CN117535204B - 一株异硫链霉菌m7及其应用 - Google Patents

一株异硫链霉菌m7及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN117535204B
CN117535204B CN202311777392.8A CN202311777392A CN117535204B CN 117535204 B CN117535204 B CN 117535204B CN 202311777392 A CN202311777392 A CN 202311777392A CN 117535204 B CN117535204 B CN 117535204B
Authority
CN
China
Prior art keywords
streptomyces
cucumber
isothiocarpus
preparation
fusarium wilt
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202311777392.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN117535204A (zh
Inventor
敖静
池景良
李杨
孙玉禄
宋立群
高晓梅
刘晓辉
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
LIAONING SCIENTIFIC ACADEMY OF MICROBIOLOGY
Original Assignee
LIAONING SCIENTIFIC ACADEMY OF MICROBIOLOGY
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by LIAONING SCIENTIFIC ACADEMY OF MICROBIOLOGY filed Critical LIAONING SCIENTIFIC ACADEMY OF MICROBIOLOGY
Priority to CN202311777392.8A priority Critical patent/CN117535204B/zh
Publication of CN117535204A publication Critical patent/CN117535204A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN117535204B publication Critical patent/CN117535204B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/20—Bacteria; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • A01N63/28—Streptomyces
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01P—BIOCIDAL, PEST REPELLANT, PEST ATTRACTANT OR PLANT GROWTH REGULATORY ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR PREPARATIONS
    • A01P21/00—Plant growth regulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01P—BIOCIDAL, PEST REPELLANT, PEST ATTRACTANT OR PLANT GROWTH REGULATORY ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR PREPARATIONS
    • A01P3/00—Fungicides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/465—Streptomyces
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
    • Y02A40/10—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in agriculture

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

本发明公开了一株异硫链霉菌M7及其应用，属于生物技术领域，所述异硫链霉菌(Streptomyces althioticus)M7，于2023年11月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.29025。本发明还公开了异硫链霉菌M7在制备黄瓜枯萎病或番茄早疫病防治制剂中的应用。本发明所述异硫链霉菌M7对黄瓜枯萎病病原菌和番茄早疫病原菌具有较强抑制作用，同时该菌株具备固氮、产IAA和降解纤维素的能力，盆栽试验表明异硫链霉菌M7菌悬液可以有效降低黄瓜枯萎病发病率，在农业生产中具有较高研究意义和应用价值。

Description

一株异硫链霉菌M7及其应用
技术领域
本发明属于生物技术领域，尤其涉及一株异硫链霉菌M7及其应用。
背景技术
黄瓜枯萎病又名萎蔫病、蔓割病、死秧病，是由尖镰孢菌黄瓜专化型侵染所引起的、发生在黄瓜上的病害。黄瓜枯萎病是由病原菌侵入黄瓜的根颈部并寄生于维管束内，阻止水和养分的吸收，导致黄瓜植株发生系统性病害。黄瓜枯萎病从零星发病到大面积发病只需2-3年，有植物“癌症”之称。同一地块连作3年，发病率可高达70％，产量损失可达10-50％，甚至绝收。目前黄瓜枯萎病的防治方法主要以农业防治和化学防治为主，首先对种子进行消毒，合理轮作，施足底肥，高垄栽培；其次选用基质穴盘嫁接育苗，加强田间管理；最后结合化学药剂进行防治。
番茄早疫病又称轮纹病、夏疫病，是由茄链格孢菌侵染引起的、发生在番茄上的植物病害。其最主要特征是不论发生在果实、叶片或主茎上的病斑，都有明显的轮纹，所以又被称作轮纹病。果实病斑常在果蒂附近，茎部病斑常在分杈处，叶部病斑发生在叶肉上。番茄早疫病发病严重时，可引起落叶、落果和断枝，减产在30％以上。此病除番茄外，还能危害马铃薯、茄子和辣椒等。目前番茄早疫病的防治主要是采取种植抗病品种和加强栽培管理为主，并配合化学防治等综合措施。
植物内生真菌是一种潜在的生物防治资源，可防治各种病原体，促进植物生长和健康。这些真菌与其宿主相互依存，而不会引起任何明显的病害症状。植物内生真菌能够适应植物内部的生活，并产生拮抗次生代谢物，这些代谢物对寄主植物的生长和抗病性至关重要。当前生物防治是植物病虫害防治必不可少的措施，也迫切需要开发并商业化生产对黄瓜枯萎病和番茄早疫病防效良好的生物农药。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提出了一株异硫链霉菌M7及其应用，硫链霉菌(Streptomyces althioticus)M7表现出广谱的抑菌活性，对黄瓜枯萎病病原菌和番茄早疫病病原菌具有优异的抑制作用，对黄瓜生长具有明显的促进作用，对黄瓜枯萎病病有显著的生物防治效果。
为实现上述目的，本发明提供了一株异硫链霉菌(Streptomyces althioticus)M7，所述异硫链霉菌M7，于2023年11月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.29025。
本发明还提供了所述的异硫链霉菌M7在制备黄瓜枯萎病或番茄早疫病防治制剂中的应用。
本发明还提供了一种黄瓜枯萎病防治制剂，包括所述的异硫链霉菌M7。
本发明还提供了一种番茄早疫病防治制剂，包括所述的异硫链霉菌M7。
本发明还提供了所述的异硫链霉菌M7在制备尖孢镰孢菌(Fusarium oxysporum)抑制剂中的应用。
本发明还提供了所述的异硫链霉菌M7在制备茄链格孢菌(Alternaria solani)抑制剂中的应用。
本发明还提供了所述的异硫链霉菌M7在制备降低黄瓜枯萎病发病率的制剂中的应用。
本发明还提供了所述的异硫链霉菌M7在制备黄瓜生长促进剂中的应用。
优选的，所述异硫链霉菌M7促进黄瓜植株生长，增加黄瓜的地上部分鲜重和干重。
本发明还提供了一种黄瓜生长促进剂，包括所述异硫链霉菌M7的菌悬液或发酵液。
与现有技术相比，本发明具有如下优点和技术效果：
本发明提供的异硫链霉菌(Streptomyces althioticus)M7由辽宁省朝阳市喀左县六官营子乡东前沟村种植黄瓜的设施温室土壤样品中分离所得，研究表明M7对黄瓜枯萎病病原菌尖孢镰孢菌(Fusarium oxysporum)和番茄早疫病原菌茄链格孢菌(Alternariasolani)具有较强抑制作用，同时该菌株具备固氮、产IAA和降解纤维素的能力，盆栽试验表明M7发酵液可以有效降低黄瓜枯萎病发病率，同时可促进黄瓜植株生长，在农业生产中具有较高研究意义和应用价值。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为M7菌落形态图；
图2为M7菌株的系统发育进化树；
图3为M7菌株在阿须贝培养基平皿中的生长情况；
图4为M7菌株降解纤维素的能力检测结果；
图5为M7菌株发酵液的显色反应。
具体实施方式
现详细说明本发明的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本发明的限制，而应理解为是对本发明的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
应理解本发明中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本发明。另外，对于本发明中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本发明内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本发明所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本发明仅描述了优选的方法和材料，但是在本发明的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
在不背离本发明的范围或精神的情况下，可对本发明说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本发明的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见得的。本发明说明书和实施例仅是示例性的。
关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。
在本发明中，若非特指，所采用的原料和设备等均可从市场购得或是本领域常用的。下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。
PDA固体培养基：：马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g、蒸馏水1000mL。
高氏一号培养基：可溶性淀粉20g、NaCl 0.5g、KNO31g、K2HPO4·3H2O 0.5g、MgSO4·7H2O 0.5g、FeSO4·7H2O 0.01g、琼脂16-18g、蒸馏水1000ml、pH 7.0。
高氏一号液体培养基：可溶性淀粉20g、NaCl 0.5g、KNO31g、K2HPO4·3H2O 0.5g、MgSO4·7H2O 0.5g、FeSO4·7H2O 0.01g、蒸馏水1000ml、pH 7.0。
阿须贝培养基：葡萄糖10g，K2HPO4·3H2O 0.2g，K2SO40.2g，NaCl 0.2g，CaCO35.0g，MgSO4·7H2O 0.2g，琼脂16g，蒸馏水1000mL。
黄瓜枯萎病病原菌(Fusarium oxysporum)和番茄早疫病原菌(Alternariasolani)菌饼购于上海帛科生物技术有限公司。
保藏证明：异硫链霉菌M7，拉丁文为Streptomyces althioticus，该菌株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期为2023年11月15日，保藏编号为CGMCC No.29025。
实施例1
1.菌株分离
该菌株由辽宁省朝阳市喀左县六官营子乡东前沟村(北纬41.23°东经119.75°)种植黄瓜的设施温室土壤样品中分离所得，方法如下：
将采集的土壤样品与无菌水混匀，称取1.0g至99mL无菌水中，振荡约30min。分别将10-3、10-4、10-5的土壤悬液均匀涂布于高氏一号培养基中，30℃培养5-7d，从中挑选放线菌单菌落，利用划线法纯化，将纯化得到的菌株接种于高氏一号斜面培养基中保存备用。
采用平板对峙法，将直径为5mm的黄瓜枯萎病病原菌(Fusarium oxysporum)菌饼接种至PDA固体培养基平皿的中心，在距离中心2.5cm处接种拮抗菌菌块，30℃培养5-7d，测量抑菌圈大小，从中选取抑菌作用明显的放线菌菌株，继代纯化后命名为M7。将菌株保存于高氏一号斜面培养基中，以供进一步使用。
2.菌种鉴定
2.1形态特征
参照《链霉菌鉴定手册》，将保存的M7接种于高氏一号固体培养基上，31℃培养3d。M7菌株在高氏一号培养基中生长良好，具有典型的链霉菌属特征，其菌株形成圆形白色菌落，菌落致密、干燥、不透明，基丝白色，气生菌丝粉状，白色，后灰色，不产可溶性色素。M7菌落形态见图1。
2.2生理生化鉴定
生理生化实验：采用放线菌鉴定的常规方法进行(参照《链霉菌鉴定手册》)，对M7菌株分别进行石蕊牛乳试验、纤维素分解试验、淀粉水解试验、明胶液化试验、产硫化氢试验、碳源利用试验。
实验表明，M7可以使牛奶胨化，能在纤维素上生长，不能使淀粉水解，不能使明胶液化，也不产生硫化氢，可以利用葡萄糖、果糖、鼠李糖、以及甘露醇，不利用棉子糖。
2.3DNA提取和分子鉴定
M7在高氏一号培养基30℃培养5天后，用使用擎科TSP101-200 TSINGKE DNA提取试剂盒(通用型)提取基因组DNA。PCR反应体系总体积20.0μL，包括：上、下游引物各2.0μL，DNA模板1.0μL，ddH2O 15.0μL。PCR反应程序为98℃2min；98℃10s，57℃10s，72℃45s，35个循环；72℃5min。将扩增好的PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳(2ul样品+6ul溴酚蓝)，300V电压下12分钟，获取单一条带送往北京擎科生物科技股份有限公司纯化测序。
PCR扩增菌株M7的16S rDNA，扩增引物的核苷酸序列如下：引物27F(SEQ IDNO.1)：5’-AGTTTGATCMTGGCTCAG-3’；引物1492R(SEQ ID NO.2)：5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’。
菌株M7的16S rDNA序列如下所示(SEQ ID NO.3)：
GACGCTGGCGGCGTGTTAACACATGCAAGTCGAACGATGAACCACTTCGGTGGGGATTAGTGGCGAACGGGTGAGTAACACGTGGGCAATCTGCCCTGCACTCTGGGACAAGCCCTGGAAACGGGGTCTAATACCGGATACTGATCCTCTTGGGCATCCAAGCGGTTCGAAAGCTCCGGCGGTGCAGGATGAGCCCGCGGCCTATCAGCTAGTTGGTGAGGTAATGGCTCACCAAGGCGACGACGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGCGACCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGAAAGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGAGGGATGACGGCCTTCGGGTTGTAAACCTCTTTCAGCAGGGAAGAAGCGAAAGTGACGGTACCTGCAGAAGAAGCGCCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGCGCGAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGAGCTCGTAGGCGGCTTGTCACGTCGGTTGTGAAAGCCCGGGGCTTAACCCCGGGTCTGCAGTCGATACGGGCAGGCTAGAGTTCGGTAGGGGAGATCGGAATTCCTGGTGTAGCGGTGAAATGCGCAGATATCAGGAGGAACACCGGTGGCGAAGGCGGATCTCTGGGCCGATACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGGTGGGCACTAGGTGTGGGCGACATTCCACGTCGTCCGTGCCGCAGCTAACGCATTAAGTGCCCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTAAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGCGGAGCATGTGGCTTAATTCGACGCAACGCGAAGAACCTTACCAAGGCTTGACATACACCGGAAAGCATCAGAGATGGTGCCCCCCTTGTGGTCGGTGTACAGGTGGTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTGTCCCGTGTTGCCAGCAGGCCCTTGTGGTGCTGGGGACTCACGGGAGACCGCCGGGGTCAACTCGGAGGAAGGTGGGGACGACGTCAAGTCATCATGCCCCTTATGTCTTGGGCTGCACACGTGCTACAATGGCCGGTACAATGAGCTGCGATACCGCGAGGTGGAGCGAATCTCAAAAAGCCGGTCTCAGTTCGGATTGGGGTCTGCAACTCGACCCCATGAAGTCGGAGTCGCTAGTAATCGCAGATCAGCATTGCTGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACGTCACGAAAGTCGGTAACACCCGAAGCCGG。
通过PCR扩增获得放线菌M7的16S rDNA基因序列的长度大约为1388KB，将测得的序列在NCBI数据库上进行Blast比对分析，发现同源性较高的菌株都来自于链霉属，基于16S rDNA基因序列构建系统发育树如图2，结果表明，放线菌M7与异硫链霉菌(Streptomyces althioticus)处于一个分支，结合形态学和生理生化特征，表明菌株M7归属于异硫链霉菌(Streptomyces althioticus)。
3.菌种特性
3.1抑菌特性
采用平板对峙法，将直径为5mm的黄瓜枯萎病病原菌(Fusarium oxysporum)和番茄早疫病原菌(Alternaria solani)菌饼接种至PDA固体培养基平皿的一侧，在距离中心2.5cm另一侧接种同样活化处理的M7菌块，设空白对照，30℃培养，待空白对照即将长满整个培养皿时，测量病原菌的对照生长量(菌落半径)和处理生长量(接种M7后的抑制生长半径)，拮抗作用用抑菌率表示。抑菌率的计算公式为：
抑菌率(％)＝(对照生长量-处理生长量)/对照生长量×100。
M7菌株拮抗试验的结果详见表1，结果显示M7对黄瓜枯萎病病原菌(Fusariumoxysporum)抑菌率为51.18％，对番茄早疫病原菌(Alternaria solani)抑菌率为70.31％，表明M7对以上两种病原菌均有较强的抑制作用。
表1M7菌株拮抗试验
3.2促生特性
(1)固氮
将M7接种于阿须贝培养基平皿中，30℃培养5d，观察其生长情况(见图3)。结果显示M7可在阿须贝培养基上正常生长，说明M7菌株有固氮能力，可促进植物对氮源的吸收。
(2)产纤维素酶
将M7点接种于纤维素刚果红培养基平板上进行产纤维素酶的定性测定，结果显示M7菌株在该培养基上可产生透明圈(见图4和表2)，说明该菌株可降解纤维素以及产生纤维素酶。
表2M7降解纤维素透明圈
另外将M7接种于高氏一号液体培养基中，30℃180r/min培养72h，依据有机物料腐熟剂纤维素酶活测定标准去测定发酵液纤维素酶酶活，同时以羧甲基纤维素为标准品绘制吸光度-浓度标准曲线，计算发酵液中纤维素酶活，结果显示M7发酵液上清液纤维素酶酶活为121.36U。由此可知M7具有较强的纤维素降解能力，能够利用土壤中的纤维素和半纤维素成分。
(3)产生植物生长素吲哚乙酸(IAA)
将M7接种于高氏一号液体培养基中培养，分别于2d、4d、6d取发酵液50uL置于瓷反应板中，加入50μL Salkowski试剂反应5分钟后观察比色液颜色(见图5)。另将发酵液置于50mL离心管中10000r/min离心10min，取上清液按照Glickmannetal(1995)的方法测定吸光值。同时以分析纯IAA绘制吸光度－浓度标准曲线，方程y＝0.0308x+0.029(R2＝0.9991)，计算发酵液中IAA含量，结果显示，M7发酵2d、4d、6d的IAA产量分别为2.36mg/L、7.44mg/L、13.67mg/L。由此可知M7具有产植物生长素吲哚乙酸(IAA)的能力，对植物植株生长可起到促进作用。
4.抗病盆栽试验
将保存的斜面M7菌种接种于高氏一号液体培养基中，30℃180r/min培养6d得到M7菌种悬液。将培养5d的病原菌菌丝用去离子水洗脱，再用6层纱布过滤，10000r/min离心5min，弃去上清液，收集孢子，用去离子水制备孢子混悬液，调节其密度为106个/mL的孢子混悬液，备用。市购黄瓜种子(津研四号)，在黄瓜一片真叶期时，在距离苗2cm处扎5个孔，每个孔接入2ml M7菌悬液。7d后每株黄瓜接种10ml的病原菌孢子悬浮液，阴性对照为10ml的清水，阳性对照为100ml的稀释1000倍的80％的多菌灵。每处理10盆，重复3次。于7d、14d和21d后调查黄瓜的发病情况，依据丁建成等(2017)制定的黄瓜枯萎病发病严重度分级标准，计算病情严重度及防效。
黄瓜枯萎病发病严重度分级标准：
0级，根、茎、叶生长正常；
I级，1/4以下根、茎变黄，植株稍有矮化；
II级，1/4至1/2根、茎变黄，下部叶脉褪色；
III级，1/2至3/4根、茎变黄，茎基纵裂；
IV级，3/4以上根、茎变黄或直接枯萎死亡。
病情严重度(DSW)＝[∑(各级发病株数×各级病情严重度代表值)/(最高级代表值×调查总株数)]×100％
防效＝[(对照病情指数-处理病情指数)/对照病情指数]×100％
M7对黄瓜枯萎病温室防治效果见表3。
表3M7对黄瓜枯萎病温室防治效果
注：不同字母表示差异显著(p<0.05)
结果表明M7对黄瓜枯萎病温室防治效果较好，在21d内防治效果均能达到60％以上。
5.促生效果
将保存的斜面M7菌种接种于高氏一号液体培养基中，30℃180r/min培养6d得到M7菌种悬液。市购黄瓜种子(津研四号)，在黄瓜一片真叶期时，在距离苗2cm处扎5个孔，每个孔接入2ml M7菌悬液。在黄瓜生长30d后，调查地上部分鲜重和干重。M7对黄瓜植株促生效果见表4。
表4M7对黄瓜植株促生效果
注：不同字母表示差异显著(p<0.05)
由表4可知，M7对黄瓜植株具有一定促生作用，与CK组相比，地上部分鲜重平均增加量为3.54g，占比22.96％，干重平均增加量为1.01g，占比31.08％，说明M7的促生效果较明显。
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

Claims (10)

1.一株异硫链霉菌(Streptomyces althioticus)M7，其特征在于：所述异硫链霉菌M7，于2023年11月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.29025。
2.如权利要求1所述的异硫链霉菌M7在制备黄瓜枯萎病或番茄早疫病防治制剂中的应用。
3.一种黄瓜枯萎病防治制剂，其特征在于：包括权利要求1所述的异硫链霉菌M7。
4.一种番茄早疫病防治制剂，其特征在于：包括权利要求1所述的异硫链霉菌M7。
5.如权利要求1所述的异硫链霉菌M7在制备尖孢镰孢菌(Fusarium oxysporum)抑制剂中的应用。
6.如权利要求1所述的异硫链霉菌M7在制备茄链格孢菌(Alternaria solani)抑制剂中的应用。
7.如权利要求1所述的异硫链霉菌M7在制备降低黄瓜枯萎病发病率的制剂中的应用。
8.如权利要求1所述的异硫链霉菌M7在制备黄瓜生长促进剂中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：所述异硫链霉菌M7促进黄瓜植株生长，增加黄瓜的地上部分鲜重和干重。
10.一种黄瓜生长促进剂，其特征在于：包括权利要求1所述异硫链霉菌M7的菌悬液或发酵液。
CN202311777392.8A 2023-12-22 2023-12-22 一株异硫链霉菌m7及其应用 Active CN117535204B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202311777392.8A CN117535204B (zh) 2023-12-22 2023-12-22 一株异硫链霉菌m7及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202311777392.8A CN117535204B (zh) 2023-12-22 2023-12-22 一株异硫链霉菌m7及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN117535204A CN117535204A (zh) 2024-02-09
CN117535204B true CN117535204B (zh) 2024-04-12

Family

ID=89796034

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202311777392.8A Active CN117535204B (zh) 2023-12-22 2023-12-22 一株异硫链霉菌m7及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN117535204B (zh)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP3128577B1 (ja) * 1999-11-04 2001-01-29 工業技術院長 ポリ乳酸樹脂の分解方法
CN104263667A (zh) * 2014-06-13 2015-01-07 湖北工业大学 一种异硫链霉菌及其应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP3128577B1 (ja) * 1999-11-04 2001-01-29 工業技術院長 ポリ乳酸樹脂の分解方法
CN104263667A (zh) * 2014-06-13 2015-01-07 湖北工业大学 一种异硫链霉菌及其应用

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
中国红豆杉内生放线菌En-1的分离、鉴定及其次生代谢物的研究;林岚;李靖;;生态环境学报;20111018(10);第29-35页 *
产木聚糖酶芽孢杆菌的筛选鉴定及肉兔饲喂效果研究;杨佳蕾;张学雯;李术娜;;饲料工业;20170625(12);第54-58页 *
出土竹简饱水期间放线菌群落结构与功能;张潇月;杨弢;吴昊;黄鑫;李静;周潇;肖嶙;赵珂;;微生物学通报;20171204(06);第37-46页 *
海洋弗氏链霉菌HNM0089抗真菌活性成分研究;陶琳;丛子文;周双清;黄东益;吴文嫱;许云;夏薇;张荣萍;黄小龙;;热带作物学报;20180308(04);第136-140页 *
防治黄瓜根结线虫和枯萎病组合菌剂的研究;汤运赟 等;《中国优秀硕士论文 农业科技辑》;20210131;D046-245 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN117535204A (zh) 2024-02-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN113151062B (zh) 贝莱斯芽孢杆菌ljbv19及其应用
CN108315267B (zh) 短密木霉gsaamlshu-1及其应用
CN111040976B (zh) 一株解淀粉芽孢杆菌及其应用
CN113969247A (zh) 一种抑制烟草病害病原菌的细菌及应用
CN113388526A (zh) 一种内生真菌fo-r20及其应用
US20220386625A1 (en) Application of endophytic falciphora oryzae fo-r20 in controlling panicle blast
CN103013852A (zh) 一种对黄瓜疫霉菌有抑制作用的放线菌及其筛选方法
CN114456981B (zh) 一株耐盐碱地固氮大豆根瘤菌及其应用
CN112342173A (zh) 贝莱斯芽孢杆菌及其应用
CN111424004A (zh) 一株亚麻假单胞菌及其应用
CN109112072B (zh) 一种木霉菌在促进植物生长中的应用
CN106929433B (zh) 解磷青霉菌及其应用
CN110643551B (zh) 一株防治水稻稻瘟病的嗜根寡养单胞菌s11及其应用
CN117264813A (zh) 野尻链霉菌菌株及其发酵液在防治玉米病害中的应用
CN108998395B (zh) 一种解淀粉芽孢杆菌及其应用
CN117535204B (zh) 一株异硫链霉菌m7及其应用
CN105462882A (zh) 一种用于防治作物黄萎病的铜绿假单胞菌及其应用
CN116240126A (zh) 一株多功能贝莱斯芽孢杆菌sb10及其应用
CN114934001A (zh) 一种烟草种子内生拮抗菌及其应用
CN110257254B (zh) 一种生防菌株tmn-1及生防菌剂的制备方法和应用
KR101182103B1 (ko) 토양근권세균 플라보박테리움 균주 ｇｓｅ０９를 포함하는 식물 탄저병 방제용 및 수량증진과 성숙촉진용 조성물 그리고 이를 이용한 탄저병 방제방법
KR101107373B1 (ko) 토양근권세균 슈도모나스 코루가타 균주 ｃｃｒ８０을 포함하는 식물 탄저병 방제용 조성물 및 이를 이용한 탄저병 방제방법
CN110982764A (zh) 一种防治水稻稻瘟病的特基拉芽孢杆菌s12及其应用
CN115927051B (zh) 一种生防细菌、生防复配菌剂及其应用
CN115637241B (zh) 一株大豆根腐病防病促生细菌RH_Pc03及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant