CN1158525C - 免疫测定装置 - Google Patents

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Abstract

一种免疫测定装置包括一色谱条，所述色谱条具有一粘附于其底面的基片和一粘附于其顶面的保护层，其中，在所述色谱条的显色区域的至少部分区域的顶面和/或底面上设置有一空间。所述免疫测定装置可以使试样溶液在所述免疫测定装置的色谱条的显色区域内进行均匀的毛细管流动，因此具有较高的检测准确度。

Description

免疫测定装置
技术领域
本发明涉及一种其中采用了色谱条的免疫测定装置。具体地说，本发明涉及这样一种免疫测定装置，它包括一色谱条，所述色谱条具有一粘附于其底面的基片和一粘附于其顶面的保护层，其中，在所述色谱条的显色区域的至少部分区域的顶面和底面上设置有一空间。
背景技术
众所周知，在一具有色谱条的免疫测定装置中，安排成一系统，由此可以使待检验的加入的试样溶液藉助毛细管流动作用力在所述色谱条内移动，并且在施加所述试样溶液的区域的下游部分上设置有一被分析物检测区域。所述检测区域是以这样一种方式来设置的，即，当到达该处的试样溶液含有一种被分析物时，所述检测区域可以显现出一种颜色或者可以使其显色程度有所降低，由此可以根据所述检测区域的显色程度来对所述被分析物是否存在或其量进行检测或测量。这样一种免疫测定装置在例如JP-A-61-145459(本文中使用的术语“JP-A”指的是“未经审查的、已公开的日本专利申请”)、JP-A-64-32169、JP-A-1-113662、JP-A-1-244370、JP-A-1-63865和JP-W-1-503174(本文中使用的术语“JP-W”指的是“未经审查的、已公开的日本国际专利申请”)中有所描述，这些描述包含在本文中，作为本发明描述的一部分。
这些免疫测定装置中的每一种均具有一色谱条，其中，在其底面上粘附有一基片，并且在其顶面上粘附有一保护层，以保护所述色谱条并防止发生生物事故。
在本发明发明人所进行的研究中发现，试样溶液的毛细管流动作用在色谱带的一个区域内，例如分析试剂固定着的一个区域内，诸如一显色区域内是不均匀的。当试样溶液在一显色区域内的流动不均匀时，所述显色区域内的显色就变得很不规则，从而使得白点和其它类似物形成在所述显色区域内，因此降低了检测的准确性。
作为一种使试样溶液通过毛细管流动作用能均匀地流过一色谱条的尝试，在公开号为No.2590055的专利中揭示了这样一种技术，其中，将一色谱条沿其纵向的两端制成一连续的锯齿(凹-凸)形状，但是，这并不是一种使显色区域内的流动得以均匀的尝试。
发明内容
因此，本发明的目的在于提供这样一种采用色谱条的免疫测定装置，它能使试样溶液在其显色区域内的毛细管流动变得均匀。
本发明的发明人发现，当将一空间设置在在其底面粘附有一基片并且在其顶面粘附有一保护层的一色谱条内的所述显色区域的至少一部分区域内时，就不会出现因显色区域内的毛细管流动作用不规则而引起的白点和其它类似物，并且可以获得较高的检测准确性。因此，本发明是一种免疫测定装置，它包括一色谱条，所述色谱条具有一粘附于其底面的基片和一粘附于其顶面的保护层，其特点是，在所述色谱条的一显色区域的至少部分区域的顶面和/或底面上设置有一空间。
附图说明
图1是本发明免疫测定装置的一实施例的示意图。在该图中，A是一防护薄片的涂有糊状粘结剂一侧的平面图，B是所述免疫测定装置的侧视图。
图2是本发明免疫测定装置的一实施例的防护薄片的涂糊状粘结剂一侧的平面图。
图3是本发明免疫测定装置的一实施例的示意图。在该图中，A是所述基片的涂湖状粘结剂一侧的视图，B是所述基片涂糊状粘结剂一侧的平面图。
图4是本发明免疫测定装置的一实施例的示意图。在该图中，A是所述防护薄片的涂糊状粘结剂一侧的平面图，B是所述免疫测定装置的侧视图。
图5是本发明免疫测定装置的一实施例的防护薄片的涂糊状粘结剂一侧的平面图。
图6是本发明免疫测定装置的一实施例的侧视图。
具体实施方式
如图1所示，本发明的所示免疫测定装置具有一色谱条1，其中一基片2粘附于其底面上，并且一保护层3粘附于其顶面上。
作为色谱条的色谱载体，可以采用本技术领域内已知的任何一种色谱载体。例如，经常使用的有纤维素、硝化纤维、乙酸纤维素和其它类似物。
所述基片和保护层通过将一糊状粘结剂4涂敷于所述基片和保护层上而粘附于所述色谱条上。例如，可以将橡胶、丙烯酸类、乙烯醚聚合物或其它类似物用作所述糊状粘结剂。
当将可溶解在有机溶剂内的硝化纤维或其它类似载体用作所述色谱载体时，所述色谱载体和所述基片可以通过将硝化纤维溶解在一种诸如丙酮等的有机溶剂内并将所述溶液散布在一由聚对苯二甲酸乙二醇酯或其它可溶解在所述溶剂内的类似薄膜所构成的基片上或散布在一具有该薄膜的基片上而粘结起来。这样一种情况也包含在将所述色谱条粘附于本发明的基片的方法中。
所述基片和保护层可以是那些使用色谱条的传统免疫测定装置中所经常采用的基片和保护层。例如，可以使用聚对苯二甲酸乙二醇酯、聚丙烯、聚氯乙烯和其它类似物。
所述色谱条具有一加样区域5，当将一可能含有被分析物的试样溶液施加于所述加样区域中时，所述试样溶液可藉助毛细管流动作用力朝下游方向移动。
所述色谱条在所述加样区域的下游位置还具有一显色区域。所述显色区域是在化验过程中能显色的区域，它包括一用来对试样溶液内的被分析物进行检测的检测区域6。有需要时，可以设置一对照区域7来作为一显色区域。
所述检测区域设置得呈这样一种方式，即，一由标记免疫抗原或抗体组成的示踪物可根据试样溶液内所含有的被分析物(即含在试样溶液内的被分析物)的数量而聚积起来，所述被分析物藉助毛细管流动作用力从所述上游区迁移。本文所使用的术语“根据试样溶液内所含有的被分析物或含在试样溶液内的被分析物的数量”指的是聚积起来的示踪物的数量在夹层测定中增大，或者是所聚积起来的示踪物的数量在竞争测定中减少。也就是，所述检测区域含有一固定化合物，如果需要，借助某一种交联化合物，一被分析物可与所述固定化合物特异地结合(在这种情况中，示踪物也将与所述被分析物特异地结合)或者与所述示踪物相竞争地特异结合。
本文中使用的术语“交联化合物”指的是这样一种物质，它与固定于所述检测区域的所述化合物以及一被分析物都特异地结合。例如，有这样一种情况，其中，抗鼠IgG抗体固定于所述检测区域，并且将一用于被分析物抗原的鼠IgG用作所述交联化合物。而且，还可以将一共轭物用作所述交联化合物，所述共轭物由一种与固定于所述检测区域的化合物特异地结合的化合物以及一与被分析物特异结合的物质构成。在这种情况中，当所述被分析物是一抗原时，与被分析物特异结合的所述物质可以是一抗体，或者当所述被分析物是一抗体时所述物质是一抗原。固定于检测区域的一种化合物和与固定于所述检测区域的该化合物特异结合的一种化合物的组合物可以是，一种是生物素，另一种是抗生物素抗体或抗生物素蛋白，或者一种是糖化物，另一种是结合糖化物的蛋白质。
当一被分析物和一示踪物与固定于所述检测区域的所述化合物竞争地结合时，可以在所述检测区域的下游位置处设置一第二检测区域，以俘获未能在所述检测区域被俘获的所述示踪物。所述第二检测区域也包括在本发明的“检测区域”内。
所使用的标记器的例子包括与显色展开反应有关的酶、金胶体和类似金属胶体、硒胶体和类似非金属胶体，以及显色的树脂微颗粒、显色脂质体、染料微颗粒和类似的显色颗粒。因此，当示踪物积聚或没有积聚在所述检测区域内，所述检测区域的显色程度将改变，从而可以通过用裸眼或利用一仪器对显色程度进行测量而了解一试样溶液存在的被分析物即该被分析物的存在量。
所述对照区域是用来了解一试样溶液是否已适当地通过了所述检测区域的一个区域，并且在需要时，可以以这样一种方式来设置，即，当试样溶液到达所述对照区域时，所述对照区域能显现出一种颜色。有需要时，可以将所述对照区域设置在所述检测区域的下游某位置处。当试样溶液到达对照区域时，显色可以通过一种众所周知方法来进行，例如藉助一PH指示剂、一与显色反应有关的酶或者所述试样溶液内的示踪物，并且使一化合物固定于对照区，当这样一种物质到达所述区域时，该化合物就能显色。
所述示踪物可以预先包含在所述色谱条的一特定区域(色谱带有标记区域8)内，或者在施加试样溶液时与所述试样溶液一起施加。
本文中使用的术语“顶面”指的是粘附所述保护层的色谱条的那一侧面，术语“底面”指的是基片粘附在其上的色谱条的那一侧面。
术语“空间”9指的是没有将基片或保护层粘附于所述色谱条表面的那一部分。
根据本发明，当将一空间仅设置在所述显色区域的某一部分区域内时，试样溶液的毛细管流动是不受干扰的，因此，可以将所述空间设置在所述显色区域的至少一个部分区域内。但是，当所述显色区域的所述部分区域极小时，所述空间理所当然就不能发挥其积极效果，而且当所述显色区域的所述部分区域太小时，它还会变得无法不粘贴到所述部分区域。
即使所述空间是所述显色区域的整个部分或者变得更宽些，即除整个部分外还包括其邻近的上、下游区域在内时，也将不会有任何问题，而是效果更大而且有助于粘贴工作，因此，所述空间通常是设置在所述显色区域的整个部分和其上、下游区域上。
所述上、下游区域可以任意长，只要它们不是所述色谱条的整个部分即可。
所述空间既可以设置在所述色谱条的底面上也可以设置在色谱条的顶面上，或者同时设置在所述顶面和底面上。
所述空间的设置可以这样来完成：不要将显色区域的至少部分区域和保护层和/或基片上面朝着所述区域的那一表面相互粘贴起来(图1和图2)。不要将所述显色区域的一部分区域和保护层和/或基片相互粘贴起来，不要将糊状粘结剂涂覆于所述保护层的不粘结部分上，或者当涂敷糊状粘结剂时，将一种能使糊状粘结剂失去粘性的媒剂涂覆于所述不粘结部分上。所有已知的媒剂都可以用作使所述糊状粘结剂失去粘性的媒剂。
或者，为了防止粘结，可以将一薄膜10插设在所述色谱条和保护层和/或基片之间(图3)。当所述薄膜插设在所述保护层和色谱条之间时，它必须是一种透明材料。
可以将如何一种不吸水的材料用作所述薄膜。
作为用来设置所述空间的另一种方法，可以将一凹部11形成在保护层和/或基片上那一面朝着所述显色区域的至少部分区域的表面上(图4)。所述凹部可以通过将两片保护层或基片粘结起来而很方便地制成，但在所述凹部部分内只使用一片保护层或基片以形成所述凹部。
所述空间还可以通过将所述保护层和除了显色区域的至少一部分区域之外的色谱条的两个或多个不连续部分粘结起来来进行设置(图5)。
而且，所述空间还可以以这样一种方式来设置，即，所述保护层或基片不覆盖住所述显色区域的至少一部分区域(图6)。
当将所述空间同时设置在色谱条的顶面和底面上时，防粘方法可以是相同的或者是互不相同的。但是，保护层和基片都不覆盖住的这样一种方法是不太理想的，这是由于它将会引起损坏，诸如使色谱条弯曲。
下面将结合几个例子对本发明作具体描述。
例子
将一大小为0.5厘米×4.0厘米的硝化纤维膜(由美国Millipore公司制造)粘贴在一基片(“包装薄片”)上。以所述硝化纤维膜的纵向一侧作为长度方向，将一种含有来自于梅毒螺旋体的梅毒抗原的溶液沿一直线滴在自其底端大约1厘米的位置上，并进行彻底干燥以使所述梅毒抗原固定不动，从而可以在所述硝化纤维膜上设定一检测区域。以一种与梅毒抗原情况中相同的方式，使抗生物素蛋白在所述检测区域上侧大约1厘米处的硝化纤维膜上固定不动，由此设定一对照区域。将一玻璃纤维膜(由美国Lydall公司制造)用一标记抗原浸渍，所述标记抗原是通过将来自于梅毒螺旋体的梅毒抗原用硒胶体和藉助将生物素与硒胶体相粘合而获得的生物素化的硒胶体来作标记而获得的，并然后对所述玻璃纤维进行干燥，以用作一标记区域。将由此准备好的标记区域以这样一种方式粘贴在所述基片上，即，使它与基片上预先获得的硝化纤维膜稍稍接触。作为一加样区域，将一大小为0.5×1.0厘米的非织造织物(由美国Du Pont公司制造)粘贴在所述基片上、于所述标记区域的底端，从而使它与标记区域相接触。
将一保护层(由Lintech公司制造)粘贴在以上述方式获得的色谱条的顶面上，利用由此获得的色谱条装置对一待检试样内的梅毒抗原进行检测。将50μl的待检血清试样施加在所述色谱条的加样区域上，在施加血清15分钟后，通过用裸眼读出检测区域和对照区域内的硒胶体的红度而获得检测结果。
当检测区域和对照区域都显示出红色时，就表示梅毒抗体呈阳性即有抗体存在，或者当仅有对照区域显示出红色时，就表示梅毒抗体呈阴性即没有抗体存在。如果对照区域没有变成红色，则视为检测无效。
在将所述保护层粘贴在所述色谱条装置上的过程中，为了防止色谱条于色谱条的检测区域和对照区域处粘附于所述保护层，可以采用下述方法：
(1)采用一种涂有油墨的保护层，所述油墨具有这样一种特性，如果在所述保护层的涂湖状粘结剂的侧上用紫外线照射，所述油墨(紫外硬化油墨，T&KTOKA制造)将硬化。通过将这种保护层粘贴在所述色谱条上，就可将一非粘结部分设置在所述保护层和色谱条之间、于涂UV硬化油墨部分(检测区域和对照区域)处。利用这种处理方法获得的色谱条装置将称为紫外处理法。
(2)通过在将一种糊状粘结剂涂敷在保护层面朝显色谱条检测区域和对照区域的部分之外的所述保护层的其它部分上之后，将一保护层粘贴在所述色谱条上，从而将一非粘结部分设置在所述保护层和所述色谱条之间。利用这种方法获得的色谱条装置将称为局部涂敷法。
(3)将所述保护层粘贴在除了检测区域和对照区域之外的所述色谱条上部分上，这样，所述检测区域和对照区域就没有保护层。利用这种方法获得的色谱条装置将称为敞开方法。
(4)作为一种对照物，将所述保护层以这样一种方式粘贴在所述色谱条上，即，在保护层和色谱条之间不形成任何空间。利用这种方法获得的色谱条装置将称为传统方法。
利用上述四种色谱条装置，对32个待检试样内的梅毒抗体进行检测，以对显色区域，即检测区域和对照区域的显色情况进行观察。表1示出了几种在这些显色区域内显现出白点或呈现不规则显色情况的色谱条装置的数目。
                            表1
检测区域 控制区域
UV处理方法 0/32 0/32 0/32 0/32 0/32 0/32
局部涂敷方法 0/32 0/32 0/32 0/32 0/32 0/32
敞开方法 0/32 0/32 0/32 0/32 0/32 0/32
传统方法 7/32 2/32 11/32 9/32 13/32 7/32
正如前文中所描述的那样，当一空间设置在所述免疫测定装置的色谱条的显色区域的至少一部分内时，所述色谱条内的试样溶液的毛细管流动在显色区域内就不会得不规则，因此，可以大大提高对待测定物质的检测精度。

Claims (8)

1.一种免疫测定装置，它包括一色谱条，所述色谱条具有一粘附于其底面的基片和一粘附于其顶面的保护层，其特征在于，在所述色谱条的显色区域的至少部分区域的顶面和/或底面上设置有一空间。
2.如权利要求1所述的免疫测定装置，其特征在于，所述空间是通过防止将所述部分区域粘附于面朝着所述部分区域的所述保护层和基片的表面中至少一个表面的一区域上的方法来设置的。
3.如权利要求2所述的免疫测定装置，其特征在于，防止将所述部分区域粘附于面朝着所述部分区域的所述保护层和基片表面的至少其中一个表面的一区域上的要求是通过不将糊状粘结剂涂敷于所述表面的至少其中一个表面的所述区域上的方法来进行的。
4.如权利要求2所述的免疫测定装置，其特征在于，防止将所述部分区域粘附于面朝着所述部分区域的所述保护层和基片表面的至少其中一个表面的一区域上的要求是通过将一种媒剂涂敷于所述表面的至少一个表面的所述区域上来进行的，所述媒剂具有使糊状粘结剂失去粘性的能力。
5.如权利要求1所述的免疫测定装置，其特征在于，所述空间是通过在面朝着所述部分区域的所述保护层和基片的表面中至少一个表面的所述区域上形成一凹部来设置的。
6.如权利要求1所述的免疫测定装置，其特征在于，所述空间是通过将一薄膜插设在所述部分区域和面朝着所述部分区域的所述保护层和基片表面中的至少一个表面的所述区域之间来设置的。
7.如权利要求1所述的免疫测定装置，其特征在于，所述空间是这样来设置的：将所述色谱条粘贴在所述保护层和基片的至少其中之一上、于除了所述部分区域之外的所述色谱条的两个或多个不连续位置处。
8.如权利要求1所述的免疫测定装置，其特征在于，所述空间是以这样一种方式来设置的，即，所述保护层或基片不覆盖所述部分区域。
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