CN115885978A - 乳牙间充质干细胞冻存液及其冻存方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种乳牙间充质干细胞冻存液，包括有干细胞基础培养基、血小板裂解物、渗透性保护剂和神经营养类注射液；所述神经营养类注射液为甲钴胺注射液；本发明的乳牙间充质干细胞冻存液可以针对提高干细胞潜在治疗效果的间充质干细胞的冻存液，能够长时间冻存乳牙间充质干细胞，以长时间保持活性和保护细胞；同时又能在细胞冻存液的作用下诱导干细胞的分化，从而提高潜在治疗效果，解冻复苏后，保持较高活性的乳牙间充质干细胞就可以快速投入到临床治疗中，不需要再经过培养基的培养。
Description
技术领域
本发明涉及干细胞冻存技术领域，特别是一种乳牙间充质干细胞冻存液及其冻存方法。
背景技术
干细胞在无菌条件下从人体自身组织中取出，经过分离、纯化后在模拟生理条件下，在体外进行培养，使其不断分化增殖，保持良好的生长状态和增殖活力，然后注入体内。细胞冻存是利用冻存技术将细胞置于-196℃的液氮中低温保存，可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，这样在需要的时候再复苏细胞用于临床应用。适度地保存一定量的细胞，可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种，起到了细胞保种的作用。除此之外，还可以利用细胞冻存的形式来购买、寄赠、交换和运送某些细胞。细胞冻存时加入冻存液，可使溶液冰点降低，加之在缓慢冻结条件下，细胞内水分透出，减少了冰晶形成，从而避免细胞损伤。
例如中国公开专利CN 110199984 A中，公开了一种脐带间充质干细胞冻存液及其用途，在其实施例二至五中记载了，冻存前后通过流式细胞仪对脐带干细胞进行细胞表面抗原标记表达的分析表明脐带间充质干细胞经该冻存液冻存后表型无明显改变；冻存的脐带间充质干细胞与未冻存的脐带间充质干细胞在体外具有相同的向软骨分化的能力，能力无明显区别；冻存的脐带间充质干细胞与未冻存的脐带间充质干细胞在体外具有相同的向成骨分化的能力，能力无明显区别。
可知，现有的细胞冻存液并不一定能够促进干细胞向其他类型细胞的分化。目前也并无特异性针对提高干细胞潜在治疗效果的间充质干细胞的冻存液。
乳牙间充质干细胞是从儿童乳牙组织中分离出来的间充质干细胞，它具有自我更新、多向分化的能力。而且少量的牙髓间充质干细胞能够通过分裂增殖获得更多的乳牙间充质干细胞。除了生成牙组织细胞，还能“变身”为其他类型细胞，如神经细胞、肌肉细胞、软骨细胞等，可以用于机体的组织修复。此前的体内研究表明，乳牙干细胞可重建功能性的牙本质/牙髓复合体以及其他组织，如骨头、牙骨质、血管和神经组织，并且经过广泛的研究，除了牙科疾病，乳牙干细胞对各种系统性疾病如脊髓损伤、帕金森氏症、拥有同样的医用价值。
乳牙间充质干细胞能够分化为如神经细胞、肌肉细胞、软骨细胞等，可以用于机体的组织修复。但促进乳牙间充质干细胞的分化培养大多是采用专门的体外培养基。例如中国公开专利CN 108753710 A中，记载了一种无血清完全培养基及其应用，包括依次或混合使用的以下两种培养基：其中，培养基I是在基础培养基中添加L-谷氨酰胺、1％-4％能有效促进细胞粘附和扩展的血清替代物，L-谷氨酰胺的浓度为2mM/L；培养基II是在基础培养基中添加L-谷氨酰胺、7％-10％用于培养ESC和iPSC的血清替代物，L-谷氨酰胺的浓度为2mM/L。本发明还提供了所述无血清完全养基在培养间充质干细胞中的应用。本发明所使用的培养基成分简单配制简便，提供的乳牙间充质干细胞培养方法有利于体外培养人乳牙间充质干细胞，维持干细胞的“干性”及多向分化能力。
但是这种专门的培养基来培养乳牙间充质干细胞的方式不利于长期保存乳牙间充质干细胞，只能在短时间内培养乳牙间充质干细胞，促使其分化，如果长时间培养会存在培养时细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种，且培养时间较长，可能会导致离体的乳牙间充质干细胞的活性降低的问题。
综上可知，现有的细胞冻存液并不一定能够促进乳牙间充质干细胞向其他类型细胞的分化，现有的干细胞培养基又不能够较长时间保存保护细胞。如果细胞冻存液既能够长时间冻存乳牙间充质干细胞，以长时间保持活性和保护细胞；同时又能在细胞冻存液的作用下诱导干细胞的分化，从而提高潜在治疗效果，那么解冻复苏后，保持较高活性的乳牙间充质干细胞就可以快速投入到临床治疗中，不需要再经过培养基的培养。因此需要一种可以针对提高干细胞潜在治疗效果的间充质干细胞的冻存液。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的缺点，提供一种乳牙间充质干细胞冻存液及其应用、冻存方法。
本发明的目的通过以下技术方案来实现：一种乳牙间充质干细胞冻存液，包括有干细胞基础培养基、血小板裂解物、渗透性保护剂和神经营养类注射液；所述神经营养类注射液为甲钴胺注射液；
所述渗透性保护剂为二甲基亚砜；
按照重量份数，包括有5-15份二甲基亚砜、80-90份干细胞基础培养基、0.5-2份的血小板裂解物；0.1-1份的甲钴胺注射液；
按照重量份数，包括有10份二甲基亚砜、87份干细胞基础培养基、2份的血小板裂解物和1份的甲钴胺注射液；
本发明还提供一种乳牙间充质干细胞的冻存方法，包括如下步骤，
1）配置权利要求1-5中任一项所述的细胞冻存液；
2）将乳牙间充质干细胞培养至P4代，消化离心；
3）使用步骤1）的冻存液重悬步骤2）收集到的乳牙间充质干细胞；
3）放入-80℃进行降温，6小时后放入液氮中保存；
进一步的，乳牙间充质干细胞在冻存液中的密度为：1×106 -1×107 /mL；
进一步的，冻存后复苏步骤为：将细胞从液氮中取出，放入30-40℃水浴锅中，轻轻摇晃至细胞完全融化；
进一步的，冻存复苏后的乳牙间充质干细胞用于神经类疾病的治疗；
更进一步的技术方案是，冻存复苏后的乳牙间充质干细胞用于大鼠三叉神经痛模型的治疗。
本发明具有以下优点：
1、渗透性保护剂，可迅速透入细胞，提高细胞膜对水的通透性，降低冰点，延缓冻结过程，避免细胞内水分形成细胞内冰晶，避免胞内冰晶对细胞的损伤；
2、干细胞基础培养基与血小板裂解物能够维持细胞冻存前的渗透压并保持对细胞的营养；血小板裂解物可以降低溶液中电解质浓度，减少阳离子进入细胞的数量；干细胞培养基是无血清、不含异源动物成分的人类干细胞培养基，可促进乳牙间充质干细胞的生长，同时还能保持多向分化潜能；
3、甲钴胺注射液为神经营养类注射液，易转移至细胞的细胞器，从而促进核酸和蛋白质的合成，并且经实验发现甲钴胺可诱导人乳牙干细胞向神经元样细胞特异性分化，进而提高乳牙干细胞对神经类疾病的潜在治疗效果；
4、本发明提供的乳牙间充质干细胞冻存液，冻存一年后复苏的乳牙间充质干细胞活率能够达到95%，同时，复苏的乳牙间充质干细胞在对神经类疾病的治疗效果上明显增强；使用本发明的冻存液对乳牙间充质干细胞进行一年的冻存后，将从冻存中复苏的乳牙间充质干细胞用于大鼠三叉神经痛模型的治疗，在对比例提升了机械疼痛的阈值的情况下，本发明将机械疼痛的阈值进一步提升，增强了乳牙间充质干细胞对大鼠三叉神经痛的治疗效果；因此，本发明的乳牙间充质干细胞冻存液既能够长时间冻存乳牙间充质干细胞，长时间保持细胞活力，并且长时间保护细胞不受污染或丢失；同时又能在细胞冻存液的作用下诱导乳牙间充质干细胞向神经元样细胞分化，从而增强乳牙间充质潜在治疗效果。
附图说明
图1 为A、B组乳牙间充质干细胞的细胞形态。
图2 为A、B组神经元样细胞标志物神经元特异性烯醇化酶（Nestin）的mRNA表达结果。
图3 为A、B组神经元样细胞标志物神经巢蛋白（NSE）的mRNA表达结果。
具体实施方式
为使本发明实施方式的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施方式中的附图，对本发明实施方式中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施方式是本发明一部分实施方式，而不是全部的实施方式。通常在此处附图中描述和示出的本发明实施方式的组件可以以各种不同的配置来布置和设计。
因此，以下对在附图中提供的本发明的实施方式的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施方式。基于本发明中的实施方式，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施方式，都属于本发明保护的范围。
需要说明的是，在不冲突的情况下，本发明中的实施方式及实施方式中的特征可以相互组合。
应注意到：相似的标号和字母在下面的附图中表示类似项，因此，一旦某一项在一个附图中被定义，则在随后的附图中不需要对其进行进一步定义和解释。
在本发明的描述中，需要说明的是，术语“中心”、“上”、“下”、“左”、“右”、“竖直”、“水平”、“内”、“外”等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，或者是该发明产品使用时惯常摆放的方位或位置关系，或者是本领域技术人员惯常理解的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。此外，术语“第一”、“第二”等仅用于区分描述，而不能理解为指示或暗示相对重要性。
在本发明的描述中，还需要说明的是，除非另有明确的规定和限定，术语“设置”、“安装”、“相连”、“连接”应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或一体地连接；可以是机械连接，也可以是电连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连，可以是两个元件内部的连通。对于本领域的普通技术人员而言，可以具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。
实施例1：一种乳牙间充质干细胞冻存液，包括有干细胞基础培养基、血小板裂解物、渗透性保护剂和神经营养类注射液；所述神经营养类注射液为甲钴胺注射液；
渗透性保护剂，可迅速透入细胞，提高细胞膜对水的通透性，降低冰点，延缓冻结过程，避免细胞内水分形成细胞内冰晶，避免胞内冰晶对细胞的损伤；干细胞基础培养基与血小板裂解物能够维持细胞冻存前的渗透压并保持对细胞的营养；血小板裂解物可以降低溶液中电解质浓度，减少阳离子进入细胞的数量；干细胞培养基是无血清、不含异源动物成分的人类干细胞培养基，可促进乳牙间充质干细胞的生长，同时还能保持多向分化潜能；甲钴胺注射液为神经营养类注射液，易转移至细胞的细胞器，从而促进核酸和蛋白质的合成，并且经实验发现甲钴胺可诱导人乳牙干细胞向神经元样细胞特异性分化，进而提高乳牙干细胞对神经类疾病的潜在治疗效果；本发明提供的乳牙间充质干细胞冻存液，冻存一年后复苏的乳牙间充质干细胞活率能够达到95%，同时，复苏的乳牙间充质干细胞在对神经类疾病的治疗效果上明显增强；因此，本发明的乳牙间充质干细胞冻存液既能够长时间冻存乳牙间充质干细胞，长时间保持细胞活力，并且长时间保护细胞不受污染或丢失；同时又能在细胞冻存液的作用下诱导乳牙间充质干细胞向神经元样细胞分化，从而增强乳牙间充质潜在治疗效果。干细胞基础培养基和血小板裂解物采用常规种类，本实施中，采用BI公司的干细胞基础培养基和BI公司的血小板裂解物。
所述渗透性保护剂为二甲基亚砜；二甲基亚砜（DMSO）是细胞冻存中常用的低温保护剂，可迅速透入细胞，提高细胞膜对水的通透性，降低冰点，延缓冻结过程，能使细胞内水分在冻结前透出细胞外，在胞外形成冰晶，减少胞内冰晶，从而减少冰晶对细胞的损伤。本实施例优选二甲基亚砜作为渗透性保护剂，与甲钴胺注射液之间不会产生相互干扰。
按照重量份数，包括有5-15份二甲基亚砜、80-90份干细胞基础培养基、0.5-2份的血小板裂解物；0.1-1份的甲钴胺注射液。本实施例中，细胞冻存液采用合适的组分配比，有利于各组分能够相互协调。其中，甲钴胺注射液包括0.1-1份，若甲钴胺注射液的用量太低，可能无法增强乳牙间充质干细胞在神经疾病上的治疗效果；若甲钴胺注射液的用量太高，则可能引发细胞代谢异常。
实施例2：一种乳牙间充质干细胞冻存液，包括有干细胞基础培养基、血小板裂解物、渗透性保护剂和神经营养类注射液；所述神经营养类注射液为甲钴胺注射液；
渗透性保护剂，可迅速透入细胞，提高细胞膜对水的通透性，降低冰点，延缓冻结过程，避免细胞内水分形成细胞内冰晶，避免胞内冰晶对细胞的损伤；干细胞基础培养基与血小板裂解物能够维持细胞冻存前的渗透压并保持对细胞的营养；血小板裂解物可以降低溶液中电解质浓度，减少阳离子进入细胞的数量；干细胞培养基是无血清、不含异源动物成分的人类干细胞培养基，可促进乳牙间充质干细胞的生长，同时还能保持多向分化潜能；甲钴胺注射液为神经营养类注射液，易转移至细胞的细胞器，从而促进核酸和蛋白质的合成，并且经实验发现甲钴胺可诱导人乳牙干细胞向神经元样细胞特异性分化，进而提高乳牙干细胞对神经类疾病的潜在治疗效果；本发明提供的乳牙间充质干细胞冻存液，冻存一年后复苏的乳牙间充质干细胞活率能够达到95%，同时，复苏的乳牙间充质干细胞在对神经类疾病的治疗效果上明显增强；因此，本发明的乳牙间充质干细胞冻存液既能够长时间冻存乳牙间充质干细胞，长时间保持细胞活力，并且长时间保护细胞不受污染或丢失；同时又能在细胞冻存液的作用下诱导乳牙间充质干细胞向神经元样细胞分化，从而增强乳牙间充质潜在治疗效果。干细胞基础培养基和血小板裂解物采用常规种类，本实施中，可采用BI干细胞基础培养基和BI血小板裂解物。
所述渗透性保护剂为二甲基亚砜；二甲基亚砜（DMSO）是细胞冻存中常用的低温保护剂，可迅速透入细胞，提高细胞膜对水的通透性，降低冰点，延缓冻结过程，能使细胞内水分在冻结前透出细胞外，在胞外形成冰晶，减少胞内冰晶，从而减少冰晶对细胞的损伤。本实施例优选二甲基亚砜作为渗透性保护剂，与甲钴胺注射液之间不会产生相互干扰。
按照重量份数，包括有5份二甲基亚砜、80份干细胞基础培养基、0.5份的血小板裂解物；0.1份的甲钴胺注射液。本实施例中，细胞冻存液采用合适的组分配比，有利于各组分能够相互协调。其中，甲钴胺注射液包括0.1份，若甲钴胺注射液的用量太低，可能无法增强乳牙间充质干细胞在神经疾病上的治疗效果。
实施例3：一种乳牙间充质干细胞冻存液，包括有干细胞基础培养基、血小板裂解物、渗透性保护剂和神经营养类注射液；所述神经营养类注射液为甲钴胺注射液；
渗透性保护剂，可迅速透入细胞，提高细胞膜对水的通透性，降低冰点，延缓冻结过程，避免细胞内水分形成细胞内冰晶，避免胞内冰晶对细胞的损伤；干细胞基础培养基与血小板裂解物能够维持细胞冻存前的渗透压并保持对细胞的营养；血小板裂解物可以降低溶液中电解质浓度，减少阳离子进入细胞的数量；干细胞培养基是无血清、不含异源动物成分的人类干细胞培养基，可促进乳牙间充质干细胞的生长，同时还能保持多向分化潜能；甲钴胺注射液为神经营养类注射液，易转移至细胞的细胞器，从而促进核酸和蛋白质的合成，并且经实验发现甲钴胺可诱导人乳牙干细胞向神经元样细胞特异性分化，进而提高乳牙干细胞对神经类疾病的潜在治疗效果；本发明提供的乳牙间充质干细胞冻存液，冻存一年后复苏的乳牙间充质干细胞活率能够达到95%，同时，复苏的乳牙间充质干细胞在对神经类疾病的治疗效果上明显增强；因此，本发明的乳牙间充质干细胞冻存液既能够长时间冻存乳牙间充质干细胞，长时间保持细胞活力，并且长时间保护细胞不受污染或丢失；同时又能在细胞冻存液的作用下诱导乳牙间充质干细胞向神经元样细胞分化，从而增强乳牙间充质潜在治疗效果。干细胞基础培养基和血小板裂解物采用常规种类，本实施中，可采用BI干细胞基础培养基和BI血小板裂解物。
所述渗透性保护剂为二甲基亚砜；二甲基亚砜（DMSO）是细胞冻存中常用的低温保护剂，可迅速透入细胞，提高细胞膜对水的通透性，降低冰点，延缓冻结过程，能使细胞内水分在冻结前透出细胞外，在胞外形成冰晶，减少胞内冰晶，从而减少冰晶对细胞的损伤。本实施例优选二甲基亚砜作为渗透性保护剂，与甲钴胺注射液之间不会产生相互干扰。
按照重量份数，包括有15份二甲基亚砜、90份干细胞基础培养基、2份的血小板裂解物；1份的甲钴胺注射液。本实施例中，细胞冻存液采用合适的组分配比，有利于各组分能够相互协调。其中，甲钴胺注射液包1份，若甲钴胺注射液的用量太高，则可能引发细胞代谢异常。
实施例4：一种乳牙间充质干细胞冻存液，包括有干细胞基础培养基、血小板裂解物、渗透性保护剂和神经营养类注射液；所述神经营养类注射液为甲钴胺注射液；
渗透性保护剂，可迅速透入细胞，提高细胞膜对水的通透性，降低冰点，延缓冻结过程，避免细胞内水分形成细胞内冰晶，避免胞内冰晶对细胞的损伤；干细胞基础培养基与血小板裂解物能够维持细胞冻存前的渗透压并保持对细胞的营养；血小板裂解物可以降低溶液中电解质浓度，减少阳离子进入细胞的数量；干细胞培养基是无血清、不含异源动物成分的人类干细胞培养基，可促进乳牙间充质干细胞的生长，同时还能保持多向分化潜能；甲钴胺注射液为神经营养类注射液，易转移至细胞的细胞器，从而促进核酸和蛋白质的合成，并且经实验发现甲钴胺可诱导人乳牙干细胞向神经元样细胞特异性分化，进而提高乳牙干细胞对神经类疾病的潜在治疗效果；本发明提供的乳牙间充质干细胞冻存液，冻存一年后复苏的乳牙间充质干细胞活率能够达到95%，同时，复苏的乳牙间充质干细胞在对神经类疾病的治疗效果上明显增强；因此，本发明的乳牙间充质干细胞冻存液既能够长时间冻存乳牙间充质干细胞，长时间保持细胞活力，并且长时间保护细胞不受污染或丢失；同时又能在细胞冻存液的作用下诱导乳牙间充质干细胞向神经元样细胞分化，从而增强乳牙间充质潜在治疗效果。干细胞基础培养基和血小板裂解物采用常规种类，本实施中，可采用BI干细胞基础培养基和BI血小板裂解物。
所述渗透性保护剂为二甲基亚砜；二甲基亚砜（DMSO）是细胞冻存中常用的低温保护剂，可迅速透入细胞，提高细胞膜对水的通透性，降低冰点，延缓冻结过程，能使细胞内水分在冻结前透出细胞外，在胞外形成冰晶，减少胞内冰晶，从而减少冰晶对细胞的损伤。本实施例优选二甲基亚砜作为渗透性保护剂，与甲钴胺注射液之间不会产生相互干扰。
按照重量份数，包括有10-12份二甲基亚砜、84-89份干细胞基础培养基、0.5-2份的血小板裂解物；0.5-1份的甲钴胺注射液。本实施例中，细胞冻存液采用合适的组分配比，有利于各组分能够相互协调。其中，甲钴胺注射液包括0.5-1份，若甲钴胺注射液的用量太低，可能无法增强乳牙间充质干细胞在神经疾病上的治疗效果；若甲钴胺注射液的用量太高，则可能引发细胞代谢异常。
实施例5：一种乳牙间充质干细胞冻存液，包括有干细胞基础培养基、血小板裂解物、渗透性保护剂和神经营养类注射液；所述神经营养类注射液为甲钴胺注射液；
渗透性保护剂，可迅速透入细胞，提高细胞膜对水的通透性，降低冰点，延缓冻结过程，避免细胞内水分形成细胞内冰晶，避免胞内冰晶对细胞的损伤；干细胞基础培养基与血小板裂解物能够维持细胞冻存前的渗透压并保持对细胞的营养；血小板裂解物可以降低溶液中电解质浓度，减少阳离子进入细胞的数量；干细胞培养基是无血清、不含异源动物成分的人类干细胞培养基，可促进乳牙间充质干细胞的生长，同时还能保持多向分化潜能；甲钴胺注射液为神经营养类注射液，易转移至细胞的细胞器，从而促进核酸和蛋白质的合成，并且经实验发现甲钴胺可诱导人乳牙干细胞向神经元样细胞特异性分化，进而提高乳牙干细胞对神经类疾病的潜在治疗效果；本发明提供的乳牙间充质干细胞冻存液，冻存一年后复苏的乳牙间充质干细胞活率能够达到95%，同时，复苏的乳牙间充质干细胞在对神经类疾病的治疗效果上明显增强；因此，本发明的乳牙间充质干细胞冻存液既能够长时间冻存乳牙间充质干细胞，长时间保持细胞活力，并且长时间保护细胞不受污染或丢失；同时又能在细胞冻存液的作用下诱导乳牙间充质干细胞向神经元样细胞分化，从而增强乳牙间充质潜在治疗效果。干细胞基础培养基和血小板裂解物采用常规种类，本实施中，可采用BI干细胞基础培养基和BI血小板裂解物。
所述渗透性保护剂为二甲基亚砜；二甲基亚砜（DMSO）是细胞冻存中常用的低温保护剂，可迅速透入细胞，提高细胞膜对水的通透性，降低冰点，延缓冻结过程，能使细胞内水分在冻结前透出细胞外，在胞外形成冰晶，减少胞内冰晶，从而减少冰晶对细胞的损伤。本实施例优选二甲基亚砜作为渗透性保护剂，与甲钴胺注射液之间不会产生相互干扰。
按照重量份数，包括有10份二甲基亚砜、87份干细胞基础培养基、2份的血小板裂解物；1份的甲钴胺注射液。本实施例中，细胞冻存液采用合适的组分配比，有利于各组分能够相互协调。其中，甲钴胺注射液包括1份，若甲钴胺注射液的用量太低，可能无法增强乳牙间充质干细胞在神经疾病上的治疗效果；若甲钴胺注射液的用量太高，则可能引发细胞代谢异常。
乳牙间充质干细胞在冻存液中的密度为：1×106 -1×107 /mL。
实施例6：一种乳牙间充质干细胞的冻存方法，包括如下步骤，
1）配置实施例5所述的细胞冻存液；
2）将乳牙间充质干细胞培养至P4代，消化离心；
3）使用步骤1）的冻存液重悬步骤2）收集到的乳牙间充质干细胞；
3）放入-80℃进行降温，6小时后放入液氮中保存；
乳牙间充质干细胞在冻存液中的密度为：1×106 -1×107 /mL；
冻存后复苏步骤为：将细胞从液氮中取出，放入30-40℃水浴锅中，轻轻摇晃至细胞完全融化。
实施例6：冻存一年后乳牙间充质干细胞复苏活力实验
实验组1：按照重量份数，冻存液为：10份二甲基亚砜，84份BI干细胞基础培养基，0.5份BI血小板裂解物，0.5份甲钴胺注射液；
实验组2：按照重量份数，冻存液为：12份二甲基亚砜，89份BI干细胞基础培养基，2份BI血小板裂解物，1份甲钴胺注射液；
实验组3：按照重量份数，冻存液为：10份二甲基亚砜，87份BI干细胞基础培养基，2份BI血小板裂解物，1份甲钴胺注射液；
对比例1：按照重量份数，冻存液为：10份二甲基亚砜，84份BI干细胞基础培养基，0.5份BI血小板裂解物；
对比例2：按照重量份数，冻存液为：12份二甲基亚砜，89份BI干细胞基础培养基，2份BI血小板裂解物；
对比例3：按照重量份数，冻存液为：10份二甲基亚砜，87份BI干细胞基础培养基，2份BI血小板裂解物。
实验组1-3和对比例1-3冻存一年后复苏的乳牙间充质干细胞活率如下表1所示。
细胞活率= 活细胞数目/（活细胞数目+ 死细胞数目）
表1 实验组1-3和对比例1-3冻存一年后复苏的乳牙间充质干细胞活率
从表1的结果可知，本发明提供的冻存液，对乳牙间充质干细胞进行冻存一年后复苏，其活力并不会受到影响，仍旧可以达到95%以上。这说明冻存液中的甲钴胺不会对细胞的活力造成负面影响。
实施例7：大鼠机械疼痛阈值变化实验
本实施例采用慢性压迫损伤眶下神经建立大鼠三叉神经痛模型：所有手术均在全身麻醉下进行，使用2%戊巴比妥钠，剂量为 40 mg/kg进行腹腔注射。大鼠取仰卧位置放置于操作台上，手术切口在口内由左侧第一磨牙附近开始，沿龈颊沟黏膜切开约1cm，钝性分离皮下组织直至骨面。分离左侧眶下神经，在神经远端与近端分别进行结扎，相距2mm。手术切口使用缝线缝合。假手术组只分离不结扎眶下神经，其余操作相同。
治疗：将大鼠进行分组。分别复苏下述6组方法冻存的乳牙间充质干细胞，后用PBS稀释重悬。实验组1-3，每只大鼠结扎眶下神经局部注实验组1-3组复苏的5×105细胞（PBS稀释至200μL），对比例1-3组，每只大鼠结扎眶下神经局部注射对比例1-3组复苏的5×105细胞（PBS稀释至200μL）。PBS组每只大鼠局部注射PBS200μL。
机械疼痛阈值测定：动物模型建立后，通过校准后的Von Frey纤维丝对机械疼痛阈值进行测试。通过Up-Down Calculators计算机械疼痛阈值。
实验组1：按照重量份数，冻存液为：10份二甲基亚砜，84份BI干细胞基础培养基，0.5份BI血小板裂解物，0.5份甲钴胺注射液；
实验组2：按照重量份数，冻存液为：12份二甲基亚砜，89份BI干细胞基础培养基，2份BI血小板裂解物，1份甲钴胺注射液；
实验组3：按照重量份数，冻存液为：10份二甲基亚砜，87份BI干细胞基础培养基，2份BI血小板裂解物，1份甲钴胺注射液；
对比例1：按照重量份数，冻存液为：10份二甲基亚砜，84份BI干细胞基础培养基，0.5份BI血小板裂解物；
对比例2：按照重量份数，冻存液为：12份二甲基亚砜，89份BI干细胞基础培养基，2份BI血小板裂解物；
对比例3：按照重量份数，冻存液为：10份二甲基亚砜，87份BI干细胞基础培养基，2份BI血小板裂解物。
实验组1-3和对比例1-3冻存一年后复苏的乳牙间充质干细胞对大鼠机械阈值的影响结果如下表2所示。
表2 实验组1-3和对比例1-3冻存一年后复苏的乳牙间充质干细胞对大鼠机械阈值的影响结果
从表2的结果可以看出，使用本专利发明的冻存液对乳牙间充质干细胞进行一年的冻存后，将从冻存中复苏的乳牙间充质干细胞用于大鼠三叉神经痛模型的治疗，在对比例提升了机械疼痛的阈值的情况下，本发明的实施例由将机械疼痛的阈值进一步提升，增强了乳牙间充质干细胞对大鼠三叉神经痛的治疗效果；这可能是因为细胞冻存液中的甲钴胺与乳牙间充质干细胞接触后发生了某种作用。导致乳牙间充质干细胞产生了变化；这种促进乳牙间充质干细胞发生变化的作用可能发生在体外，也可能发生在注射后的大鼠体内。
实施例8：甲钴胺诱导乳牙干细胞向神经元样细胞的分化实验
乳牙间充质干细胞（SHED）原代培养后传至第4代，消化后培养，经过24小时，细胞完全贴壁后，吸去培养基，按不同组别分别加入下列培养液：
A组（对照组）：10%FBS的DMEM完全培养液
B组（实验组）：加入含75μg/mL甲钴胺浓度的10%FBS的DMEM培养液。
隔天更换同种培养液，96小时后检测神经元样细胞标志物神经元特异性烯醇化酶（Nestin）和神经巢蛋白（NSE）。
实验结果如图1-3。如图1所示，乳牙间充质干细胞（SHED）经75μg/mL甲钴胺（B组）诱导96h后，细胞出现神经元样形态改变：细胞向周围长出较长的突触，有立体感，折光性增强，并且相邻细胞间的突触开始出现连接，而不加甲钴胺的对照组（A组）细胞96小时后形态无明显变化。这可能说明甲钴胺诱导了乳牙间充质干细胞向神经元样细胞分化，从而增强了其在神经性疾病上的潜在治疗效果。
图2和图3所示：乳牙间充质干细胞（SHED）经75μg/mL甲钴胺诱导96h后，RT-PCR结果显示神经元样细胞标志物神经元特异性烯醇化酶（Nestin）和神经巢蛋白（NSE）的mRNA表达上调，说明甲钴胺可以诱导乳牙干细胞向神经元样细胞分化。
尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换,凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (9)
1.一种乳牙间充质干细胞冻存液，其特征在于：包括有干细胞基础培养基、血小板裂解物、渗透性保护剂和神经营养类注射液；所述神经营养类注射液为甲钴胺注射液。
2.根据权利要求1所述的乳牙间充质干细胞冻存液，其特征在于：所述渗透性保护剂为二甲基亚砜。
3.根据权利要求2所述的乳牙间充质干细胞冻存液，其特征在于：按照重量份数，包括有5-15份二甲基亚砜、80-90份干细胞基础培养基、0.5-2份的血小板裂解物；0.1-1份的甲钴胺注射液。
4.根据权利要求3所述的乳牙间充质干细胞冻存液，其特征在于：按照重量份数，包括有10份二甲基亚砜、87份干细胞基础培养基、2份的血小板裂解物和1份的甲钴胺注射液。
5.一种乳牙间充质干细胞的冻存方法，其特征在于：包括如下步骤，
1）配置权利要求1-4中任一项所述的细胞冻存液；
2）将乳牙间充质干细胞培养至P4代，消化离心；
3）使用步骤1）的冻存液重悬步骤2）收集到的乳牙间充质干细胞；
3）放入-80℃进行降温，6小时后放入液氮中保存。
6.根据权利要求5所述的乳牙间充质干细胞冻存方法，其特征在于：乳牙间充质干细胞在冻存液中的密度为：1×106 -1×107 /mL。
7.根据权利要求8所述的乳牙间充质干细胞的冻存方法，其特征在于：冻存后复苏步骤为：将细胞从液氮中取出，放入30-40℃水浴锅中，轻轻摇晃至细胞完全融化。
8.根据权利要求7所述的乳牙间充质干细胞的冻存方法，其特征在于：冻存复苏后的乳牙间充质干细胞用于神经类疾病的治疗。
9.根据权利要求8所述的乳牙间充质干细胞的冻存方法，其特征在于：冻存复苏后的乳牙间充质干细胞用于大鼠三叉神经痛模型的治疗。
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Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105941390A (zh) * | 2016-05-20 | 2016-09-21 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 一种牙髓或牙髓干细胞的冻存液及其冻存方法 |
| CN107494517A (zh) * | 2017-08-07 | 2017-12-22 | 章毅 | 无血清冻存液及其在冻存间充质干细胞中的应用 |
| CN109511651A (zh) * | 2019-01-04 | 2019-03-26 | 青岛麦迪赛斯生物科技有限公司 | 一种人脐带间充质干细胞无血清冻存液的制备方法 |
| CN110317781A (zh) * | 2019-07-18 | 2019-10-11 | 天津博雅秀岩生物技术有限公司 | 间充质干细胞冻存和复苏的方法 |
| CN110338189A (zh) * | 2019-07-09 | 2019-10-18 | 浙江优牙生物科技有限公司 | 一种牙髓组织无血清冻存及复苏方法及冻存液 |
| CN112538456A (zh) * | 2019-09-20 | 2021-03-23 | 北京干细胞与再生医学研究院 | 一种多能干细胞、药物组合物及其制备方法与用途 |
| CN114557337A (zh) * | 2022-02-21 | 2022-05-31 | 大连博格林生物科技有限公司 | 脐带间充质干细胞无蛋白非程序冻存液及其制备方法 |
| CN114615886A (zh) * | 2019-08-29 | 2022-06-10 | 得克萨斯大学体系董事会 | 细胞冷冻保存培养基 |
| CN115152743A (zh) * | 2022-07-12 | 2022-10-11 | 河南省银丰生物工程技术有限公司 | 一种人脐带间充质干细胞无血清冻存液的制备方法 |
-
2022
- 2022-12-30 CN CN202211719925.2A patent/CN115885978B/zh active Active
Patent Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105941390A (zh) * | 2016-05-20 | 2016-09-21 | 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 | 一种牙髓或牙髓干细胞的冻存液及其冻存方法 |
| CN107494517A (zh) * | 2017-08-07 | 2017-12-22 | 章毅 | 无血清冻存液及其在冻存间充质干细胞中的应用 |
| CN109511651A (zh) * | 2019-01-04 | 2019-03-26 | 青岛麦迪赛斯生物科技有限公司 | 一种人脐带间充质干细胞无血清冻存液的制备方法 |
| CN110338189A (zh) * | 2019-07-09 | 2019-10-18 | 浙江优牙生物科技有限公司 | 一种牙髓组织无血清冻存及复苏方法及冻存液 |
| CN110317781A (zh) * | 2019-07-18 | 2019-10-11 | 天津博雅秀岩生物技术有限公司 | 间充质干细胞冻存和复苏的方法 |
| CN114615886A (zh) * | 2019-08-29 | 2022-06-10 | 得克萨斯大学体系董事会 | 细胞冷冻保存培养基 |
| CN112538456A (zh) * | 2019-09-20 | 2021-03-23 | 北京干细胞与再生医学研究院 | 一种多能干细胞、药物组合物及其制备方法与用途 |
| CN114557337A (zh) * | 2022-02-21 | 2022-05-31 | 大连博格林生物科技有限公司 | 脐带间充质干细胞无蛋白非程序冻存液及其制备方法 |
| CN115152743A (zh) * | 2022-07-12 | 2022-10-11 | 河南省银丰生物工程技术有限公司 | 一种人脐带间充质干细胞无血清冻存液的制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 羊明智 等: "甲钴胺体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化", 《中国组织工程研究》, vol. 17, no. 32, pages 5741 - 5748 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN115885978B (zh) | 2024-06-18 |
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