取代噻吩并苯醌并异噁唑类化合物及其制备方法与应用
本申请是2013年5月28日提交的专利申请号为201310202745.1,发明名称为“取代三环苯醌类化合物及其制备方法与应用”的发明专利申请的分案申请。
技术领域
本发明涉及医药技术领域,具体涉及一种新的取代三环苯醌类化合物及其制备方法,以及作为抗真菌药物的应用。
背景技术
近年来,抗菌素的滥用、肿瘤放化疗和器官移植等因素引起免疫抑制,加之艾滋病患者急速增加,白念菌、烟曲霉菌、卡氏肺囊虫和新生隐球菌深部感染大幅度上升,深部真菌感染现已成为艾滋病和肿瘤等重大疾病死亡的主要原因。然而,临床上理想的抗真菌药物十分缺乏。作用于真菌细胞膜脂质的多烯类抗生素(例如两性霉素B)为首选治疗药,但是毒副作用大,临床应用严重受限。作用于羊毛甾醇14α-去甲基化酶(CYP51)的唑类药物(例如氟康唑、伊曲康唑和伏立康唑)是目前应用最多的一种抗真菌药物,但是该类药物由于对细胞色素P450酶系的抑制作用,会引起明显的药物-药物相互作用,并且对耐药菌株无效。作用于真菌细胞壁β-1,3葡聚糖合成酶的脂肽类药物(例如卡泊芬净和米卡芬净)又存在价格昂贵、生物利用度较低等问题。
1986年Rao等首次报道了新型生物碱类抗真菌化合物sampangine(J.U.M.Rao.Sampangine,a New Alkaloid from Cananga Odorata,J.Nat.Prod.1986,346-347).Sampangine提取自亚洲依兰树Cananga odorata(Lamk)Hook.F.et Thoms.茎皮中;1990年Liu.S.等首次报道了提取自西非Cleistophathis patens树的根皮中的3-methoxy sampangine(8)。二者对白色念珠菌(Candida albicans)的IC50值分别为3.0和0.15μg/mL。由于sampangine为四环稠环结构,溶解度差;同时分子的羰基和吡啶存在共振式,导致进一步修饰改造的空间较小,难度较大。
因此,除了优化改良现有药物的结构和制剂外,寻找具全新结构类型和全新作用机制先导化合物已成为抗真菌药物研究的重要方向。
发明内容
本发明的目的在于提供一种取代三环苯醌类化合物。本发明的另一目的在于提供所述的取代三环苯醌类化合物的制备方法。本发明的第三目的在于提供所述的取代三环苯醌类化合物在制备抗真菌药物中的应用。
本发明的技术方案是,运用结构简化策略将抗真菌天然产物Sampangine中复杂的四环结构简化为噻吩并苯醌并杂环母核,并在骨架上引入各种取代基,发现了结构新颖、分子量低,溶解性好的取代三环苯醌类化合物,目前尚未见有该类化合物的合成及其抗真菌活性的报道。
本发明的第一方面,是提供一种取代三环苯醌类化合物及其药学上可接受的盐,所述的取代三环苯醌类化合物,其结构通式如下:
其中:
R1基团,代表噻吩上的取代基,取代基位于噻吩环上各个位置,是单取代或多取代,取代基为硝基、胺基、氢、氰基、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、叔丁基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、三氟甲基、氟、氯、溴、或碘;
A基团,代表与苯醌环并环的芳环取代基,取代基选自以下a)至c)任一:
R2基团,代表芳环A基团上的各种取代基,取代基可以位于杂环上各个
位置,可以是单取代,也可以多取代,取代基选自以下ⅰ)至ⅵ)任一:
ⅰ)氢、氟、氯、溴、碘;
ⅱ)低级烷基、低级环烷基、二溴甲基、醛基、羧基;
ⅲ)取代苯基,苯基上取代基可以位于苯环上各个位置,可以是单取代,也可以多取代,取代基指氢、氟、氯、溴、碘、低级烷基、低级烷氧基、三氟甲基、三氟甲基低级烷基、氰基、硝基、胺基、N,N-二甲基、2-呋喃基、2-噻吩基、2-吡啶基;
ⅳ)丙烯酸甲酯、丙烯酸乙酯、丙烯酸丙酯、丙烯酸丁酯、丙烯酸叔丁酯;
ⅴ)取代酰胺基,即-CONHR,取代基R指低级烷基、低级环烷基、低级烷基单取代或多取代的苯基、卤素单取代或多取代的苯基、三氟乙基、吡啶基、嘧啶基、羟基环己基、四氢吡喃基甲基、吗啉基、吡咯烷基、哌嗪基;
ⅵ)1-(5-甲基呋喃-2-基)乙基、1-苯乙基、哌啶-4-基、N-低级烷基-哌啶-4-基;
与烷基和烷氧基有关的“低级”指含1至6个碳原子的直链或支链饱和脂肪烃基团;
与环烷基有关的“低级”是指含3至7个碳的环。
经试验抗真菌效果较好的部分优先化合物,其R1、A和R2基团的组合分别为如下:
表1:部分优先化合物其R1、A和R2基团的组合
本发明还提供了上述化合物的光学异构体、外消旋体、顺反异构体等。
本发明的某些化合物可按照常规方法制备为药用盐的形式。包括其有机酸盐及无机酸盐:无机酸包括(但不限于)盐酸、硫酸、磷酸、二磷酸、氢溴酸、硝酸等,有机酸包括(但不限于)乙酸、马来酸、富马酸、酒石酸、琥珀酸、乳酸、对甲苯磺酸、水杨酸、草酸等。
本发明的第二方面,是提供上述的取代三环苯醌类化合物及其药学上可接受的盐的制备方法。
本发明化合物的合成反应流程如下:
具体步骤为:
(1)制备5,5-二溴-6,7-二氢苯并[b]噻吩-4(5H)-酮(Ⅱ)
6,7-二氢苯并[b]噻吩-4(5H)-酮(Ⅷ)在乙酸乙酯中,与溴化铜反应,加热12小时,生成5,5-二溴-6,7-二氢苯并[b]噻吩-4(5H)-酮;
(2)制备5-溴苯并[b]噻吩-4-醇(Ⅲ)
5,5-二溴-6,7-二氢苯并[b]噻吩-4(5H)-酮(Ⅸ)在DMF中,与碳酸锂在100℃反应6小时,生成制备5-溴苯并[b]噻吩-4-醇;
(3)制备5-溴苯并[b]噻吩-4,7-二酮(Ⅳ)
5-溴苯并[b]噻吩-4-醇(Ⅹ)在醋酸、三氟醋酸及几滴水的混合溶剂中,零度下与碘苯二乙酸酯反应30分钟,生成5-溴苯并[b]噻吩-4,7-二酮(Ⅵ);
(4)制备8-甲基噻吩并[2,3-g]喹啉-4,9-二酮(1)
5-溴苯并[b]噻吩-4,7-二酮(Ⅺ)在无水乙醇中,以碳酸氢钠为碱,与(E)-2-((E)-丁-2烯--亚基)-1,1-二甲基肼(Ⅲ)加热反应3小时,生成8-甲基噻吩并[2,3-g]喹啉-4,9-二酮(Ⅳ);
(5)制备3-硝基-8-甲基噻吩并[2,3-g]喹啉-4,9-二酮(2)和2-硝基-8-甲基噻吩并[2,3-g]喹啉-4,9-二酮(3)
以浓硫酸为溶剂,将8-甲基噻吩并[2,3-g]喹啉-4,9-二酮加入并冷却溶液后分批次加入硝酸钾固体,反应1.5小时淬灭反应,分离得到两个异构体化合物2和3;
(6)制备8-甲基-2-硝基-4,9-二氧代-4,9-二氢噻吩并[2,3-g]喹啉-5-氮氧化物(4)
2-硝基-8-甲基噻吩并[2,3-g]喹啉-4,9-二酮加入双氧水中,冷却后加入三氟醋酐,将吡啶N氧化为氮氧化物8-甲基-2-硝基-4,9-二氧代-4,9-二氢噻吩并[2,3-g]喹啉-5-氮氧化物(4);
(7)制备3-氨基-8-甲基噻吩并[2,3-g]喹啉-4,9-二酮(5)和2-氨基-8-甲基噻吩并[2,3-g]喹啉-4,9-二酮(6)
3-硝基-8-甲基噻吩并[2,3-g]喹啉-4,9-二酮在甲醇和DMF的混合溶剂中,以硼氢化钠/氯化镍为还原剂,得到还原产物3-氨基-8-甲基噻吩并[2,3-g]喹啉-4,9-二酮(5);化合物6的制备参考同样的方法。
(8)制备8-(二溴甲基)-2-硝基噻吩并[2,3-g]喹啉-4,9-二酮(7)
2-硝基-8-甲基噻吩并[2,3-g]喹啉-4,9-二酮在醋酸中,以液溴为溴化试剂,110度反应3小时可以得到双溴代产物8-(二溴甲基)-2-硝基噻吩并[2,3-g]喹啉-4,9-二酮(7);
(9)制备2-硝基-4,9-二氧代-4,9-二氢噻吩并[2,3-g]喹啉-8-甲醛(8)
以DMSO为溶剂及氧化剂,120度加热反应4小时,可以将8-(二溴甲基)-2-硝基噻吩并[2,3-g]喹啉-4,9-二酮氧化为醛基衍生物2-硝基-4,9-二氧代-4,9-二氢噻吩并[2,3-g]喹啉-8-甲醛(8);
(10)制备(E)-3-(2-硝基-4,9-二氧代-4,9-二氢噻吩并[2,3-g]喹啉-8-基)丙烯酸叔丁基酯(9)和(Z)-3-(2-硝基-4,9-二氧代-4,9-二氢噻吩并[2,3-g]喹啉-8-基)丙烯酸叔丁基酯(10)
2-硝基-4,9-二氧代-4,9-二氢噻吩并[2,3-g]喹啉-8-甲醛与叔丁基2-(三苯基正膦亚基)乙酸酯在无水二氯甲烷中发生wittig反应得到顺反式产物9和10;
(11)制备1,1-二甲基-2-((E)-戊-2-烯-1-亚基)肼(Ⅵ,R1=Et,R2=H)
(Z)-戊-2-烯醛与偏二甲肼在无水THF中脱水反应生成1,1-二甲基-2-((E)-戊-2-烯-1-亚基)肼(Ⅵ,R1=Et,R2=H);
(12)制备8-乙基噻吩并[2,3-g]喹啉-4,9-二酮(Ⅶ,R1=Et,R2=H)
5-溴苯并[b]噻吩-4,7-二酮(Ⅺ)在无水乙醇中,以碳酸氢钠为碱,与1,1-二甲基-2-((E)-戊-2-烯-1-亚基)肼加热反应3-4小时,得到8-乙基噻吩并[2,3-g]喹啉-4,9-二酮(Ⅶ,R1=Et,R2=H);
(13)制备8-乙基-2-硝基噻吩并[2,3-g]喹啉-4,9-二酮(13)和8-乙基-3-硝基噻吩并[2,3-g]喹啉-4,9-二酮(14)
8-乙基噻吩并[2,3-g]喹啉-4,9-二酮在浓硫酸中,分批加入硝酸钾固体,0度下继续反应1-2小时,得到硝化产物13和14;
化合物11,12,15-21的合成均参照类似方法。
(14)制备2-硝基-6,7-二氢苯并[b]噻吩-4(5H)-酮(Ⅷ)
6,7-二氢苯并[b]噻吩-4(5H)-酮为原料,参照化合物13和4的合成方法,得到单一的硝化产物2-硝基-6,7-二氢苯并[b]噻吩-4(5H)-酮;
(15)制备5,5-二溴-2-硝基-6,7-二氢苯并[b]噻吩-4(5H)-酮(Ⅸ)
2-硝基-6,7-二氢苯并[b]噻吩-4(5H)-酮为原料,参照化合物Ⅱ的合成方法,得到5,5-二溴-2-硝基-6,7-二氢苯并[b]噻吩-4(5H)-酮(Ⅸ);
(16)制备5-溴-2-硝基苯并[b]噻吩-4-醇(Ⅹ)
5,5-二溴-2-硝基-6,7-二氢苯并[b]噻吩-4(5H)-酮(Ⅸ)为原料,参照化合物Ⅲ的合成方法,得到5-溴-2-硝基苯并[b]噻吩-4-醇(Ⅹ);
(17)制备5-溴-2-硝基苯并[b]噻吩-4,7-二酮(Ⅺ)
5-溴-2-硝基苯并[b]噻吩-4-醇(Ⅹ)为原料,参照化合物Ⅳ的合成方法,得到5-溴-2-硝基苯并[b]噻吩-4,7-二酮(Ⅺ);
(18)制备(E)-1,1-二甲基-2-((E)-3-(2-硝基苯)丙烯基)肼(ⅩⅢ,R=2-硝基苯基)邻硝基肉桂醛为原料,参照化合物Ⅵ的合成方法,得到(E)-1,1-二甲基-2-((E)-3-(2-硝基苯)丙烯基)肼(ⅩⅢ,R=2-硝基苯基);
(19)制备2-硝基-8-(2-硝基苯基)噻吩并[2,3-g]喹啉-1,9-二酮(23)
5-溴-2-硝基苯并[b]噻吩-4,7-二酮(Ⅺ)和(E)-1,1-二甲基-2-((E)-3-(2-硝基苯)丙烯基)肼为原料,参照化合物Ⅶ的合成方法,得到2-硝基-8-(2-硝基苯基)噻吩并[2,3-g]喹啉-1,9-二酮(23);
化合物22,24-26均参考类似方法。
(20)制备N,N-二甲基乙二醛腙(ⅩⅤ)
乙二醛水溶液与偏二甲肼室温下反应得到N,N-二甲基乙二醛腙(ⅩⅤ);
(21)制备4-(2,2-二甲基肼)丁-2-烯酸叔丁酯(ⅩⅥ,R=But)
N,N-二甲基乙二醛腙(ⅩⅤ)与2-(三苯基正膦亚基)乙酸叔丁酯发生wittig反应得到4-(2,2-二甲基肼)丁-2-烯酸叔丁酯(ⅩⅥ,R=But);
(22)制备2-硝基-4,9-二氧代-4,9-二氢噻吩并[2,3-g]喹啉-8-羧酸叔丁酯(28)
5-溴-2-硝基苯并[b]噻吩-4,7-二酮(Ⅺ)和4-(2,2-二甲基肼)丁-2-烯酸叔丁酯为原料,碳酸氢钠为碱,乙醇为溶剂,反应3-4小时得到2-硝基-4,9-二氧代-4,9-二氢噻吩并[2,3-g]喹啉-8-羧酸叔丁酯(28);
化合物27的合成参照类似的方法。
(23)制备2-硝基-4,9-二氧代-4,9-二氢噻吩并[2,3-g]喹啉-8-羧酸(29)
2-硝基-4,9-二氧代-4,9-二氢噻吩并[2,3-g]喹啉-8-羧酸叔丁酯与盐酸甲醇反应得到水解产物2-硝基-4,9-二氧代-4,9-二氢噻吩并[2,3-g]喹啉-8-羧酸(29);
(24)制备N-(1-甲氧基-丁-2-基)-2-硝基-4,9-二氧代-4,9-二氢噻吩并[2,3-g]喹啉-8-甲酰胺(35)
2-硝基-4,9-二氧代-4,9-二氢噻吩并[2,3-g]喹啉-8-羧酸与1-甲氧基-丁-2-胺在DMF溶剂中,加入缩合剂TBTU,三乙胺作碱得到N-(1-甲氧基-丁-2-基)-2-硝基-4,9-二氧代-4,9-二氢噻吩并[2,3-g]喹啉-8-甲酰胺(35);
化合物30-34,36-42的合成均参照类似方法。
(25)制备2-亚甲基戊醛(ⅩⅧ,R=Pr)
正戊醛与甲醛在异丙醇溶液中,以丙酸,吡咯烷为催化剂,45度搅拌4小时得到2-亚甲基戊醛(ⅩⅧ,R=Pr);
(26)制备1,1-二甲基-2-(2-亚甲基戊烯基)肼(ⅩⅨ,R=Pr)
2-亚甲基戊醛(ⅩⅧ,R=Pr)为原料,参照化合物Ⅵ的合成方法,得到1,1-二甲基-2-(2-亚甲基戊烯基)肼(ⅩⅨ,R=Pr);
(27)制备7-丙基-2-硝基噻吩并[2,3-g]喹啉-4,9-二酮(44)
5-溴-2-硝基苯并[b]噻吩-4,7-二酮(Ⅺ)和1,1-二甲基-2-(2-亚甲基戊烯基)肼为原料,碳酸氢钠为碱,乙醇为溶剂,反应3-4小时得到7-丙基-2-硝基噻吩并[2,3-g]喹啉-4,9-二酮(44);
化合物43,45-51均参照类似方法。
(28)制备6-硝基-3-丙基噻吩并[3',2',4,5]苯并[1,2-d]异噁唑-4,8-二酮(52)
5-溴-2-硝基苯并[b]噻吩-4,7-二酮(Ⅺ)在无水二氯甲烷中,三乙胺为碱,与氯代丁醛肟发生3+2环加成反应得到6-硝基-3-丙基噻吩并[3',2',4,5]苯并[1,2-d]异噁唑-4,8-二酮(52);
(29)制备6-硝基-4,8-二氧代-4,8-二氢噻吩并[3',2',4,5]苯并[1,2-d]异噁唑-3-羧酸乙酯(53)
参照化合物52的合成方法,以(Z)-乙基-2-氯-2-(羟基亚氨基)乙酸乙酯与5-溴-2-硝基苯并[b]噻吩-4,7-二酮(Ⅺ)反应得到6-硝基-4,8-二氧代-4,8-二氢噻吩并[3',2',4,5]苯并[1,2-d]异噁唑-3-羧酸乙酯(53);
(30)制备3-(吡啶-4-基)噻吩并[3',2',4,5]苯并[1,2-d]异噁唑-4,8-二酮(54)
5-溴-2-硝基苯并[b]噻吩-4,7-二酮(Ⅺ)在二氯甲烷中,三乙胺为碱,与次氯酸钠混合后冷却反应液到零度。然后滴加异烟醛肟发生环加成反应得到3-(吡啶-4-基)噻吩并[3',2',4,5]苯并[1,2-d]异噁唑-4,8-二酮(54);
(31)制备3-苯基噻吩并[3',2',4,5]苯并[1,2-d]异噁唑-4,8-二酮(55)
参照化合物54合成方法,以苯甲醛肟与5-溴-2-硝基苯并[b]噻吩-4,7-二酮(Ⅺ)在三乙胺及次氯酸钠作用下生成3-苯基噻吩并[3',2',4,5]苯并[1,2-d]异噁唑-4,8-二酮(55);
(32)制备3-(吡啶-4-基)-6-硝基噻吩并[3',2',4,5]苯并[1,2-d]异噁唑-4,8-二酮(56)和3-(吡啶-4-基)-7-硝基噻吩并[3',2',4,5]苯并[1,2-d]异噁唑-4,8-二酮(57)
参照化合物2和3的合成方法,以3-(吡啶-4-基)噻吩并[3',2',4,5]苯并[1,2-d]异噁唑-4,8-二酮为原料,与浓硫酸/硝酸钾发生硝化反应得到两个异构体56和57;
(33)制备(1E,3E)-戊-1,3-二烯-1-基乙酸酯(ⅩⅩⅠ)
巴豆醛在乙酸异丙烯酯中加热回流状态下,经甲苯磺酸(0.5g,2.3mmol)和醋酸铜催化作用,发生反应;粗产品经蒸馏得到(1E,3E)-戊-1,3-二烯-1-基乙酸酯(ⅩⅩⅠ);
(34)制备8-甲基萘[2,3-b]噻吩-4,9-二酮(ⅩⅩⅡ)
参照化合物1合成方法,以5-溴苯并[b]噻吩-4,7-二酮(Ⅳ)和(1E,3E)-戊-1,3-二烯-1-基乙酸酯(ⅩⅩⅠ)为原料,经4+2环加成及消去反应得到8-甲基萘[2,3-b]噻吩-4,9-二酮(ⅩⅩⅡ);
(35)制备8-甲基-2-硝基萘并[2,3-b]噻吩-4,9-二酮(58)和8-甲基-3-硝基萘并[2,3-b]噻吩-4,9-二酮(59)
参照化合物2和3的合成方法,以8-甲基萘[2,3-b]噻吩-4,9-二酮(ⅩⅩⅡ)为原料,与浓硫酸/硝酸钾发生硝化反应得到两个异构体58和59。
本发明的第三方面,是提供所述的取代三环苯醌类化合物及其药学上可接受的盐在制备抗真菌药物中的应用。
本发明的化合物经体外抑菌实验,证明大部分化合物具有较好的抗真菌活性和较广的抗菌谱,说明本发明化合物可用于制备治疗抗真菌感染的药物。
本发明所述化合物是一类全新结构类型的抗真菌先导化合物,具有广谱抗真菌活性,为深入研究和开发新结构类型抗真菌药物开辟了新的途径,可用于制备治疗抗真菌感染的药物。
具体实施方式
以下结合具体实施例,对本发明作进一步说明。应理解,以下实施例仅用于说明本发明而非用于限定本发明的范围。
实施例1:5,5-二溴-6,7-二氢苯并[b]噻吩-4(5H)-酮(Ⅱ)的制备
向一个500mL圆底烧瓶中加入CuBr2(28.2g,126mmol,4eq)及80mL乙酸乙酯。将此悬浮液加热到80度反应几分钟。然后加入溶有6,7-二氢苯并[b]噻吩-4(5H)-酮Ⅷ(4.78g,31.45mmol)的氯仿溶液80mL。加完后,将混合物在该温度下搅拌过夜。原料反应完后将混合物在真空中浓缩至干。残余物用乙酸乙酯稀释后通过氧化铝过滤。滤液用饱和NaHCO3洗涤,有机相经硫酸钠干燥并过滤后浓缩,得到白色晶体产物9.5g,收率97%.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:7.51(d,J=5.2Hz,1H),7.20(d,J=5.2Hz,1H),3.18(s,4H).
实施例2:5-溴苯并[b]噻吩-4-醇(Ⅲ)的制备
在250mL圆底烧瓶中加入化合物5,5-二溴-6,7-二氢苯并[b]噻吩-4(5H)-酮(9.6g,31mmol)及DMF(100mL)。向该溶液中加入碳酸锂(14g,186.mmol,6eq)。在氮气下将反应混合物加热至100℃反应6小时。然后将反应溶液冷却至室温并过滤。将滤液用水稀释,用HCl酸化至pH=1,并用乙酸乙酯萃取。有机相用水和盐水洗涤,浓缩并经柱层析纯化(洗脱剂为乙酸乙酯:石油醚=1:50),得到白色固体6.82g,收率95.8%.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:7.52(d,J=5.2Hz,1H),7.41(d,J=5.2Hz,1H),7.40(d,J=8.4,1H),7.35(d,J=8.4,1H),5.89(br s,4H).
实施例3:5-溴苯并[b]噻吩-4,7-二酮(Ⅳ)的制备
向一个500mL圆底烧瓶中加入苯酚5-溴苯并[b]噻吩-4-醇(4.6g,20mmol),80mL醋酸,120mL三氟醋酸和几滴水。将此反应混合物用冰水浴冷却到零度,然后分批加入碘苯二乙酸酯(19.3g,60mmol,3eq)。加完后,将混合物继续搅拌10分钟,再在室温下搅拌20分钟。然后加入100mL甲醇,搅拌10分钟后,加入水和二氯甲烷。分离有机相并浓缩。将浓缩后的残余物进行硅胶柱层析纯化(洗脱剂为乙酸乙酯:石油醚=1:50),得到黄色固体3.91g,收率80.5%.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:7.73(d,J=5.2Hz,1H),7.66(d,J=5.2Hz,1H),7.42(s,1H);13C NMR(100MHz,CDCl3)δppm:177,174,143,139.6,139.3,139,134,127.
实施例4:8-甲基噻吩并[2,3-g]喹啉-4,9-二酮(1)的制备
取5-溴苯并[b]噻吩-4,7-二酮(610mg,2.5mmol)溶于30mL无水乙醇中并冷却到0℃。向此溶液中加入(E)-2-((Z)-丁-2烯--亚基)-1,1-二甲基肼(560mg,2eq)的乙醇溶液(4mL)。滴加完毕后,加入碳酸氢钠粉末425mg(2eq)。然后将反应液加热到80℃,继续反应3小时。冷却后加入二氯甲烷40mL,过滤,浓缩滤液得到黄色固体420mg,收率73.1%.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:8.37(d,J=4.8Hz,1H),7.54(d,J=4.8Hz,1H),7.33(d,J=4.8Hz,1H),7.20(d,J=4.8Hz,1H),2.49(s,3H).MS(ESI)m/z:230(M+1).
实施例5:3-硝基-8-甲基噻吩并[2,3-g]喹啉-4,9-二酮(2)和2-硝基-8-甲基噻吩并[2,3-g]喹啉-4,9-二酮(3)的制备
取8-甲基噻吩并[2,3-g]喹啉-4,9-二酮(229mg,0.1mol)加入到2mL浓硫酸中并冷却到0℃。然后分批次加入硝酸钾(15mg,1.5eq)。1.5小时后反应结束,将反应液滴加到20mL冰水中,用乙酸乙酯萃取3次。合并有机相,干燥,过滤,旋干后得到粗品。经制备HPLC分离得到两个异构体,灰色粉末233mg,总收率85.2%。
化合物2,93mg。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:2.78(s,3H),7.72(d,J=4.8Hz,1H),8.87(d,J=4.8Hz,1H),8.99(s,1H).MS(ESI)m/z:275.2(M+1).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δppm:177.90,173.65,152.45,150.10,147.10,144.70,134.25,131.80,131.00,128.15;
化合物3,140mg。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:2.79(s,3H),7.75(d,J=4.77Hz,1H),8.50(s,1H),8.89(d,J=4.64Hz,1H).MS(ESI)m/z:275.2(M+1).13C NMR(100MHz,DMSO-d6)δppm:179.20,175.35,156.65,153.15,150.90,150.35,149.20,139.20,131.25,129.00,126.55.
实施例6:8-甲基-2-硝基-4,9-二氧代-4,9-二氢噻吩并[2,3-g]喹啉-5-氮氧化物(4)的制备
将95-98%的双氧水(1.02g,30mmol)冷却至-10℃,剧烈搅拌下加入含三氟乙酸(一两滴)的三氟乙酸酐(10.5g,50mmol)溶液。将反应混合物在冰浴中搅拌10分钟,直到它成为透明均匀的溶液。然后加入原料含有噻吩(10mmol)的10mL三氟乙酸溶液,并剧烈搅拌24小时。反应结束后,过滤析出的白色固体,冰水洗涤,干燥后得到白色固体产品(收率:55.2%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:8.53(d,J=6.8Hz,1H),8.42(s,1H),7.67(d,J=7.2Hz,1H),2.70(s,3H).MS(ESI)m/z:290.9(M+1).
实施例7:3-氨基-8-甲基噻吩并[2,3-g]喹啉-4,9-二酮(5)和2-氨基-8-甲基噻吩并[2,3-g]喹啉-4,9-二酮(6)的制备
向250mL单口瓶中加入硝基底物3(28mg,0.1mmol)和5mL甲醇/DMF的混合溶液(v/v=3/1),然后加入六水合氯化镍固体(47mg,2eq)。搅拌15分钟后迅速加入硼氢化钠(8mg,2当量),反应剧烈发生,溶液快速变黑。TLC检测反应结束。加入2mL水,DCM萃取。经制备HPLC分离得到7.5mg棕色固体6,收率32.2%.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:2.75(s,3H),6.34(s,1H),7.57(d,J=4.8Hz,1H)8.70(d,J=4.8Hz,1H).MS(ESI)m/z:245.2(M+1).
参照实施例6合成方法。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:2.74(s,3H),6.30(s,1H),7.48(d,J=4.8Hz,1H)8.73(d,J=4.8Hz,1H).MS(ESI)m/z:245.2(M+1).
实施例8:8-(二溴甲基)-2-硝基噻吩并[2,3-g]喹啉-4,9-二酮(7)的制备
向溶有274mg原料3(1mmol)的3mL醋酸溶液中加入液溴(240mg,1.5eq)。将此反应液加热到110℃反应3小时。冷却后到0℃,加入冰水25g,用乙酸乙酯萃取。快柱分离(石油醚:乙酸乙酯=30:1)得到土黄色二溴代物(7)共355mg,收率825.%.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:9.15(d,J=5.2Hz,1H),8.50(s,1H),8.40(d,J=5.2Hz,1H),8.12(s,1H).
实施例9:2-硝基-4,9-二氧代-4,9-二氢噻吩并[2,3-g]喹啉-8-甲醛(8)的制备
在3mL DMSO中加入二溴代物(107mg,0.25mmol),加热到120℃反应4小时。冷却后将反应液倒入水中,乙酸乙酯萃取。有机相干燥浓缩后得到会褐色粉末64mg,收率90.4%.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:10.66(s,1H),9.24(br s,1H),8.58(s,1H),7.89(d,J=4.77Hz,1H).
实施例10:(E)-3-(2-硝基-4,9-二氧代-4,9-二氢噻吩并[2,3-g]喹啉-8-基)丙烯酸叔丁基酯(9)和(Z)-3-(2-硝基-4,9-二氧代-4,9-二氢噻吩并[2,3-g]喹啉-8-基)丙烯酸叔丁基酯(10)的制备
向含有24毫克化合物8(3.56毫摩尔)的无水二氯甲烷(3mL)中,滴加叔丁基2-(三苯基正膦亚基)乙酸酯(37毫克,1.2当量)的无水二氯甲烷溶液(2mL)。滴加完毕后继续搅拌反应过夜。加水5毫升后萃取,干燥后经制备TLC分离得到两个异构体化合物9和10。
化合物9,棕黄色固体10mg,收率31.2%.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:1.47-1.61(m,9H),6.39(d,J=16.06Hz,1H),7.71(d,J=5.02Hz,1H),8.46(s,1H),8.58(d,J=15.81Hz,1H),9.08(d,J=4.77Hz,1H).MS(ESI)m/z:388.1(M+1);
化合物10,褐色固体8.6mg,收率32.3%.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:1.35(s,9H),6.19(d,J=12.05Hz,1H),7.48(d,J=12.30Hz,1H),7.58(d,J=4.77Hz,1H),8.49(s,1H),9.05(d,J=4.77Hz,1H).MS(ESI)m/z:388.1(M+1).
实施例11:1,1-二甲基-2-((E)-戊-2-烯-1-亚基)肼(Ⅵ,R1=Et,R2=H)的制备
取(Z)-戊-2-烯醛(8.4g,0.1mol)溶于100mL无水THF中,慢慢滴加偏二甲肼(6.0g,0.1mol,1.0eq)。滴加完毕后将反应液在室温下搅拌过夜。将反应混合物浓缩至干,得到浅棕色液体10.1g,收率80.5%.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm 0.98-1.10(m,3H)2.18(q,J=6.90Hz,2H),2.83(s,6H),5.89(dt,J=15.50,6.43Hz,1H),6.13-6.30(m,1H),7.05(d,J=8.78Hz,1H).
实施例12:8-乙基噻吩并[2,3-g]喹啉-4,9-二酮(Ⅶ,R1=Et,R2=H)的制备
重复实施例4的步骤,得到化合物褐色固体粉末Ⅶ240mg,收率65%。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:1.24(t,J=7.40Hz,3H),3.24(q,J=7.53Hz,2H),7.69(d,J=5.02Hz,2H),8.18(d,J=5.02Hz,1H),8.86(d,J=5.02Hz,1H).
实施例13:8-乙基-2-硝基噻吩并[2,3-g]喹啉-4,9-二酮(13)和8-乙基-3-硝基噻吩并[2,3-g]喹啉-4,9-二酮(14)的制备
重复实施例5步骤,得到化合物13和14。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:8.96(d,J=5.0Hz,1H),8.44(s,1H),7.58(d,J=5.0Hz,1H):3.34(q,J=7.36Hz,2H),1.31-1.40(m,3H).MS(ESI)m/z:289.2(M+1)(13).
1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:8.97(d,J=4.8Hz,1H),8.40(s,1H),7.58(d,J=4.8Hz,1H),3.50(q,J1=7.2Hz,J2=14.8,2H),1.35-1.38(m,3H).MS(ESI)m/z:289.2(M+1)(14).
表1中化合物11-12,15-21可分别经重复实施例11~13中的步骤。
实施例14:2-硝基-6,7-二氢苯并[b]噻吩-4(5H)-酮(Ⅷ)的制备
取原料6,7-二氢苯并[b]噻吩-4(5H)-酮(15.2g,0.1mol)溶于150mL浓硫酸中,冷却至零度后分批加入硝酸钾固体(12g,1.2eq)。继续在此温度下反应1小时至HPLC显示原料反应完全。将浓硫酸混合液逐滴加入到100g冰水中,乙酸乙酯萃取。有机相经碳酸氢钠洗涤两次,干燥后旋干溶剂得到浅黄色固体(19.1g,收率:90.2%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:2.30(q,J=6.27Hz,2H),2.60-2.67(m,2H),3.08(t,J=6.02Hz,2H),8.16(s,1H).
实施例15:5,5-二溴-2-硝基-6,7-二氢苯并[b]噻吩-4(5H)-酮(Ⅸ)的制备
重复实施例1步骤,黄色固体:12.3g,收率:92.0%.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:3.23(s,4H),8.26(s,1H).
实施例16:5-溴-2-硝基苯并[b]噻吩-4-醇(Ⅹ)的制备
重复实施例2步骤,黄色固体:7.89g,收率:96.0%.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.53(d,J=8.78Hz,1H),7.77(d,J=8.78Hz,1H),8.74(s,1H),11.23(br s,1H).
实施例17:5-溴-2-硝基苯并[b]噻吩-4,7-二酮(Ⅺ)的制备
重复实施例3步骤,黄色固体:10.9g,收率:85.3%.1H NMR(400MHz,CDCl3)ppm:7.55(s,1H),8.32(s,1H).
实施例18:(E)-1,1-二甲基-2-((E)-3-(2-硝基苯)丙烯基)肼(ⅩⅢ,R=2-硝基苯基)的制备
参照化合物Ⅵ的合成方法,灰白色固体15mg,收率15.0%.1H NMR(400MHz,DMSO-d6)ppm:7.39(d,J=7.28Hz,1H),7.60-7.82(m,2H),7.82-7.92(m,1H),8.31(d,J=8.28Hz,1H),8.49(br s,1H),9.10(br s,1H).MS(ESI)m/z:381.9(M+1).
实施例19:2-硝基-8-(2-硝基苯基)噻吩并[2,3-g]喹啉-1,9-二酮(23)的制备
表1中化合物22,24-26可经重复实施例12中的步骤。
实施例20:N,N-二甲基乙二醛腙(ⅩⅤ)的制备
向40%乙醛水溶液(58g,0.4mol)中冰浴下慢慢加入偏二甲肼(20g,0.33mol)。然后在室温下反应1小时。二氯甲烷萃取3次。有机相干燥后旋干溶剂,经柱层析短柱纯化后得到26g黄色液体(收率:78.8%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:9.39(d.J=7.6Hz,1H),6.64(d.J=7.6Hz,1H),3.19(s,1H).
实施例21:4-(2,2-二甲基肼)丁-2-烯酸叔丁酯(ⅩⅥ,R=But)的制备
取N,N-二甲基乙二醛腙(ⅩⅤ)3g(30mmol)溶到15mL二氯甲烷中,室温下滴加2-(三苯基正膦亚基)乙酸叔丁酯(11.3g,1.0eq)的二氯甲烷溶液。然后加热到40℃回流过夜。冷却后旋干溶剂,残余物经柱层析(石油醚:乙酸乙酯=5:1)得到黄色固体(5.05g,收率85.2%)。1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:7.31(m,1H)6.88(d.J=9.2Hz,1H),5.87(d,J=15.6Hz,1H),3.02(s,6H),1.49(s,1H).
实施例22:2-硝基-4,9-二氧代-4,9-二氢噻吩并[2,3-g]喹啉-8-羧酸叔丁酯(28)的制备
参照实施例4合成方法,得到褐色固体15.8mg,收率10.3.0%.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:9.12(d,J=4.8Hz,1H),8.46(s,1H),7.58(d,J=4.8,1H),1.67(s,9H).MS(ESI)m/z:360.9(M+1).
表1中化合物27可经重复实施例4中的步骤。
实施例23:2-硝基-4,9-二氧代-4,9-二氢噻吩并[2,3-g]喹啉-8-羧酸(29)的制备
取叔丁酯(1g,3mmol)加入到4M的盐酸甲醇溶液中(6mL,8eq),加热回流反应过夜。旋干溶剂后用石油醚洗涤,得到白色固体(740mg,收率:90%)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δppm:7.86(br s,1H),8.51(s,1H),9.10(br s,1H)MS(ESI)m/z:304.9(M+1).
实施例24:N-(1-甲氧基-丁-2-基)-2-硝基-4,9-二氧代-4,9-二氢噻吩并[2,3-g]喹啉-8-甲酰胺(35)的制备
将羧酸(30mg,0.1mmol),1-甲氧基丁-2-胺(21mg,0.2mmol)及三乙胺(40mg,4eq)加入到3mLDMF溶液中。然后室温搅拌至TLC跟踪检测反应完毕(大约2小时)。制备硅胶板分离得到白色固体26mg,收率:68.5%.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:9.15(d,J=4.52Hz,1H),8.49(s,1H),7.66(d,J=4.77Hz,1H),6.07(d,J=8.53Hz,1H),4.22-4.33(m,1H),3.67-3.77(m,1H),3.55-3.65(m,1H),3.37-3.44(m,3H),1.72-1.85(m,2H),1.10(t,J=7.53Hz,3H).MS(ESI)m/z:390.2(M+1).
表1中化合物30-34,36-42可经重复实施例24中的步骤。
实施例25:2-亚甲基戊醛(ⅩⅧ,R=Pr)的制备
向含有8.2克甲醛水溶液(37%,0.1mol)和正戊醛(8.6克,0.1mol)的异丙醇溶液(10mL)中,加入丙酸(0.1mmol,10mol%)和吡咯烷(0.1mmol,10mol%)。将反应混合物在45℃下搅拌4小时。冷却后,用碳酸氢钠溶液洗涤,用二氯甲烷萃取。合并的萃取液用饱和食盐水洗涤,硫酸钠干燥,并在真空下浓缩。由此得到的粗产物通过一个短的硅胶垫纯化(二氯甲烷作洗脱剂),得到无色液体7.2g,收率84%.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:9.52(s,1H),6.23(s,1H),5.98(s,1H),2.20(t,J=7.53Hz,2H),1.44-1.49(m,2H),0.90(s,3H).
实施例26:1,1-二甲基-2-(2-亚甲基戊烯基)肼(ⅩⅨ,R=Pr)的制备
参照实施例11合成方法,得到无色油状物185mg,收率78.5%.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:7.01(s,1H),5.06(d,J=16.0Hz,2H),2.85(s,6H),2.31(t,J=5.4Hz,2H),1.54(m,2H),0.93(t,J=5.4Hz,3H).
实施例27:7-丙基-2-硝基噻吩并[2,3-g]喹啉-4,9-二酮(44)的制备
表1中化合物43,45-51可经重复实施例26步骤。
实施例28:6-硝基-3-丙基噻吩并[3',2',4,5]苯并[1,2-d]异噁唑-4,8-二酮(52)的制备
将5-溴-2-硝基苯并[b]噻吩-4,7-二酮(28.7mg,0.1mmol)和氯代丁醛肟(12.7mg,0.11mmol)加到无水二氯甲烷(5mL)中,冷却到0度后慢慢滴加三乙胺(20.2mg,0.2mmol)。滴加完毕后,升到室温搅拌过夜。加入5mL水,萃取后,干燥并旋干,柱层析(石油醚:乙酸乙酯=5:2)得到灰色固体16.4mg,收率56.1%.1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:8.45(s,1H),3.02(t,J=7.2Hz,2H),1.84-1.89(m,2H),1.06(t,J=7.2Hz,3H);13C NMR(100MHz,CD3OD)δppm:173.80,167.20,165.20,162.00,156.65,147.90,138.20,125.10,120.90,27.55,20.25,14.80.
实施例29:6-硝基-4,8-二氧代-4,8-二氢噻吩并[3',2',4,5]苯并[1,2-d]异噁唑-3-羧酸乙酯(53)的制备
重复实施例28步骤,得到黄色固体12.4mg,收率52.9%.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:8.31(s,1H),6.96(s,1H),4.44-4.51(m,2H),1.44(t,J=5.6Hz,3H).
实施例30:3-(吡啶-4-基)噻吩并[3',2',4,5]苯并[1,2-d]异噁唑-4,8-二酮(54)的制备
将原料5-溴苯并[b]噻吩-4,7-二酮(254mg,1.05mmol),三乙胺(3mg,3%mol)和15%的次氯酸钠水溶液(15mL)依次加入到二氯甲烷(10mL)中,然后冷到零度下。在此温度下滴加异烟醛肟(128mg,1.05mmol),大约15分钟加完。搅拌1.5小时后,加入10mL水,用二氯甲烷萃取水相。有机相用无水硫酸钠干燥,过滤后减压下除去溶剂。将残余物经快速层析纯化,得到10mg黄绿色固体目标分子,收率33.6%.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:8.81-8.83(dd,J=1.6,4.8Hz,2H),8.09-8.10(d,J=1.6,4.8Hz,2H),7.79(d,J=5.2Hz,1H),7.70(d,J=5.2Hz,1H);13C NMR(100MHz,CDCl3)δppm:173.14,168.39,167.57,158.81,150.66,146.49,140.10,135.17,133.67,126.38,123.00,119.60.
实施例31:3-苯基噻吩并[3',2',4,5]苯并[1,2-d]异噁唑-4,8-二酮(55)的制备
重复实施例30步骤,得到黄色固体13.4mg,收率11.9%.1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:8.05-8.10(m,2H),7.70(d,J=5.27Hz,1H),7.63(d,J=5.02Hz,1H),7.44-7.50(m,3H)MS(ESI)m/z:326.2(M+1).
实施例32:3-(吡啶-4-基)-6-硝基噻吩并[3',2',4,5]苯并[1,2-d]异噁唑-4,8-二酮(56)和3-(吡啶-4-基)-7-硝基噻吩并[3',2',4,5]苯并[1,2-d]异噁唑-4,8-二酮(57)的制备
重复实施例5的步骤,得到化合物56和57。
化合物56,1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:8.07(d,J=6.02Hz,2H),8.40(s,1H),8.87(d,J=5.77Hz,2H)MS(ESI)m/z:327.2(M+1);
化合物57,1H NMR(400MHz,CDCl3)δppm:8.10(d,J=6.02Hz,2H)8.45(s,1H)8.86(d,J=5.77Hz,2H)MS(ESI)m/z:327.2(M+1).
实施例33:(1E,3E)-戊-1,3-二烯-1-基乙酸酯(ⅩⅩⅠ)的制备
向含有对甲苯磺酸(0.5g,2.3mmol)、0.13g醋酸铜的乙酸异丙烯酯(60mL)溶液中,在回流状态下慢慢滴加巴豆醛(26g),1小时后加完。继续加热30分钟后,将反应装置该为蒸馏方式,设定浴温在110-130℃。反应混合物经减压蒸馏(沸点44-45℃,1.02毫米汞柱)得到35g浅黄色液体,收率:82%。1H NMR(400MHz,CDCl3).ppm 1.72-1.79(m,3H),2.14(s,1.33H)2.16(s,1.67H),5.50-5.60(m,0.56H),5.64-5.75(m,0.44H),5.91-6.02(m,1.44H),6.33(t,J=11.92Hz,0.56H),7.30(s,0.44H),7.37(d,J=12.30Hz,0.56H).
实施例34:8-甲基萘[2,3-b]噻吩-4,9-二酮(ⅩⅩⅡ)的制备
参照实施例1合成方法,得到褐色固体30mg,收率20.6%.1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:8.13(d,J=7.3Hz,1H),7.98-7.90(m,1H),7.70-7.58(m,3H),2.80(s,3H).
实施例35:8-甲基-2-硝基萘并[2,3-b]噻吩-4,9-二酮(58)和8-甲基-3-硝基萘并[2,3-b]噻吩-4,9-二酮(59)的制备
参照实施例5合成方法,分别得到两个异构体。
化合物58,灰色固体20mg,收率16.6%.1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:2.91(br s,3H),7.81-7.84(m,1H),7.87-7.91(m,1H),8.37-8.43(m,1H),8.50(br s,1H);
化合物59,灰色固体21mg,收率17.0%.1H NMR(400MHz,CD3OD)δppm:2.90(s,3H),7.78-7.84(m,1H),7.85-7.89(m,1H),8.51(br s,1H),8.78(d,J=11.54Hz,1H).
本发明已合成的部分优选化合物的化学结构和1H-NMR数据见表2,表2与表1化合物编号一致。
表2部分优选化合物的化学结构和1H-NMR数据
实施例36:本发明合成的取代噻吩并苯醌类化合物的抗真菌作用
(一)实验方法:采用常规的体外抑菌实验方法(详见:Antimicrob AgentsChemother 1995,39(5):1169)
1.材料与方法
(1)实验菌株
本实验选用了以下8种重要的人体致病标准真菌菌株作为筛选对象,真菌菌株由第二军医大学长海医院真菌室(或购自中科院药物所)提供。
1)白色念珠菌(Candida albicans,标准株SC5314);
2)白色念珠菌(Candida albicans,标准株Y0109);
3)近平滑念珠菌(Candida parapsilosis,ATCC 22019)
4)新型隐球菌(Cryptococcus neoformans,标准株56992);
5)光滑念珠菌(Candida glabrata,537);
6)烟曲霉菌(Aspergillus fumigatus,0796);
7)红色毛癣菌(Trichophyton rubrum,Cmccftla)
8)石膏状小孢子菌(Microsporum gypseum,Cmccfmza)。
(2)试验方法
菌悬液配制:a.新型隐球菌和念珠菌经YEPD液体培养基35℃培养16小时,两次活化,用血细胞计数板计数,以RPM1640液体培养基调整浓度至1×103~5×103个/mL。b.丝状菌(烟曲霉菌和红色毛癣菌、石膏状小孢子菌)经SDA斜面分别培养(35℃)一周和(28℃)两周,两次活化,加RPM1640液体培养基并用吸管吹打,使孢子游离于RPM1640液中,经四层纱布过滤,计数,调整浓度至1×103~5×103个/mL。
药液配制:取本发明待测化合物溶于二甲亚砜,配成8.0mg/ml的药物储存液,实验前用RPM1640稀释成640μg/ml。
接种:96孔板1号孔加RPM1640100μl作空白对照,3-12号孔各加菌悬液120μl,2号孔加菌悬液160μl和药液1.6μl,2-11号孔的药物浓度作10级4倍比稀释,各孔药物浓度分别为64、16、4、1、0.25、0.0625、0.0156、0.0039、0.00097、0.00024μg/mL。12号孔不加药液,作阳性对照。药物对照为氟康唑。
培养及检测:设阳性对照孔光密度值(OD值)为100%,以光密度值比阳性对照孔低于80%的最低药物浓度为最小抑菌浓度值(MIC)。
(二)实验结果
体外抑菌实验结果见表3,表3与表1、表2化合物编号一致。
表3:部分优选目标化合物体外抗真菌最小抑菌浓度值(MIC,μg/mL)
上述实验结果表明,与阳性对照药相比,本发明所述化合物中大部分具有较好的抗真菌活性和较广的抗菌谱,说明本类化合物可用于制备治疗抗真菌感染的药物。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解,本发明不受上述实施例的限制,上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理,在不脱离本发明精神和范围的前提下本发明还会有各种变化和改进,这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等同物界定。