CN1220397A

CN1220397A - 一检多项一步免疫检测方法与半定量一步免疫检测方法

Info

Publication number: CN1220397A
Application number: CN 98117648
Authority: CN
Inventors: 祝加贝
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1997-11-28
Filing date: 1998-08-28
Publication date: 1999-06-23

Abstract

本发明是将半定量免疫检测方法与一检多项免疫检测方法应用于一步法检测试条上,从而解决了一步法检测方法原来只能作定性检测和一检一项的缺陷。该方法通过一条试条一次检测同时即能得到多项检测结果,即同时得到多种定性结论或得到包括数种量程在内的宽量程定量标示。本方法将普通试条反应区设置打印了两条或两条以上的标志线,以此将反应区划分为三个或三个以上的反应区,并利用反应膜,根据不同检测目的,可在不同反应区包被不同溶液的特性,以实现在一条试条上同时做多项检测的目的;同时,通过增加一条半定量对照线,而使该一步法检测试条在得到定性结果的同时,得到半定量检测的结果。

Description

一检多项一步免疫检测方法与半定量一步免疫检测方法

本发明属于生物技术领域，

一步法免疫检测方法以其快速、简便和灵敏度高等特性，已在全世界范围内的检测诊断中得到日益广泛的应用，有在许多方面取代以前的酶联固相免疫吸附检测(ELISA)的趋势，并在不断完善中。

现在的一步法免疫检测方法都是一次检测只能测试一种结果，这样在实际应用中不仅浪费试样，效率也不能提高。常用来作定量检测的ELISA方法操作繁琐，使用起来不甚方便，其它方法也有此弊病。

普通一步法免疫检测方法(以HCG一步法检测试条为例说明)：

HCG一步法检测试条主要由以下三部分构成(如图1)。1试条与标本直接接触部分(A)：其中主要成分为金标抗HCG第一抗体。2反应膜部分(B)(是测试条用于检测反应结果的材料主体)：其左右两端分别包被了两条线，右端A线为抗HCG第二抗体，左端B线作为对照，包被兔抗鼠IgG抗体。3吸水材料部分(C)。

HCG一步法检测试条的整体反应过程为：将试条有颜色标志线一端直接侵入被检标本容器中时，其反应开始启动。(1)若被检样品中没有HCG，则无法形成双抗体夹心反应，反应体系的金标第一抗体与包被的兔抗鼠IgG抗体(阴性对照)反应，作为对照标记形成一条红色沉积反应线，这不仅表明被测标本中无HCG，为阴性结果；且表明测试条整体反应系统工作正常。如图2：

(2)若被检样品中存在HCG，则与反应体系的金标记抗HCG发生反应，形成HCG金标抗体复合物，继而此混合物继续爬行，再与HCG第二抗体相遇结合，形成双抗体夹心反应，显示有一条沉积反应，从而表明为HCG阳性反应。同时，过量的金标抗体越过第二抗体包被线与兔抗鼠IgG抗体结合，形成第二条红色沉积反应线。如图3。

现有技术一步法检测系统在反应膜上尚没有明确的类似标志线的标志分开。(有些一步法检测系统为使结果更明确，不得不将试条装入有某些特殊装置的塑料壳内，如在反应膜位置处设俩个窗口，以分开对照区及检测区)。

本发明一步法免疫检测方法其目的是提供一种新型的一步法免疫检测模式。通过一次检测一个操作步骤可同时获得几种定性结果或一个宽量程的多个分段定量

本发明是通过以下技术方案来实现的：

首先对现有测试条的结构组成进行改造，即在原测试条反应体表面用以观察结果的测试反应区设置打印了两条或两条以上的标志线(该标志线用打印机打印在反应膜上，该反应膜是测试条用于检测反应结果的材料主体)，以此划分了三个或三个以上的反应区，用以区别预先包被在反应膜上面而在测试反应前所看不到的若干检测、对照及半定量对照等用于不同目的的反应区域。简言之，印在反应膜上的明晰标志线把不同项的反应区及反应结果明确清晰地分开，使检测结果的判定更加一目了然，如图4及图5所示。

原测试条的对照线和反应线通常是包被在反应膜上，要区分反应线和对照线只能在检测之后，这里用特别印迹把两条以上明线(标志线)预先印在膜上用以区别三个以上反应区和对照区，这样便可以把不同项目结果清楚地分开，这就使本发明特别适于一检多项一步法及半定量一步法免疫检测。

为改进原一步法免疫检测试条不能定量的局限，尤其是克服原试条由HOOK效应产生的待检样品在极高浓度与低浓度不易区分的现象，我们特别设置了两个对照区，即对照区与半定量对照区和相应的对照线和半定量对照线，从而可以区分待检物质的浓度范围。

原一步法免疫检测试条只有一条对照线，它只是作为鉴定检测是否操作正常以及试条反应是否有效，而没有定量意义。同时，由于一步法检测中不能避免的HOOK效应(即待检物质在高浓度时反应而使检测线颜色减弱的现象)，从而使待检样品在极高浓度时的表现与浓度很弱时的反应结果相近，从而使某些结果在实际诊断中难以判定。半定量一步法免疫检测试条设置的对照线采用抗胶体金单克隆抗体作为包被在反应膜对照区的生物活性材料，因此在检测中，无论是否有待检物质存在，无论待检物质含量的高低，该对照线的显色强弱和颜色深浅均不发生改变，而半定量线采用抗鼠IgG Fab段单克隆抗体作为包被在半定量对照区的生物活性材料，因此在检测中，半定量线的显色会在待检样品浓度超过一定范围时，随待检样品浓度增加而减弱，所以对测试反应结果的显示只要将变化的检测线和半定量线分别与不变的对照线来比较其颜色深浅并结合使用随本产品提供的特别比色卡进行对比便可知待检物的浓度范围。

用比较检测线，半定量以及用对照线区别高浓度和低浓度的情况：

(1)在低浓度时，半定量线的颜色比对照线的颜色深，在这种情况下检测线的颜色与待检物质浓度成正比，如图6(A)。

(2)在高浓度时，半定量线颜色比对照线颜色浅或相同，在这种情况下检测线的颜色与待检物质浓度成反比，如图6(B)。

检测线、半定量线以及对照线可用dispenser(喷头)包被，采用通常使用的喷的方式。也可采用″plotter″或人工划线方式包被，即将需包被的溶液装在“喷头”或″plotter″或人工划线用的吸水笔中，采用喷或划线包被在膜上。

以下结合附图说明实施例：

一、一检多项法免疫检测：检测血清样品中的HBsAg(乙型肝炎表面抗原)和HBeAg(乙型肝炎e抗原)，显示符号如图7。

反应膜处理：用扣印机预先扣印两条标志线，将反应膜划分为HBsAg检测区，HBeAg检测区和对照区。选用分别抗HBsAg和HBeAg的单克隆抗体分别包被HBsAg检测线，HBeAg检测线，用抗鼠IgG单克隆抗体包被对照线。包被好的膜即用BSA-PBS溶液封闭风干，此膜即用做试条中的反应膜。选用抗HBsAg和HBeAg的单抗分别与胶体金交联，分别按照普通一步法试条组装法组装成条，灵敏性试验及特异性试验分别确定胶体金标记抗HBsAg与胶体金标记抗HBeAg的最佳使用浓度，然后按照该最佳使用浓度混合抗HBsAg胶体金与抗HBeAg胶体金。再按普通一步法试条组装成条，按普通HBsAg一步法试条检测，结果如图8。

图8中各小图表示：

1为HBsAg和HBeAg均为阴性。

2为HBsAg为阳性，HBeAg为阴性。

3为HBsAg和HBeAg均为阳性。

4为检测失误。

图9。

二、半定量一步法免疫检测：检测尿样(或血清)中的HCG，显示符号如

反应膜处理：用打印机预先打印两条标志线，将反应膜划分为半定量对照区，对照区和检测区。用抗鼠IgG Fab段单克隆抗体包被半定量对照区，用胶体金单克降抗体包被对照线，用抗HCG单克隆抗体包被检测线。包被好的膜即用BSA-PBS溶液封闭风于，此膜即用做试条中的反应膜。选用抗HCG单克隆抗体与胶体金结合，再按照普通一步法试条组装法组装成条。

检测时将试条的下端放入尿液或血清中(如图9)取出后再放置几分钟便可对照色卡读结果。

测量结果可用比色卡对比给出：(图10)

1.在HCG含量在每毫升零国际单位至200毫国际单位的浓度范围内，半定量线(S)比对照线(C)。的颜色深，检测线(T)的颜色随NCG浓度升高而加深。

2.在HCG含量在每毫升5个国际单位或以上时，半定量线(S)颜色相同于或弱于对照线(C)，检测线(T)的颜色随HCG浓度升高而变浅。

本发明的优点：

1)本发明免疫检测方法可用在半定量检测及一检多项检测

2)操作简便；

3)整个检测省时半定量检测时省样品

4)用途广泛，可用于所有一步法免疫检测及其它检测系统中。

附图说明：

1).图1为HCG一步法检测试条

2).图2为HCG检测阴性结果

3).图3为HCG检测阳性结果

4).图4为本发明一检多项一步法免疫检测试条

5).图5为本发明半定量一步法免疫检测试条

6).图6A为低浓度半定量线颜色对比

7).图6B为高浓度半定量线颜色对比

8).图7为血清样品检测例结果

9).图8为血清样品检测试条显示

10).图9为检测尿样(或血清)操作示意

11).图10为检测尿样比色卡结果

Claims

1.一检多项一步法免疫检测方法与半定量一步法免疫检测方法：使用一步法检测试条，其特征在于在原试条上用于观察结果的测试反应区预先设置打印了两条或以上的标志线，从而将反应区划分为三个或以上的反应区，并利用反应膜根据不同检测目的可在不同反应区包被不同抗原(抗体)的特性，以实现在一个试条上同时做多项检测之目的。此外，将其中一个反应区包被上一定量的抗胶体金单抗，或其他与检测反应无交叉的单抗系统即在反应中作为颜色深浅永远不变的对照线，另一个反应区包被上抗鼠IgG单抗即在反应中作为颜色深线将随着待检物浓度不同而改变的半定量线，从而实现半定量检测的目的，尤其可以有效判别一步法检测中通常在高浓度出现的HOOK效应。

2.如权利要求1所述的一检多项一步法及半定量一步法免疫检测方法，其特征在于所述的标志线用打印机预先打印在反应膜上，所述的各反应线，对照线及半定量对照线可用dispenser(喷头)包被，采用通常使用的喷的方式，也可采用″plotter″或人工划线方式包被。

3.如权利要求1所述的半定量一步法免疫检测方法，其特征在于检测待检物的浓度时，使用比色卡对比得出待检物的浓度范围。