CN1186958A - 一种一检多项一步法半定量免疫检测方案 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一检多项一步法半定量免疫检测方案,该方案使用一步法检测试条,在该试条反应体表面用于观察结果的测试反应区设置了两条或两条以上标志线,以此画出两个或两个以上反应区,同时设置了第三反应区和相应的反应线即定量半定量反应区和定量半定量对照线,标志线把不同项的反应区及反应结果明确清晰地分开,使检测结果的判定一目了然,而定量半定量对照线则有效地克服了HOOK效应从而能区别待检物质浓度的高与低。该方案操作简便、省时间,是一种很有效的一步法半定量免疫检测方案。
Description
本发明属于生物技术领域,具体地说是涉及一步法半定量免疫检测。
在临床检测方法中,一步法免疫检测方法属于操作简便并且快捷的方法,各种抗原抗体以及激素都可以用该检测方法,但对抗原、抗体及激素的定量检测,目前临床上最常用的是酶联免疫吸附实验和放射免疫实验,而这两种方法操作时均很费时间并且还需要配以特殊仪器进行。
通常一步法检测试纸的检测原理是以胶体金作为指示标记,交联抗体(如检测抗原则为交联抗原)与检测品中的抗原(或抗体)结合,形成夹心一步法。试纸通常分为三部分(如图1)所示:(1)胶体金-抗体结合体区域(2)检测反应区(3)对照线反应区。
反应完成后阳性结果通常是在检测区和对照线区出现明显红线,如图2(A)所示(1.2)该红线是由胶体金和以上两个区域的抗体结合所产生的,阴性结果只在对照线区出现红线(3)如图2(B)所示,需要指出的是,该反应结果所表现的红线在反应前是看不到的。
以上双线的一步法检测试纸条只用于定性检测而不能用于定量检测,因为在检测样品中待检物质浓度低的时候,检测线的颜色深浅与待测物质浓度成正比,但当待测物质浓度很高时检测线的颜色深浅会与待检的浓度成反比,这就是一步法检测中常出现的“潜带或倒置现象”(HOOK效应)。因为“潜带效应”的存在,致使一步法检测试条不能用于半定量检测(因为用目视比色法不能区别待检物质低浓度和高浓度的结果)。
本发明的目的是提供一种操作简便,并且省时的一检多项一步法半定量免疫检测方案。以填补现有技术的不足,此方法可广泛应用于所有一步法免疫检测及其他检测系统之中。
本发明是通过以下技术方案完成的:
首先对现有测试纸(条)的结构组成进行改造:在原测试条反应体表面用于观察结果的测试反应区设置了两条或两条以上的标志线,(该标志线用打印机打印在反应膜上,该反应膜是测试纸条用于反应检测结果的材料主体)以此画出了两个或两个以上的反应区,用以区别预先包被在反应膜上面而在测试反应前所看不到的若干对照、检测、定量半定量等用于不同目的的反应区域。简言之,印在反应膜上的明晰标志线把不同项的反应区及反应结果明确清晰地分开,使检测结果的判定更加一目了然,如图3所示。
原测试试条的对照线和反应线通常是包被在反应膜上,要区分反应线和对照线只能在检测之后,这里用特别印迹把两条以上明线(标志线)予先印在膜上用以区别两个以上反应区和对照区,这样便可把不同项结果清楚地分开,这就使本发明特别适于做ST一检多项的检测。
为改进原方法测试纸条不能定量的局限,有效的克服HOOK效应我们特别设置了第三反应区和相应的反应线即定量区和定量对照线(简称对照线B)如图4所示,该对照线B能区别待检物质的低浓度和高浓度的情况。
在原方法测试纸条上所表现的检测线与对照线,受待检物质浓度影响而产生HOOK效应的变化,从而失去对照线本身的意义。本方法的对照线B则采用抗胶体金单克隆抗体作为包被在反应膜上的生物活性材料,因此在检测中,无论是否有待检物质的存在,无论待检物质含量的高低,该对照线B不受HOOK效应影响,其显色强弱和颜色深浅均不发生改变,对测试反应结果的显示只要将变化的检测线和定量线分别与不变的对照线B来比较其颜色深浅并结合使用随本品提供的特别比色卡进行对比便可知待检物的浓度范围。
用对照线B区别高浓度和低浓度的情况:
(1)在低浓度时,定量线颜色比对照线B颜色深,在这种情况下检测线的颜色深浅与待检物质浓度成正比,如图4(A)。
(2)在高浓度时,定量线颜色比对照线B颜色浅或相同,在这种情况下检测线的颜色与待检物质浓度成反比,如图4(B)。
对照线B可用dispenser(喷头)包被,采用通常使用的喷的方式。也可采用“plotter”或人工划线方式包被,即将需包被的溶液装在“喷头”或“plotter”或人工划线用的吸水笔中,采用喷或划线包被在膜上。
以下结合附图说明实施例:以一步法妊娠检测试纸为例,检测人绒毛膜促性腺激素(HCG),以诊断是否怀孕,这里对HCG浓度的半定量测量很有必要。
本发明可在几分钟内测知HCG浓度范围,图5中半定量线、对照线B和反应线在本实施例的包被情况如下:
S(半定量线)包被了抗鼠抗体Fab段的单抗体。
C(对照线B)包被了抗胶体金的单抗体。
T(检测线)包被了抗HCG的单克隆抗体。
胶体金标记抗体(图5中1):胶体金与抗HCG单抗的结合物。
检测时将试条的下端放入尿液或血清中(如图6)取出后再放置几分钟便可对照色卡读结果。测量结果可以比色卡(图7)对比给出:
一、在HCG含量在每毫升零国际单位至200毫国际单位的浓度范围内,定量线(S)比对照线B(C)的颜色深,检测线(T)的颜色随HCG浓度升高而加深。
二、在HCG含量在每毫升5个国际单位或以上时,定量线(S)颜色相同或浅于对照线(C),检测线(T)的颜色随HCG浓度升高而变浅。
本发明优点:
1.本发明免疫检测方法可用在作半定量检测;
2.操作简便;
3.整个检测省时;
4.用途广泛,可用于所有一步法免疫检测及其他检测系统之中。
附图说明:
图1为一步法检测试纸的组成示意图
图2为一步法检测试纸作定性检测示意图
图3为一步法检测试纸设置两条标志线示意图
图4为一步法检测试纸设置对照线B示意图
图5为对照线B区别高低浓度示意图
图6为检测时试纸放入待检液示意图
图7为比色卡示意图
Claims (3)
1.一种一检多项一步法半定量免疫检测方案:使用一步法检测试纸,其特征在于在原试纸反应体表面用于观察结果的测试反应区设置了两条或两条以上标志线以此画出两个或两个以上的反应区以实现在一个试条上同时可做多项检测之目的,此外设置了第三反应区和相应的反应线即定量区和定量对照线,该定量对照线可克服HOOK效应,从而实现半定量检测之目的。
2.如权利要求1所述的一步法定量免疫检测方案其特征在于所述的标志线用打印机预先打印在反应膜上,所述的定量半定量对照线可用dispenser(喷头)包被,采用通常使用的喷的方式,也可采用“plotter”或人工划线方式包被,而且该定量半定量对照线采用抗胶体金半抗作为包被在反应膜上的生物活性材料。
3.如权利要求1所述的一检多项一步法半定量免疫检测方案,其特征在于检测待检物浓度时,使用比色卡对比得出待检测物的浓度范围。
Priority Applications (2)
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CN97121956A CN1186958A (zh) | 1997-11-28 | 1997-11-28 | 一种一检多项一步法半定量免疫检测方案 |
CN 98117648 CN1220397A (zh) | 1997-11-28 | 1998-08-28 | 一检多项一步免疫检测方法与半定量一步免疫检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
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CN97121956A CN1186958A (zh) | 1997-11-28 | 1997-11-28 | 一种一检多项一步法半定量免疫检测方案 |
Publications (1)
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CN1186958A true CN1186958A (zh) | 1998-07-08 |
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Family Applications (1)
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Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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CN104969069A (zh) * | 2012-12-28 | 2015-10-07 | 雅培医护站股份有限公司 | 用于鉴定钩状效应和扩大及时现场护理免疫测定的动态范围的设备和方法 |
CN107918015A (zh) * | 2017-07-14 | 2018-04-17 | 王镕 | 免疫层析半定量试纸条、试剂盒以及检测方法 |
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1997
- 1997-11-28 CN CN97121956A patent/CN1186958A/zh active Pending
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US9671398B2 (en) | 2012-12-28 | 2017-06-06 | Abbott Point Of Care Inc. | Apparatus and method for identifying a hook effect and expanding the dynamic range in point of care immunoassays |
CN104969069B (zh) * | 2012-12-28 | 2017-09-12 | 雅培医护站股份有限公司 | 用于鉴定钩状效应和扩大及时现场护理免疫测定的动态范围的设备和方法 |
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