CN115820461B

CN115820461B - 一种高产吲哚乙酸菌株jb0319及其应用

Info

Publication number: CN115820461B
Application number: CN202210961846.6A
Authority: CN
Inventors: 王金斌; 周益帆; 岳童; 白寅霜; 何川; 曾海娟; 刘华
Original assignee: Shanghai Academy of Agricultural Sciences
Current assignee: Shanghai Academy of Agricultural Sciences
Priority date: 2022-08-11
Filing date: 2022-08-11
Publication date: 2024-02-02
Anticipated expiration: 2042-08-11
Also published as: CN115820461A

Abstract

本发明提供一种高产吲哚乙酸菌株JB0319及其应用。所述高产吲哚乙酸菌株JB0319分类命名为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)，于2022年7月1日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏号为GDMCC No：62594。本发明从青菜根际土中分离得到一株IAA产量高达30.05μg/mL的菌株，具有较强的溶磷能力、产铁载体、产ACC脱氨酶和产生物膜能力，盆栽试验结果表明，接种该菌株JB0319后，青菜的地上株高、鲜重、根长、根粗、叶片数显著增加。该菌株JB0319可作为候选根际促生菌，为微生物菌剂的开发提供了宝贵的菌种资源。

Description

一种高产吲哚乙酸菌株JB0319及其应用

技术领域

本发明涉及菌种分离鉴定技术领域，更具体地涉及一种高产吲哚乙酸菌株JB0319及其应用。

背景技术

随着现代农业的发展，粮食生产安全和农作物品质提升对我国的农业发展提出了更高的要求。通常情况下，人们会使用化学肥料或农药提高农作物的产量和品质，但这些措施只能在短期内快速提升农作物产量，长期使用化学肥料和农药，会造成土壤板结，土壤微生物数量急剧下降，从而影响作物的产量和品质，导致食品安全存在隐患。植物根际促生菌(plant growth promoting rhizobacteria，PGPR)是指自由生活在土壤或附生于植物根系的一类可促进植物生长及其对矿质营养的吸收和利用，并能抑制有害生物的有益菌类。因此，具有安全、环保、持久性等诸多优点的植物根际促生菌(PGPR)成为了国内外的学者关注的焦点。在已有的研究中，许多PGPR被证明有明显的促生效应，并将其应用到了农业实践中。

吲哚-3-乙酸(IAA)是一种广泛存在于植物体内的生长素，对植物生长有重要作用。目前的许多研究表明，PGPR可产生IAA，包括芽孢杆菌属(Bacillus sp.)、假单胞菌属(Pseudomonas sp.)、变形杆菌属(Proteus sp.)等。IAA在细菌细胞中没有明显的功能，但可以作用于植物细胞壁，促进根系分泌物的增加，招募有益微生物并提供营养保障它们的生长繁殖；IAA还能刺激植物根毛和侧根的生长发，增加根表面积，从而使植物更容易吸收水分和获取土壤养分。Liu 等研究表明，从何首乌根际分离出产IAA的PGPR的产量达33.64～38.65μg/mL，并发现该菌株对何首乌种子的萌发具有显著的促进作用。张慧敏等研究表明，产IAA的PGPR能促进玉米、白菜、番茄、马铃薯等植株的生长发育，明显提高其产量和品质。由此可见，PGPR在农业中具有较大的开发潜力。

Zhou等从水稻叶片分离得到的B.cereus YN917具有IAA合成能力的菌株具有多种促生活性，盆栽试验结果表明菌株YN917能从多方面促进水稻种子萌发和幼苗植株生长。Arti等从盐泽土壤中分离出3株耐盐芽孢杆菌，分别为 B.paramycoides HB6J2、B.amyloliquefaciens HB8P1和B.pumilus HB4N3，发现 3株菌具有合成IAA等多种促生能力，且其可克服盐胁迫对植物的不利影响，并促进植物生长、提高作物产量。Irina等研究发现具有较高促生活性的菌株 C-21N2(Bacillus sp.)对苜蓿表现出较突出的促生作用，田间试验证明接种菌株C-21N2可显著提高种子的发芽率，该菌还参与苜蓿植株细胞外氨基酸代谢。 Panigrahi等从圣罗勒茎中分离到的内生菌Enterobacter cloacae OS03在不同pH和温度下的IAA分泌量为17.807～17.934μg/mL，盆栽实验发现OS03对水稻、花生、绿豆和白菜的幼苗地上部分、种子活力、根系生物量等指数有显著的促进作用。Rafaela等发现产铁载体和ACC脱氨酶的链霉菌对玉米的根和也有显著的促生作用。Subramaniam等从鹰嘴豆根际分离出的根际细菌将鹰嘴豆的籽粒产量提高了25～27％，地上鲜重提高了21～42％，还提高了土壤中速效磷、全氮和有机碳的含量。Lou等通过培养皿发芽试验和盆栽试验发现芽孢杆菌对番茄胚根的长度、根系长度等有显著的促进作用，这对番茄植株的生长起到重要的作用。这些研究为PGPR的深入研究和在农业中的应用提供了参考。

发明内容

本发明的目的是提供一种高产吲哚乙酸菌株JB0319及其应用，从而提供一种具有更优的促生特性的促生功能候选菌株，以丰富微生物菌种资源库。

为了解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：

根据本发明的第一方面，提供一种高产吲哚乙酸菌株JB0319，所述高产吲哚乙酸菌株JB0319分类命名为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)，于2022年7 月1日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，地址为广州市先烈中路100号大院 59号楼5楼，保藏号为GDMCC No：62594。

根据本发明的第二方面，提供一种如上面所述的高产吲哚乙酸菌株 JB0319在促进植物生长中的应用。

所述高产吲哚乙酸菌株JB0319通过产吲哚-3-乙酸促进植物生长。

所述应用包括以下步骤：S1：将根据权利要求1所述的高产吲哚乙酸菌株JB0319接种于LB液体培养基中，37℃、180r/min振摇培养至对数期，在 4000～6000rpm条件下离心8～12min，用无菌水重悬，调整OD₆₀₀为1，备用； S2：将植物种子用温汤浸种法催芽，将种子置于38～42℃温水中浸泡，将种子分散于装有湿滤纸片的培养皿中，24～28℃下催芽，种子露白后移栽至育苗基质中，不施任何肥料，在日照条件下培养，当幼苗长至四叶期，移栽至盆中；S3：采用步骤S1备好的菌液对植株进行处理，用量为3～10mL/株，即可实现对植物的促进生长。

优选地，幼苗移栽3天后开始菌液处理，每隔7天施加一次菌液，共计 4次。

根据本发明的第三方面，提供一种如上面所述的高产吲哚乙酸菌株 JB0319在制备促进植物生长制剂中的应用。

优选地，所述促进植物生长制剂为微生物菌剂或微生物肥料。

产生生物膜是PGPR定植于植物根际的基础，而PGPR稳定地定植于植物根际是有效发挥其促生作用的先决条件。PGPR的生物膜形成可为微生物细胞提供保护，使其免受胁迫条件的影响，并能承受根际波动的环境条件。PGPR的生物膜形成能力表征其根际定殖能力的强弱，PGPR通过形成生物膜稳定地定植于植物根际，从而增强植物养分吸收、改善土壤结构或增加持水能力促进植物生长。将PGPR应用于农业是一种有效的提高农作物产量和品质的措施。目前广泛报道的PGPR大都是芽孢杆菌属、假单胞菌属等。

本发明中通过高通量筛选从青菜根际土中获得一株高产IAA的菌株 JB0319，经16S rDNA测序鉴定该菌株为一株贝莱斯芽孢杆菌。该菌株JB0319 具有较强的生物膜形成能力，我们初步推测该菌株可能通过形成生物膜定植于青菜的根际，进而促进青菜的生长，进一步地我们还验证了该菌株确实具有促生潜力，如产IAA、解磷、产铁载体等，盆栽试验也证实了该菌株确实对青菜具有较好的促生效果，表明贝莱斯芽孢杆菌可作为促生功能候选菌株，丰富微生物菌种资源库。根据本发明提供这样一种高产IAA菌株JB0319，其产生的IAA可作用于植物细胞壁，促进宿主植物根系的发育，从而使植物更好地吸收水分和利用养分。同时，IAA也可诱导ACC脱氨酶的活性，促进ACC的分解，减少ACC的积累和降低植物的乙烯水平，从而促进植物根的伸长。

本发明从青菜根际土中筛选得到的高产IAA菌株JB0319的IAA产量最高达到30.05μg/mL，较其它研究中菌株的产IAA能力，该菌株具有较强的产IAA 能力。同时，JB0319还具有较强的解有机磷能力、产铁载体、产ACC脱氨酶和产生物膜的能力。关于植物促生菌促生效应的研究，其实际应用效果是至关重要的评判指标。为了解分离菌株的促生和应用潜力，本发明还在平板试验的基础上进一步进行盆栽，验证目的菌株对于植物表型的作用效果。在本发明中，接种JB0319后，青菜的形态指标得到了显著的提高。JB0319作为一株高产IAA且具有多种促生特性的菌株，可能通过多种途径作用于青菜，促进其生长发育。

综上所述，本发明筛选得到一株高产IAA的贝莱斯芽孢杆菌JB0319，其 IAA产量为30.05μg/mL，该菌株兼具解磷、产铁载体、产ACC脱氨酶、产生物膜能力。在青菜盆栽试验中，接种JB0319之后，青菜的地上株高、鲜重、根长、根粗、叶片数分别较对照增加了17.06％、96.42％、125.77％、50.56％、33.33％，表明该菌株具有较优良的促生特性以及突出的促生潜力和应用前景，值得深入研究。

附图说明

图1示出了基于16S rDNA基因序列构建的菌株序列系统发育树；

图2示出了产IAA菌株JB0319的Salkowski显色反应；

图3示出了菌株JB0319在孟金娜培养基上的形态；其中，A：对照，B： JB0319；

图4示出了菌株JB0319在CAS检测平板上的形态；其中，A：对照，B： JB0319；

图5示出了菌株JB0319在ADF和DF培养基中的长势；

图6示出了菌株JB0319产生物膜能力(A)及其菌落形态(B)；

图7示出了青菜盆栽表型。

具体实施方式

以下结合具体实施例，对本发明做进一步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本发明而非用于限制本发明的范围。

材料和方法

1土壤样品

实验所用青菜根际土样来自上海缘菊粮食果蔬专业合作社的温室中大棚里(121°15′23″E,31°26′7″N)。

2培养基

LB培养基：NaCl 10g，酵母提取物5g，胰蛋白胨10g，蒸馏水定容至 1L。

孟金娜培养基：葡萄糖10.0g，(NH₄)₂SO₄ 0.5g，酵母提取物0.5g， NaCl 0.3g，KCl0.3g，MgSO₄ 0.3g，FeSO₄ 0.03g，MnSO₄ 0.03g，CaCO₃ 1.0g，卵磷脂0.2g，琼脂15g，用蒸馏水定容至1L。

PKO培养基：葡萄糖10.0g，(NH₄)₂SO₄ 0.5g，酵母提取物0.5g， NaCl 0.3g，KCl0.3g，MgSO₄ 0.3g，FeSO₄ 0.03g，MnSO₄ 0.03g，CaCO₃ 1.0g， Ca₃(PO₄)₂ 0.2g，琼脂15g，用蒸馏水定容至1L。

PBS购自北京拉博科技有限公司；ADF、DF培养基购自北京雷根生物技术有限公司；嗜铁素(CAS)固体培养基购自北京酷来搏科技有限公司。

实施例1菌株的分离与筛选

1.1样品稀释：称取根系样品3.0g，放入50mL的无菌离心管中，用无菌水冲洗至无大块土壤，将其转移至装有40mL无菌PBS的离心管中，超声1min，充分颠倒混匀，通过无菌滤纸将根际土菌悬液液体转移至新的50mL无菌离心管中。将根际土菌悬液按梯度加入含有100mL 10％LB(含有100mg/L的L-色氨酸)溶液的试剂瓶中，配制成不同梯度的稀释液。

1.2细菌培养：将稀释液分装进96孔细胞培养板，未添加根际土菌悬液的10％LB(含有100mg/L的L-色氨酸)溶液作为阴性对照。将培养板放置在 37℃，300r/min条件下培养1～2d，观察96孔细胞培养板中细菌的生长情况，将培养板中有约30％的孔呈现肉眼可见的浑浊状态的稀释浓度作为最适稀释浓度。

1.3产IAA菌株定性初筛：吸取50μL 96孔板中浑浊的菌液于白色陶瓷板，同时加入等量的Salkowski显色液进行显色反应。以加入50μL IAA(50mg/L) 的标准液作为阳性对照，未加菌液的LB(含有100mg/L的L-色氨酸)溶液为阴性对照。白色陶瓷板于室温，避光条件下放30min后观察，颜色变红者表示能够产生IAA。将产IAA的菌株在LB平板上进行划线培养，确保分离的菌株均为纯菌株，并保藏菌株。

实施例2菌株的鉴定

2.1菌株基因组DNA提取

挑取纯化的单菌落接种于LB液体培养基中，37℃、180r/min振摇培养至对数期，吸取1mL菌液至1.5mL离心管，离心收集菌体，按SK8255(细菌) 试剂盒(生工生物工程有限公司)操作提取菌株基因组DNA。

2.2菌株16S r DNA基因序列分析

采用细菌通用引物27F(SEQ ID No.1)： 5’-AGTTTGATCMTGGCTCAG-3’和1492R(SEQID No.2)： 5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’对16S rDNA基因全长序列进行PCR扩增。 PCR反应体系包含：0.5μL模板、0.2μL 2×Taq、2.5μL Buffer、1μL dNTP、0.5 μL F、0.5μL R、dd H₂O补充至25μL。PCR反应条件为：94℃ 4min；94℃ 45 s；55℃ 45s；72℃ 1min；30个循环；72℃10min。PCR产物送至生工生物工程(上海)有限公司进行测序分析。将测得的16S rDNA基因序列提交 GenBank，与数据库中相似性高的相关菌株的16S rDNA序列进行比对，采用 MEGA7.0软件Neighbor-Joining法构建系统发育树，进行系统发育树分析。

结果：经测序，该菌株的16S rDNA基因序列长度为1440bp，如SEQ ID No.3所示：

TCAGGACGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTCGAGCGGACAG ATGGGAGCTTGCTCCCTGATGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGG GTAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACC GGATGGTTGTTTGAACCGCATGGTTCAGACATAAAAGGTGGCTTCGGCTAC CACTTACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTC ACCAAGGCGACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGG GACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTC CGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGT TTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTGCCGTTCAAATA GGGCGGCACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGC CAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGC GTAAAGGGCTCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCT CAACCGGGGAGGGTCATTGGAAACTGGGGAACTTGAGTGCAGAAGAGGA GAGTGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACA CCAGTGGCGAAGGCGACTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGAGCGAAA GCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACG ATGAGTGCTAAGTGTTAGGGGGTTTCCGCCCCTTAGTGCTGCAGCTAACGC ATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGACTGAAACTCAAAGGA ATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCA ACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTGACAATCCTAGAGATAG GACGTCCCCTTCGGGGGCAGAGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGC TCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGATC TTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTAAGGTGACTGCCGGTGACAAA CCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGG GCTACACACGTGCTACAATGGACAGAACAAAGGGCAGCGAAACCGCGAG GTTAAGCCAATCCCACAAATCTGTTCTCAGTTCGGATCGCAGTCTGCAACT CGACTGCGTGAAGCTGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGT GAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCACGAGAGTTT GTAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCTTTTAGG

将序列进行Blast并构建进化树分析(如图1所示)，菌株JB0319与Bacillusvelezensis SRCM103616(GenBank登录号为CP035410)的遗传距离最近且相似性为99％，与芽孢杆菌属其他菌株遗传距离相对较远，故鉴定菌株JB0319为贝莱斯芽孢杆菌(B.velezensis)。

实施例3菌株产IAA能力的定量测定

3.1标准曲线的制作

配制浓度为0、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100μg/mL的IAA 标准溶液，并按体积比1:1与Salkowski比色液混合，室温避光放置30min，以蒸馏水与Salkowski比色液等体积混合为对照，测各浓度的OD530 nm，最后以 IAA浓度为横坐标，OD530 nm为纵坐标作图，即为IAA标准曲线。

3.2产IAA菌株的定量复筛

根据标准曲线，对初筛的菌株进行定量复筛，其中以未接菌含100mg/L 的L-色氨酸的LB的液体培养基与Salkowski比色液等体积混合为对照组。最后根据标准曲线计算相应的IAA含量。

通过96孔板微培养结合Salkowski比色法从青菜根际土中分离得到一株产IAA能力较强的菌株，并对获得菌株的产IAA能力进行定量测定，结果如图 2所示。以IAA标准溶液浓度为横坐标，以530nm下的吸光值为纵坐标，绘制标准曲线，其线性回归方程为y＝0.052x-0.0091，R2＝0.9986，拟合优较好，故根据此方程计算发酵液中IAA的含量。经计算，菌株JB0319 IAA的浓度为30.05 μg/mL，这表明其具有较好的合成IAA的能力。

实施例4菌株促生潜力体外测定

4.1溶磷活性测定

有机磷的测定方法：将菌液用移液枪移取5μL至有机磷培养基上，在 37℃恒温培养箱中培养2～3d，测量其溶磷圈直径(D)和菌落直径(d)。有机磷降解菌的溶磷圈直径(D)与菌落直径(d)的比值越大，有机磷降解效果越好。

无机磷的测定方法：将菌液用移液枪移取5μL至无机磷培养基上，在 37℃恒温培养箱中培养2～3d，测量其溶磷圈直径(D)和菌落直径(d)。无机磷降解菌的溶磷圈直径(D)与菌落直径(d)的比值越大，无机磷降解效果越好。

本实施例将菌株JB0319分别通过孟金娜和PKO培养基进行溶磷能力测定，结果如图3所示。菌株JB0319在孟金娜培养基上有较明显的解磷圈，其 D/d为2.84；在PKO培养基上未形成解磷圈。根据解磷圈的相对大小(D/d)，对菌株的解磷情况进行统计，其中有机磷D/d≤1.50表示为“有解磷能力”、D/d 在1.50～1.90表示为“有良好的解磷能力”、D/d≥1.90表示为“有较强的解磷能力”。因此，可判断出菌株JB0319具有较强的解有机磷能力，不具有解无机磷能力。

4.2产铁载体能力测定

将目标菌吸取5μL菌液点接在CAS平板上，37℃静置培养2～3d，观察菌落在CAS平板上是否产生橙黄色晕圈，菌落周围均出现明显的橙黄色晕圈，表明供试菌株能产生铁载体。通过测定菌落直径和晕圈直径计算噬铁圈大小，噬铁圈大小＝(晕圈直径-菌落直径)/2。

将菌株JB0319接种于CAS检测平板，根据橙黄色晕圈的有无，判断其是否能产铁载体。如图4所示，在CAS检测平板上，菌株JB0319周围出现较为明显的橙黄色晕圈，表明菌株JB0319能产生铁载体以螯合培养基中的铁。通过测定菌株产生的噬铁圈的大小发现，菌株JB0319的噬铁圈的大小为0.47± 0.04cm。因此判断为该菌具有产铁载体能力。

4.3产ACC脱氨酶能力测定

根据菌株在ADF和DF培养基中的长势，可判断出菌株的产ACC脱氨酶能力。本实施例将目标菌分别接种于ADF培养基和DF培养基，在相同条件下 (37℃、200r/min)培养24h，分光光度计测定菌液的OD600值，以判断菌株长势。当菌株在ADF培养基中的长势明显好于DF时，说明该菌株能以ACC为唯一氮源进行生长，即该菌株能产生ACC脱氨酶。

结果如图5所示，菌株JB0319在ADF培养基中的长势优于DF培养基，因此初步判断JB0319具有产ACC脱氨酶的能力。

4.4产生物膜能力测定

本实施例通过平板静置培养初步判断JB0319具有产生物膜的能力，利用结晶紫染色法测定菌株产生物膜能力的大小。将目标菌株接种于装有LB液体培养基的96孔板中，37℃培养箱中静置培养，观察是否有生物膜产生，并初步判断目标菌株是否具有产生物膜的能力。随后将培养液吸出，每孔加入200μL无菌PBS缓冲液清洗板孔3次，再向孔中加入100μL10％甲醇固定15min，然后吸出甲醇，自然晾干。每孔加入100μL 1％结晶紫溶液，室温染色15min后，吸出结晶紫染色液，并用无菌蒸馏水清洗3次至无色，把培养板倒置在滤纸上，吸干表面水分，再置于37℃烘箱内烘干水分。待板完全干燥后，每孔加入100μL 33％冰乙酸溶液，置于37℃培养箱内30min，以LB为对照，测定580nm下的 OD值。

结果如图6所示，菌株JB0319产生物膜能力为1.107±0.173，且其在平板上形成了褶皱状菌落形态。表明菌株JB0319具有较强的产生物膜能力。

实施例5菌液接种对青菜生长的影响

为验证IAA的合成是否对植物的生长具有促进作用，本实施例开展了菌株JB0319的青菜盆栽试验。将青菜种子用温汤浸种法催芽，将种子置于40℃温水中浸泡，将种子分散于装有湿滤纸片的的培养皿中，26℃下催芽，种子露白后移栽至育苗基质中(蛭石:基质＝1.5:1)。不施任何肥料，在26℃、正常日照条件下正常培养，当青菜苗长至四叶期，移栽至盆中，每盆1棵苗。

试验共设2个处理，每个处理10个重复。处理组为JB0319，对照组为 CK。备好的菌液在5000rpm条件下离心10min，用无菌水重悬，调整OD600 为1，备用。处理组用菌剂处理(5mL/株)，对照组用等量清水处理，幼苗移栽 3天后开始菌剂处理，每隔7d浇一次，共浇4次，30d后测定青菜的鲜重、株高、根粗、根长和叶片数。青菜盆栽表型如图7所示。

进一步，本实施例采用Microsoft Excel 2010、MEGA 7.0、GraphPad Prism 8进行数据统计处理并制图，并釆用SPSS软件进行数据分析，用Duncan法进行差异显著性多重比较。结果如下表1所示。

表1接种菌株JB0319对青菜的生长指标

接种JB0319之后，青菜的地上株高、鲜重、根长、根粗、叶片数分别较对照增加了17.06％、96.42％、125.77％、50.56％、33.33％。通过该盆栽试验结果证实该菌株确实对青菜具有较好的促生效果，表明该贝莱斯芽孢杆菌可作为促生功能候选菌株，丰富微生物菌种资源库。

以上所述的，仅为本发明的较佳实施例，并非用以限定本发明的范围，本发明的上述实施例还可以做出各种变化。凡是依据本发明申请的权利要求书及说明书内容所作的简单、等效变化与修饰，皆落入本发明专利的权利要求保护范围。本发明未详尽描述的均为常规技术内容。

Claims

1.一种高产吲哚乙酸菌株JB0319，其特征在于，所述高产吲哚乙酸菌株JB0319分类命名为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis），于2022年7月1日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏号为GDMCC No：62594。

2.一种根据权利要求1所述的高产吲哚乙酸菌株JB0319在促进植物生长中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述高产吲哚乙酸菌株JB0319通过产吲哚-3-乙酸促进植物生长。

4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述应用包括以下步骤：

S1：将权利要求1所述的高产吲哚乙酸菌株JB0319接种于LB液体培养基中，37 °C、180r/min振摇培养至对数期，在4000~6000 rpm条件下离心8~12 min，用无菌水重悬，调整OD₆₀₀为1，备用；

S2：将植物种子用温汤浸种法催芽，将种子置于38~42 ℃温水中浸泡，将种子分散于装有湿滤纸片的培养皿中，24~28 ℃下催芽，种子露白后移栽至育苗基质中，不施任何肥料，在日照条件下培养，当幼苗长至四叶期，移栽至盆中；

S3：采用步骤S1备好的菌液对植株进行处理，用量为3~10 mL/株，即可实现对植物的促进生长。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，步骤S3包括：幼苗移栽3天后开始菌液处理，每隔7 天施加一次菌液，共计4次。

6.一种根据权利要求1所述的高产吲哚乙酸菌株JB0319在制备促进植物生长制剂中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述促进植物生长制剂为微生物菌剂或微生物肥料。