CN115808530A - 血栓弹力图活化凝血检测试剂及其应用 - Google Patents
血栓弹力图活化凝血检测试剂及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115808530A CN115808530A CN202211459750.6A CN202211459750A CN115808530A CN 115808530 A CN115808530 A CN 115808530A CN 202211459750 A CN202211459750 A CN 202211459750A CN 115808530 A CN115808530 A CN 115808530A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- blood coagulation
- activated blood
- detection reagent
- kaolin
- coagulation detection
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明涉及体外凝血检测技术领域，具体涉及血栓弹力图活化凝血检测试剂及其应用。本发明提供的活化凝血检测试剂采用纳米级粉末高岭土，与脑磷脂配合，能有效启动内源性凝血激活途径，采用结冷胶与二价金属镁离子，形成的三维网络结构具有良好的承托力和极低的粘性，使试剂保持良好的流动性及悬浮能力，能减少有效成分的沉淀，有效避免活化凝血检测试剂在长期保存及运输过程中出现失效的问题。
Description
技术领域
本发明涉及体外凝血检测技术领域，具体涉及血栓弹力图活化凝血检测试剂及其应用。
背景技术
血栓弹力图(thromboela-stogram，TEG)是血栓弹力仪描绘出的特殊图形，可以准确、整体地评估体外血液凝固情况。利用TEG指导成分输血、判断促凝和抗凝等药物的疗效、评估患者血栓发生几率以及为预防手术后的血栓发生等提供科学、客观可靠的数据支持。
德国教授Harter于1948年首先描述了血栓弹力图。2000年开始，我国三甲医院开始引入血栓弹力仪，并在麻醉科、ICU、体外循环和器官移植等科室率先使用。到了2007年6月，血栓弹力图仪进入《医疗机构临床检验项目目录》和《全国医疗服务价格项目规范(试行2001年版)》目录中。血栓弹力图仪中的不锈钢盛血杯以4°45'角度来回转动，当杯壁与杯中圆柱体中间的血液标本呈液态时，杯的来回转动不能带动圆柱体，通过传感器反映到描图纸上的信号是一条直线，当血液开始凝固时，杯与圆柱体之间因纤维蛋白黏附性而产生阻力，杯的转动带动圆柱体同时运动，随着纤维蛋白的增加阻力也不断增大，杯带动圆柱体的运动也随之变化，圆柱体运动切割磁力线产生电流，电流转换为数字信号，此信号通过传感器描绘到描图纸上形成特有的血栓弹力图。
目前全自动血栓弹力图活化凝血检测试剂多为大瓶装，但由于检测时间久，在检测过程中激活剂高岭土会发生部分沉降，造成检测试剂不均匀，影响检测结果。例如现有的一种全自动血栓弹力图活化凝血检测试剂的激活剂包括高岭土、磷脂和叠氮钠等，虽然能够降低成本，短期内稳定性良好，却无法保证长时间稳定性良好及试剂的均匀性，同时也无法避免高岭土的沉淀。因此亟需开发出一种稳定性好、不易沉淀、均匀性好的全自动血栓弹力图活化凝血检测试剂。
发明内容
有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供血栓弹力图活化凝血检测试剂及其应用，本发明提供了一种可以使高岭土长时间悬浮，避免有效试剂沉淀的活化凝血检测试剂及其在血栓弹力图试验中的应用。
本发明提供了活化凝血检测试剂，包括0.1％～0.6％(w/v)Tris、0.01％～0.05％(w/v)高岭土、0.1％～2％(v/v)脑磷脂、0.1％～0.5％(w/v)稳定剂、0.01％～2％(w/v)金属离子和0.05％(w/v)防腐剂；
所述w/v为质量体积比，单位为g/mL；
所述稳定剂选自结冷胶、琼脂、卡拉胶、黄原胶中至少一种；
所述金属离子选自Mg2+、Zn2+、Mn2+中至少一种。
进一步的，本发明提供的所述活化凝血检测试剂稳定性好、不易沉淀、均匀性好，所述活化凝血检测试剂与血栓弹力图仪配合使用，进行相关指标的检测。
在一些实施例中，本发明通过设计试验对活化凝血检测试剂的组分和浓度进行筛选，结果表明活化凝血检测试剂的组分为Tris、高岭土、脑磷脂、稳定剂、金属离子和防腐剂，浓度为0.1％～0.6％(w/v)Tris、0.01％～0.05％(w/v)高岭土、0.1％～2％(v/v)脑磷脂、0.1％～0.5％(w/v)稳定剂、0.01％～2％(w/v)金属离子和0.05％(w/v)防腐剂时，检测效果更好。
具体的，本发明提供的活化凝血检测试剂包括0.3％(w/v)Tris、0.035％(w/v)高岭土、1％(v/v)脑磷脂、0.2％(w/v)稳定剂、0.15％(w/v)金属离子和0.05％(w/v)防腐剂。
本发明提供的所述活化凝血检测试剂中，所述稳定剂为结冷胶，所述金属离子为Mg2+。
具体的，稳定剂包括结冷胶、琼脂、卡拉胶、黄原胶、海藻酸钠、阿拉伯胶、果胶、瓜尔豆胶、槐豆胶、明胶、吐温。本发明通过实验证明低酰基结冷胶依靠其游离基团能够与二价金属离子形成特殊的凝胶，因此与适量的Mg2+结合能够形成三维网络结构，既具有良好的承托力，又具有假塑性和极低的黏性，使试剂保持良好的流动性及悬浮能力。
本发明提供的所述活化凝血检测试剂，其pH值为7.0～8.5。
具体的，在一些实施例中，所述活化凝血检测试剂的pH值为7.3。
本发明提供的所述活化凝血检测试剂，所述金属离子具体为：
所述Mg2+来自MgCl2、MgSO4、Mg(NO3)2中至少一种；
所述Zn2+来自ZnCl2、ZnSO4、Zn(NO3)2中至少一种；
所述Mn2+来自MnCl2、MnSO4、Mn(NO3)2中至少一种，本发明对此不作限定。
本发明提供的所述活化凝血检测试剂，所述高岭土为纳米级粉末高岭土。
具体的，内源性凝血激活剂包括高岭土、鞣花酸和硅藻土。本发明采用的纳米级粉末高岭土，与结冷胶搭配，可以使细小的高岭土微粒长时间混悬在介质中，进而提高试剂的稳定性和均匀性，避免试剂中有效成分的沉淀。
本发明提供的所述活化凝血检测试剂，所述防腐剂为硫酸庆大霉素。
具体的，防腐剂包括叠氮钠、硫柳汞、卡松、庆大霉素、Proclin300。本发明所采用的硫酸庆大霉素是一种氨基糖苷类药物，对铜绿假单胞菌、变形杆菌属、大肠杆菌、克雷白菌属、肠杆菌属、沙雷菌属、志贺菌属、枸橼酸杆菌属、奈瑟菌、金黄色葡萄球菌有较强的抗菌活性。
本发明提供的所述活化凝血检测试剂具体包括水、0.3％(w/v)Tris、0.035％(w/v)高岭土、1％(v/v)脑磷脂、0.2％(w/v)结冷胶、0.15％(w/v)氯化镁和0.05％(w/v)硫酸庆大霉素。
具体的，在一些实施例中，所述活化凝血检测试剂的组分为水、0.3％(w/v)Tris、0.035％(w/v)高岭土、1％(w/v)脑磷脂、0.2％(w/v)结冷胶、0.15％(w/v)氯化镁和0.05％(w/v)硫酸庆大霉素时，对血液样本的检测结果优于其他组分的活化凝血检测试剂，并且稳定性更高，均匀性更好。
本发明还提供了所述活化凝血检测试剂在制备凝固法活化凝血检测试剂盒中的应用。
本发明还提供了凝固法活化凝血检测试剂盒，其包括所述的活化凝血检测试剂以及氯化钙，所述氯化钙的浓度为0.1～1mol/L，优选浓度为0.2mol/L。
本发明提供的方案中，高岭土和脑磷脂能有效启动内源性凝血激活途径，从而进行精确的血栓弹力图检测。结冷胶和Mg2+两种稳定剂结合形成三维网络结构，既具有良好的承托力，又具有假塑性和极低的黏性，使试剂保持良好的流动性及悬浮能力，显著提高了活化凝血检测试剂的稳定性，能有效避免激活剂在长期保存及运输过程中出现失效的问题。
具体实施方式
本发明提供了血栓弹力图活化凝血检测试剂及其应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
制备例1活化凝血检测试剂的制备
活化凝血检测试剂(pH＝7.0～8.5)的组分与浓度如表1所示
表1
| 组分 | 浓度(w/v) |
| Tris | 0.1％～0.6％ |
| 高岭土 | 0.01％～0.05％ |
| 结冷胶 | 0.1％～0.5％ |
| Mg<sup>2+</sup> | 0.01％～2％ |
| 硫酸庆大霉素 | 0.01％～0.1％ |
| 组分 | 浓度(v/v) |
| 脑磷脂 | 0.1％～2％ |
| 水 | 98％～99.9％ |
实施例1
将活化凝血检测试剂按百分比计为0.035％的高岭土、1％的脑磷脂、0.2％的结冷胶、0.15％的Mg2+、0.3％的Tris、0.05％的硫酸庆大霉素和余量的水。
实施例2
将活化凝血检测试剂按百分比计为0.035％的硅藻土、1％的脑磷脂、0.2％的结冷胶、0.15％的Mg2+、0.3％的Tris、0.05％的硫酸庆大霉素和余量的水。
实施例3
将活化凝血检测试剂按百分比计为0.035％的高岭土、0.1％的脑磷脂、0.2％的结冷胶、0.15％的Mg2+、0.3％的Tris、0.05％的硫酸庆大霉素和余量的水。
实施例4
将活化凝血检测试剂按百分比计为0.035％的高岭土、2％的脑磷脂、0.2％的结冷胶、0.15％的Mg2+、0.3％的Tris、0.05％的硫酸庆大霉素和余量的水。
实施例5
将活化凝血检测试剂按百分比计为0.01％的高岭土、1％的脑磷脂、0.2％的结冷胶、0.15％的Mg2+、0.3％的Tris、0.05％的硫酸庆大霉素和余量的水。
实施例6
将活化凝血检测试剂按百分比计为0.05％的高岭土、1％的脑磷脂、0.2％的结冷胶、0.15％的Mg2+、0.3％的Tris、0.05％的硫酸庆大霉素和余量的水。
实施例7
将活化凝血检测试剂按百分比计为0.035％的高岭土、1％的脑磷脂、0.5％的结冷胶、0.15％的Mg2+、0.3％的Tris、0.05％的硫酸庆大霉素和余量的水。
实施例8
将活化凝血检测试剂按百分比计为0.035％的高岭土、1％的脑磷脂、0.1％的结冷胶、0.15％的Mg2+、0.3％的Tris、0.05％的硫酸庆大霉素和余量的水。
对比例1
将活化凝血检测试剂按百分比计为0.035％的高岭土、1％的脑磷脂、0.3％的Tris、0.05％的硫酸庆大霉素和余量的水。
对比例2
现有技术中的一种血栓弹力图活化凝血检测试剂盒(凝固法)。
氯化钙试剂的制备：氯化钙试剂包含有CaCl2、硫酸庆大霉素，CaCl2浓度在0.1～1mol/L，优选浓度0.2mol/L，硫酸庆大霉素浓度在0.01％-0.1％，优选浓度0.05％。
实验例1可行性分析
利用实施例1-8和对比例1-2的检测试剂对相同来源的血液样本进行检测，检测过程包括以下步骤：
1.在相应的血栓弹力图仪软件界面上，输入患者姓名，测试名称，测试类型于下拉框中选择“CK-Citrated Kaolin”。
2.在血栓弹力图仪的每一通道上装载一套普通杯，用1mL移液器移取枸橼酸钠抗凝全血样本1mL到活化凝血检测试剂瓶中，颠倒试剂瓶5次使之充分混匀，待使用。
3.移取20μL氯化钙试剂到普通杯杯底。
4.移取340μL活化凝血检测试剂瓶中的血液到普通杯中。
5.杯子移至测试位置，开始测试。
6.凝血过程约30分钟结束，如观察纤溶过程需延长至1小时。
7.测试完成后，在软件界面点击“停止”或“Stop”，卸去一次性普通杯，按实验室要求丢弃处理。
检测结果如表2：
①R值(凝血时间)反应参加凝血启动过程的凝血因子的综合作用；
②K值(血块形成时间)一般认为此参数代表凝血酶活化放大阶段，主要通过纤维蛋白原裂解和纤维蛋白聚合，导致血凝块的固化；
③Angle值(血凝速率)是反应纤维蛋白和血小板在血凝块开始形成时的共同作用结果，此时纤维蛋白原的功能为主；④MA值(血块强度)反映了正在形成的血凝块最大强度及血凝块形成的稳定性，主要受血小板及纤维蛋白两个因素影响，其中血小板的作用要比纤维蛋白原大，约占80％。
表2
| 试验组 | R(min) | K(min) | Angle(deg) | MA(mm) |
| 实施例1 | 6.8 | 1.9 | 65.1 | 60.1 |
| 实施例2 | 6.3 | 1.6 | 66.3 | 60.3 |
| 实施例3 | 7.2 | 2.1 | 63.1 | 59.6 |
| 实施例4 | 5.8 | 1.8 | 68.9 | 62.5 |
| 实施例5 | 8.7 | 2.6 | 56.4 | 57.1 |
| 实施例6 | 4.8 | 1.3 | 69.6 | 63.5 |
| 实施例7 | 7.5 | 2.3 | 62.5 | 58.8 |
| 实施例8 | 6.8 | 1.9 | 64.1 | 61.5 |
| 对比例1 | 6.8 | 1.9 | 65.3 | 60.5 |
| 对比例2 | 6.7 | 1.8 | 65.5 | 60.3 |
结果：本发明的检测试剂的检测结果实施例1及实施例8与市售检测试剂检测结果相近，说明本发明的检测试剂能有效应用于血栓弹力图仪，但无法说明实施例1试剂与市售试剂的稳定性，后续进行稳定性探索，而实施例2-7与市售检测试剂的检测结果相差较大，说明实施例2-7较实施例1和8较差，后续选择实施例1和8做后续探究。
实验例2稳定性评估
稳定性评估过程如下：
1、将实施例1及实施例8和对比例1-2中的检测试剂置于37℃进行加速稳定4周。
2、分别在37℃进行加速稳定的第0、7、14、28天取试剂对同一批次的质控进行检测。
分别利用实施例1及实施例8和对比例1-2的检测试剂对同一批次的质控进行检测，检测结果如表3：
表3
结果：实施例1中的检测试剂含有稳定剂结冷胶，在37℃进行加速稳定4周，检测同一批次样本偏差依然很小，而实施例8添加较少结冷胶和对比例1中未添加稳定剂结冷胶，其偏差较大，说明稳定性差，实施例1较对比例2检测结果偏差较小说明，稳定性优于市售检测试剂，采用结冷胶作为稳定剂，可使活化凝血检测试剂更稳定。
实验例3重复性评估
重复性评估过程：将28天的实施例1和对比例1-2中的检测试剂对同一批次质控检测十次。
分别利用实施例1和对比例1-2的检测试剂对同一批次的质控进行检测，检测结果如表4：
表4
结果：实施例1在37℃进行加速4周，检测同一批次样本十次CV很小，实施例1较对比例1-2检测结果CV较小，说明实施例1的重复性、均匀性较好，不易沉淀，且优于市售检测试剂。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.活化凝血检测试剂，其特征在于，包括0.1％～0.6％(w/v)Tris、0.01％～0.05％(w/v)高岭土、0.1％～2％(v/v)脑磷脂、0.1％～0.5％(w/v)稳定剂、0.01％～2％(w/v)金属离子和0.05％(w/v)防腐剂；
所述稳定剂选自结冷胶、琼脂、卡拉胶、黄原胶中至少一种；
所述金属离子选自Mg2+、Zn2+、Mn2+中至少一种。
2.根据权利要求1所述的活化凝血检测试剂，其特征在于，包括0.3％(w/v)Tris、0.035％(w/v)高岭土、1％(v/v)脑磷脂、0.2％(w/v)稳定剂、0.15％(w/v)金属离子和0.05％(w/v)防腐剂。
3.根据权利要求1或2所述的活化凝血检测试剂，其特征在于，所述稳定剂为结冷胶，所述金属离子为Mg2+。
4.根据权利要求1或2所述的活化凝血检测试剂，其特征在于，其pH值为7.0～8.5。
5.根据权利要求1所述活化凝血检测试剂，其特征在于，
所述Mg2+来自MgCl2、MgSO4、Mg(NO3)2中至少一种；
所述Zn2+来自ZnCl2、ZnSO4或Zn(NO3)2中至少一种；
所述Mn2+来自MnCl2、MnSO4或Mn(NO3)2中至少一种。
6.根据权利要求1或2所述的活化凝血检测试剂，其特征在于，所述高岭土为纳米级粉末高岭土。
7.根据权利要求1或2所述的活化凝血检测试剂，其特征在于，所述防腐剂为硫酸庆大霉素。
8.根据权利要求1～7任一项所述的活化凝血检测试剂，其特征在于，包括水、0.3％(w/v)Tris、0.035％(w/v)高岭土、1％(v/v)脑磷脂、0.2％(w/v)结冷胶、0.15％(w/v)氯化镁和0.05％(w/v)硫酸庆大霉素。
9.权利要求1～8任一项所述的活化凝血检测试剂在制备凝固法活化凝血检测试剂盒中的应用。
10.凝固法活化凝血检测试剂盒，其特征在于，其包括权利要求1～8任一项所述的活化凝血检测试剂以及氯化钙，所述氯化钙的浓度为0.1～1mol/L。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211459750.6A CN115808530A (zh) | 2022-11-16 | 2022-11-16 | 血栓弹力图活化凝血检测试剂及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211459750.6A CN115808530A (zh) | 2022-11-16 | 2022-11-16 | 血栓弹力图活化凝血检测试剂及其应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115808530A true CN115808530A (zh) | 2023-03-17 |
Family
ID=85483693
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202211459750.6A Pending CN115808530A (zh) | 2022-11-16 | 2022-11-16 | 血栓弹力图活化凝血检测试剂及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115808530A (zh) |
-
2022
- 2022-11-16 CN CN202211459750.6A patent/CN115808530A/zh active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101226201B (zh) | 活化部分凝血活酶时间(aptt)测定试剂 | |
| JPH05507297A (ja) | ヘパリンの酵素による中和 | |
| JP3330685B2 (ja) | 液体トロンボプラスチン試薬 | |
| Cazenave et al. | Quantitative radioisotopic measurement and scanning electron microscopic study of platelet adherence to a collagen-coated surface and to subendothelium with a rotating probe device | |
| EP1884778A1 (en) | Method for testing efficacy of antithrombotic agent | |
| Greco et al. | Staphylococcus epidermidis forms biofilms under simulated platelet storage conditions | |
| CA3002250A1 (en) | Improved clotting composition | |
| CN105651568A (zh) | 一种血细胞分析仪质控品的制备方法 | |
| Lattwein et al. | An in vitro proof-of-principle study of sonobactericide | |
| JP6818187B1 (ja) | 鉄キレート剤を含むプロトロンビン時間試薬 | |
| CA1213198A (en) | Diagnostic activated partial thromboplastin reagent | |
| JPH10509514A (ja) | 止血活性の分析のための方法、試薬およびキット | |
| CN115808530A (zh) | 血栓弹力图活化凝血检测试剂及其应用 | |
| Melvin et al. | Development and Blood Compatibility of a Stable and Bioactive Metal–Organic Framework Composite Coating for Blood-Circulation Tubing | |
| Kang et al. | Dose optimization of cefpirome based on population pharmacokinetics and target attainment during extracorporeal membrane oxygenation | |
| JPS6315150A (ja) | 生菌数測定装置 | |
| Maurer-Spurej et al. | Could microparticles be the universal quality indicator for platelet viability and function? | |
| CN207528590U (zh) | 检测凝血功能的样品杯及系统 | |
| US3753925A (en) | Cerebrospinal fluid control standard | |
| CN111337385A (zh) | 一种含肝素血样检测试剂盒及其制备方法 | |
| Mohr et al. | Sterility testing of platelet concentrates prepared from deliberately infected blood donations | |
| Straub et al. | Investigation of three common centrifugation protocols for platelet-rich fibrin (PRF) as a bio-carrier for ampicillin/sulbactam: A prospective trial | |
| US8114580B2 (en) | Simulation of normal fresh blood platelets for reference control | |
| Moroff et al. | Comparative in vitro evaluation of apheresis platelets stored with 100% plasma or 65% platelet additive solution III/35% plasma and including periods without agitation under simulated shipping conditions | |
| CN107561296A (zh) | 一种测定凝血酶时间（tt）的试剂盒 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |