CN115746022A - 一种卡波特韦衍生物的制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于药物化学合成技术领域，具体涉及一种卡波特韦衍生物及其制备方法和应用。所述的卡波特韦衍生物，其结构式如下：

其中：R为苯基衍生物或苄基衍生物；得到目标化合物对H460、Huh7、MCF7、HCT116和SKOV3共5种肿瘤细胞具有一定的抑制效果，对人肾小管上皮细胞HRM表现低毒作用，是一种潜在的抗肿瘤先导化合物。

Description

一种卡波特韦衍生物的制备方法和应用

技术领域

本发明属于药物合成技术领域，具体涉及一种卡波特韦衍生物的制备方法和应用。

背景技术

卡波特韦(cabotegravir)是根据度鲁特韦进一步改造，把手性氮氧六元环变为手性氮氧五元环得到的一种长效HIV整合酶抑制剂，作用于广泛的HIV亚型，抑制HIV整合酶催化的链转移反应的IC₅₀达到3nM。2021年，美国FDA宣布批准由ViiV Healthcare公司开发的Cabenuva(Cabotegravir/Rilpivirine)卡波特韦/利匹韦林(一种长效非核苷逆转录酶抑制剂)注射制剂上市治疗接受抗逆转录病毒治疗后出现病毒学抑制的成人HIV-1感染患者，这些患者无失败治疗史，对卡博特韦或利匹韦林均无已知或疑似耐药性。这是FDA批准的首个只需每月给药一次用于HIV感染承认患者的完整注射方案。这次批准标志着一个重大里程碑，将为HIV治疗带来一场革命，将把全年每天365天口服转变为每个月或每2个月注射一次、全年仅需注射治疗12天或6天。

美国FDA还批准了Vocabria(Cabotegravir)卡波特韦片剂上市。在开始施用Cabenuva治疗前，Vocabria应与口服利匹韦林联合使用1个月，以确保在转换为缓释注射制剂前药物耐受性良好。卡波特韦Cabenuva和Vocabria曾被FDA授予快速通道和优先审评资格。Cabenuva的安全性和有效性得到两项随机、开放标签、对照临床试验的支持。这两项名为ATLAS和FLAIR的临床试验的结果已经发表在《新英格兰医学杂志》(NEJM)上。研究结果表明，每月一次，肌肉注射Cabenuva，与每日服用口服抗病毒疗法相比，治疗48周后，在抑制患者体内HIV-1病毒RNA水平方面效果相当。并且未观察到CD4阳性细胞计数较基线的临床相关变化。

我们发现1,2,3-三氮唑化合物是一类具有广泛生物活性的氮杂环，一直以来备受药物化学家和生物化学家的重视，这类三唑化合物可以通过氢键和偶极作用与靶向分子相互作用，并且具有广泛的抗HIV活性和很高的抗人类HIV变异活性，并且1,2,3-三氮唑不但是酸性的杂环，而且可以作为酰胺键的生物电子等排体，有文献报道利用经典的抗HIV药物齐多夫定结构上具有叠氮的特点，直接通过点击反应引入1,2,3-三氮唑，得到的化合物能够有效的提高活性，因此我们拟用1,2,3-三氮唑对卡波特韦结构进行了修饰，用1,2,3-三氮唑衍生物结构替换2,4-二氟苄基结构，得到一系列结构新的的具有自主知识产权的化合物，得到一类结构新颖的化合物，然后进行抗肿瘤方面的活性应用，希望发现新的用途。

发明内容

本发明解决的技术问题是提供了一种操作简单易行、原料廉价易得且反应效率高的卡波特韦衍生物制备方法。

本发明为解决上述技术问题采用如下技术方案，一种卡波特韦衍生物制备方法，其特征在于具体制备过程包括以下步骤：

(1)、4-氯乙酰乙酸甲酯与甲醇反应得到4-甲氧基乙酰乙酸甲酯；具体为：在反应瓶中加入一定量的四氢呋喃和甲醇钠，氮气保护下加入一定量含量为60％氢化钠，然后滴加一定量的甲醇与4-氯乙酰乙酸甲酯的混合溶液，反应结束后加入冰乙酸，当反应体系pH值为10-11时，抽滤反应体系，抽滤后的粘稠固体再用溶剂打浆洗涤多次，抽滤后把白色固体加入乙酸乙酯，搅拌状态下缓慢滴加稀盐酸，调节反应体系pH值到4，体系呈现溶清状态，分出有机相，使用无水硫酸镁干燥后浓缩得到无色液体。所述的含量为60％氢化钠与甲醇与4-氯乙酰乙酸甲酯的投料量摩尔比为2：3：1，所述的打浆洗涤溶剂为戊烷或石油醚或辛烷。

(2)、4-甲氧基乙酰乙酸甲酯与DMF-DMA和氨基乙醛缩二甲醇反应得到(Z)-甲基-2-(((2,2-二甲氧基乙基)胺基)亚甲基)-4-甲氧基-3-氧桥丁酸；具体为：把一定量的4-甲氧基乙酰乙酸甲酯加入到反应瓶中，在氮气保护下，反应温度降至15℃，缓慢滴加DMF-DMA，滴加完毕，保持室温条件搅拌反应一段时间，原料反应完全后降低反应温度至10～15℃，缓慢滴加一定量的氨基乙醛缩二甲醇，保持反应温度不超过20℃，滴加完后继续搅拌一段时间加入甲基叔丁基醚，缓慢搅拌过滤反应液，滤饼用甲基叔丁基醚洗涤两次，烘干后得到固体，在0℃条件下将母液缓慢搅拌蒸发大约20％的溶剂，缓慢搅拌过程中会发现析晶，过滤后剩余的滤液，继续在0℃条件下缓慢搅拌蒸发，继续有析晶，抽滤，可以重复几次，直至不再有析晶出现，合并这几个得到的固体，用甲基叔丁基醚洗涤多次，烘干后得到(Z)-甲基-2-(((2,2-二甲氧基乙基)胺基)亚甲基)-4-甲氧基-3-氧桥丁酸。

(3)、(Z)-甲基-2-(((2,2-二甲氧基乙基)胺基)亚甲基)-4-甲氧基-3-氧桥丁酸与草酸二甲酯反应得到1-(2,2-二甲氧基乙基)-1,4-二氢-3-甲氧基-4-氧代-2,5-吡啶二甲酸甲酯；具体为：在反应瓶中加入一定量的(Z)-甲基-2-(((2,2-二甲氧基乙基)胺基)亚甲基)-4-甲氧基-3-氧桥丁酸和无水甲醇，在室温条件和氩气保护下搅拌至完全溶解；保持室温搅拌，加入一定量的草酸二甲酯，搅拌均匀后在室温条件下，快速加入甲醇钠，然后反应体系缓慢升温至回流，保持反应回流搅拌一段时间，把反应体系冷却至10℃，在搅拌状态下缓慢滴加2N盐酸调节反应液pH为5～6，然后将反应液转入单口瓶中，在真空条件下，内温小于40℃下蒸除溶剂甲醇；然后向浓缩物中加入乙酸乙酯，搅拌条件下使浓缩物溶解；然后反应温度降至10～15℃，加入2N盐酸调节反应液pH为3，搅拌下加入水,将反应体系转入分液漏斗中，上层有机相分出，并快速加入饱和碳酸钠溶液洗涤有机相pH为8；下层水相加入乙酸乙酯萃取，有机相分出，加入饱和碳酸钠洗涤有机相pH为8；水相再次用同样办法反萃取多次，有机相分出后均快速加入饱和碳酸钠溶液调节pH为8；最后合并所有得到的有机相，水洗搅拌后分出有机层，真空浓缩得到产品1-(2,2-二甲氧基乙基)-1,4-二氢-3-甲氧基-4-氧代-2,5-吡啶二甲酸甲酯。

(4)、1-(2,2-二甲氧基乙基)-1,4-二氢-3-甲氧基-4-氧代-2,5-吡啶二甲酸甲酯经氢氧化锂水解得到1-(2,2-二甲氧基乙基)-1,4-二氢-3-甲氧基-4-氧代-2,5-吡啶二甲酸-2-甲酸；具体为：取1-(2,2-二甲氧基乙基)-1,4-二氢-3-甲氧基-4-氧代-2,5-吡啶二甲酸甲酯加入甲醇中，在氮气保护下，0℃条件下加入氢氧化锂，加完后反应至TLC显示原料反应完全保持反应温度0～5℃下缓慢滴加2N盐酸溶液调节反应液pH为6～7，反应体系转移至单口瓶，真空条件下蒸除溶剂甲醇；再加入乙酸乙酯,0℃下继续滴加2N盐酸溶液调节反应液pH为1～2，移至分液漏斗分层，分出上层有机相，有机相浓缩旋干后经甲醇重结晶提纯后得到1-(2,2-二甲氧基乙基)-1,4-二氢-3-甲氧基-4-氧代-2,5-吡啶二甲酸。

(5)、1-(2,2-二甲氧基乙基)-1,4-二氢-3-甲氧基-4-氧代-2,5-吡啶二甲酸-2-甲酸在甲酸中脱保护后与S-2-氨基丙醇反应得到羧酸基团化合物；具体为：把1-(2,2-二甲氧基乙基)-1,4-二氢-3-甲氧基-4-氧代-2,5-吡啶二甲酸-2-甲酯加入到无水甲酸中，在氩气保护下，搅拌条件下加热至65℃；反应一段时间后浓缩旋蒸除去甲酸，加入乙腈，搅拌使溶解，加入S-2-氨基丙醇，体系升温至内温80～82℃搅拌反应至原料反应完全；在45℃条件下浓缩蒸除溶剂，加入二氯甲烷，再加入2N盐酸调节反应液pH为1～2，分出下层有机相，上层水相用二氯甲烷萃取三次，合并有机相，然后在真空条件下浓缩后在甲醇中重结晶纯化得到羧酸基团化合物。

(6)、羧酸基团化合物在HATU，DIPEA作用下与间氨基苯乙炔缩合后脱去甲基得到端基炔基团化合物。

(7)、端基炔基团化合物与叠氮类化合物反应得到

其中R为2-氟苯基，4-三氟甲基苯基，2-甲基-3-硝基苯基，3-甲基苯基，4-氟苯基，3,4-二甲氧基苯基，3-甲氧基苯基，苯基，3-三氟甲基苯基，2,5-二(三氟甲基)苯基，2-甲基苯基，2-甲氧基苯基，2-溴苯基，2-氯苯基，2-碘苯基，4-甲氧基苯基，4-甲基苯基，2,4,6-三甲基苯基，4-氯苯基，2-氯苯基，3-氯苯基，4-溴苯基，3-溴苯基，3-氟苯基，3,5-二溴苄基，苄基，2-溴苄基，3-甲氧基苄基，3-溴苄基，2-氟苄基，2-甲基苄基，4-三氟甲基苄基，4-甲基苄基，2-氯苄基，4-氯苄基，3-氟苄基。

(8)、卡波特韦衍生物抗肿瘤活性及作用机制研究。

本发明的技术优势：新设计的合成路线进一步优化了原有的路线，缩短了反应步骤并降低了“三废”，减少了中间体后处理损失，有效提高反应收率，得到的部分卡波特韦衍生物具有良好的抑制肿瘤细胞的效果。

附图说明

图1为化合物9c核磁氢谱图

图2为化合物9k核磁氢谱图

图3为化合物9s核磁氢谱图

图4为化合物9u核磁氢谱图

图5为化合物10f核磁氢谱图

图6为化合物10i核磁氢谱图

图7为化合物9s与拓扑异构酶1蛋白分子对接图

具体实施方式

以下通过实施例对本发明的上述内容做进一步详细说明，但不应该将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例，凡基于本发明上述内容实现的技术均属于本发明的范围。

实施例1

在反应瓶中，加入四氢呋喃200mL和甲醇钠5.5g，氮气保护下，搅拌均匀，降温至15℃下加入含量为60％氢化钠8g，加完后补充四氢呋喃50mL；体系开始降温，在反应温度不超过15℃下缓慢滴加甲醇10g与4-氯乙酰乙酸甲酯15g的混合溶液，滴加完后控制反应温度在20℃以下，搅拌反应约3h，升值室温搅拌反应1h,再次降温至0℃，缓慢加入冰乙酸，滴加过程中保持内温在10℃以下，一边滴加一边搅拌，观察到反应体系中逐渐有大量浅土黄色的固体出现，反应体系逐渐变得非常浓稠，当反应体系pH值为10-11时，固体出现最多，抽滤反应体系，抽滤后的粘稠固体再用戊烷10mL打浆洗涤两次，进一步除去煤油等杂质和有色杂质并使固体呈现颗粒状避免粘稠，抽滤后把白色固体加入乙酸乙酯100mL，搅拌状态下缓慢滴加稀盐酸，调节反应体系pH值到4，体系呈现溶清状态，分出有机相，使用无水硫酸镁干燥后浓缩得到无色液体12.4g，¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ4.01(d,J＝4.0Hz,2H),3.67(d,J＝4.0Hz,3H),3.46(t,J＝4.0Hz,2H),3.36(d,J＝4.0Hz,3H)。

实施例2

在反应瓶中，加入四氢呋喃200mL和甲醇钠5.5g，氮气保护下，搅拌均匀，降温至15℃下加入含量为60％氢化钠8g，加完后补充四氢呋喃50mL；体系开始降温，在反应温度不超过15℃下缓慢滴加甲醇10g与4-氯乙酰乙酸甲酯15g的混合溶液，滴加完后控制反应温度在20℃以下，搅拌反应约3h，升值室温搅拌反应1h,再次降温至0℃，缓慢加入冰乙酸，滴加过程中保持内温在10℃以下，一边滴加一边搅拌，观察到反应体系中逐渐有大量浅土黄色的固体出现，反应体系逐渐变得非常浓稠，当反应体系pH值为10-11时，固体出现最多，抽滤反应体系，抽滤后的粘稠固体再用石油醚10mL打浆洗涤两次，抽滤后把白色固体加入乙酸乙酯100mL，搅拌状态下缓慢滴加稀盐酸，调节反应体系pH值到4，体系呈现溶清状态，分出有机相，使用无水硫酸镁干燥后浓缩得到无色液体9.9g。

实施例3

在反应瓶中，加入四氢呋喃200mL和甲醇钠5.5g，氮气保护下，搅拌均匀，降温至15℃下加入含量为60％氢化钠8g，加完后补充四氢呋喃50mL；体系开始降温，在反应温度不超过15℃下缓慢滴加甲醇10g与4-氯乙酰乙酸甲酯15g的混合溶液，滴加完后控制反应温度在20℃以下，搅拌反应约3h，升值室温搅拌反应1h,再次降温至0℃，缓慢加入冰乙酸，滴加过程中保持内温在10℃以下，一边滴加一边搅拌，观察到反应体系中逐渐有大量浅土黄色的固体出现，反应体系逐渐变得非常浓稠，当反应体系pH值为10-11时，固体出现最多，抽滤反应体系，抽滤后的粘稠固体再用辛烷10mL打浆洗涤两次，抽滤后把白色固体加入乙酸乙酯100mL，搅拌状态下缓慢滴加稀盐酸，调节反应体系pH值到4，体系呈现溶清状态，分出有机相，使用无水硫酸镁干燥后浓缩得到无色液体7.4g。

实施例4

在带有搅拌和温控装置的多功能反应瓶中，把4-甲氧基乙酰乙酸甲酯150g加入到反应瓶中，在氮气保护下，反应温度降至15℃，缓慢滴加DMF-DMA(120g)，约30min滴加完毕，缓慢升至25℃，保持室温条件搅拌反应1.0h，TLC监控原料反应完全，再次降低反应温度至10～15℃，缓慢滴加氨基乙醛缩二甲醇(115g)，滴加过程中可观察到溶液升温，保持反应温度不超过20℃，滴加完后继续搅拌30min后可见大量固体析出；加入甲基叔丁基醚100mL，缓慢搅拌10min使固体悬浮，过滤反应液，滤饼用甲基叔丁基醚50mL洗涤两次，烘干后得到固体，在0℃条件下将母液缓慢搅拌蒸发大约20％的溶剂，缓慢搅拌过程中会发现析晶，过滤后剩余的滤液，继续在0℃条件下缓慢搅拌蒸发，继续有析晶，抽滤，可以重复几次，直至不再有析晶出现，合并这几个得到的固体，用甲基叔丁基醚20mL洗涤三次，烘干后得到(Z)-甲基-2-(((2,2-二甲氧基乙基)胺基)亚甲基)-4-甲氧基-3-氧桥丁酸231g，纯度为98.1％。

实施例5

在反应瓶中加入(Z)-甲基-2-(((2,2-二甲氧基乙基)胺基)亚甲基)-4-甲氧基-3-氧桥丁酸(化合物3)260g和无水甲醇2000mL，在室温条件和氩气保护下搅拌至完全溶解；保持室温搅拌，加入草酸二甲酯480g，搅拌10min；控制内温在室温条件下，快速加入甲醇钠125g，可见反应体系升温；然后反应体系缓慢升温至回流，可见溶液逐渐呈深红棕色，保持反应回流搅拌4h，TLC监控原料反应完全；把反应体系冷却至10℃，在搅拌状态下缓慢滴加2N盐酸调节反应液pH为5～6，可见溶液颜色逐渐由深棕红色变为土黄色；然后将反应液转入单口瓶中，在真空条件下，内温小于40℃下蒸除溶剂甲醇；然后向浓缩物中加入乙酸乙酯2000mL，搅拌条件下使浓缩物溶解；然后反应温度降至10～15℃，加入2N盐酸调节反应液pH为3，搅拌下加入水200mL,可见溶液上层有机相部分基本澄清；将反应体系转入分液漏斗中，上层有机相分出，并快速加入饱和碳酸钠溶液洗涤有机相pH为8；下层水相加入乙酸乙酯200mL萃取一次，震摇(若乳化加入酸水少量即可澄清)再次分层，有机相分出，加入饱和碳酸钠洗涤有机相pH为8；水相再次用同样办法反萃取三次，每次若发现有轻微乳化现象，可加入少量的2N盐酸溶液破除乳化；这三次的有机相分出后均快速加入饱和碳酸钠溶液调节pH为8；最后合并所有得到的有机相，加入水200mL，搅拌30min，分出有机层，真空浓缩得到产品(化合物4)269g。

实施例6

在反应瓶中，取(化合物4)32g加入甲醇200mL中，在氮气保护下，0℃条件下加入一水合氢氧化锂14.8g，加完后可见反应液呈现浑浊状态，保持反应温度不超过5℃搅拌反应1.5h，然后保持反应温度0～5℃下缓慢滴加2N盐酸溶液调节反应液pH为2，pH值不能低于2，不然会有双水解副产物，补加丙酮50mL，搅拌反应体系中有大量固体出现，过滤反应液，收集好固体，滤液浓缩后加入乙酸乙酯完全溶解，再加入活性炭5g，加热回流搅拌20min，过滤后用饱和碳酸钠溶液调节至8，分出有机相，浓缩后得到固体，合并两次固体，经甲醇加热冷却重结晶提纯后得到精品化合物5(29.1g)；¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ8.42(s,1H),4.54(t,J₁＝4.0Hz,J₂＝4.0Hz,1H),4.14(d,J＝8.0Hz,2H),4.03(s,6H),3.42(s,6H).

实施例7

在反应瓶中，把1-(2,2-二甲氧基乙基)-1,4-二氢-3-甲氧基-4-氧代-2,5-吡啶二甲酸-2-甲酯(化合物5，31g)加入到无水甲酸180mL中，在氩气保护下，搅拌条件下加热至65℃，搅拌反应至TLC监控原料反应完全，真空45℃条件下浓缩旋蒸除去甲酸，然后加入乙腈200mL,浓缩旋蒸以除去残余的甲酸，然后再加入乙腈200mL，搅拌使溶解，加入S-3-氨基丙醇(12.5g)，搅拌10min；体系升温至回流搅拌反应2h，在45℃条件下浓缩蒸除溶剂至少量，加入二氯甲烷300mL，搅拌下加入水100mL,再加入2N盐酸调节反应液pH为1～2，搅拌10min后分出下层有机相，上层水相用二氯甲烷150mL萃取三次，合并有机相，用饱和食盐水100mL洗涤3次；然后在真空条件下浓缩得到粗品，最后在甲醇中重结晶纯化得到纯品23.6g，¹HNMR(400MHz,DMSO)δ15.46(d,J＝8.1Hz,1H),8.75(d,J＝3.2Hz,1H),5.43(d,J＝82.2Hz,1H),4.87(d,J＝80.4Hz,1H),4.41(d,J＝47.8Hz,1H),4.14(d,J＝53.8Hz,2H),3.89(d,J＝4.2Hz,3H),3.72(dd,J＝10.8,5.9Hz,1H),3.14(d,J＝85.1Hz,1H),1.33(d,J＝29.1Hz,3H).

实施例8

在反应瓶中，把(化合物4)32g加入到无水甲酸100mL中，在氩气保护下，搅拌条件下加热至60℃；搅拌反应3h后，真空浓缩旋蒸除去甲酸，加入乙腈200mL，搅拌使溶解，加入S-3-氨基丙醇11g，体系升温至内温80℃搅拌反应至原料反应完全；真空浓缩蒸后加入二氯甲烷200mL，搅拌下加入水100mL，再加入2N盐酸调节反应液pH为1～2，搅拌10min后分出下层有机相，上层水相用二氯甲烷100mL萃取四次，合并有机相，用饱和食盐水100mL洗涤3次；然后在真空条件下浓缩后在甲醇中重结晶得到纯品7(29.7g)

实施例9

在室温条件下，在反应瓶中加入化合物6(30g)，HATU38g，DIPEA25g，间氨基苯乙炔23g和N,N-二甲基甲酰胺1500mL，搅拌反应12h，室温下加水500mL，室温下，充分的打浆后，抽滤，滤饼置于鼓风烘箱干燥过夜，得到化合物8(34.3g)；¹H NMR(400MHz,DMSO)δ12.53(s,1H),8.69(s,1H),7.95(s,1H),7.58(s,1H),7.38(s,1H),7.22(s,1H),5.42(d,J＝78.6Hz,1H),4.87(d,J＝76.4Hz,1H),4.40(d,J＝25.2Hz,1H),4.14(d,J＝68.8Hz,2H),3.80(d,J＝72.6Hz,3H),3.13(d,J＝67.9Hz,1H),2.81(d,J＝63.8Hz,1H),1.29(d,J＝48.7Hz,3H)

实施例10

在室温条件下，在反应瓶中加入化合物7(3.7g)，HATU3.8g，DIPEA2.5g，间氨基苯乙炔2.3g和N,N-二甲基甲酰胺100mL，搅拌反应7.5h，室温下加水100mL，室温下，充分的打浆后，抽滤，滤饼置于鼓风烘箱干燥过夜，得到化合物8(3.61g)；¹H NMR(400MHz,DMSO)δ12.53(s,1H),8.69(s,1H),7.95(s,1H),7.58(s,1H),7.38(s,1H),7.22(s,1H),5.42(d,J＝78.6Hz,1H),4.87(d,J＝76.4Hz,1H),4.40(d,J＝25.2Hz,1H),4.14(d,J＝68.8Hz,2H),3.80(d,J＝72.6Hz,3H),3.13(d,J＝67.9Hz,1H),2.81(d,J＝63.8Hz,1H),1.29(d,J＝48.7Hz,3H)

实施例11

在反应瓶中，将2-氟苯胺0.167g加入到水和盐酸体积比为1:1的溶剂5mL中，冰浴(5℃以下)搅拌，之后把亚硝酸钠0.11g溶解在水5mL中，缓慢滴入，滴加完全后最将叠氮化钠0.1g溶解在水5mL中缓慢滴入，滴加完毕，反应24小时，用二氯甲烷10mL萃取两次，合并有机相，然后依次加入化合物8(0.4g)，叔丁醇10mL，水10mL和四氢呋喃10mL，碘化亚铜0.1g，在50℃条件下反应，TLC监控原料反应完全，过滤后搅拌分出有机相，水相加入二氯甲烷20mL萃取两次，合并有机相经无水硫酸镁干燥后，浓缩后用甲醇重结晶得到白色的产品，目标化合物9b(0.569g)，R为2-氟苯基，¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):12.59(s,1H),9.16(s,1H),8.71(s,1H),8.23(s,1H),7.92(t,J₁＝8.0Hz,J₂＝4.0Hz,1H),7.85(d,J＝4.0Hz,1H),7.71(d,J＝4.0Hz,1H),7.66-7.60(m,2H),7.50(dd,J₁＝4.0Hz,J₂＝8.0Hz,2H),5.54-5.34(m,1H),4.96-4.79(m,1H),4.46-4.36(m,2H),3.92(d,J＝4.0Hz,3H),3.25-3.04(m,1H),1.37-1.30(m,3H)。

实施例12

在反应瓶中，将2-甲基苯胺0.16g加入到水和盐酸体积比为1:1的溶剂5mL中，冰浴(5℃以下)搅拌，之后把亚硝酸钠0.11g溶解在水5mL中，缓慢滴入，滴加完全后最将叠氮化钠0.1g溶解在水5mL中缓慢滴入，滴加完毕，反应24小时，用二氯甲烷10mL萃取两次，合并有机相，然后依次加入化合物8(0.4g)，叔丁醇10mL，水10mL和四氢呋喃10mL，碘化亚铜0.1g，在50℃条件下反应，TLC监控原料反应完全，过滤后搅拌分出有机相，水相加入二氯甲烷20mL萃取两次，合并有机相经无水硫酸镁干燥后，浓缩后用甲醇重结晶得到白色的产品，目标化合物9c(0.572g)，R为2-甲基苯基，¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):12.59(s,1H),9.02(s,1H),8.71(s,1H),8.21(s,1H),7.84(d,J＝4.0Hz,1H),7.69(d,J＝4.0Hz,1H),7.54-7.44(m,4H),5.53-5.34(m,1H),4.97-4.79(m,1H),4.45-4.36(m,1H),4.18-4.05(m,2H),3.91(d,J＝4.0Hz,3H),3.25-3.04(m,1H),1.37-1.30(m,3H)。

实施例13

在反应瓶中，将3-氟苯胺0.167g加入到水和盐酸体积比为1:1的溶剂5mL中，冰浴(5℃以下)搅拌，之后把亚硝酸钠0.11g溶解在水5mL中，缓慢滴入，滴加完全后最将叠氮化钠0.1g溶解在水5mL中缓慢滴入，滴加完毕，反应24小时，用二氯甲烷10mL萃取两次，合并有机相，然后依次加入化合物8(0.4g)，叔丁醇10mL，水10mL和四氢呋喃10mL，碘化亚铜0.1g，在50℃条件下反应，TLC监控原料反应完全，过滤后搅拌分出有机相，水相加入二氯甲烷20mL萃取两次，合并有机相经无水硫酸镁干燥后，浓缩后用甲醇重结晶得到白色的产品，目标化合物9f(0.472g)，R为3-氟苯基，¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):12.68(s,1H),9.50(s,1H),8.77(s,1H),8.22(s,1H),7.98-7.93(m,3H),7.78-7.74(m,2H),7.57(t,J₁＝4.0Hz,J₂＝4.0Hz,1H),7.45(t,J₁＝4.0Hz,J₂＝8.0Hz,1H),5.60-5.40(m,1H),5.03-4.85(m,1H),4.52-4.42(m,1H),4.24-4.11(m,2H),3.98-3.97(m,3H),3.31-3.11(m,1H),1.43-1.36(m,3H)。

实施例14

在反应瓶中，将2-甲氧基苯胺0.185g加入到水和盐酸体积比为1:1的溶剂5mL中，冰浴(5℃以下)搅拌，之后把亚硝酸钠0.11g溶解在水5mL中，缓慢滴入，滴加完全后最将叠氮化钠0.1g溶解在水5mL中缓慢滴入，滴加完毕，反应24小时，用二氯甲烷10mL萃取两次，合并有机相，然后依次加入化合物8(0.4g)，叔丁醇10mL，水10mL和四氢呋喃10mL，碘化亚铜0.1g，在50℃条件下反应，TLC监控原料反应完全，过滤后搅拌分出有机相，水相加入二氯甲烷20mL萃取两次，合并有机相经无水硫酸镁干燥后，浓缩后用甲醇重结晶得到白色的产品，目标化合物9g(0.501g)，R为2-甲氧基苯基，¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):12.59(s,1H),9.00(s,1H),8.74(s,1H),8.23(s,1H),7.84(d,J＝8.0Hz,1H),7.72-7.70(m,2H),7.59(t,J₁＝8.0Hz,J₂＝8.0Hz,1H),7.50(t,J₁＝8.0Hz,J₂＝8.0Hz,1H),7.39-7.37(m,1H),7.20(t,J₁＝8.0Hz,J₂＝8.0Hz,1H),5.56-5.36(m,1H),5.00-4.80(m,1H),4.48-4.37(m,1H),4.21-4.06(m,2H),3.94-3.92(m,6H),3.28-3.06(m,1H),1.39-1.32(m,3H)。

实施例15

在反应瓶中，将3-三氟甲基苯胺0.241g加入到水和盐酸体积比为1:1的溶剂5mL中，冰浴(5℃以下)搅拌，之后把亚硝酸钠0.11g溶解在水5mL中，缓慢滴入，滴加完全后最将叠氮化钠0.1g溶解在水5mL中缓慢滴入，滴加完毕，反应24小时，用二氯甲烷10mL萃取两次，合并有机相，然后依次加入化合物8(0.4g)，叔丁醇10mL，水10mL和四氢呋喃10mL，碘化亚铜0.1g，在50℃条件下反应，TLC监控原料反应完全，过滤后搅拌分出有机相，水相加入二氯甲烷20mL萃取两次，合并有机相经无水硫酸镁干燥后，浓缩后用甲醇重结晶得到白色的产品，目标化合物9h(0.511g)，R为3-三氟甲基苯基，¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):12.64(s,1H),9.58(s,1H),8.73(s,1H),8.39-8.36(m,1H),8.21(s,1H),7.93-7.89(m,3H),7.73(d,J＝8.0Hz,1H),7.54(t,J₁＝8.0Hz,J₂＝8.0Hz,1H),5.57-5.36(m,1H),5.00-4.81(m,1H),4.49-4.38(m,1H),4.20-4.19(m,1H),4.12-4.09(m,1H),3.94-3.93(m,3H),3.28-3.06(m,1H),1.40-1.32(m,3H)。

实施例16

在反应瓶中，将4-三氟甲基苯胺0.242g加入到水和盐酸体积比为1:1的溶剂5mL中，冰浴(5℃以下)搅拌，之后把亚硝酸钠0.11g溶解在水5mL中，缓慢滴入，滴加完全后最将叠氮化钠0.1g溶解在水5mL中缓慢滴入，滴加完毕，反应24小时，用二氯甲烷10mL萃取两次，合并有机相，然后依次加入化合物8(0.4g)，叔丁醇10mL，水10mL和四氢呋喃10mL，碘化亚铜0.1g，在50℃条件下反应，TLC监控原料反应完全，过滤后搅拌分出有机相，水相加入二氯甲烷20mL萃取两次，合并有机相经无水硫酸镁干燥后，浓缩后用甲醇重结晶得到白色的产品，目标化合物9j(0.535g)，R为4-三氟甲基苯基，¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):12.65(s,1H),9.58(s,1H),8.74(d,J＝4.0Hz,1H),8.29-8.22(m,3H),8.07(d,J＝8.0Hz,1H),7.92-7.90(m,1H),7.75-7.73(m,1H),7.54(t,J₁＝8.0Hz,J₂＝8.0Hz,1H),5.57-5.36(m,1H),5.00-4.81(m,1H),4.49-4.38(m,1H),4.21-4.07(m,2H),3.94-3.93(m,3H),3.28-3.08(m,1H),1.40-1.32(m,3H)。

实施例17

在反应瓶中，将2,5-二(三氟甲基)苯胺0.343g加入到水和盐酸体积比为1:1的溶剂5mL中，冰浴(5℃以下)搅拌，之后把亚硝酸钠0.11g溶解在水5mL中，缓慢滴入，滴加完全后最将叠氮化钠0.1g溶解在水5mL中缓慢滴入，滴加完毕，反应24小时，用二氯甲烷10mL萃取两次，合并有机相，然后依次加入化合物8(0.4g)，叔丁醇10mL，水10mL和四氢呋喃10mL，碘化亚铜0.1g，在50℃条件下反应，TLC监控原料反应完全，过滤后搅拌分出有机相，水相加入二氯甲烷20mL萃取两次，合并有机相经无水硫酸镁干燥后，浓缩后用甲醇重结晶得到白色的产品，目标化合物9k(0.506g)，R为2,5-二(三氟甲基)苯基，¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):12.63(s,1H),9.20(s,1H),8.73(d,J＝4.0Hz,1H),8.46(s,1H),8.37-8.27(m,3H),7.86-7.83(m,1H),7.72-7.70(m,1H),7.53(t,J₁＝8.0Hz,J₂＝8.0Hz,1H),5.56-5.36(m,1H),5.00-4.80(m,1H),4.49-4.38(m,1H),4.21-4.07(m,2H),3.94-3.90(m,3H),3.28-3.08(m,1H),1.39-1.32(m,3H)。

实施例18

在反应瓶中，将2,4,6-三甲基苯胺0.21g加入到水和盐酸体积比为1:1的溶剂5mL中，冰浴(5℃以下)搅拌，之后把亚硝酸钠0.11g溶解在水5mL中，缓慢滴入，滴加完全后最将叠氮化钠0.1g溶解在水5mL中缓慢滴入，滴加完毕，反应24小时，用二氯甲烷10mL萃取两次，合并有机相，然后依次加入化合物8(0.4g)，叔丁醇10mL，水10mL和四氢呋喃10mL，碘化亚铜0.1g，在50℃条件下反应，TLC监控原料反应完全，过滤后搅拌分出有机相，水相加入二氯甲烷20mL萃取两次，合并有机相经无水硫酸镁干燥后，浓缩后用甲醇重结晶得到白色的产品，目标化合物9l(0.520g)，R为2,4,6-三甲基苯基，¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):12.59-12.57(m,1H),8.85(s,1H),8.71(s,1H),8.21(s,1H),7.82(d,J＝4.0Hz,1H),7.67(d,J＝8.0Hz,1H),7.48(t,J₁＝8.0Hz,J₂＝8.0Hz,1H),7.13(s,2H),5.53-5.34(m,1H),4.96-4.79(m,1H),4.45-4.36(m,1H),4.18-4.12(m,1H),4.09-4.05(m,1H),3.91-3.90(m,3H),3.25-3.04(m,1H),2.35(s,3H),1.96(s,6H),1.37-1.30(m,3H)。

实施例19

在反应瓶中，将2-溴苯胺0.255g加入到水和盐酸体积比为1:1的溶剂5mL中，冰浴(5℃以下)搅拌，之后把亚硝酸钠0.11g溶解在水5mL中，缓慢滴入，滴加完全后最将叠氮化钠0.1g(65，0.0015mol)溶解在水5mL中缓慢滴入，滴加完毕，反应24小时，用二氯甲烷10mL萃取两次，合并有机相，然后依次加入化合物8(0.4g)，叔丁醇10mL，水10mL和四氢呋喃10mL，碘化亚铜0.1g，在50℃条件下反应，TLC监控原料反应完全，过滤后搅拌分出有机相，水相加入二氯甲烷20mL萃取两次，合并有机相经无水硫酸镁干燥后，浓缩后用甲醇重结晶得到白色的产品，目标化合物9m(0.522g)，R为2-溴苯基，¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):12.60-12.59(m,1H),9.10(s,1H),8.71(s,1H),8.23(s,1H),8.00-7.95(m,1H),7.89-7.82(m,1H),7.77-7.48(m,5H),5.54-5.34(m,1H),4.98-4.78(m,1H),4.48-4.34(m,1H),4.19-4.04(m,2H),3.91-3.90(m,3H),3.25-3.03(m,1H),1.37-1.30(m,3H)。

实施例20

在反应瓶中，将4-氟苯胺0.167g加入到水和盐酸体积比为1:1的溶剂5mL中，冰浴(5℃以下)搅拌，之后把亚硝酸钠0.11g溶解在水5mL中，缓慢滴入，滴加完全后最将叠氮化钠0.1g溶解在水5mL中缓慢滴入，滴加完毕，反应24小时，用二氯甲烷10mL萃取两次，合并有机相，然后依次加入化合物8(0.4g)，叔丁醇10mL，水10mL和四氢呋喃10mL，碘化亚铜0.1g，在50℃条件下反应，TLC监控原料反应完全，过滤后搅拌分出有机相，水相加入二氯甲烷20mL萃取两次，合并有机相经无水硫酸镁干燥后，浓缩后用甲醇重结晶得到白色的产品，目标化合物9n(0.528g)，R为4-氟苯基，¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):12.61(d,J＝4.0Hz,1H),9.36(s,1H),8.71(s,1H),8.17(s,1H),8.06-8.02(m,1H),7.87(d,J＝8.0Hz,1H),7.70(d,J＝8.0Hz,1H),7.51(t,J₁＝8.0Hz,J₂＝8.0Hz,3H),5.55-5.35(m,1H),4.98-4.79(m,1H),4.47-4.36(m,1H),4.21-4.05(m,2H),3.92(d,J＝4.0Hz,3H),3.27-3.05(m,1H),1.38-1.31(m,3H)。

实施例21

在反应瓶中，将4-溴苯胺0.255g加入到水和盐酸体积比为1:1的溶剂5mL中，冰浴(5℃以下)搅拌，之后把亚硝酸钠0.11g溶解在水5mL中，缓慢滴入，滴加完全后最将叠氮化钠0.1g溶解在水5mL中缓慢滴入，滴加完毕，反应24小时，用二氯甲烷10mL萃取两次，合并有机相，然后依次加入化合物8(0.4g)，叔丁醇10mL，水10mL和四氢呋喃10mL，碘化亚铜0.1g，在50℃条件下反应，TLC监控原料反应完全，过滤后搅拌分出有机相，水相加入二氯甲烷20mL萃取两次，合并有机相经无水硫酸镁干燥后，浓缩后用甲醇重结晶得到白色的产品，目标化合物9o(0.433g)，R为4-溴苯基。

实施例22

在反应瓶中，将4-氯苯胺0.19g加入到水和盐酸体积比为1:1的溶剂5mL中，冰浴(5℃以下)搅拌，之后把亚硝酸钠0.11g溶解在水5mL中，缓慢滴入，滴加完全后最将叠氮化钠0.1g溶解在水5mL中缓慢滴入，滴加完毕，反应24小时，用二氯甲烷10mL萃取两次，合并有机相，然后依次加入化合物8(0.4g)，叔丁醇10mL，水10mL和四氢呋喃10mL，碘化亚铜0.1g，在50℃条件下反应，TLC监控原料反应完全，过滤后搅拌分出有机相，水相加入二氯甲烷20mL萃取两次，合并有机相经无水硫酸镁干燥后，浓缩后用甲醇重结晶得到白色的产品，目标化合物9p(0.459g)，R为4-氯苯基。

实施例23

在反应瓶中，将2-碘苯胺0.327g加入到水和盐酸体积比为1:1的溶剂5mL中，冰浴(5℃以下)搅拌，之后把亚硝酸钠0.11g溶解在水5mL中，缓慢滴入，滴加完全后最将叠氮化钠0.1g溶解在水5mL中缓慢滴入，滴加完毕，反应24小时，用二氯甲烷10mL萃取两次，合并有机相，然后依次加入化合物8(0.4g)，叔丁醇10mL，水10mL和四氢呋喃10mL，碘化亚铜0.1g，在50℃条件下反应，TLC监控原料反应完全，过滤后搅拌分出有机相，水相加入二氯甲烷20mL萃取两次，合并有机相经无水硫酸镁干燥后，浓缩后用甲醇重结晶得到白色的产品，目标化合物9q(0.541g)，R为2-碘苯基，¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):12.61(d,J＝4.0Hz,1H),9.40(s,1H),8.72(s,1H),8.18(s,1H),8.00-7.98(m,1H),7.88(d,J＝8.0Hz,1H),7.72-7.63(m,3H),7.55-7.49(m,3H),5.55-5.34(m,1H),4.98-4.79(m,1H),4.46-4.35(m,1H),4.19-4.05(m,2H),3.92-3.91(m,3H),3.25-3.04(m,1H),1.37-1.30(m,3H)。

实施例24

在反应瓶中，将苯胺0.14g加入到水和盐酸体积比为1:1的溶剂5mL中，冰浴(5℃以下)搅拌，之后把亚硝酸钠0.11g溶解在水5mL中，缓慢滴入，滴加完全后最将叠氮化钠0.1g溶解在水5mL中缓慢滴入，滴加完毕，反应24小时，用二氯甲烷10mL萃取两次，合并有机相，然后依次加入化合物8(0.4g)，叔丁醇10mL，水10mL和四氢呋喃10mL，碘化亚铜0.1g，在50℃条件下反应，TLC监控原料反应完全，过滤后搅拌分出有机相，水相加入二氯甲烷20mL萃取两次，合并有机相经无水硫酸镁干燥后，浓缩后用甲醇重结晶得到白色的产品，目标化合物9r(0.399g)，R为苯基，¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆):12.63(d,J＝4.0Hz,1H),9.41(s,1H),8.73(d,J＝4.0Hz,1H),8.18(s,1H),8.01-7.98(m,1H),7.88(d,J＝12.0Hz,1H),7.72-7.63(m,3H),7.55-7.49(m,3H),5.55-5.34(m,1H),4.98-4.79(m,1H),4.48-4.36(m,1H),4.20-4.05(m,2H),3.92(d,J＝4.0Hz,3H),3.26-3.04(m,1H),1.37-1.30(m,3H)。

实施例25

在反应瓶中，将3-氯苯胺0.19g加入到水和盐酸体积比为1:1的溶剂5mL中，冰浴(5℃以下)搅拌，之后把亚硝酸钠0.11g溶解在水5mL中，缓慢滴入，滴加完全后最将叠氮化钠0.1g溶解在水5mL中缓慢滴入，滴加完毕，反应24小时，用二氯甲烷10mL萃取两次，合并有机相，然后依次加入化合物8(0.4g)，叔丁醇10mL，水10mL和四氢呋喃10mL，碘化亚铜0.1g，在50℃条件下反应，TLC监控原料反应完全，过滤后搅拌分出有机相，水相加入二氯甲烷20mL萃取两次，合并有机相经无水硫酸镁干燥后，浓缩后用甲醇重结晶得到白色的产品，目标化合物9s(0.392g)，R为3-氯苯基，¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆):12.62(d,J＝6.0Hz,1H),9.47(s,1H),8.71(d,J＝6.0Hz,1H),8.16(s,1H),8.12(t,J₁＝6.0Hz,J₂＝6.0Hz,1H),8.02-8.00(m,1H),7.88(d,J＝12.0Hz,1H),7.70-7.66(m,2H),7.60(d,J＝12.0Hz,1H),7.51(t,J₁＝6.0Hz,J₂＝6.0Hz,1H),5.54-5.34(m,1H),4.97-4.79(m,1H),4.46-4.37(m,1H),4.18-4.05(m,2H),3.91(d,J＝6.0Hz,3H),3.25-3.05(m,1H),1.37-1.30(m,3H)。

实施例26

在反应瓶中，将3-溴苯胺0.255g加入到水和盐酸体积比为1:1的溶剂5mL中，冰浴(5℃以下)搅拌，之后把亚硝酸钠0.11g溶解在水5mL中，缓慢滴入，滴加完全后最将叠氮化钠0.1g溶解在水5mL中缓慢滴入，滴加完毕，反应24小时，用二氯甲烷10mL萃取两次，合并有机相，然后依次加入化合物8(0.4g)，叔丁醇10mL，水10mL和四氢呋喃10mL，碘化亚铜0.1g，在50℃条件下反应，TLC监控原料反应完全，过滤后搅拌分出有机相，水相加入二氯甲烷20mL萃取两次，合并有机相经无水硫酸镁干燥后，浓缩后用甲醇重结晶得到目标化合物9t(0.532g)，R为3-溴苯基，¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆):12.62(d,J＝6.0Hz,1H),9.46(s,1H),8.71(d,J＝6.0Hz,1H),8.24(s,1H),8.16(s,1H),8.05-8.04(m,1H),7.88(d,J＝12.0Hz,1H),7.74-7.68(m,2H),7.60(t,J₁＝12.0Hz,J₂＝6.0Hz,1H),7.51(t,J₁＝6.0Hz,J₂＝12.0Hz,1H),5.54-5.34(m,1H),4.97-4.79(m,1H),4.46-4.37(m,1H),4.18-4.05(m,2H),3.92(d,J＝6.0Hz,3H),3.25-3.04(m,1H),1.37-1.30(m,3H)。

实施例27

在反应瓶中，将2-氯苯胺0.19g加入到水和盐酸体积比为1:1的溶剂5mL中，冰浴(5℃以下)搅拌，之后把亚硝酸钠0.11g溶解在水5mL中，缓慢滴入，滴加完全后最将叠氮化钠0.1g溶解在水5mL中缓慢滴入，滴加完毕，反应24小时，用二氯甲烷10mL萃取两次，合并有机相，然后依次加入化合物8(0.4g)，叔丁醇10mL，水10mL和四氢呋喃10mL，碘化亚铜0.1g，在50℃条件下反应，TLC监控原料反应完全，过滤后搅拌分出有机相，水相加入二氯甲烷20mL萃取两次，合并有机相经无水硫酸镁干燥后，浓缩后用甲醇重结晶得到目标化合物9u(0377g)，R为2-氯苯基，¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆):12.60(d,J＝6.0Hz,1H),9.12(s,1H),8.72(d,J＝6.0Hz,1H),8.23(s,1H),7.84-7.79(m,3H),7.69-7.62(m,3H),7.50(t,J₁＝6.0Hz,J₂＝12.0Hz,1H),5.54-5.34(m,1H),4.97-4.79(m,1H),4.45-4.36(m,1H),4.18-4.05(m,2H),3.91(d,J＝6.0Hz,3H),3.25-3.04(m,1H),1.37-1.30(m,3H)。

实施例28

在反应瓶中，将苄溴0.26g和叠氮化钠0.1g加入到丙酮和水比例为4：1的溶剂10mL中，常温搅拌24小时，然后用二氯甲烷10mL萃取两次，合并有机相后依次加入化合物8(0.4g)，叔丁醇10mL，水10mL、四氢呋喃10mL和碘化亚铜0.1g，在50℃条件下反应，TLC监控原料反应完全，过滤后搅拌分出有机相，水相加入二氯甲烷20mL萃取两次，合并有机相经无水硫酸镁干燥后，浓缩后用甲醇重结晶得到10a(0.408g)，R为苄基，¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆):12.55(d,J＝6.0Hz,1H),8.71(s,1H),8.71(d,J＝6.0Hz,1H),8.13(s,1H),7.76(d,J＝6.0Hz,1H),7.59(d,J＝6.0Hz,1H),7.45-7.34(m,6H),5.65(s,2H),5.53-5.33(m,1H),4.96-4.77(m,1H),4.45-4.36(m,1H),4.18-4.05(m,2H),3.91(d,J＝6.0Hz,3H),3.25-3.04(m,1H),1.36-1.30(m,3H)。

实施例29

在反应瓶中，将2-溴苄溴0.37g和叠氮化钠0.1g加入到丙酮和水比例为4：1的溶剂10mL中，常温搅拌24小时，然后用二氯甲烷10mL萃取两次，合并有机相后依次加入化合物8(0.4g)，叔丁醇10mL，水10mL、四氢呋喃10mL和碘化亚铜0.1g，在50℃条件下反应，TLC监控原料反应完全，过滤后搅拌分出有机相，水相加入二氯甲烷20mL萃取两次，合并有机相经无水硫酸镁干燥后，浓缩后用甲醇重结晶得到10b(0.358g)，R为2-溴苄基。

实施例30

在反应瓶中，将2-甲基苄溴0.27g和叠氮化钠0.1g加入到丙酮和水比例为4：1的溶剂10mL中，常温搅拌24小时，然后用二氯甲烷10mL萃取两次，合并有机相后依次加入化合物8(0.4g)，叔丁醇10mL，水10mL、四氢呋喃10mL和碘化亚铜0.1g，在50℃条件下反应，TLC监控原料反应完全，过滤后搅拌分出有机相，水相加入二氯甲烷20mL萃取两次，合并有机相经无水硫酸镁干燥后，浓缩后用甲醇重结晶得到10c(0.315g)，R为2-甲基苄基，¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆):12.54(d,J＝6.0Hz,1H),8.70(d,J＝6.0Hz,1H),8.60(s,1H),8.13(s,1H),7.76(d,J＝12.0Hz,1H),7.60(d,J＝6.0Hz,1H),7.43(t,J₁＝6.0Hz,J₂＝6.0Hz,1H),7.28-7.16(m,4H),5.66(s,2H),5.53-5.34(m,1H),4.96-4.77(m,1H),4.47-4.36(m,1H),4.18-4.04(m,2H),3.91(d,J＝6.0Hz,3H),3.24-3.04(m,1H),2.36(s,3H),1.36-1.30(m,3H)。

实施例31

在反应瓶中，将2-甲基-4-乙氧基苯胺0.27g加入到水和盐酸体积比为1:1的溶剂5mL中，冰浴(5℃以下)搅拌，之后把亚硝酸钠0.11g溶解在水5mL中，缓慢滴入，滴加完全后最将叠氮化钠0.1g溶解在水5mL中缓慢滴入，滴加完毕，反应24小时，用二氯甲烷10mL萃取两次，合并有机相，然后依次加入化合物8(0.4g)，叔丁醇10mL，水10mL和四氢呋喃10mL，碘化亚铜0.1g，在50℃条件下反应，TLC监控原料反应完全，过滤后搅拌分出有机相，水相加入二氯甲烷20mL萃取两次，合并有机相经无水硫酸镁干燥后，浓缩后用甲醇重结晶得到目标化合物10e(0.435g),R为2-甲基-4-乙氧基苯基。

实施例32

在反应瓶中，将2-三氟甲基苄溴0.36g和叠氮化钠0.1g加入到丙酮和水比例为4：1的溶剂10mL中，常温搅拌24小时，然后用二氯甲烷10mL萃取两次，合并有机相后依次加入化合物8(0.4g)，叔丁醇10mL，水10mL、四氢呋喃10mL和碘化亚铜0.1g，在50℃条件下反应，TLC监控原料反应完全，过滤后搅拌分出有机相，水相加入二氯甲烷20mL萃取两次，合并有机相经无水硫酸镁干燥后，浓缩后用甲醇重结晶得到10f(0.476g)，R为2-三氟甲基苄基，¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆):12.55(d,J＝6.0Hz,1H),8.70(d,J＝6.0Hz,2H),8.15(s,1H),7.85(d,J＝12.0Hz,1H),7.77(d,J＝6.0Hz,1H),7.72(t,J₁＝6.0Hz,J₂＝6.0Hz,1H),7.61(t,J₁＝6.0Hz,J₂＝12.0Hz,2H),7.44(t,J₁＝12.0Hz,J₂＝6.0Hz,1H),7.28(d,J＝6.0Hz,1H),5.86(s,2H),5.53-5.34(m,1H),4.96-4.78(m,1H),4.45-4.36(m,1H),4.18-4.05(m,2H),3.91(d,J＝6.0Hz,3H),3.24-3.04(m,1H),1.36-1.30(m,3H)。

实施例33

在反应瓶中，将4-氯苄溴0.30g和叠氮化钠0.1g加入到丙酮和水比例为4：1的溶剂10mL中，常温搅拌24小时，然后用二氯甲烷10mL萃取两次，合并有机相后依次加入化合物8(0.4g)，叔丁醇10mL，水10mL、四氢呋喃10mL和碘化亚铜0.1g，在50℃条件下反应，TLC监控原料反应完全，过滤后搅拌分出有机相，水相加入二氯甲烷20mL萃取两次，合并有机相经无水硫酸镁干燥后，浓缩后用甲醇重结晶得到10g(0.349g)，R为4-氯苄基，¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆):12.55(d,J＝6.0Hz,1H),8.70-8.69(m,2H),8.12(s,1H),7.76(d,J＝12.0Hz,1H),7.57(d,J＝6.0Hz,1H),7.48-7.40(m,5H),5.66(s,2H),5.53-5.34(m,1H),4.96-4.77(m,1H),4.46-4.36(m,1H),4.18-4.05(m,2H),3.91(d,J＝6.0Hz,3H),3.24-3.04(m,1H),1.37-1.30(m,3H)。

实施例34

在反应瓶中，将3-甲氧基苄溴0.3g和叠氮化钠0.1g加入到丙酮和水比例为4：1的溶剂10mL中，常温搅拌24小时，然后用二氯甲烷10mL萃取两次，合并有机相后依次加入化合物8(0.4g)，叔丁醇10mL，水10mL、四氢呋喃10mL和碘化亚铜0.1g，在50℃条件下反应，TLC监控原料反应完全，过滤后搅拌分出有机相，水相加入二氯甲烷20mL萃取两次，合并有机相经无水硫酸镁干燥后，浓缩后用甲醇重结晶得到10h(0.311g)，R为3-甲氧基苄基，¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆):12.55(d,J＝6.0Hz,1H),8.70-8.69(m,2H),8.13(s,1H),7.76(d,J＝6.0Hz,1H),7.59(d,J＝6.0Hz,1H),7.43(t,J₁＝12.0Hz,J₂＝6.0Hz,1H),7.31(t,J₁＝12.0Hz,J₂＝6.0Hz,1H),6.97(s,1H),6.93-6.91(m,2H),5.62(s,2H),5.53-5.34(m,1H),4.96-4.77(m,1H),4.45-4.36(m,1H),4.19-4.05(m,2H),3.91(d,J＝6.0Hz,3H),3.76(s,3H),3.24-3.04(m,1H),1.36-1.30(m,3H)。

实施例35

在反应瓶中，将2-氯苄溴0.30g和叠氮化钠0.1g加入到丙酮和水比例为4：1的溶剂10mL中，常温搅拌24小时，然后用二氯甲烷10mL萃取两次，合并有机相后依次加入化合物8(0.4g)，叔丁醇10mL，水10mL、四氢呋喃10mL和碘化亚铜0.1g，在50℃条件下反应，TLC监控原料反应完全，过滤后搅拌分出有机相，水相加入二氯甲烷20mL萃取两次，合并有机相经无水硫酸镁干燥后，浓缩后用甲醇重结晶得到10i(0.427g)，R为2-氯苄基，¹H NMR(600MHz,DMSO-d₆):12.55(d,J＝6.0Hz,1H),8.70(d,J＝6.0Hz,1H),8.68(s,1H),8.14(s,1H),7.76(d,J＝12.0Hz,1H),7.61(d,J＝6.0Hz,1H),7.55(d,J＝12.0Hz,1H),7.45-7.39(m,3H),7.32(d,J＝12.0Hz,1H),5.77(s,2H),5.53-5.33(m,1H),4.96-4.78(m,1H),4.45-4.36(m,1H),4.17-4.04(m,2H),3.91(d,J＝6.0Hz,3H),3.24-3.04(m,1H),1.36-1.30(m,3H)。

实施例36

在反应瓶中，将3-氟苄溴0.28g和叠氮化钠0.1g(65，0.0015mol)加入到丙酮和水比例为4：1的溶剂10mL中，常温搅拌24小时，然后用二氯甲烷10mL萃取两次，合并有机相后依次加入化合物8(0.4g)，叔丁醇10mL，水10mL、四氢呋喃10mL和碘化亚铜0.1g，在50℃条件下反应，TLC监控原料反应完全，过滤后搅拌分出有机相，水相加入二氯甲烷20mL萃取两次，合并有机相经无水硫酸镁干燥后，浓缩后用甲醇重结晶得到10j(0.501g)，R为3-氟苄基，¹HNMR(600MHz,DMSO-d₆):12.55(d,J＝12.0Hz,1H),8.74(s,1H),8.70(d,J＝6.0Hz,1H),8.14(s,1H),7.77(d,J＝12.0Hz,1H),7.60(d,J＝6.0Hz,1H),7.45-7.43(m,2H),7.26-7.18(m,3H),5.69(s,2H),5.53-5.34(m,1H),4.96-4.78(m,1H),4.45-4.36(m,1H),4.18-4.05(m,2H),3.91(d,J＝6.0Hz,3H),3.24-3.04(m,1H),1.36-1.30(m,3H)。

实施例37

我们通过CCK8实验来检测所有新合成的卡波特韦衍生物对H460、Huh7、MCF7、HCT116和SKOV3共5种肿瘤细胞以及一种正常细胞HRM(人肾小管上皮细胞)的抗增殖和细胞毒性作用，化合物浓度设置为25μM，研究在72h下的抑制效果结果如下表所示。

化合物细胞毒活性评价

提前1天将100μL肿瘤细胞悬液接种在96孔中，10000个细胞/孔；2、除去原始培养基，分别加入100μL含不同测试药物(终浓度为0,0.4μM,2μM,10μM,20μM,50μM)的培养基继续培养72h，每组3个复孔，用0.1％DMSO作为对照；3、除去含药物的培养基，加入100μL用完全培养基稀释的1×Cell Counting Kit-8(CCK-8)试剂，并将96孔板放置于培养箱孵育1～4h；4、使用Synergy HTX多功能酶标仪检测450nm处的吸光度；5、用吸光度计算抑制率，计算公式为：抑制率＝[(Ac-As)/(Ac-Ab)]×100％；As，实验孔(药物处理)；Ac，对照孔(0.1％DSMO处理)；Ab，空白组(不含细胞)。用Graph Pad Prism 8.0软件确定药物对细胞生长的半抑制浓度(IC₅₀)，结果如下表所示，可以发现所得到的化合物对SKOV3细胞普遍具有良好的抑制效果，我们进一步研究发现，化合物9k，9s，9u，10f和10i能够进入到拓扑异构酶1(PDB：1K4T)的核心口袋中，与周围的氨基酸发生氢键作用，蛋白印迹并能够减弱该酶的表达和导致DNA的损伤γ-H2AX表达量增加，说明可以通过抑制拓扑异构酶1的活性，阻碍肿瘤细胞DNA的解旋，抑制肿瘤细胞的生长。

以上实施例仅为说明本发明的技术思想，不能以此限定本发明的保护范围，凡是按照本发明提出的技术思想，在技术方案基础上所做的任何改动，均落入本发明保护范围之内。

Claims (10)

1.一种卡波特韦衍生物的制备方法和应用，其特征在于该卡波特韦衍生物具有以下结构：

其中R为2-氟苯基，4-三氟甲基苯基，2-甲基-3-硝基苯基，3-甲基苯基，4-氟苯基，3,4-二甲氧基苯基，3-甲氧基苯基，苯基，3-三氟甲基苯基，2,5-二(三氟甲基)苯基，2-甲基苯基，2-甲氧基苯基，2-溴苯基，2-氯苯基，2-碘苯基，4-甲氧基苯基，4-甲基苯基，2,4,6-三甲基苯基，4-氯苯基，2-氯苯基，3-氯苯基，4-溴苯基，3-溴苯基，3-氟苯基，3,5-二溴苄基，苄基，2-溴苄基，3-甲氧基苄基，3-溴苄基，2-氟苄基，2-甲基苄基，4-三氟甲基苄基，4-甲基苄基，2-氯苄基，4-氯苄基，3-氟苄基。

2.根据权利要求1所述的一种卡波特韦衍生物的制备方法和应用，其特征在于其中一步反应的具体过程为：在反应瓶中，加入一定量的四氢呋喃和甲醇钠，氮气保护下，在15℃下加入一定量含量为60％氢化钠，然后在反应温度不超过15℃下缓慢滴加一定量的甲醇与4-氯乙酰乙酸甲酯的混合溶液，滴加完后控制反应温度在20℃以下，反应结束后降温至0℃，缓慢加入冰乙酸，滴加过程中保持内温在10℃以下，当反应体系pH值为10-11时，抽滤反应体系，抽滤后的粘稠固体再用溶剂打浆洗涤多次，抽滤后把白色固体加入乙酸乙酯，搅拌状态下缓慢滴加稀盐酸，调节反应体系pH值到4，体系呈现溶清状态，分出有机相，使用无水硫酸镁干燥后浓缩得到无色液体。所述的含量为60％氢化钠与甲醇与4-氯乙酰乙酸甲酯的投料量摩尔比为2：3：1，所述的打浆洗涤溶剂为戊烷或石油醚或辛烷。

3.根据权利要求1所述的一种卡波特韦衍生物的制备方法和应用，其特征在于其中一步反应的具体过程为：把一定量的4-甲氧基乙酰乙酸甲酯加入到反应瓶中，在氮气保护下，反应温度降至15℃，缓慢滴加DMF-DMA，滴加完毕，保持室温条件搅拌反应一段时间，原料反应完全后降低反应温度至10～15℃，缓慢滴加一定量的氨基乙醛缩二甲醇，保持反应温度不超过20℃，滴加完后继续搅拌一段时间加入甲基叔丁基醚，缓慢搅拌过滤反应液，滤饼用甲基叔丁基醚洗涤两次，烘干后得到固体，在0℃条件下将母液缓慢搅拌蒸发大约20％的溶剂，缓慢搅拌过程中会发现析晶，过滤后剩余的滤液，继续在0℃条件下缓慢搅拌蒸发，继续有析晶，抽滤，可以重复几次，直至不再有析晶出现，合并这几个得到的固体，用甲基叔丁基醚洗涤多次，烘干后得到(Z)-甲基-2-(((2,2-二甲氧基乙基)胺基)亚甲基)-4-甲氧基-3-氧桥丁酸；所述的4-甲氧基乙酰乙酸甲酯与DMF-DMA与氨基乙醛缩二甲醇的投料量摩尔比为1：1：1.1。

4.根据权利要求1所述的一种卡波特韦衍生物的制备方法和应用，其特征在于其中一步反应的具体过程为：在反应瓶中加入一定量的(Z)-甲基-2-(((2,2-二甲氧基乙基)胺基)亚甲基)-4-甲氧基-3-氧桥丁酸和无水甲醇，在室温条件和氩气保护下搅拌至完全溶解；保持室温搅拌，加入一定量的草酸二甲酯，搅拌均匀后在室温条件下，快速加入甲醇钠，然后反应体系缓慢升温至回流，保持反应回流搅拌一段时间，把反应体系冷却至10℃，在搅拌状态下缓慢滴加2N盐酸调节反应液pH为5～6，然后将反应液转入单口瓶中，在真空条件下，内温小于40℃下蒸除溶剂甲醇；然后向浓缩物中加入乙酸乙酯，搅拌条件下使浓缩物溶解；然后反应温度降至10～15℃，加入2N盐酸调节反应液pH为3，搅拌下加入水,将反应体系转入分液漏斗中，上层有机相分出，并快速加入饱和碳酸钠溶液洗涤有机相pH为8；下层水相加入乙酸乙酯萃取，有机相分出，加入饱和碳酸钠洗涤有机相pH为8；水相再次用同样办法反萃取多次，有机相分出后均快速加入饱和碳酸钠溶液调节pH为8；最后合并所有得到的有机相，水洗搅拌后分出有机层，真空浓缩得到产品1-(2,2-二甲氧基乙基)-1,4-二氢-3-甲氧基-4-氧代-2,5-吡啶二甲酸甲酯；所述的(Z)-甲基-2-(((2,2-二甲氧基乙基)胺基)亚甲基)-4-甲氧基-3-氧桥丁酸与草酸二甲酯与甲醇钠的投料量摩尔比为1：4：2.2。

5.根据权利要求1所述的一种卡波特韦衍生物的制备方法和应用，其特征在于其中一步反应的具体过程为：取1-(2,2-二甲氧基乙基)-1,4-二氢-3-甲氧基-4-氧代-2,5-吡啶二甲酸甲酯加入甲醇中，在氮气保护下，0℃条件下加入氢氧化锂，加完后反应至TLC显示原料反应完全保持反应温度0～5℃下缓慢滴加2N盐酸溶液调节反应液pH为6～7，反应体系转移至单口瓶，真空条件下蒸除溶剂甲醇；再加入乙酸乙酯,0℃下继续滴加2N盐酸溶液调节反应液pH为1～2，移至分液漏斗分层，分出上层有机相，有机相浓缩旋干后经甲醇重结晶提纯后得到1-(2,2-二甲氧基乙基)-1,4-二氢-3-甲氧基-4-氧代-2,5-吡啶二甲酸；所述的1-(2,2-二甲氧基乙基)-1,4-二氢-3-甲氧基-4-氧代-2,5-吡啶二甲酸甲酯与氢氧化锂的投料量摩尔比为1：3。

6.根据权利要求1所述的一种卡波特韦衍生物的制备方法和应用，其特征在于其中一步反应的具体过程为：把1-(2,2-二甲氧基乙基)-1,4-二氢-3-甲氧基-4-氧代-2,5-吡啶二甲酸-2-甲酯加入到无水甲酸中，在氩气保护下，搅拌条件下加热至65℃；反应一段时间后浓缩旋蒸除去甲酸，加入乙腈，搅拌使溶解，加入S-2-氨基丙醇，体系升温至内温80～82℃搅拌反应至原料反应完全；在45℃条件下浓缩蒸除溶剂，加入二氯甲烷，再加入2N盐酸调节反应液pH为1～2，分出下层有机相，上层水相用二氯甲烷萃取三次，合并有机相，然后在真空条件下浓缩后在甲醇中重结晶纯化得到

所述的1-(2,2-二甲氧基乙基)-1,4-二氢-3-甲氧基-4-氧代-2,5-吡啶二甲酸-2-甲酯与R-3-氨基丁醇的投料量为1：1.4。

7.根据权利要求1所述的一种卡波特韦衍生物的制备方法和应用，其特征在于其中一步反应的具体过程为：把1-(2,2-二甲氧基乙基)-1,4-二氢-3-甲氧基-4-氧代-2,5-吡啶二甲酸甲酯加入到无水甲酸中，在氩气保护下，搅拌条件下加热至65℃；反应一段时间后浓缩旋蒸除去甲酸，加入乙腈，搅拌使溶解，加入S-2-氨基丙醇，体系升温至回流搅拌反应至原料反应完全；在45℃条件下浓缩蒸除溶剂，加入二氯甲烷，再加入2N盐酸调节反应液pH为1～2，分出下层有机相，上层水相用二氯甲烷萃取多次，合并有机相，然后在真空条件下浓缩得到粗品，最后在甲醇中重结晶纯化得到

所述的1-(2,2-二甲氧基乙基)-1,4-二氢-3-甲氧基-4-氧代-2,5-吡啶二甲酸-2-甲酯与R-3-氨基丁醇的投料量为1：1.4。

8.根据权利要求1所述的一种卡波特韦衍生物的制备方法和应用，其特征在于其中一步反应的具体过程为：在反应瓶中加入一定量的

HATU，DIPEA，间氨基苯乙炔和N,N-二甲基甲酰胺，搅拌反应一段时间，室温下加水，室温下充分的打浆后，抽滤，滤饼置于鼓风烘箱干燥过夜，得到

所述的

与HATU与DIPEA25与间氨基苯乙炔的投料量摩尔比为1：1：2：1。

9.根据权利要求1所述的一种卡波特韦衍生物的制备方法和应，其特征在于(7)的具体过程为：将一定量的苯胺类化合物加入到水和盐酸体积比为1:1的溶剂中，置于5℃以下搅拌，之后把一定量的亚硝酸钠溶解在水中，缓慢滴入，滴加完全后最将叠氮化钠溶解在水中缓慢滴入，滴加完毕，反应小时结束后用二氯甲烷萃取两次，合并有机相，然后依次加入

叔丁醇，水和四氢呋喃，碘化亚铜，在50℃条件下反应，TLC监控原料反应完全，过滤后搅拌分出有机相，水相加入二氯甲烷萃取两次，合并有机相经无水硫酸镁干燥后，浓缩后用甲醇重结晶得到白色的产品；所述的苯胺类化合物与亚硝酸钠与叠氮化钠的投料量摩尔比为1：1：1；苯胺类化合物与

的投料量摩尔比为3：2。

10.根据权利要求1所述的一种卡波特韦衍生物的制备方法和应，其特征在于(7)的具体过程为：将一定量的苄溴衍生物和叠氮化钠加入到丙酮和水比例为4：1的溶剂中，常温搅拌24小时，然后用二氯甲烷萃取多次，合并有机相后依次加入

叔丁醇，水、四氢呋喃和碘化亚铜，在50℃条件下反应，TLC监控原料反应完全，过滤后搅拌分出有机相，水相加入二氯甲烷萃取两次，合并有机相经无水硫酸镁干燥后，浓缩后用甲醇重结晶得到；所述的苄溴衍生物与叠氮化钠与

的投料量摩尔比为1.5：1.5：1。

Images