JP6043351B2 - 核酸クロマトグラフィー検査具 - Google Patents

Description

本発明は、感染症やアレルギーなどに関する診断や、細菌やウィルスなどの検出に使用可能な核酸クロマトグラフィー検査具に関する。

ウィルスや細菌に由来する核酸（ＤＮＡ、ＲＮＡ）の有無、および特定の疾患や体質に関連した変異遺伝子に由来する核酸の有無を調べることにより、感染症、腫瘍などの遺伝性疾患、体質などを的確に診断することが可能である。例えば、ウィルス感染の有無を診断する場合には、患者の粘膜などから試料を採取し、ＰＣＲ法を用いてウィルスに由来する核酸のみを増幅する処理を行う。この処理で得られた試料において、ウィルスに由来する核酸が検出されると、患者がウィルスに感染しているものと判定することができる。今日では、ゲノム解析の発展によって、遺伝子などの核酸の塩基配列に関する情報が蓄積されているのに加え、ＰＣＲ法の改良によって、ウィルスや細菌に由来する核酸や特定の変異遺伝子に由来する核酸を選択的に増幅することはたやすくなっている。そこで、上述した核酸を対象とした診断法の適用をさらに一般的に広めるため、特定の核酸の有無を簡便に判定する技術が求められている。

特定の核酸（以下、「標的核酸」という）の有無を簡便に判定する技術として、核酸クロマトグラフィー検査具が提案されている（特許文献１、２）。この核酸クロマトグラフィー検査具は、ペーパークロマトグラフィーと同様の仕組みで液体の試料を多孔性シート内に展開し、試料中に含まれる標的核酸を、多孔性シートの表面に固定した核酸プローブによって捕獲する。さらに、捕獲した標的核酸を発色させることにより、多孔性シートの表面に標的核酸の検出を表示するというものである。このように、核酸クロマトグラフィー検査具では、試料中に標的核酸が含まれている場合には多孔性シートの表面に表示が現れる。一方、試料中に標的核酸が含まれていない場合には多孔性シートの表面に表示が現れない。こうした極めて単純な仕組みで標的核酸の有無を判定することが可能である。

一般的に、核酸クロマトグラフィー検査具は、細長い長方形の多孔性シートを、細長い長方形の台紙（バッキングシート）に貼り付けて作られた試験片（これを通常「ストリップ」と呼ぶ）の形で広く用いられている（特許文献３、４）。例えば、試料を調製する際に標的核酸を予め色素で標識しておいた場合には、上述のストリップの先端部を試料の入ったテストチューブに挿し込んでおくと、この後は何の操作を行わなくても、試料が毛細管現象によって多孔性シート内を展開していく。そして、多孔性シート中の核酸プローブを固定した場所で標的核酸が捕獲され、蓄積されていくことで、多孔性シート表面（核酸プローブを固定した部分）を発色させることが可能となる。そのため、核酸クロマトグラフィー検査具のストリップを多数のテストチューブのそれぞれに挿し込むのみという非常に簡便な作業でも、多数の試料を同時に検査可能になるという利点がある。

特開２００１−１５７５９８号公報 特表２００５−５０３５５６号公報 特開２００６−２０１０６２号公報 特開２０１０−１４５０７号公報

ところが、上述の核酸クロマトグラフィー検査具のストリップでは、試料中の標的核酸の濃度が薄い場合、標的核酸の検出を示す表示の発色が薄くぼやけてしまい、標的核酸の有無を判定することが困難なことがある（従来技術の第１の問題点）。

また、上述の核酸クロマトグラフィー検査具のストリップでは、細長く薄い試験片のため、ストリップを正面以外の方向から観察する場合、特に、ストリップを側方から観察する場合に、多孔性シートの表面を視認しにくくなり、その結果、標的核酸の検出を示す表示の有無を判別することが困難となる（従来技術の第２の問題点）。もっとも、観察する際にストリップをハンドリングし、ストリップを正面に向ければ支障がないとも思われるが、ハンドリング時に多孔性シートに触れてしまうと、多孔性シートが汚染されてしまって、標的核酸が捕獲されているにも関わらず、発色が現れないことがある。その結果として、標的核酸が存在している試料に対して、標的核酸が存在していないという誤った判定をしてしまう恐れがある。また、核酸クロマトグラフィー検査具のストリップでは、上述したように多くの試料を同時かつ簡便に検査可能であることが重要な利点であるので、ストリップを１つ１つハンドリングして向きを調整することになれば、この重要な利点を大きく損なうことにもなる。

上記の従来技術の第１の問題点に鑑みて、本願の第１発明の目的は、試料中の標的核酸の濃度が薄い場合であっても、標的核酸の有無を容易に判別可能とする技術を提供することにある。

また、上記の従来技術の第２の問題点に鑑みて、本願の第２発明の目的は、核酸クロマトグラフィー検査具を正面以外の方向から観察する場合であっても、標的核酸の検出を示す表示の有無を容易に判別可能な技術を提供することにある。

本発明は、以下に示す核酸クロマトグラフィー検査具である。

［１］ 標的核酸を含む試料液体を展開し、前記標的核酸を検出して表示するための細長形状の多孔性シートと、前記多孔性シートが貼り付けられた貼付面を有するバッキング部材と、を備え、前記多孔性シートの表面は、前記標的核酸を捕獲するための核酸プローブが固定されているとともに前記多孔性シートの長手方向と交わる角度に延びる帯状の表示部を有する検出面を有し、前記貼付面が凹形状を呈するとともに、前記多孔性シートが前記貼付面の凹形状に追随して反った形状を有する核酸クロマトグラフィー検査具。

［２］ 前記多孔性シートの前記長手方向に平行でかつ前記多孔性シートの厚さ方向に平行な断面において、前記貼付面が凹形状を呈する前記［１］に記載の核酸クロマトグラフィー検査具。

［３］ 前記多孔性シートの反りに伴って、前記検出面における平均開孔径が、前記多孔性シートの前記貼付面側の表面における平均開孔径よりも小さい前記［１］または［２］に記載の核酸クロマトグラフィー検査具。

［４］ 前記バッキング部材の形状が細長の板形状であり、前記バッキング部材の長手方向が前記多孔性シートの前記長手方向と平行である前記［１］〜［３］のいずれかに記載の核酸クロマトグラフィー検査具。

［５］ 前記多孔性シートが、曲率を有して反っている前記［１］〜［４］のいずれかに記載の核酸クロマトグラフィー検査具。

［６］ 前記多孔性シートの凹値が１．０〜５．０ｍｍである前記［５］に記載の核酸クロマトグラフィー検査具。

［７］ 前記バッキング部材は、前記貼付面とは反対側の表面が前記貼付面の凹形状に相補的な凸形状であることにより、弓なりに湾曲している前記［１］〜［６］のいずれかに記載の核酸クロマトグラフィー検査具。

［８］ 複数の、前記［１］〜［７］のいずれかに記載の核酸クロマトグラフィー検査具と、前記核酸クロマトグラフィー検査具を収容する梱包ケースと、を備える核酸クロマトグラフィー検査具セット。

［９］ 複数の、前記［７］に記載の核酸クロマトグラフィー検査具と、前記核酸クロマトグラフィー検査具を収容する梱包ケースと、を備え、前記複数の核酸クロマトグラフィー検査具の前記バッキング部材がそれぞれ異なる曲率を有して弓なりに湾曲している核酸クロマトグラフィー検査具セット。

［１０］ 標的核酸を含む試料液体を展開し、前記標的核酸を検出して表示するための細長形状の多孔性シートと、前記多孔性シートが貼り付けられたバッキング部材と、を備え、前記多孔性シートの表面は、前記標的核酸を捕獲するための核酸プローブが固定されているとともに前記多孔性シートの長手方向と交わる角度に延びる帯状の表示部を有する検出面を有し、前記検出面に垂直かつ前記表示部の延びる方向に沿って前記表示部を切断した断面において、前記表示部の両端部以外の部分が前記表示部の前記両端部を結ぶ基準線よりも張り出している核酸クロマトグラフィー検査具。

［１１］ 前記多孔性シートの前記長手方向に垂直な断面において、前記検出面が曲率を有して張り出している前記［１０］に記載の核酸クロマトグラフィー検査具。

［１２］ 前記表示部においては、前記表示部の両端部のそれぞれから中央に向かって所定の幅を有する領域で、同一の前記表示部における残余の領域よりも前記核酸プローブが高密度に固定されている前記［１０］または［１１］に記載の核酸クロマトグラフィー検査具。

［１３］ 前記表示部においては、前記表示部の両端部のそれぞれから中央に向かって所定の幅を有する領域で、同一の前記表示部における残余の領域よりも前記多孔性シートの平均開口径が小さい前記［１０］〜［１２］のいずれかに記載の核酸クロマトグラフィー検査具。

本願の第１発明（上記［１］〜［９］に記載されている発明）によれば、核酸クロマトグラフィー検査具のバッキング部材における貼付面が凹形状を呈し、この貼付面の凹形状に追随して多孔性シートが反った形状を有するので、表示部で標的核酸がより密集した状態で捕獲される。その結果、標的核酸の検出を示す表示の発色が濃く現れやすくなる。すなわち、本願の第１発明（上記［１］〜［９］に記載されている発明）によれば、標的核酸の検出を示す表示の発色が濃く現れやすくなるので、試料中の標的核酸の濃度が薄い場合であっても、標的核酸の有無を容易に判別可能となる。

本願の第２発明（上記［１０］〜［１３］に記載されている発明）によれば、標的核酸の検出を表示する表示部の両端部以外の部分が当該表示部の両端部よりも張り出しているので、核酸クロマトグラフィー検査具を正面以外の方向から観察する場合であっても、表示部の一部分が面として視認可能な状態となる。その結果、標的核酸の検出を示す表示の有無を容易に判別可能となる。

第１発明の核酸クロマトグラフィー検査具の一実施形態を模式的に示す正面図である。 図１Ａに示されている白抜き矢印Ｖ_Ｌの方向から観た、核酸クロマトグラフィー検査具の模式的な側面図である。 図１Ａに示されている核酸クロマトグラフィー検査具の使用時において、表示部に標的核酸が捕獲されている様子を模式的に示す説明図である。 図１Ａに示されている核酸クロマトグラフィー検査具の一使用態様を示す模式図である。 第１発明の核酸クロマトグラフィー検査具の他の実施形態を模式的に示す側面図である。 第１発明の核酸クロマトグラフィー検査具セットの一実施形態を示す模式図である。 第２発明の核酸クロマトグラフィー検査具の一実施形態を模式的に示す正面図である。 図６Ａに示されている白抜き矢印Ｖ_Ｌの方向から観た、核酸クロマトグラフィー検査具の模式的な側面図である。 図６Ａ中のＡ−Ａ’断面の模式図である。 図６Ａに示されている核酸クロマトグラフィー検査具の一使用態様を模式的に示す正面図である。 図８Ａに示されている白抜き矢印Ｖ_Ｌの方向から観た、核酸クロマトグラフィー検査具の一使用態様を模式的に示す側面図である。 第２発明の核酸クロマトグラフィー検査具の他の実施形態を模式的に示す正面図である。 図９中のＢ−Ｂ’断面の模式図である。 図９に示されている白抜き矢印Ｖ_Ｌの方向から観た、核酸クロマトグラフィー検査具の模式的な側面図である。 キャプチャーＤＮＡプローブ溶液のスポットの概要を示す説明図である。 展開工程および検出工程の説明図である。

以下、図面を参照しつつ本発明の実施の形態について説明する。本発明は、以下の実施形態に限定されるものではなく、本発明の範囲を逸脱しない限りにおいて、変更、修正、改良を加え得るものである。

１．第１発明：
図１Ａは、本願の第１発明の核酸クロマトグラフィー検査具の一実施形態を模式的に示す正面図である。図１Ｂは、図１Ａに示されている白抜き矢印Ｖ_Ｌの方向から観た、核酸クロマトグラフィー検査具１ａの模式的な側面図である。本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査具１ａは、細長形状の多孔性シート１０と、バッキング部材２０とを備えている。さらに、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査具１ａでは、吸収パッド４０を備えている。

まず、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査具１ａにおいて、多孔性シート１０の表面には、標的核酸を検出した時に表示が現れる検出面１３が設けられている。この検出面１３内には表示部１５が設けられている。表示部１５は、多孔性シート１０の長手方向Ｘと交わる角度に延びる、帯状の領域であり、この帯状の領域内に標的核酸を捕獲するための核酸プローブが固定されている。

さらに、図１Ｂに示されているように、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査具１ａでは、バッキング部材２０に凹形状を呈した貼付面２５が設けられている。この貼付面２５の凹形状に追随する形で、多孔性シート１０が反った形状にて貼付面２５に貼り付けられている。そのため、多孔性シート１０の検出面１３、さらには、検出面１３の一部領域である表示部１５も弓なりに反った形状になっている。

図２は、図１Ａに示されている核酸クロマトグラフィー検査具１ａの使用時において、表示部１５に標的核酸６０が捕獲されている様子を模式的に示す説明図である。図示されているように、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査具１ａでは、表示部１５が弓なりに反った形状であるので、表示部１５に捕獲されている標的核酸６０同士、特に、標的核酸６０の中の表示部１５から離れている部分同士が互いに寄せ集まる。その結果として、標的核酸６０を標識している色素６５同士が密集した状態になる。このように色素６５が密集することにより、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査具１ａでは、標的核酸６０の検出を示すシグナル（発色）が表示部１５に濃く、鮮明に現れやすくなる。

本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査具１ａでは、多孔性シート１０の長手方向Ｘに平行でかつ多孔性シート１０の厚さ方向Ｚに平行な断面において、貼付面２５が凹形状を呈することが好ましい。このように貼付面２５が長手方向Ｘに沿って弓状となる凹形状を有する場合には、標的核酸６０が帯状の表示部１５の側方から中央に向かって寄せ集まるようになるので、標的核酸６０の検出を示すシグナル（発色）がシャープなバンドとして現れやすくなる。

また、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査具１ａでは、表示部１５に捕獲されている標的核酸６０同士がより一層に寄せ集まり、その結果として、標的核酸６０を標識している色素６５同士がより一層に密集した状態となる。このことから、多孔性シート１０の反りに伴って、検出面１３における平均開孔径が、多孔性シート１０の貼付面２５側の表面における平均開孔径よりも小さいことが好ましい。

図３は、図１Ａに示されている核酸クロマトグラフィー検査具１ａの一使用態様を示す模式図である。図示されているように、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査具１ａについては、例えば、テストチューブ５０内に入っている液体の試料５５の中に、核酸クロマトグラフィー検査具１ａの先端部４５を浸して使用することができる。こうして先端部４５を試料５５の中に浸しておくと、試料５５が毛細管現象によって多孔性シート１０内を展開して、もう一方の先端部（吸収パッド４０が設けられている先端部）まで送られていく。このとき、試料５５内に標的核酸が含まれていると、この標的核酸が表示部１５に固定されている核酸プローブによって捕獲され、その結果、標的核酸を標識する色素によって表示部１５が発色するようになる（図３中の表示部１５ａ，１５ｂを参照）。

図３に示されているように、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査具１ａでは、検出面１３が２本の位置マーカー１４ａ，１４ｂによって長手方向Ｘに沿って３つの区画に仕切られており、これら３つの区画に表示部１５ａ〜１５ｃが１つずつ設けられている。そして、表示部１５ａ〜１５ｃには、それぞれ異なる種類の標的核酸（異なる塩基配列の標的核酸）を捕獲するための核酸プローブが固定されている。例えば、表示部１５ａにアレルギー疾患のマーカーとなる標的核酸に対する核酸プローブ、表示部１５ｂに腫瘍マーカーとなる標的核酸に対する核酸プローブ、および表示部１５ｃにウィルス感染のマーカーとなる標的核酸に対する核酸プローブを固定しておくと、一度の検査で上述した３種の疾患を患っているのか否かを判定することが可能となる。これを図３に示されている例に当てはめて考えると、図３中の試料５５が採取された患者については、表示部１５ａ，１５ｂで発色が観察され、表示部１５ｃで発色が観察されていないので、アレルギー疾患および腫瘍を患っている一方で、ウィルス疾患を患っていないと判定されることになる。

本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査具１ａでは、表示部１５ａ〜１５ｃは、長手方向Ｘと直交する幅方向Ｙに沿って直線状に延びている。なお、本実施形態では、表示部１５は、多孔性シート１０の幅方向Ｙに沿って直線状に延びている必要はなく、試料５５が多孔性シート１０内を展開していく過程で、試料５５が表示部１５を横断していくように設けられているものであればよい。ここでは図示しないが、表示部１５については、例えば、長手方向Ｘに対して４５度で交わる角度で延びる帯形状や、蛇行した帯形状（例えば、図９を参照）などの任意の形状を適用することができる。

本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査具１ａでは、多孔性シート１０の一部と接触し、多孔性シート１０を展開してきた試料５５を吸収する吸収パッド４０が設けられている。本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査具１ａのように吸収パッド４０が設けられている場合には、吸収パッド４０が多孔性シート１０を展開してきた試料５５を吸収、保持することが可能となるので、多孔性シート１０内に展開させる試料５５の液量を増加させることが可能となる。ひいては、核酸クロマトグラフィー検査具１ａにアプライされる標的核酸の量も増加させることが可能となる。その結果として、表示部１５に捕獲される標的核酸の量も増加し、標的核酸の検出を示すシグナル（発色）が濃く現れるようになるのでよい。

本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査具１ａでは、試料５５が多孔性シート１０内を展開している際に、標的核酸の全部または一部が一本鎖のポリヌクレオチド構造を有するように調製しておく。また、核酸プローブも標的核酸の一本鎖ポリヌクレオチド構造と特異的にハイブリダイズ可能な一本鎖ポリヌクレオチド構造（標的核酸の一本鎖ポリヌクレオチドの塩基配列と相補的な塩基配列を有する一本鎖ポリヌクレオチド）を少なくとも一部に有するものを用いる。こうした標的核酸と核酸プローブを用いると、標的核酸が表示部１５に到達したときに、標的核酸の一本鎖ポリヌクレオチド構造と、核酸プローブの一本鎖ポリヌクレオチド構造とがハイブリダイズ（二本鎖形成）し、標的核酸が核酸プローブを介して表示部１５に固定される。なお、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査具１ａでは、核酸プローブについては、標的核酸の有する一本鎖ポリヌクレオチド構造と特異的にハイブリダイズ可能な一本鎖ポリヌクレオチド構造を有するものであれば、ＤＮＡプローブ、ＲＮＡプローブ、あるいはモルフォリノアンチセンスオリゴなど、特に制限はされない。

また、標的核酸についても、一本鎖ＤＮＡ、端部が一本鎖構造とされた二本鎖ＤＮＡ、ＲＮＡなどを適用することが可能である。標的核酸の標識についても通常用い得る方法を適用すればよい。ＰＣＲ法を用いて標的核酸を調製する場合には、ポリメラーゼ反応の基質となるｄＮＴＰ（ｄＡＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＧＴＰ、ｄＴＴＰ）のうちの少なくとも１種に予め標識したものを用いてＰＣＲ産物を直接的に標識する手法を用いることができる。また、無標識のＰＣＲ産物（二本鎖ＤＮＡ）に事後的に標識を付加する手法を用いることができる。無標識のＰＣＲ産物（二本鎖ＤＮＡ）に事後的に標識を付加する手法としては、例えば、ＰＣＲ産物の両端が特定の塩基配列の一本鎖ポリヌクレオチド構造となるように改変したＰＣＲプライマーを用いることができる。この改変型のＰＣＲプライマーを用いて得られたＰＣＲ産物の一本鎖ポリヌクレオチド構造に対して、これと相補的な塩基配列を有する標識された一本鎖ポリヌクレオチドをハイブリダイズさせる。このハイブリダイゼーションの結果、標的核酸（ＰＣＲ産物）を標識することが可能である。

本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査具１ａでは、多孔性シート１０は、ニトロセルロース、セルロース、ポリエーテルスルホン、ナイロン、ＰＶＤＦなどから作られた、無数の細孔を有するシートを用いることが可能である。

また、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査具１ａのように、バッキング部材２０の形状が細長の板形状であり、バッキング部材２０の長手方向Ｘが多孔性シート１０の長手方向Ｘと平行であることが好ましい。このようにすると、核酸クロマトグラフィー検査具１ａはコンパクトなストリップとなるのでハンドリング性に優れたものとなる。

また、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査具１ａでは、試料５５が多孔性シート１０を均一に展開しやすくなり、その結果として表示部１５に現れるシグナル（発色）にムラが生じにくくなるという理由から、多孔性シート１０が曲率を有して反っていることが好ましい。なお、ここでいう「曲率を有して反っている」とは、断面で観た場合に、多孔性シートが円弧形状になっていることを意味する。

また、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査具１ａでは、多孔性シート１０が曲率を有して反っている場合、表示部１５に現れるシグナル（発色）にムラがより確実に生じにくくなるという理由から、多孔性シート１０の凹値が１．０〜５．０ｍｍであることが好ましい。さらに、ハンドリング性が高まるとの理由から、凹値が２．０〜５．０ｍｍであることがより好ましい。これ加えて特に、表示部１５に現れるシグナル（発色）が濃くなるという理由から、凹値が２．０〜４．０ｍｍであることがより一層に好ましい。図４を参照しつつ説明すると、本明細書にいう「多孔性シートの凹値」とは、上述のバッキン部材２０の長さ方向［ノギスを用いて長さを測定する場合に、バッキング部材２０の最大長さが測定される方向（図４の例では長手方向Ｘ）］に対して垂直な方向に沿って測定される多孔性シートの凹みの深さＤの値のことを意味する。

さらに、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査具１ａでは、表示部１５に現れるシグナル（発色）が濃くなるという理由から、多孔性シート１０の長さが１５〜１００ｍｍかつ凹値が１．０〜５．０ｍｍであることが好ましい。さらに多孔性シート１０の長さが３０〜６０ｍｍかつ凹値が１．０〜４．０ｍｍであることがより好ましい。特に多孔性シート１０の長さが４０〜５０ｍｍかつ凹値が１．０〜３．０ｍｍであることがより一層に好ましい。本明細書にいう多孔性シートの長さとは、多孔性シートの表面（検出面）上において長手方向に沿って引かれた多孔性シートの中心線の長さのことを意味する。

図４は、第１発明の核酸クロマトグラフィー検査具の他の実施形態を示す模式的な側面図である。本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査具１ｂでは、バッキング部材２０は、背面２７（貼付面２５とは反対側にあるバッキング部材２０の表面）が貼付面２５の凹形状に相補的な凸形状であることにより、弓なりに湾曲している。本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査具１ｂでは、バッキング部材２０が弓なりに湾曲しているので、バッキング部材２０の背面２７を平らな実験台の上につける状態で置くと、核酸クロマトグラフィー検査具１ｂの両端と実験台との間に隙間が生じる。この隙間により、核酸クロマトグラフィー検査具１ｂを摘まみ易くなる。こうして摘まみ易くなると、核酸クロマトグラフィー検査具１ｂの検出面１３を誤って触れて汚染させてしまうことが防止でき、ひいては、検出面１３の汚染に起因する誤判定を防止することが可能になる。

図５は、第１発明の核酸クロマトグラフィー検査具セットの一実施形態を示す模式図である。図示されているように、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査具セット７５は、上述した核酸クロマトグラフィー検査具１と、核酸クロマトグラフィー検査具１を収容する梱包ケース７０とを有する。

特に、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査具セット７５では、複数の核酸クロマトグラフィー検査具１のバッキング部材２０が弓なりに湾曲しているものであり、さらに、これら複数の核酸クロマトグラフィー検査具１のバッキング部材２０がそれぞれ異なる曲率を有して弓なりに湾曲していることが好ましい。このように、各核酸クロマトグラフィー検査具１のバッキング部材２０が異なる曲率で弓なりに湾曲している場合には、梱包ケース７０内で隣接する核酸クロマトグラフィー検査具１同士の間に隙間が生じる。その結果として、梱包ケース７０から核酸クロマトグラフィー検査具１を１つずつ摘まみ出し易くなる。また、核酸クロマトグラフィー検査具１のバッキング部材２０が異なる曲率で弓なりに湾曲している場合、バッキング部材２０の背面２７と梱包ケース７０の内壁７３との間に隙間が生じるので、梱包ケース７０から核酸クロマトグラフィー検査具１を摘まみ出し易くなる。

２．第２発明：
図６Ａは、本願の第２発明の核酸クロマトグラフィー検査具の一実施形態を示す模式的な正面図である。図６Ｂは、図６Ａに示されている白抜き矢印Ｖ_Ｌの方向（側方）から観察した、核酸クロマトグラフィー検査具１０１ａの模式的な側面図である。本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査具１０１ａは、細長形状の多孔性シート１１０と、バッキング部材１２０とを備えている。さらに、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査具１０１ａでは、吸収パッド１４０を備えている。

まず、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査具１０１ａにおいて、多孔性シート１１０の表面には、標的核酸を検出した時に表示が現れる検出面１１３が設けられている。この検出面１１３内には表示部１１５が設けられている。表示部１１５は、多孔性シート１１０の長手方向Ｘと交わる角度に延びる、帯状の領域であり、この帯状の領域内に標的核酸を捕獲するための核酸プローブが固定されている。さらに、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査具１０１ａでは、多孔性シート１１０がバッキング部材１２０の貼付面１２５に貼り付けられている。

図７は、図６Ａ中のＡ−Ａ’断面の模式図である。この断面は、検出面１１３に垂直かつ表示部１１５の延びる方向に沿って表示部１１５を切断した断面に該当する。当該断面において、表示部１１５の両端部１１８ａ，１１８ｂ以外の部分が表示部１１５の両端部１１８ａ，１１８ｂを結ぶ基準線（図７中の端部１１８ａと端部１１８ｂとを結ぶ破線）よりも表側に張り出している。こうして表示部１１５が表側に向けて張り出しているので、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査具１０１ａを正面以外の方向（例えば、図６Ａ，図７中の白抜き矢印Ｖ_Ｌで示されている側方）から観察する場合であっても、図６Ｂに示されているように、表示部１１５の一部分が面として視認可能となる。その結果、標的核酸の検出を示す表示（発色）の有無を容易に判別可能となる。

図７に示されているように、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査具１０１ａでは、多孔性シート１１０は中央部で厚く、中央部から両側に向かうにつれて薄くなる形状（蒲鉾形状）を有している。こうした形状の多孔性シート１１０を平らな貼付面１２５に密着させて貼り付けることで、多孔性シート１１０の検出面１１３（およびその一部領域である表示部１１５）が表側に向けて張り出した形となる。

本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査具１０１ａでは、多孔性シート１１０の長手方向に垂直な断面において、検出面１１３が曲率を有して表側に張り出していることが好ましい。このように検出面１１３が曲率を有して表側に張り出している場合には、検出面１１３に陰影が生じにくくなり、表示部１１５に現れるシグナル（発色）を視認し易くなる。なお、ここでいう「曲率を有して張り出している」とは、断面で観た場合に、多孔性シートの検出面が円弧形状になっていることを意味する。

図８Ａおよび図８Ｂは、図６Ａに示されている核酸クロマトグラフィー検査具１０１ａの一使用態様を示す模式図である。なお、図８Ａが図６Ａと同じ方向から観た正面図、図８Ｂが図６Ｂと同じ方向から観た側面図である。図示されているように、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査具１０１ａについては、例えば、テストチューブ１５０内に入っている液体の試料１５５の中に、核酸クロマトグラフィー検査具１０１ａの先端部１４５を浸して使用することができる。こうして先端部１４５を試料１５５の中に浸しておくと、試料１５５が毛細管現象によって多孔性シート１１０内を展開して、もう一方の先端部（吸収パッド１４０が設けられている先端部）まで送られていく。このとき、試料１５５内に標的核酸が含まれていると、この標的核酸が表示部１１５に固定されている核酸プローブによって捕獲される。その結果、標的核酸を標識する色素によって表示部１１５が発色するようになる（図８Ａ，８Ｂ中の表示部１１５ａ，１１５ｂを参照）。

図示されているように、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査具１０１ａでは、検出面１１３が２本の位置マーカー１１４ａ，１１４ｂによって長手方向Ｘに沿って３つの区画に仕切られており、これら３つの区画に表示部１１５ａ〜１１５ｃが１つずつ設けられている。そして、表示部１１５ａ〜１１５ｃには、それぞれ異なる種類の標的核酸（異なる塩基配列の標的核酸）を捕獲するための核酸プローブが固定されている。例えば、表示部１１５ａにアレルギー疾患のマーカーとなる標的核酸に対する核酸プローブ、表示部１１５ｂに腫瘍マーカーとなる標的核酸に対する核酸プローブ、および表示部１１５ｃにウィルス感染のマーカーとなる標的核酸に対する核酸プローブを固定しておくと、一度の検査で上述した３種の疾患を患っているのか否かを判定することが可能となる。これを図８Ａおよび図８Ｂに示されている例に当てはめて考えると、図８Ａおよび図８Ｂ中の試料１５５が採取された患者については、表示部１１５ａ，１１５ｂで発色が観察され、表示部１１５ｃで発色が観察されない。そのため、アレルギー疾患および腫瘍を患っている一方で、ウィルス疾患を患っていないと判定されることになる。

本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査具１０１ａでは、表示部１１５ａ〜１１５ｃは、長手方向Ｘと直交する幅方向Ｙに沿って直線状に延びている。なお、本実施形態では、表示部１１５は、多孔性シート１１０の幅方向Ｙに沿って直線状に延びている必要はなく、試料１５５が多孔性シート１１０内を展開していく過程で、試料１５５が表示部１１５を横断していくように設けられているものであればよい。表示部１１５については、例えば、長手方向Ｘに対して４５度で交わる角度で延びる帯形状や、蛇行した帯形状などの任意の形状を適用することができる。

本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査具１０１ａでは、多孔性シート１１０の一部と接触し、多孔性シート１１０を展開してきた試料１５５を吸収する吸収パッド１４０が設けられている。本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査具１０１ａのように吸収パッド１４０が設けられている場合には、吸収パッド１４０が多孔性シート１１０を展開してきた試料１５５を吸収、保持することが可能となる。そのため、多孔性シート１１０内に展開させる試料１５５の液量を増加させることが可能となり、ひいては、核酸クロマトグラフィー検査具１０１ａにアプライされる標的核酸の量も増加させることが可能となる。その結果として、表示部１１５に捕獲される標的核酸の量も増加し、標的核酸の検出を示すシグナル（発色）が濃く現れるようになるのでよい。

本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査具１０１ａでは、試料１５５が多孔性シート１１０内を展開している際に、標的核酸の全部または一部が一本鎖のポリヌクレオチド構造を有するように調製しておく。また、核酸プローブも標的核酸の一本鎖ポリヌクレオチド構造と特異的にハイブリダイズ可能な一本鎖ポリヌクレオチド構造（標的核酸の一本鎖ポリヌクレオチドの塩基配列と相補的な塩基配列を有する一本鎖ポリヌクレオチド）を少なくとも一部に有するものを用いる。こうした標的核酸と核酸プローブを用いると、標的核酸が表示部１１５に到達したときに、標的核酸の一本鎖ポリヌクレオチド構造と、核酸プローブの一本鎖ポリヌクレオチド構造とがハイブリダイズ（二本鎖形成）し、標的核酸が核酸プローブを介して表示部１１５に固定される。なお、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査具１０１ａでは、核酸プローブについては、標的核酸の有する一本鎖ポリヌクレオチド構造と特異的にハイブリダイズ可能な一本鎖ポリヌクレオチド構造を有するものであれば、ＤＮＡプローブ、ＲＮＡプローブ、あるいはモルフォリノアンチセンスオリゴなど、特に制限はされない。

また、標的核酸についても、一本鎖ＤＮＡ、端部が一本鎖構造とされた二本鎖ＤＮＡ、ＲＮＡなどを適用することが可能である。標的核酸の標識についても通常用い得る方法を適用すればよい。ＰＣＲ法を用いて標的核酸を調製する場合には、ポリメラーゼ反応の基質となるｄＮＴＰ（ｄＡＴＰ、ｄＣＴＰ、ｄＧＴＰ、ｄＴＴＰ）のうちの少なくとも１種に予め標識したものを用いてＰＣＲ産物を直接的に標識する手法を用いることができる。また、無標識のＰＣＲ産物（二本鎖ＤＮＡ）に事後的に標識を付加する手法を用いることができる。無標識のＰＣＲ産物（二本鎖ＤＮＡ）に事後的に標識を付加する手法としては、例えば、ＰＣＲ産物の両端が特定の塩基配列の一本鎖ポリヌクレオチド構造となるように改変したＰＣＲプライマーを用いることができる。この改変型のＰＣＲプライマーを用いて得られたＰＣＲ産物の一本鎖ポリヌクレオチド構造に対して、これと相補的な塩基配列を有する標識された一本鎖ポリヌクレオチドをハイブリダイズさせる。このハイブリダイゼーションにより、標的核酸（ＰＣＲ産物）を標識することができる。

本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査具１０１ａでは、多孔性シート１１０は、ニトロセルロース、セルロース、ポリエーテルスルホン、ナイロン、ＰＶＤＦなどから作られた、無数の細孔を有するシートを用いることが可能である。

図９は、第２発明の核酸クロマトグラフィー検査具の他の実施形態を模式的に示す正面図である。図示されているように、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査具１０１ｂでは、表示部１１５ｄ，１１５ｅがＳ字形状に曲がり、その表示部１１５ｄ，１１５ｅの両端部１１８ｃ，１１８ｄが検出面１１３の側縁までは達していない。

図１０は、図９中のＢ−Ｂ’断面の模式図である。この断面は、図９中の帯状の表示部１１５ｄの両端部１１８ｃ，１１８ｄを結ぶ破線に示されているように、表示部１１５ｄの中心線を含むものである。図示されているように、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査具１０１ｂでは、アーチ形状に湾曲したシート状のバッキング部材１２０の上面を貼付面１２５とし、この貼付面１２５に均一な厚さの多孔性シート１１０が貼り付けられている。そのため、当該断面において、表示部１１５ｄの両端部１１８ｃ，１１８ｄ以外の部分が表示部１１５ｄの両端部１１８ｃ，１１８ｄを結ぶ基準線（図１０中の破線）よりも表側に張り出している。

図１１は、図９および図１０中の白抜き矢印Ｖ_Ｌで示されている方向から観た、核酸クロマトグラフィー検査具１０１ｂの側面図である。上述のように表示部１１５ｄが表側に向けて張り出している。そのため、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査具１０１ｂを正面以外の方向から観察する場合であっても、表示部１１５ｄの一部分が面として視認可能な状態となる。その結果、表示部１１５ｄにおける標的核酸の検出を示す表示（発色）の有無を容易に判別可能となる。

さらに、図９に示されているように、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査具１０１ｂでは、表示部１１５（表示部１１５ｄ，１１５ｅ）においては、表示部１１５の両端部１１８ｃ，１１８ｄのそれぞれから中央に向かって所定の幅Ｗを有する領域で、同一の表示部１１５における残余の領域よりも核酸プローブが高密度に固定されている。図９および図１１中では、核酸プローブの密度の濃淡について表示部１１５ｄの網掛けの濃さで示す。このように表示部１１５における両端部１１８ｃ，１１８ｄの近傍の領域で核酸プローブが高密度で固定されていると、表示部１１５の両端部１１８ｃ，１１８ｄの近傍の領域で標的核酸の検出を示すシグナル（発色）が濃く現れるようになる。その結果として、図１１に示されているように、核酸クロマトグラフィー検査具１０１ｂを側方から観察する場合、表示部１１５の端部１１８ｄの近傍の領域しか視認することができなくても、標的核酸の検出を示すシグナル（発色）の有無を容易に判別することが可能となる。これを図１１に示されている例に当てはめて説明すると、核酸クロマトグラフィー検査具１０１ｂを側方から観察する場合であっても、表示部１１５ｄで標的核酸の検出を示すシグナル（発色）が生じた一方、表示部１１５ｅではシグナル（発色）が生じていないことを容易に判別することが可能になる。特に、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査具１０１ｂでは、標的核酸が検出されれば表示部１１５の端部１１８ｄの近傍が濃く発色するはずである。そのため、側方から観察した場合に表示部１１５の端部１１８ｄの近傍に発色を認められなければ、躊躇することなく、標的核酸が検出されないとの判定を下すことが可能である。すなわち、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査具１０１ｂでは、迅速に標的核酸の有無を判定することが可能になる。

また、第２発明の核酸クロマトグラフィー検査具１０１では、表示部１１５の両端部１１８ｃ，１１８ｄのそれぞれから中央に向かって所定の幅Ｗを有する領域で、同一の表示部１１５における残余の領域よりも多孔性シート１１０の平均開口径が小さいことが好ましい。このように、表示部１１５の両端部１１８ｃ，１１８ｄの近傍の領域で多孔性シート１１０の平均開口径が小さい場合には、これら両端部１１８ｃ，１１８ｄの近傍の領域では、標的核酸が密集した状態で捕獲されるようになる。その結果、標的核酸の検出を示すシグナル（発色）が濃く現れるようになるのでよい。

なお、第２発明の核酸クロマトグラフィー検査具１０１では、表示部１１５の両端部１１８ｃ，１１８ｄの近傍の領域で核酸プローブが高濃度で固定され、かつ表示部１１５の両端部１１８ｃ，１１８ｄの近傍の領域で多孔性シート１１０の平均開口径が小さい場合がある。この場合、核酸プローブが高濃度で固定されている領域と、多孔性シート１１０の平均開口径が小さい領域とは必ずしも完全に一致するものでなくてもよい。

多孔性シート１１０に関して、表示部１１５の両端部１１８ｃ，１１８ｄのそれぞれから中央に向かって所定の幅Ｗを有する領域で、同一の表示部１１５における残余の領域よりも多孔性シート１１０の平均開口径が小さいものを作製する際には、次のようにするとよい。まず、細長形状の多孔性シート１１０とする際に、多孔性シート１１０の両側縁（幅方向Ｙの両側縁）（あるいは両側縁とそれらの近傍の部分）を圧縮した後に切断するとよい。あるいは、圧縮しつつ切断する手法を用いるとよい。こうして多孔性シート１１０の切断時に両側縁を圧縮すると、多孔性シート１１０の両側縁の周辺部分で多孔性シート１１０の平均開口径を縮小させることが可能となる。具体的には、刃先の鈍い押切カッターを用いて、多孔性シート１１０の両側縁を切断する方法などを用いるとよい。

以下、本発明を実施例に基づいてさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。

［核酸クロマトグラフィー検査具の作製］
メルクミリポア製Ｈｉ−Ｆｌｏｗ Ｐｌｕｓ メンブレンシート（以下、「多孔性シート」と称する）（４５ｍｍ×３００ｍｍ）をメルクミリポア製ラミネート加工メンブレンカード（以下、「バッキング部材」と称する）（６０ｍｍ×３００ｍｍ）に貼り付けて、複合シートを作製した。続いて、下記の手順１〜７に従い、複合シートの多孔性シートの表面に、表１に示す塩基配列からなるキャプチャーＤＮＡプローブ溶液を、日本ガイシ株式会社ＧＥＮＥＳＨＯＴ（登録商標）スポッターを用いてスポットし、キャプチャーＤＮＡプローブを多孔性シートの表面に固定化した。次いで、複合シートを細長形状に切断する加工を行うことにより、核酸クロマトグラフィー検査具のストリップを得た。なお、ＧＥＮＥＳＨＯＴ（登録商標）スポッターは、特開２００３−７５３０５号公報に記載されている吐出ユニット（インクジェット法）を用いた装置である。

［手順１：キャプチャーＤＮＡプローブ溶液の調製］
９種類のキャプチャーＤＮＡプローブを表１の塩基配列に従って合成した。これらのキャプチャーＤＮＡプローブをＴｒｉｓ−ＥＤＴＡ ｂｕｆｆｅｒで溶解した水溶液を、ＳＳＣ緩衝液およびブロモフェノールブルー（ＢＰＢ）と混合して、ブロモフェノールブルー０．０５ｗｔ％、キャプチャーＤＮＡプローブ濃度２〜６０μＭの溶液を調製した。

［手順２：スポット条件の検討］
複合シートの多孔性シートの表面にスポットするのに先立ち、検査用のシート上に検査スポットを行うことにより、スポット条件の検討を行った。具体的には、ＧＥＮＥＳＨＯＴ（登録商標）スポッターの吐出ユニット内に配置した液体注入部に、キャプチャーＤＮＡプローブ溶液を注入し、検査用のシート上に検査スポットを行った。品質の検査は、検査用シートに対して、（ｉ）スポットが形成されないことはないか、（ｉｉ）スポットがいびつな形状ではないか、（ｉｉｉ）スポット径が設計値から１０％以上ずれていないか、（ｉｖ）不要なスポット（一般に「サテライト」と称されているスポット）が発生していないか、（ｖ）スポット位置がスポット径の３分の１以上ずれていないか、という５項目について実施した。キャプチャーＤＮＡプローブ溶液はブロモフェノールブルーによって青色に着色されているので、上記（ｉ）〜（ｖ）の項目については検査用のシート上のスポットを目視で観察することにより検査可能であった。

上述の品質の検査の結果、検査スポットで不良が検出されたときは、吐出ユニット内に配置された圧電／電歪素子の駆動信号を調整して、検査スポットを再度行った。駆動信号の調整は電圧値、所定電圧までの上昇時間、所定電圧値のキープ時間、電圧立ち下げ時間の変更により行った。それでもなお不良が検出されるときは、真空吸引によって吐出ユニットからキャプチャーＤＮＡプローブ溶液を抜き取り、液体注入部にキャプチャーＤＮＡプローブ溶液を再度注入した後に、検査スポットを行った。以上の操作を、不良スポットが検出されなくなるまで繰り返した。

［手順３：キャプチャーＤＮＡプローブ溶液のスポット］
不良スポットが検出されなくなったことを確認した後、以下の方法でキャプチャーＤＮＡプローブを、複合シートの多孔性シートの表面にスポットした。まず、１種類のキャプチャーＤＮＡプローブ溶液につき、スポットのピッチを横方向［完成品の「幅方向Ｙ」に対応］、縦方向［完成品の「長手方向Ｘ」に対応］ともに０．０５ｍｍで、かつ、多孔性シートの表面でスポットが横方向、縦方向に一直線上に並ぶように、吐出ユニットと多孔性シートとが非接触の状態でスポットを行った。これにより、複合シートの多孔性シートの表面に横方向３００ｍｍ、縦方向０．５ｍｍのライン（完成品の「表示部」に対応）を形成した。具体的には、多孔性シート上で、吐出ユニットを複合シートの横方向［完成品の「幅方向Ｙ」に対応］に一直線上に移動させる。そして、終点まで到達したら、複合シートを縦方向［完成品の「長手方向Ｘ」に対応］に１列分または複数列分だけ移動させる。次いで、再び複合シートの横方向［完成品の「幅方向Ｙ」に対応］に一直線上に移動させる。これらの手順にて、ライン（完成品の「表示部」に対応）の形成を行った。

吐出ユニットから吐出されたキャプチャーＤＮＡプローブのスポットが着弾し、当該スポットが乾燥する前に、隣接する次のスポットが着弾して、両者が接触すると、滲みや色むらが発生する恐れがある。そこで、まず、横方向［完成品の「幅方向Ｙ」に対応］に０．１ｍｍのピッチで前半のスポットを行った。続いてスポットとスポットとの隙間に、新たにキャプチャーＤＮＡプローブのスポットを着弾させる態様で、０．１ｍｍのピッチにて後半のスポットを行った。このように、前半、後半に分けてスポットをすることにより、０．０５ｍｍのピッチのスポット列を形成すると、滲みや色むらを防ぐことが可能となった。

上述の長さ３００ｍｍ×幅０．５ｍｍのラインは、図１２に示されているように、ライン縦方向［完成品の「長手方向Ｘ」に対応］に並ぶ、ｙ１〜ｙ１０のスポット列により形成されている。ｙ１、ｙ２、ｙ３、ｙ４、ｙ５、ｙ６、ｙ７、ｙ８、ｙ９、ｙ１０の順にスポット列を形成することにより、長さ３００ｍｍ×幅０．５ｍｍのラインを形成することができるが、先のスポット列が乾燥する前に、後続のスポット列が重なってしまうと、この重なった部分で滲みや色むらが発生する恐れがある。そこで、ｙ１、ｙ１０、ｙ２、ｙ９、ｙ３、ｙ８、ｙ４、ｙ７、ｙ５、ｙ６の順でスポットを行うと、先のスポット列が乾燥する前に、後続のスポット列が重なってしまう状況を回避することができる。その結果、ライン幅を０．４５〜０．５５ｍｍ（設計値０．５０ｍｍ±誤差０．０５ｍｍ）以内に収まるように、滲みの発生を抑制可能であった。さらに、ｙ１、ｙ６、ｙ２、ｙ７、ｙ３、ｙ８、ｙ４、ｙ９、ｙ５、ｙ１０の順もしくは、ｙ１、ｙ３、ｙ５、ｙ７、ｙ９、ｙ２、ｙ４、ｙ６、ｙ８、ｙ１０の順のように隣接するスポット列を連続して形成しないようにすることにより、滲みによるライン幅が０．４５ｍｍ〜０．５５ｍｍ（設計値０．５０ｍｍ±誤差０．０５ｍｍ）以内に収まるのに加えて、ライン内の色むらを防ぐことが可能であった。

最終的に、複合シートの多孔性シートの表面に、縦方向［完成品の「長手方向Ｘ」に対応］のピッチが１．２ｍｍにて、９本の、長さ３００ｍｍ×幅０．５ｍｍのライン（ライン幅の設計値からの誤差が０．１ｍｍ以下）を形成した。これらの９本のラインは、それぞれ１種類ずつ異なるキャプチャーＤＮＡプローブ（表１中のプローブ番号１〜９）から形成した。すなわち、９種類のキャプチャーＤＮＡプローブ（プローブ番号１〜９）のそれぞれを多孔性シートの表面の異なる場所に固定した。

［手順４：位置マーカーラインのスポット］
表示部の位置の判定を容易にするために、顔料系マゼンダインクを含んだ液体をスポットすることにより、位置マーカーのラインを形成した。なお、位置マーカーのラインは、キャプチャーＤＮＡプローブ溶液のスポットと同様の方法でスポットを行うことにより形成した。その結果、９本のキャプチャーＤＮＡプローブのライン［ブロモフェノールブルー（ＢＰＢ）で着色］と、３本の位置マーカーのライン（顔料系マゼンダインクで着色）とがストライプ状に配置された複合シートを得た（当該複合シートを加工して得られた完成品を示している図１３（ａ）を参照）。

［手順５：キャプチャーＤＮＡの固定化］
手順４を経てキャプチャーＤＮＡプローブのライン、位置マーカーのラインの形成が完了したのち、複合シートを５０℃で３０分間加熱することにより、キャプチャーＤＮＡプローブを多孔性シートの表面に固定し、位置マーカーの顔料系マゼンタインクを多孔性シートの表面に固着した。

［手順６：検査］
上述の手順３で行った検査と同様の項目［（ｉ）〜（ｖ）］に関して、複合シートの多孔性シートに対して検査を行った。

［手順７：加工］
（実施例１〜５）
手順６の検査後、異常がなかった複合シートについては、下記の加工方法１〜３のいずれかの方法にて加工することにより、多孔性シートの凹値が１．０ｍｍ（実施例１）、２．０ｍｍ（実施例２）、３．０ｍｍ（実施例３）、４．０ｍｍ（実施例４）、５．０ｍｍ（実施例５）となるように長手方向に沿って弓なりに湾曲した、核酸クロマトグラフィー検査具のストリップを作製した（「多孔性シートの凹値」については、図４中のＤ値を参照）。

［加工方法１］
メルクミリポア製吸収パッド（２０ｍｍ×３００ｍｍ）を、多孔性シートに５ｍｍ程度被るように装着した。吸収パッドを固定するために、粘着テープ（２５ｍｍ×３００ｍｍ）を吸収パッドの上面部を予め貼った後、粘着テープのはみ出ている部分を、複合シートの縦方向（完成品の「長手方向Ｘ」に対応）に引っ張りながら、粘着テープのはみ出ている部分を多孔性シートに貼り付けた。このようにすることで、多孔性シートおよびこれを裏打ちするバッキング部材が弓なりに湾曲した複合シートを得た（弓なりに湾曲した形状については図４を参照）。続いて、この複合シートについて裁断機もしくはギロチン式のカッターを用いて切断を行い、幅３．５ｍｍ、長さ６０ｍｍ（多孔性シート長さ４５ｍｍ）のストリップ（核酸クロマトグラフィー検査具）を８５個得た。なお、多孔性シートの凹値は１．０〜５．０ｍｍであった。

［加工方法２］
メルクミリポア製吸収パッド（２０ｍｍ×３００ｍｍ）を、多孔性シートに５ｍｍ程度被るように装着した。吸収パッドを固定するために、粘着テープ（２５ｍｍ×３００ｍｍ）を多孔性シートに貼り付けた。多孔性シートの凹値が１．０〜５．０ｍｍとなるように調整された固定治具を準備し、この固定治具に複合シートを固定した。こうして固定した状態で、複合シートを、裁断機もしくはギロチン式カッターを用いて切断し、幅３．５ｍｍ、長さ６０ｍｍ（多孔性シート長さ４５ｍｍ）のストリップ（核酸クロマトグラフィー検査具）を８５個得た。

［加工方法３］
メルクミリポア製吸収パッド（２０ｍｍ×３００ｍｍ）を、多孔性シートに５ｍｍ程度被るように装着した。吸収パッドを固定するために、粘着テープ（２５ｍｍ×３００ｍｍ）を多孔性シートに貼り付けた。複合シートを裁断機もしくはギロチン式カッターを用いて切断し、幅３．５ｍｍ、長さ６０ｍｍ（多孔性シート長さ４５ｍｍ）としてストリップを８５個得た。続いて、これらストリップの一方の先端部もしくは、両方に先端部に適当な応力を加えることにより、多孔性シートの凹値が１．０〜５．０ｍｍとなるようにストリップを弓なりに湾曲させ、核酸クロマトグラフィー検査具のストリップを得た。

（比較例１）
［加工方法４］
メルクミリポア製吸収パッド（２０ｍｍ×３００ｍｍ）を、多孔性シートに５ｍｍ程度覆うように装着した。吸収パッドを固定するために、粘着テープ（２５ｍｍ×３００ｍｍ）を多孔性シートに貼り付けた。複合シートを裁断機もしくはギロチン式カッターで切断し、幅３．５ｍｍ、長さ６０ｍｍ（多孔性シート長さ４５ｍｍ）のストリップ（核酸クロマトグラフィー検査具）を８５個得た。なお、ここで得られた核酸クロマトグラフィー検査具のストリップは、多孔性シートが平ら、すなわち、多孔性シートの凹値が０．０ｍｍであった。

（実施例６〜１０）
手順６の検査後、異常がなかった複合シートについては、下記の加工方法５または加工方法６にて加工することにより、多孔性シートの中央部と縁部との高低差（凸値）が０．０１ｍｍ（実施例６）、０．０３ｍｍ（実施例７）、０．０５ｍｍ（実施例８）、０．０７ｍｍ（実施例９）、０．１０ｍｍ（実施例１０）となる核酸クロマトグラフィー検査具のストリップを作製した。なお、上記高低差（凸値）については、多孔性シート両端部の表面を結ぶ基準線から多孔性シート中央部の表面までの距離であり、図７中の「凸値Ｔ」を参照されたい。

［加工方法５］
メルクミリポア製吸収パッド（２０ｍｍ×３００ｍｍ）を、多孔性シートに５ｍｍ程度被るように装着した。吸収パッドを固定するために、粘着テープ（２５ｍｍ×３００ｍｍ）をメンブレンシートに貼り付けた。続いて、裁断機を使用して複合シートの加工を行う際に、裁断機の刃を多孔性シートの表面に接触させた後、多孔性シートに刃を押し込むようにして、複合シートを切断した。このようにすることで、多孔性シートの中央部の厚みが０．５５ｍｍ、両縁部の厚みが０．４５ｍｍとなる、核酸クロマトグラフィー検査具のストリップを得ることができた。すなわち、多孔性シートの中央部が同両端部よりも０．１０ｍｍ突出している蒲鉾形状となった。また、同様の作業を繰り返して、１枚の複合シートから、幅３．５ｍｍ、長さ６０ｍｍ（多孔性シート長さ４５ｍｍ）のストリップを８５個得た。さらに、裁断機の刃を押し込む力を調整することにより、多孔性シートの中央部と縁部との高低差（凸値）が、上述の０．１０ｍｍのものの他に、０．０１ｍｍ、０．０３ｍｍ、０．０５ｍｍ、０．０７ｍｍのものも作製した。

［加工方法６］
メルクミリポア製吸収パッド（２０ｍｍ×３００ｍｍ）を、多孔性シートに５ｍｍ程度被るように装着した。吸収パッドを固定するために、粘着テープ（２５ｍｍ×３００ｍｍ）をメンブレンシートに貼り付けた。続いて、複合シートの加工を行う際に、裁断機もしくは、ギロチン式カッターを用い、刃先が鋭角ではなく平坦なカッターによって、多孔性シートを押しつぶすようにして、複合シートを切断した。さらに、刃先に粘着剤を付着させておくことにより、多孔性シートをより確実に押しつぶすように切断した。このようにすることで、多孔性シートの中央部が両端部よりも突出している蒲鉾形状で、多孔性シートの中央部と縁部との高低差（凸値）が、０．０１ｍｍ、０．０３ｍｍ、０．０５ｍｍ、０．０７ｍｍ、０．１０ｍｍのものを得た。なお、１枚の複合シートから幅３．５ｍｍ、長さ６０ｍｍ（多孔性シート長さ４５ｍｍ）のストリップを８５個得た。

（比較例２）
［加工方法７］
メルクミリポア製吸収パッド（２０ｍｍ×３００ｍｍ）を、多孔性シートに５ｍｍ程被るように装着した。吸収パッドを固定するために、粘着テープ（２５ｍｍ×３００ｍｍ）をメンブレンシートに貼り付けた。刃先が鋭く鋭利な刃を用いて切断を行うことにより、多孔性シートの厚さが均一（０．５５ｍｍ）で、多孔性シートの中央部と両側部との高低差（凸値）が０．００ｍｍの核酸クロマトグラフィー検査具のストリップを得た。

［評価試験］
実施例１〜１０、比較例１，２の核酸クロマトグラフィー検査具のストリップについて、下記の手順８〜１０に従った、クロマトグラフィー法により評価を行った。

［手順８：移動相の準備］
プローブ番号１の塩基配列に相補的な塩基配列を有するサンプルＤＮＡ（なお、アミノ基で修飾）を、カルボキシル化ラテックス粒子（色：青色、平均粒子径：４００ｎｍ）に固定した。このサンプルＤＮＡを固定したラテックス粒子を滅菌水で分散し、移動相とした。

［手順９：展開工程］
０．２ｍｌマイクロチューブに、移動相５０μｌを分注し、核酸クロマトグラフィー検査具のストリップの先端を移動相に浸積した。浸漬直後から、移動相が毛細管現象により、多孔性シート内を上方（吸収パッドが設けられているもう一方の先端の方向）に向かって移動した。ブロモフェノールブルー（ＢＰＢ）は、多孔性シートに固定されていないため、移動相により洗い流された。こうして洗い流されることで、ブロモフェノールブルーによるラインは消失した［図１３（ｂ）〜１３（ｄ）中で、消失したラインを星印（＊）にて示す］。こうして移動相が上方に移動していくにつれて、ブロモフェノールブルーによる９本のラインが順次消失していくので、移動相が多孔性シート内のどこの位置まで到達しているのかを容易に確認することが可能であった。なお、位置マーカーの顔料系マゼンダインクは、多孔性シートに固着しており、移動相に不溶であるため、移動相によって洗い流されなかった。

［手順１０：検出工程］
移動相中のサンプルＤＮＡは、プローブ番号１のキャプチャーＤＮＡプローブと相補的な塩基配列を有しているため、ハイブリダイゼーション反応によって、プローブ番号１のキャプチャーＤＮＡプローブに特異的に結合する。これにより、サンプルＤＮＡを固定したラテックス粒子が、プローブ番号１のキャプチャーＤＮＡプローブに捕捉される。プローブ番号１のキャプチャーＤＮＡプローブが固定されている表示部では、サンプルＤＮＡとプローブ番号１のキャプチャーＤＮＡプローブとのハイブリダイゼーション反応の進行に伴い、ラテックス粒子が蓄積、凝集し、青色に発色した［図１３（ｄ）を参照］。移動相への浸漬から約２０分で、移動相がすべて吸収パッドに移動して反応が終了した。以上の手順９、手順１０で述べたように、ブロモフェノールブルー（ＢＰＢ）のラインの色が移動相の展開（上昇）とともに一旦消失した後［図１３（ｃ）を参照］、プローブ番号１の表示部がラテックス粒子の蓄積により発色（青色）した［図１３（ｄ）を参照］。

［評価試験の結果］
実施例１〜５、比較例１の核酸クロマトグラフィー検査具のストリップについて、評価結果を表２に示す。

（ハンドリング）
表２に示されているように、多孔性シートの凹値が１．０ｍｍの実施例１では、ストリップを平らな机の上に置いたときや、梱包ケースから取り出すときのハンドリングが若干もたつくことが時々あった［評価結果：良、表２中では丸印（○）で表示］。多孔性シートの凹値が２．０〜５．０ｍｍの実施例２〜５では、ハンドリングが極めて良好であった［評価結果：優、表２中では二重丸印（◎）で表示］。これに対して、多孔性シートの凹値が０．００ｍｍの比較例１では、ストリップを平らな机の上に置いたときや、梱包ケースから取り出すときにハンドリングが困難であった。そのため、比較例１では、キャプチャーＤＮＡプローブをスポットした領域を手で触ったり、ストリップを変形させてしまったりすることがあった［評価結果：不可、表２中ではクロス印（×）で表示］。

（表示部の発色）
また、プローブ番号１のキャプチャーＤＮＡプローブを固定した表示部の発色については、多孔性シートの凹値が１．０〜４．０ｍｍの実施例１〜４では、凹値が大きくなるにつれて、表示部の発色が非常に濃く（通常レベルよりも濃く）なることが観察できた［評価結果：優、表２中では二重丸印（◎）で表示］。実施例５の核酸クロマトグラフィーの検査具のストリップでは、移動相の全量を展開させることが不可能なときがあり（詳しくは後述）、このようなときには表示部の発色が通常レベルで濃くなっていた［評価結果：良、表２中では丸印（○）で表示］。なお、多孔性シートの凹値が０．０ｍｍの比較例１では、表示部の発色が薄くぼやけていた［評価結果：不可、表２中ではクロス印（×）で表示］。

（移動相の吸収）
実施例１〜４、比較例１の核酸クロマトグラフィーの検査具のストリップでは、マイクロチューブに入れておいた移動相の全量を吸収パッドに移動させることができた［評価結果：優、表２中では二重丸印（◎）で表示］。実施例５の核酸クロマトグラフィーの検査具のストリップでは、吸収パッドが一部で剥がれて、多孔性シートと吸収パッドとの間に隙間が生じ、移動相のほぼ全量を吸収パッドに移動させることが不可能な場合もあった［評価結果：良、表２中では丸印（○）で表示］。

以上から、実施例１〜５の核酸クロマトグラフィー検査具のストリップでは、「ハンドリング」、「表示部の発色」、「移動相の吸収」のいずれの項目も良好（評価結果が「良」以上）であることが判明した。

実施例６〜１０、比較例２の核酸クロマトグラフィーの検査具のストリップについて、評価結果を表３に示す。

（側方からの視認性）
表３に示されているように、実施例６のように多孔性シートの中央部と端部との高低差（凸値）が０．０１ｍｍの場合には、核酸クロマトグラフィーの検査具のストリップの側方から位置マーカーのラインを僅かに視認することができた［評価結果：良、表３中では丸印（○）で表示］。さらに、実施例７〜１０のように多孔性シートの中央部と端部との高低差（凸値）が０．０３〜０．１０ｍｍの場合には、位置マーカーのラインを明確に視認することができた［評価結果：優、表３中では二重丸印（◎）で表示］。また、実施例７〜１０のように多孔性シートの中央部と端部との高低差（凸値）が０．０３〜０．１０ｍｍの場合には、多孔性シートの中央部と端部との高低差が大きくなるにつれて、位置マーカーのラインの視認性が高まっていくことが判明した。これに対して、比較例２のように多孔性シートの中央部と端部との高低差（凸値）が０．００ｍｍの場合では、核酸クロマトグラフィーの検査具のストリップの側方から位置マーカーのラインを視認することができなかった［評価結果：不可、表３中ではクロス印（×）で表示］。

（側方からの表示部の発色の判別性）
実施例６〜８のように多孔性シートの中央部と端部との高低差（凸値）（厚みの差）が０．０１〜０．０５ｍｍの場合には、核酸クロマトグラフィーの検査具のストリップの側方から表示部の発色を確認することができた［評価結果：良、表３中では丸印（○）で表示］。さらに、実施例９，１０のように多孔性シートの中央部と端部との高低差（凸値）（厚みの差）が０．０７〜０．１０ｍｍの場合には、核酸クロマトグラフィー検査具のストリップの側方から表示部の呈色を非常に明瞭に確認することができた［評価結果：優、表３中では二重丸印（◎）で表示］。これに対して、比較例２のように多孔性シートの中央部と端部との高低差（凸値）（厚みの差）が０．００ｍｍの場合には、核酸クロマトグラフィーの検査具のストリップの側方から表示部の発色を確認することができなかった［評価結果：不可、表３中ではクロス印（×）で表示］。

ここでは、実施例６〜１０、比較例２の核酸クロマトグラフィーの検査具のストリップにおける多孔性シート表面についての顕微鏡観察などの結果を考慮する。元来は厚みが均一であったメンブレンシート（多孔性シート）を材料として、完成品のストリップで、中央部が厚く、両縁部が薄くなるように多孔性シートを加工すると、完成品のストリップにおける多孔性シートの両縁部の近傍の領域が収縮することが判明した。これにより、この両縁部の近傍の領域の表面では、多孔性シートの平均開口径が縮小し、この平均開口径の縮小に伴ってＤＮＡプローブの密度が高くなることが判明した。こうした仕組みにより、実施例９，１０の核酸クロマトグラフィー検査具のストリップでは、多孔性シートの両縁部の近傍の領域で発色が非常に濃くなるものと結論付けることができた。

本発明は、感染症やアレルギーなどに関する診断や、細菌やウィルスなどの検出に使用可能な核酸クロマトグラフィー検査具として利用できる。

１，１ａ，１ｂ：核酸クロマトグラフィー検査具、１０：多孔性シート、１３：検出面、１４ａ〜１４ｃ：位置マーカー、１５，１５ａ〜１５ｅ：表示部、１８ａ，１８ｂ：（表示部の）端部、２０：バッキング部材、２５：貼付面、２７：背面、４０：吸収パッド、４５：試料採取部、５０：テストチューブ、５５：試料、６０：標的核酸、６５：色素、７０：梱包ケース、７３：内壁、７５：核酸クロマトグラフィー検査具セット、１０１，１０１ａ，１０１ｂ：核酸クロマトグラフィー検査具、１１０：多孔性シート、１１３：検出面、１１４ａ〜１１４ｃ：位置マーカー、１１５，１５ａ〜１５ｅ：表示部、１１８ａ〜１１８ｄ：（表示部の）端部、１２０：バッキング部材、１２５：貼付面、１４０：吸収パッド、１４５：試料採取部、１５０：テストチューブ、１５５：試料。

Claims (13)

1. 標的核酸を含む試料液体を展開し、前記標的核酸を検出して表示するための細長形状の多孔性シートと、
   前記多孔性シートが貼り付けられた貼付面を有するバッキング部材と、を備え、
   前記多孔性シートの表面は、前記標的核酸を捕獲するための核酸プローブが固定されているとともに前記多孔性シートの長手方向と交わる角度に延びる帯状の表示部を有する検出面を有し、
   前記貼付面が凹形状を呈するとともに、
   前記多孔性シートが前記貼付面の凹形状に追随して反った形状を有する核酸クロマトグラフィー検査具。
2. 前記多孔性シートの前記長手方向に平行でかつ前記多孔性シートの厚さ方向に平行な断面において、前記貼付面が凹形状を呈する請求項１に記載の核酸クロマトグラフィー検査具。
3. 前記多孔性シートの反りに伴って、前記検出面における平均開孔径が、前記多孔性シートの前記貼付面側の表面における平均開孔径よりも小さい請求項１または２に記載の核酸クロマトグラフィー検査具。
4. 前記バッキング部材の形状が細長の板形状であり、前記バッキング部材の長手方向が前記多孔性シートの前記長手方向と平行である請求項１〜３のいずれか１項に記載の核酸クロマトグラフィー検査具。
5. 前記多孔性シートが、曲率を有して反っている請求項１〜４のいずれか１項に記載の核酸クロマトグラフィー検査具。
6. 前記多孔性シートの凹値が１．０〜５．０ｍｍである請求項５に記載の核酸クロマトグラフィー検査具。
7. 前記バッキング部材は、前記貼付面とは反対側の表面が前記貼付面の凹形状に相補的な凸形状であることにより、弓なりに湾曲している請求項１〜６のいずれか１項に記載の核酸クロマトグラフィー検査具。
8. 複数の、請求項１〜７のいずれか１項に記載の核酸クロマトグラフィー検査具と、
   前記核酸クロマトグラフィー検査具を収容する梱包ケースと、を備える核酸クロマトグラフィー検査具セット。
9. 複数の、請求項７に記載の核酸クロマトグラフィー検査具と、
   前記核酸クロマトグラフィー検査具を収容する梱包ケースと、を備え、
   前記複数の核酸クロマトグラフィー検査具の前記バッキング部材がそれぞれ異なる曲率を有して弓なりに湾曲している核酸クロマトグラフィー検査具セット。
10. 標的核酸を含む試料液体を展開し、前記標的核酸を検出して表示するための細長形状の多孔性シートと、
    前記多孔性シートが貼り付けられたバッキング部材と、を備え、
    前記多孔性シートの表面は、前記標的核酸を捕獲するための核酸プローブが固定されているとともに前記多孔性シートの長手方向と交わる角度に延びる帯状の表示部を有する検出面を有し、
    前記検出面に垂直かつ前記表示部の延びる方向に沿って前記表示部を切断した断面において、前記表示部の両端部以外の部分が前記表示部の前記両端部を結ぶ基準線よりも張り出している核酸クロマトグラフィー検査具。
11. 前記多孔性シートの前記長手方向に垂直な断面において、前記検出面が曲率を有して張り出している請求項１０に記載の核酸クロマトグラフィー検査具。
12. 前記表示部においては、前記表示部の両端部のそれぞれから中央に向かって所定の幅を有する領域で、同一の前記表示部における残余の領域よりも前記核酸プローブが高密度に固定されている請求項１０または１１に記載の核酸クロマトグラフィー検査具。
13. 前記表示部においては、前記表示部の両端部のそれぞれから中央に向かって所定の幅を有する領域で、同一の前記表示部における残余の領域よりも前記多孔性シートの平均開口径が小さい請求項１０〜１２のいずれか１項に記載の核酸クロマトグラフィー検査具。