌落进行增菌培养，在MRS液体培养基(含20％甘油)中-80℃保存。所有菌株在使用前需经过3次传代培养。经MRS分离培养基纯化后，得到圆形，乳白色，边缘整齐，表面光滑，直径1-1.5mm，成对或成链排列菌落，革兰氏染色镜检可见分散、成链排列短杆状菌体。
(2)16S rDNA测序鉴定
将纯化后的菌株，挑取单个菌落至5mL液体培养基中增菌培养过夜，使用生工生物工程(上海)股份有限公司细菌DNA基因组抽提试剂盒提取分离菌株的基因组DNA。
以上述基因组DNA为模板，由生工生物公司合成细菌16S rDNA通用引物 (正向序列：27F：5’-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3’，反向序列：1492R：5’ -TACGGYTACCTTG TTACGACTT-3’)对分离菌株16S rDNA特异性片段进行 PCR扩增，50μLPCR反应体系如表1-2所示。PCR扩增程序设置如下，预变性：94℃、5min；变性：94℃、30s；退火：55℃、30s；延伸：72℃、90 s；30个循环；末端延伸：72℃、10min。
表1 PCR反应体系
Tab.1 Reaction system of PCR
取5μL PCR扩增产物，经1％琼脂糖凝胶电泳检测，在1600bp处有清晰条带的样品进行切胶回收，将胶回收产物连接pMD18-T克隆载体，转化至DH5α感受态细胞，将阳性克隆质粒送往生工生物工程(上海)股份有限公司进行测序分析。将得到的测序结果采用BLAST与NCBI中的数据进行比对确定其种属。 16S rDNA序列比对结果显示，该菌与L.rhamnosus序列一致性达99％。
实施例2复方中药发酵液的制备
步骤一：将实验室保存的鼠李糖乳杆菌PC30-2-1按1％接菌量接种于5mL 灭菌MRS液体培养基，于37℃，150r/min,振荡培养12h，获得种子培养液；
步骤二：称取麦冬30g、半夏15g、人参15g、甘草100g、石膏20g、淡竹叶 15g，按照料液比1:20加水煎煮1h,纱布过滤滤液；再次加等体积水，煎煮30min，合并滤液；
步骤三：将上述所得药渣烘干，称取一定量干燥药渣于锥形瓶中，按照料液比1:10加入蒸馏水，于121℃高压灭菌后冷却至室温；
步骤四：将步骤一的种子培养液按0.5％体积比无菌接入步骤三的锥形瓶中，于37℃，150r/min,振荡培养18h，将上述药渣发酵液于4℃，8000r/min，离心 10min，将离心后所得上清液通过0.45μm滤膜进行真空抽滤，后将滤液于旋转蒸发仪(45℃，75r/min)，旋蒸浓缩至体积比为1:4；得到复方中药发酵液。
实施例3牛津杯法测试复方中药发酵液对大肠杆菌标准株ATCC25922抑菌活性；
将实验室保存的ATCC25922株接于LB液体培养基，于37℃，150r/min,振荡培养至OD600＝0.5(约108CFU/mL)，利用LB液体培养基连续稀释100倍；
取100μL上述培养好的ATCC25922株均匀涂布于LB固体培养基平板，并均匀放置4个灭菌牛津杯，向牛津杯中加入200μL实施例2制备的浓缩发酵液，于37℃恒温培养箱静置培养12h；
观察平板有无抑菌圈，并用直尺测量抑菌圈直径，如图1所示，图1为牛津杯法测试复方中药发酵液对大肠杆菌标准株ATCC25922抑菌活性照片，其中，左侧图代表培养基对照组，右侧代表PC30-2-1，牛津杯实验结果显示，本发明的中药渣浓缩发酵上清液对大肠杆菌ATCC25922株抑菌圈直径约为13-14mm，具有一定抑菌效果。
实施例4
选取7日龄健康洛克鸡雏鸡30只(已完成基础免疫)，适应环境5天，设为试验组和对照组，10只/组，雌雄各半。将本发明实施例2制备的具有抑菌圈发酵液按1％和5％添加量连续饮水饲喂21天，2次/日，于试验第22天，停止添加发酵液，滴鼻感染禽致病性大肠杆菌CC1株0.5mL/只(约109CFU/mL)。攻菌后48h，观察试验鸡状态、临床症状等，翅下采集静脉血，检测血清IL-6、IL-8 等炎症细胞因子水平，每组剖检6只试验鸡，观察器官病变、计算脾脏、法氏囊等器官指数(表2)。
表2复方中药渣发酵液对试验鸡免疫器官指数％
图2为灌服实施例2的制备药渣发酵液的试验鸡的早重曲线图，图3为灌服实施例2的制备药渣发酵液的试验鸡的晚重曲线图，图4为灌服实施例2的制备药渣发酵液的试验鸡的周增重柱状图，从图2-4生长试验结果显示，在21 天添加周期内，中药渣发酵液能够明显提高试验鸡食欲，促进增重，且1％添加量组效果优于5％添加量组。周增重统计结果显示，1％中药渣发酵液添加组在给药第一周即可显著促进雏鸡增重，其中，第二周平均增重达21.82％，与对照组差异极显著，具有较好的促生长效果，有望缩短试验鸡出栏周期。
如表2所示，中药渣发酵液试验鸡脾指数和法氏囊指数与对照组差异均不显著。图5为血清IL-6含量的细胞因子柱状图、图6为血清IL-8含量的细胞因子柱状图、图7为血清IL-10含量的细胞因子柱状图、图8为血清IFN-γ含量的细胞因子柱状图，攻菌试验结果显示，与对照组相比，1％中药渣发酵液能够显著降低血清IL-6、IL-8、IL-10、IFN-γ等细胞因子的分泌，表明其具有一定抗炎效果，1％中药渣发酵液添加组抗炎效果优于5％添加组。
Claims (10)
1.一株鼠李糖乳杆菌，其特征在于，保藏名称为鼠李糖乳杆菌（Lactobacillusrhamnosus）PC30-2-1，保藏单位为：中国典型培养物保藏中心，保藏地址为：中国武汉大学，保藏日期为：2022年1月17日，保藏中心编号为：CCTCC NO:M 2022083。
2.权利要求1所述的鼠李糖乳杆菌在制备由麦冬、半夏、人参、甘草、石膏和淡竹叶组合的复方中药渣发酵液中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的复方中药渣发酵液的制备方法，包括：
步骤一：将权利要求1所述的鼠李糖乳杆菌接种于培养基中，于37℃，150r/min, 振荡培养12-18h，获得种子培养液；
步骤二：将麦冬、半夏、人参、甘草、石膏和淡竹叶切片后，加水煎煮，合并滤液；
步骤三：将步骤二得到的药渣进行烘干，得到的干药渣加入蒸馏水，进行灭菌后冷却至室温，得到药渣培养液；
步骤四：将步骤二的种子培养液接种于步骤三的药渣培养液中，于37℃，150r/min, 振荡培养12-18h，离心收集发酵上清，得到复方中药渣发酵液。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的步骤一的培养基为MRS液体培养基。
5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的步骤二中中药原料配比为：麦冬30-50份、半夏15-25份、人参10-15份、甘草50-100份、石膏20-30份、淡竹叶10-15份。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的步骤二中中药原料配比为：麦冬30份、半夏15份、人参15份、甘草100份、石膏20份、淡竹叶15份。
7.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的步骤二中煎煮次数为2次，第一次煎煮时间为1h，第二次煎煮时间为30min，料液比为1:20。
8.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的步骤三的烘干温度为室温，晾晒烘干时间为48h，所述的步骤三中灭菌温度为121℃，压力为103.4kPa。
9.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的步骤三中药渣和蒸馏水的料液比为1:10。
10.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的步骤四离心收集包括：将药渣发酵液于4℃，8000r/min，离心10 min，将离心后所得上清液通过0.45μm滤膜进行真空抽滤，后将滤液于旋转蒸发仪45℃，75r/min，旋蒸浓缩至体积比为1:4。
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Citations (4)
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|---|---|---|---|---|
| CN105878554A (zh) * | 2016-06-20 | 2016-08-24 | 三株福尔制药有限公司 | 一种益生菌发酵八珍汤组合物及其制备方法和应用 |
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| CN113116919A (zh) * | 2019-12-26 | 2021-07-16 | 儒医(北京)科技有限公司 | 一种抗hpv与hsv的中药微生态复方制剂及其制备方法 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105878554A (zh) * | 2016-06-20 | 2016-08-24 | 三株福尔制药有限公司 | 一种益生菌发酵八珍汤组合物及其制备方法和应用 |
| CN108208311A (zh) * | 2017-11-30 | 2018-06-29 | 浦江县昂宝生物技术有限公司 | 含有海参活性多肽的野猪饲料制备方法 |
| CN109965121A (zh) * | 2019-05-06 | 2019-07-05 | 王朋 | 一种中猪饲料的制备方法 |
| CN113116919A (zh) * | 2019-12-26 | 2021-07-16 | 儒医(北京)科技有限公司 | 一种抗hpv与hsv的中药微生态复方制剂及其制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
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| 益生微生物在健胃消食片药渣开发中的应用;邓侃，等;江西农业大学学报;第37卷(第4期);738-742 * |
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