CN117683672B - 一种小白链霉菌及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种小白链霉菌及其应用，属于微生物领域。本发明通过筛选得到一株新的小白链霉菌S86，其保藏编号为CGMCC No.29077。通过实验发现，该菌株可以显著抑制假禾谷镰孢菌菌丝的生长速率、产孢量、孢子萌发率以及生物量。本发明公开的小白链霉菌S86可以显著抑制假禾谷镰孢菌生长，用于防治假禾谷镰孢菌引起的小麦茎基腐病中。
Description
技术领域
本发明涉及微生物领域，特别是涉及一种小白链霉菌及其应用。
背景技术
小麦是人类口粮的三大作物之一，是我国的主要农作物之一，其丰缺直接影响人民群众的基本生活。小麦病害是小麦是否能够实现高产、稳产的重要影响因素。近年来，小麦锈病、赤霉病、白粉病、纹枯病、小麦茎基腐病等病害的发生，给我国农业生产带来了巨大的经济损失，严重制约着我国小麦产业的健康稳定发展，威胁着国家粮食安全。其中，小麦茎基腐病是近些年小麦生产中的一种重要病害，成为近十年来危害中国小麦生产的主要病害之一。
当前对小麦茎基腐病的防治方法主要为化学防治，以药剂拌种和返青拔节期施药为主要途径，但化学防治的过程已经出现了一些问题，如环境污染、人类健康危害和农药残留。生物农药正逐渐成为现代农药发展的主流，开发高效、低毒、低残留、无污染的生物农药也成为未来农药研发的发展方向。生物农药如农用抗生素的开发应用有助于推进广谱、高效、低毒、低残留、低环境污染的农药发展，链霉菌正是农用抗生素的重要生产者，对于生物农药的发展有巨大的开发潜力。因此，分离筛选出能产生对小麦茎基腐病具有防效作用的代谢产物的链霉菌，有望为小麦茎基腐病的防治提供技术支撑，为生物农药的发展做出一定的贡献。
发明内容
本发明的目的是提供一种小白链霉菌及其应用，以解决上述现有技术存在的问题，通过分离筛选得到的小白链霉菌S86可以显著抑制假禾谷镰孢菌，用于防治假禾谷镰孢菌引起的小麦茎基腐病中。
为实现上述目的，本发明提供了如下方案：
本发明提供一种小白链霉菌(Streptomyces albulus)，该菌保藏编号为CGMCCNo.29077，保藏时间为2023年11月21日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。
本发明还提供所述的小白链霉菌在防治小麦茎基腐病中的应用。
本发明还提供所述的小白链霉菌在制备防治小麦茎基腐病的生防菌剂或者微生物菌肥中的应用。
本发明还提供所述的小白链霉菌在抑制假禾谷镰孢菌中的应用。
本发明还提供所述的小白链霉菌在制备抑制假禾谷镰孢菌的菌剂中的应用。
本发明还提供含有所述的小白链霉菌的菌剂。
本发明还提供由所述的小白链霉菌制备的生防药剂或者抗菌剂。
本发明还提供一种所述的小白链霉菌的发酵方法，采用56#发酵培养基进行振荡培养；所述振荡培养的温度为28℃、转速为220rpm、发酵时间为3d，所述56#发酵培养基包括以下含量的组分：黄豆粉20g、玉米粉30g、葡萄糖20g、氯化铵4g、碳酸钙3g和水1L。
本发明公开了以下技术效果：
本发明通过筛选得到一株新的小白链霉菌S86，通过实验发现，该菌株可以显著抑制假禾谷镰孢菌菌丝的生长速率，当培养基中的小白链霉菌S86发酵液含量达到4％时，可以完全抑制假禾谷镰孢菌的生长。该菌株可以显著抑制假禾谷镰孢菌的产孢量及孢子萌发率，当培养基中的小白链霉菌S86发酵液含量达到2％时，假禾谷镰孢菌便不产孢；当用稀释10倍的小白链霉菌S86发酵液处理假禾谷镰孢菌的孢子时，孢子便不能萌发。该菌株可以显著抑制假禾谷镰孢菌的生物量，当培养基中的小白链霉菌S86发酵液含量达到3％时，假禾谷镰孢菌孢子便不能在培养基中生长。本发明公开的小白链霉菌S86可以显著抑制假禾谷镰孢菌生长，用于防治假禾谷镰孢菌引起的小麦茎基腐病中。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为实验室保存菌株的整理结果；
图2为链霉菌发酵液抑菌测定结果；其中86、122为56#发酵培养基发酵结果，其余为链霉菌通用发酵培养基(ISP1培养基)发酵结果；
图3为链霉菌56#发酵液对红酵母的抑菌测定结果；
图4为假禾谷镰孢菌在含发酵液的PDA培养基上的生长情况；
图5为发酵液对小麦苗期壮苗指数的影响；
图6为小麦病情严重度分级标准；
图7为S86发酵液对假禾谷镰孢菌菌落生长的影响；A-E依次为培养基含发酵液量为0％、1％、2％、3％、4％；
图8为物种分布饼图；
图9为系统发育树；
图10为S86发酵液对假禾谷镰孢菌菌丝形态的影响；A：空白培养基上的菌丝；B：含发酵液培养基上的菌丝；
图11为S86发酵液对假禾谷镰孢菌产孢量的影响；
图12为S86发酵液对假禾谷镰孢菌孢子萌发的影响；A-D依次为无菌水空白对照及发酵液稀释10倍、50倍、100倍处理的结果；
图13为S86发酵液对假禾谷镰孢菌孢子形态的影响；A：无菌水处理；B：发酵液处理；
图14为S86发酵液对假禾谷镰孢菌鲜重的影响；A-D分别为培养基含发酵液量依次为0、1％、2％、3％，E为不同的发酵液含量添加PDA培养基对菌丝鲜重影响的统计结果；
图15为S86发酵液对假禾谷镰孢菌干重的影响；
图16为S86发酵液对小麦病害的抑菌谱。
具体实施方式
现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值，以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见得的。本发明说明书和实施例仅是示例性的。
关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。
实施例1小麦茎基腐病生防菌的分离筛选与鉴定
1、分离筛选
1.1培养基
高氏1号培养基：硝酸钾1g、可溶性淀粉20g、磷酸氢二钾0.5g、七水硫酸镁0.5g、氯化钠0.5g、硫酸铁0.01g、琼脂20g和水1L。
ISP1发酵培养基：胰蛋白胨5g、酵母浸粉3g和水1L。
56#发酵培养基：黄豆粉20g、玉米粉30g、葡萄糖20g、氯化铵4g、碳酸钙3g和水1L。
PDA培养基：葡萄糖20g、琼脂20g和马铃薯汁1L。
1.2分离方法
整理中国农业科学院植物保护研究所农用抗生素研究组保存但尚未知功能的菌株，使用高氏1号培养基将保存的989株菌用平板划线法分离纯化3次，28℃培养7d以上，得到单菌落。挑取单菌落至高氏1号液体培养基中(每300mL培养基中加入1mL 3％重铬酸钾溶液以抑制霉菌和细菌的生长)，220rpm，28℃，培养2d，得到的菌液提取DNA，并PCR扩增，16srRNA测序。扩增引物序列为：27F(5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’)，1492R(5’-TACGACTTAACCCCAATCGC-3’)。设置退火温度55℃，时间15s，延伸温度72℃，时间30s，35个循环。所得序列于NCBI Blast筛选出链霉菌。
将筛选出的65株链霉菌分别划成1cm2大小的菌块，转入ISP1发酵培养基或56#发酵培养基内，之后放进摇床，在28℃，220rpm的条件下发酵培养3d，用滤纸过滤，将滤液用细菌过滤器过滤得到无菌发酵液，4℃保存备用。在每100mL PDA培养基中加入1mL红酵母(Rhodotorula，其由中国农业科学院植物保护研究所农用抗生素研究组保存)稀释液混匀，倒平板，每个培养皿中倒入20mL培养基，待凝固；将已灭菌的牛津杯置于平板中，轻轻加压，使其与培养皿接触无空隙(每平板3个牛津杯，每个样本3组重复)，往牛津杯中注入200μL过滤后的发酵液，置于25℃培养箱中培养2-3d，观察抑菌圈情况。筛选出具有抑菌活性的链霉菌。
1.3结果
整理实验室保存但功能尚未知的菌株，共得989个样本，如图1所示，分离纯化后得175个样本，有93个样本成功得到序列，经NCBI Blast筛选得到65株链霉菌。
经过ISP1发酵培养基得有38株链霉菌具有抑菌活性，对红酵母产生抑菌圈，将剩余27株使用56#发酵培养基发酵得到得发酵液有2株具有抑菌活性，且抑菌效果显著优于ISP1发酵培养基发酵所得发酵液。至此，65株链霉菌中共有40株具有抑菌活性，抑菌情况如图2所示，抑菌圈直径如表1所示。该40株链霉菌在NCBI Blast中显示出13种不同结果，在13种中各选一株效果较好菌株用56#发酵培养基发酵，结果得该13种发酵液均可对红酵母产生明显抑菌圈，抑菌情况如图3所示，抑菌圈直径如表2所示，即该13株链霉菌均可产生效果较好的抑菌物质，均具有开发潜力。
表1链霉菌发酵液对红酵母的抑菌圈直径
注：表中抑菌圈直径数据为平均数±标准差。采用LSD法进行显著性分析，不同小写字母表示同列数据在5％差异显著水平。其中86、122为56#发酵培养基发酵结果，其余为链霉菌通用发酵培养基ISP1发酵结果。
表2链霉菌56#发酵液对红酵母的抑菌圈直径
注：表中数据为平均数±标准差。采用LSD法进行显著性分析，不同小写字母表示同列数据在5％差异显著水平。
2、小麦茎基腐病生防菌的筛选
2.1供试菌株
假禾谷镰孢菌(Fusarium pseudograminearum)由中国农业科学院植物保护研究所农用抗生素研究组保存。
2.2发酵液对致病菌假禾谷镰孢菌的筛选
将所得的13种链霉菌及链霉菌CK-15、C27各用灭菌后的刀片切取1cm2分别置于56#发酵培养基中，在28℃，220rpm的条件下发酵培养3d，用滤纸过滤，将滤液用细菌过滤器过滤得到无菌发酵液，4℃保存备用。将15种不同发酵液加入到融化的PDA培养基中，使PDA最终含发酵液的比重为2％，混匀，倒入培养皿中。用无菌打孔器取相同生长状况的假禾谷镰孢菌菌饼，置于PDA培养基中央，使菌丝那边接触培养基，25℃培养。以不含发酵液的PDA为对照，每组重复三次。待空白组菌落生长至培养基四分之三大小时，采用十字交叉法统计各菌落直径。
2.3发酵液对小麦的萌发及苗期生长的影响
按上文方法获得S86、S131发酵液，用清水将发酵液分别稀释10、100、1000倍，挑选健康小麦种子消毒催芽后置于铺有滤纸的培养皿中，每个培养皿中20粒种子，每个培养皿用3mL不同浓度的发酵液润湿滤纸，以无菌水为对照，培养皿封口，置于25℃培养箱光暗交替培养，2d后统计小麦种子萌发率。
挑选健康小麦种子消毒催芽后播种于花盆中，每盆播种8粒，播种后每隔5d将不同浓度发酵液浇灌于小麦根部，对照组浇灌清水，小麦置于25℃温室培养，注意保湿，20d开始每隔10d测定小麦株高、茎粗、干重，统计小麦壮苗指数，直到60d。
壮苗指数＝(茎粗/株高+地下部分干重/地上部分干重)×总干重
2.4发酵液对小麦茎基腐病苗期防效测定
接种用病麦粒的制备：小麦种子经清水浸泡过夜后121℃湿热灭菌30min，置于无菌三角瓶后接入PDA培养基培养的假禾谷镰孢菌菌块，每天光照12h并摇瓶一次，25℃培养7～10d即得到接种用病麦粒。
用清水将发酵液分别稀释10、50、100倍，在小麦2叶期时分别喷施50mL稀释不同浓度发酵液以及未稀释的发酵液，以清水处理为空白对照，每个处理设置3组重复，3d后采用病麦粒接种法：即将病麦粒置于二叶期小麦苗基部，每株一粒，覆土保湿培养。接病21d后调查发病情况。严重情况按以下标准分级(见图6)：0级：植株健壮，无变褐症状；1级：植株仅第一叶鞘变褐，且变褐面积不超过1/2；3级：植株仅第一叶鞘变褐，且变褐面积超过1/2；5级：植株第二叶鞘变褐；7级：植株第三叶鞘变褐；9级：植株死亡。计算病情指数及防治效果。
病情指数＝[Σ(各病级病株数×发病级别)/(调查总株数×最高病级值)]×100
防治效果(％)＝[(对照组病情指数-处理组病情指数)/对照组病情指数]×100
2.5结果
2.5.1对含发酵液的PDA培养基中的假禾谷镰孢菌菌落直径测量，结果显示链霉菌131及链霉菌86对其抑制效果最好，病原菌直径最小，菌落直径分别为28.00mm、29.00mm，菌落生长情况如图4所示，菌落直径如表3所示。因此，选用这两株链霉菌作进一步筛选，以下称为S131、S86。
表3假禾谷镰孢菌在含发酵液培养基上生长的菌落直径
注：表中数据为平均数±标准差。采用LSD法进行显著性分析，不同小写字母表示同列数据在5％差异显著水平。
2.5.2经发酵液处理后，小麦种子的萌发率无显著变化，萌发率均达到85％以上，如表4所示。
经发酵液处理(每隔5d浇灌)，出苗后50d、60d的测量结果显示S86发酵液处理后提高小麦的壮苗指数，且稀释1000倍时效果更为明显，如图5所示。即S86发酵液对小麦苗期生长具有一定的促进作用。
表4发酵液对小麦种子萌发率的影响
注：表中数据为平均数±标准差。采用LSD法进行显著性分析，不同小写字母表示同列数据在5％差异显著水平。
2.5.3采用病麦粒接种法，结果如表5所示，与对照组相比，经发酵液处理后，小麦茎基腐病的病情指数显著降低，且整体来看，S86发酵液较S131效果好。其中，S86发酵液原液的防治效果达到54.23％，而131号发酵液原液的防治效果却较其他处理组低，可能由药害作用导致。
表5发酵液处理对小麦茎基腐病的防治效果
注：表中数据为平均数±标准差。采用LSD法进行显著性分析，不同小写字母表示同列数据在5％差异显著水平。
3、链霉菌S86的鉴定及特征分析
3.1S86全基因组测序
链霉菌S86由北京奥维森公司进行全基因组测序，对测序结果进行分析，利用antiSMASH数据库分析S86代谢产物。
3.2S86生理生化特征测定
3.2.1培养基配方
明胶液化培养基：葡萄糖20g，蛋白胨5g，明胶120g，水1L，115℃灭菌15min。
牛奶培凝固与胨化养基：脱脂奶粉200g，碳酸钙0.2g，水1L，115℃灭菌15min。
硫化氢培养基：蛋白胨10g，柠檬酸铁0.5g，琼脂粉17g，水1L。
硝酸盐还原培养基：硫酸镁0.5g，硝酸钾1g，磷酸氢二钾0.5g，氯化钠0.5g，蔗糖20g，水1L。
碳源利用基础培养基：磷酸氢二铵1g，氯化钠1g，七水硫酸镁0.2g，磷酸二氢钾0.5g，琼脂20g，蒸馏水1L。
3.2.2实验方法
明胶液化试验：将菌株穿刺接种到明胶试管内，28℃分别培养7-14d后，将试管放入4℃冰箱处理0.5h，观察明胶液化程度。若培养基部分或全部液化，则为阳性反应；反之则为阴性。
牛奶凝固与胨化：将菌株穿刺接种于脱脂牛奶试管中，28℃培养7d后，若牛奶出现凝块则为凝固现象，继续培养又变为液体，为胨化现象，即阳性反应；反之为阴性反应。
硫化氢的产生：将菌株接种于硫化氢培养基上，28℃培养5d后，观察菌块周围颜色变化。若菌块周围变黑，说明能产生硫化氢，为阳性反应；反之则为阴性。
硝酸盐还原实验：将菌株接种到硝酸盐还原培养基中，28℃静置培养7-14d，后按照硝酸盐还原试剂盒操作步骤进行检测。
淀粉水解实验：将菌株接种至含有淀粉的高氏1号培养基中，于28℃培养7d，待菌株生长良好后，在菌落周围滴加碘液。如有淀粉酶产生，即将淀粉变成糊精或利用吸收，遇到碘液不变为蓝色，却形成透明圈；反之菌落周围遇碘液呈蓝色。
纤维素水解实验：将菌株接种在置有滤纸条的液体培养基中，28℃220rpm培养3d，后观察。如果能将滤纸条分解，或将滤纸折断或变薄，则说明菌株能产生纤维素酶使之水解，无变化则不产生纤维素酶。
碳源利用试验：在碳源利用基础培养基中分别加入1％的半乳糖、麦芽糖、蔗糖、木糖、甘露醇、葡萄糖、乳糖、鼠李糖、果糖这9种碳源，将菌株接种到含唯一碳源的培养基中，28℃培养，7d后观察菌株是否能生长，若生长则菌株能利用该碳源，反之则不能利用。
3.2.3结果
(1)测序组装结果显示，全基因组总长度为9456997bp，GC含量为72.29％。结合NR、COG、KEGG以及GO数据库对全基因组进行基因功能注释，结果显示全基因组共预测到8998个开放阅读框，占整个基因组长度的86.95％。对编码基因、重复序列、非编码RNA等进行预测，获取测序S86基因组的组成情况，基因组共编码71个tRNA(总长度5385bp)，7个5s rRNA(总长度812bp)、7个16s rRNA(总长度10619bp)、7个23s rRNA(总长度21836bp)和16个sRNA(总长度2197bp)。利用小白链霉菌S86全基因序列进行Blast比对，结果显示：得分排名前3的目标序列均为小白链霉菌(Streptomyces albulus)，物种分布饼图如图8所示。构建的系统发育树如图9所示。
(2)S86生理生化特征如表7所示，链霉菌S86能使牛奶凝固且胨化、能分解纤维素、能还原硝酸盐、能水解淀粉、不产生硫化氢、不能使明胶液化，能利用半乳糖、果糖，不能利用麦芽糖、蔗糖、木糖、甘露醇、葡萄糖、乳糖和鼠李糖。
表7 S86生理生化特征
注：表中“+”为阳性反应，“-”为阴性反应。
根据上述基因鉴定结果和生理生化结果，确定所筛选的菌株为小白链霉菌(Streptomyces albulus)S86。该小白链霉菌已于2023年11月21日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.29077，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。
实施例2小白链霉菌S86的抑菌作用
1、培养基配方
CMC产孢培养基：羧甲基纤维素钠15g、酵母提取物1g、七水硫酸镁0.5g、硝酸铵1g、磷酸二氢钾1g和水1L。
GYEP培养基：蔗糖50g、蛋白胨1g、酵母提取物1g和水1L。
2、实验方法
2.1S86发酵液对假禾谷镰孢菌生长速率及菌丝形态的影响
S86发酵液加入到融化的PDA培养基中，混匀，使培养基最终含发酵液量分别为1％、2％、3％、4％、5％，待培养基凝固后将灭过菌的玻璃纸平铺于培养基表面，用无菌打孔器取相同生长状况的假禾谷镰孢菌菌饼，置于PDA培养基中央，使菌丝那边接触玻璃纸，25℃培养。以不含发酵液的PDA为对照，每组重复三次。待空白组菌落生长至培养基四分之三大小时，采用十字交叉法统计各菌落直径，计算菌落生长抑制率，利用SPSS软件绘制毒力回归曲线，得出S86发酵液对假禾谷镰孢菌的有效中浓度(EC50)值，并于光学显微镜下观察菌丝形态。
2.2S86发酵液对假禾谷镰孢菌产孢量及孢子萌发率的影响
S86发酵液加入到100mL CMC产孢培养基中，混匀，使培养基最终含发酵液量分别为1％、2％、3％、4％、5％，用无菌打孔器取相同生长状况的假禾谷镰孢菌菌饼，每瓶培养基中放入6个菌饼，以不含发酵液的CMC为对照，每组重复三次。25℃，180r/min，培养3d后用血球计数板统计产孢量。
用无菌打孔器打取直径为6mm的假禾谷镰孢菌菌饼，将6-8个菌饼接种于装有100mL CMC培养液的250mL锥形瓶，25℃、180rpm培养3d使病原菌产孢。在无菌条件下，用擦镜纸过滤培养基中的菌丝体，将滤液在4000r/min下离心5min，去除上清液，将孢子重新悬浮于灭菌的去离子水中，调节孢子浓度为1×106个/mL，加0.2％吐温-20混匀。S86发酵液用无菌水分别稀释10、50、100倍，将不同浓度发酵与上述孢子悬浮液按体积比1:1混合，用油画笔蘸取融化的2％琼脂均匀涂于干净的载玻片上，冷却凝固，用另一支油画笔蘸取混合后的孢子悬浮液，轻刷于载玻片上，不要将琼脂表面划破。放于铺有湿润滤纸的培养皿中，加盖，封口，以无菌水与孢子悬浮液混合为空白对照，每组重复3次，25℃培养20h后于光学显微镜下观察孢子形态及萌发率，以芽管长度达到分生孢子细胞一半时记为萌发。
2.3S86发酵液对假禾谷镰孢菌生物量的影响
S86发酵液加入到融化的PDA培养基中，混匀，使培养基最终含发酵液量分别为1％、2％、3％、4％、5％，待培养基凝固后将灭过菌的玻璃纸平铺于培养基表面，取4μL上述孢子悬浮液滴于玻璃纸中央，25℃培养，4d后统计菌落鲜重，即总重量减去玻璃纸重量。S86发酵液加入到GYEP培养基中，混匀，使培养基最终含发酵液量分别为1％、2％、3％、4％、5％，用无菌打孔器取相同生长状况的假禾谷镰孢菌菌饼，每瓶培养基中放入6个菌饼，以不含发酵液的GYEP为对照，每组重复三次。25℃，180r/min培养4d，用干燥的滤纸过滤，弃滤液的菌丝置于烘箱烘干后称重，菌丝干重为总重量减去滤纸重量。
2.4S86发酵液对小麦其他病害的抑菌谱
S86发酵液加入到融化的PDA培养基中，混匀，使培养基最终含发酵液量为1.5％，待培养基凝固后用无菌打孔器取相同生长状况的小麦茎基腐病、小麦根腐病、小麦纹枯病、小麦赤霉病及小麦全蚀病的病原菌菌饼，置于PDA培养基中央，25℃培养4d后观察菌落生长情况。以不含发酵液的PDA为对照，每组重复三次。
3、结果
3.1经发酵液处理后，假禾谷镰孢菌菌丝生长速率受到显著抑制，如图7所示，当培养基含发酵液量为4％时，菌落便不再生长，菌落直径及抑制率如表8所示。且较空白对照组菌丝量少，视野中菌丝较为稀疏，菌丝生长弯曲、杂乱，如图10所示。发酵液对假禾谷镰孢菌的毒力曲线为y＝5.37x-7.18，R2＝1.000，有效中浓度(EC50)为21.7μL/mL，95％置信区间为19.4μL/mL-24.5μL/mL。
表8S86发酵液对假禾谷镰孢菌菌落生长影响
注：表中数据为平均数±标准差。采用LSD法进行显著性分析，不同小写字母表示同列数据在5％差异显著水平。
3.2经发酵液处理后，假禾谷镰孢菌的产孢量及孢子萌发率受到显著抑制，当培养基含发酵液量为2％时，假禾谷镰孢菌便不产孢，如图11所示；当用稀释10倍的发酵液处理假禾谷镰孢菌的孢子时，孢子便不能萌发，如图12、表9所示，且孢子形态发生畸变，如图13所示。
表9S86发酵液对假禾谷镰孢菌孢子萌发率的影响
注：表中数据为平均数±标准差。采用LSD法进行显著性分析，不同小写字母表示同列数据在5％差异显著水平。
3.3S86发酵液能显著抑制假禾谷镰孢菌的生物量，当培养基含发酵液量达到3％时，假禾谷镰孢菌孢子便不能在培养基中生长，如图14、图15所示。
3.4在PDA含药量1.5％条件下，25℃培养4d后观察得，S86对小麦其他病原菌也具有较好的抑制作用。经发酵液处理后，除小麦茎基腐病外，小麦根腐病、小麦纹枯病、小麦赤霉病及小麦全蚀病的病原菌菌落直径均小于空白培养基上的菌落直径，如图16所示。
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。
Claims (8)
1.一种小白链霉菌（Streptomyces albulus），其特征在于，该菌保藏编号为CGMCCNo.29077。
2.如权利要求1所述的小白链霉菌在防治小麦茎基腐病中的应用。
3.如权利要求1所述的小白链霉菌在制备防治小麦茎基腐病的生防菌剂或者微生物菌肥中的应用。
4.如权利要求1所述的小白链霉菌在抑制假禾谷镰孢菌（Fusariumpseudograminearum）中的应用。
5.如权利要求1所述的小白链霉菌在制备抑制假禾谷镰孢菌的菌剂中的应用。
6.含有权利要求1所述的小白链霉菌的菌剂。
7.由权利要求1所述的小白链霉菌制备的生防药剂或者抗菌剂。
8.一种如权利要求1所述的小白链霉菌的发酵方法，其特征在于，采用56#发酵培养基进行振荡培养；所述振荡培养的温度为28℃、转速为220rpm、发酵时间为3d，所述56#发酵培养基的组分为：黄豆粉20g、玉米粉30g、葡萄糖20 g、氯化铵4 g、碳酸钙3g和水1L。
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