CN115737598B - 一种纳米粒子簇Al-PHNPs-PAMAM的制备及其在治疗脑部疾病中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种纳米粒子簇Al‑PHNPs‑PAMAM的制备及其在治疗脑部疾病中的应用。本发明将聚合物PLA以及HPG制成PLA‑HPG后，再制备成PHNPs，PHNPs经高碘酸钠氧化、亚硫酸钠还原后得到具有生物粘附性的Al‑PHNPs，最后将Al‑PHNPs与树枝状聚合物PAMAM结合给药至鼻腔。所制备得到的Al‑PHNPs‑PAMAM在鼻腔可以保持长时间粘附，在鼻腔内释放药物，聚集成高浓度后更好的进入脑内，并且纳米材料不会进入，在持续发挥作用治疗脑病的同时有更好的生物相容性，能在各类脑部疾病的治疗中发挥更好的治疗效果。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种纳米粒子簇Al-PHNPs-PAMAM的制备及其在治疗脑部疾病中的应用。
背景技术
脑血管病(cerebrovascular disease，CVD)是临床常见的一类神经系统疾病，主要是 脑部血液供应障碍(包括由于栓塞和血栓导致的血管结构异常等多种病理改变)而导致的 疾病。每年发生的脑血管病约60％～80％都是缺血性脑血管病(ischemic cerebro-vascular disease，ICVD)，其特点为患病率高、死亡率高、复发率高及致残率高。脑缺血是因为血 管堵塞造成脑血流量减少和脑损伤，脑血流量减少持续的时间越长，脑损伤就会越严重。 如果缺血区的血流很快恢复，则损伤可逆，缺血半暗带内的神经细胞仍可存活并恢复正常， 因此保护半暗带内的神经元是治疗脑缺血成功的关键。其中，脑缺血再灌注损伤较为常见， 其机制十分复杂，主要机制为线粒体损伤能量代谢障碍、钙超载、兴奋性氨基酸(excitatory amino acids，EAAs)的神经毒性、氧自由基的累积、炎性反应等。
由于血脑屏障(BBB)限制了药物向大脑的运输，因此不需要经过BBB，而通过嗅 觉和三叉神经通路直接靶向大脑已成为向大脑提供广泛治疗的重要思路。其中，通过鼻内 运输途径直接将药物输送至大脑，无需全身吸收，从而避免了副作用，提高了神经治疗药 物的疗效。在过去的几十年中，已经研究出了不同的药物输送系统(DDS)通过鼻途径靶 向大脑，但鼻腔给药的方式也面临着鼻腔清除率高，不能达到很好的滞留效果，生物相容 性差，从而无法达到很好的治疗结果这样的问题。
针对当前存在的这些问题，有必要开发一种可以增加鼻腔粘膜粘附时间，在鼻腔内释 放药物，聚集成高浓度后更好的进入脑内，而载药载体不会进入脑内的药物递送系统，而 且使药物在持续发挥作用治疗脑病的同时有更好的生物相容性。
发明内容
为了克服上述现有技术的不足，本发明提供了一种用于治疗脑部疾病的纳米粒子簇 Al-PHNPs-PAMAM的制备方法，所制得的包载治疗脑部疾病药物的可降解生物粘附纳米粒簇能够在有鼻腔粘液存在的情况下很好的粘附并滞留在鼻腔黏膜上，从而在鼻腔内滞留更长时间，在鼻腔内释放药物，聚集成高浓度后更好的进入脑内，并且纳米材料不会进入脑内，在持续发挥作用治疗脑病的同时，有更好的生物相容性，可以增强鼻对脑的药物递送效果，提高治疗脑部疾病的疗效。
为实现上述目的，本发明是通过以下技术方案来实现的：
本发明提供了一种用于治疗脑部疾病的纳米粒子簇Al-PHNPs-PAMAM的制备方法，该方法包括以下步骤：
S1、HPG的合成：在充满绝水的惰性气体氛围下将1,1,1-三羟甲基丙烷置于90-100℃ 油浴中直至完全溶解之后加入甲醇钾，并继续抽真空，10-30分钟后再充满惰性气体，然后在反应12个半小时内添加25mL缩水甘油，得到粗HPG，粗HPG经过纯化后得到HPG；
S2、PLA-HPG合成：将PLA和HPG分别溶解在有机溶剂中，合并两溶液，干燥后 再加入N,N'-二异丙基碳二酰亚胺和4-二甲氨基吡啶，在室温下搅拌反应4-6天，反应后 经沉淀制得；
S3、PHNPs的制备：用EA和DMSO分别配制PLA-HPG溶液和药物溶液，所述药 物为用于治疗脑部疾病的药物，然后将PLA-HPG溶液、药物溶液、EA以及DMSO按0.225： 0.050-0.250：0.300：0.100-0.300的体积比混合均匀后转移至一定量水中，经三次超声后 得到小体积纳米乳，再次将小体积纳米乳转移至处于搅拌状态下的水中，并旋转蒸发至无 气泡产生，即得药物/PHNPs粗品，粗品经纯化后得到非生物粘附性纳米粒-药物/PHNPs；
S4、Al-PHNPs的制备：将高碘酸钠溶液加至药物/PHNPs中反应2-3min，所述高碘酸钠溶液的浓度为0.1mol/L，所述高碘酸钠溶液与药物/PPHNP的体积比为1-3:1；再加 入亚硫酸钠溶液终止反应，最后经纯化制得治疗脑部疾病的生物粘附性纳米粒-药物 /Al-PHNPs；
S5、Al-PHNPs-PAMAM的制备：将步骤S4的药物/Al-PHNPs与PAMAM混合均匀 后制备得到Al-PHNPs-PAMAM纳米子簇。
本发明将聚合物PLA以及HPG制成PLA-HPG后，再制备成PHNPs，PHNPs经高碘 酸钠氧化、亚硫酸钠还原后得到具有生物粘附性的Al-PHNPs，最后将Al-PHNPs与树枝 状聚合物PAMAM结合给药至鼻腔。本发明在可降解纳米粒子的基础上增加了生物粘附 性这一特性，由于鼻腔黏膜处有蛋白，而药物/Al-PHNPs上的醛基能与组织蛋白上的氨基 反应形成Schiff键，故而附着在鼻黏膜上，但由于Al-PHNPs上的醛基与黏膜上的氨基结 合形成的Schiff键可逆，并且鼻腔中存在的一些粘液很容易打开这个键，导致单纯使用药 物/Al-PHNPs不能达到最理想的滞留效果，这时候利用带有氨基的树枝状聚合物PAMAM 连接Al-PHNPs，形成类似笼子状结构的多价生物粘附性纳米粒团簇Al-PHNPs-PAMAM， 从而增加了纳米粒子在鼻腔内的滞留时间，减少纳米粒子的二次流失，可以在鼻腔内缓慢 释放药物聚集成较高浓度，再经鼻脑通路更好地进入脑内，从而达到更好的治疗效果，并 且由于纳米材料不会进入脑内，该体系有较好的生物相容性。这个系统可以通过包载各种 治疗脑部疾病药物的方式应用于各种脑病的治疗中。
优选地，所述脑部疾病为脑缺血再灌注损伤。
优选地，所述用于治疗脑部疾病的药物包括右美托咪定(DEX)。
优选地，步骤S5中，在与药物/Al-PHNPs混合前，先将PAMAM制成的浓度为 100mg/mL的溶液，PAMAM溶液与药物/Al-PHNPs的体积比为2:3。
优选地，Al-PHNPs-PAMAM的给药方法为：Al-PHNPs和PAMAM在鼻腔内分别给 药后混匀。
更优选地，Al-PHNPs-PAMAM的给药方法为：先将六分之四的Al-PHNPs在鼻腔内 分4次给药，再将PAMAM按4次给药，最后再将剩下的Al-PHNPs分2次给药，Al-PHNPs 每次给药的量以及PAMAM每次给药的量均为等量给药。
优选地，步骤S3中，PLA-HPG溶液的浓度为100mg/mL，药物溶液的浓度为10-50 mg/mL。
优选地，步骤S3中，混合溶液与第一次转移时的用水量、第二次转移时的用水量的体积比为0.875：2：10。
优选地，步骤S3和S4中的纯化均为离心三次后再水洗出纳米粒子，每次离心的温度为4℃，转速为4500rpm，时间为15min。
本发明还提供了采用上述的制备方法制备得到的用于治疗脑部疾病的纳米粒子簇 Al-PHNPs-PAMAM。
按照本发明方法所制备得到的Al-PHNPs-PAMAM在鼻腔可以保持长时间粘附，在鼻腔内释放药物，聚集成高浓度后更好的进入脑内，并且纳米材料不会进入，在持续发挥作用治疗脑病的同时有更好的生物相容性，能在各类脑部疾病的治疗中发挥更好的治疗效果。 此外，通过本发明方法还可以制备用于治疗其他组织类疾病的药物递送纳米粒。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明公开了一种用于治疗脑部疾病的纳米粒子簇Al-PHNPs-PAMAM的制备方法，将聚合物PLA以及HPG制成PLA-HPG后，再制备成PHNPs，PHNPs经高碘酸钠氧化、 亚硫酸钠还原后得到具有生物粘附性的Al-PHNPs，最后将Al-PHNPs与树枝状聚合物 PAMAM结合给药至鼻腔。利用带有氨基的树枝状聚合物PAMAM连接Al-PHNPs，形成 类似笼子状结构的多价生物粘附性纳米粒团簇Al-PHNPs-PAMAM，从而克服了纳米粒在 鼻腔内滞留时间短的问题，可以增加其在鼻腔内的滞留时间，减少纳米粒子的二次流失， 该包载药物的纳米粒团簇可以在鼻腔内缓慢释放药物聚集成较高浓度，然后经鼻脑通路更 好地进入脑内，从而达到更好的治疗效果，并且由于纳米材料不会进入脑内，该系统有较 好的生物相容性。这个系统可以通过包载各种治疗脑部疾病药物的方式应用于各种脑病的 治疗中。
附图说明
图1为纳米粒包载染料在鼻腔上的滞留和分布荧光图；
图2为纳米粒包载染料在鼻腔上滞留的荧光强度百分比分析图；
图3为PLA-Cy5各组在脑组织上的分布、定量图；
图4为C6各组在脑组织上的分布、定量图；
图5为不同组别对脑缺血再灌注大鼠的治疗效果；
图6为不同组别脑缺血再灌注大鼠行为学评分结果。
具体实施方式
下面对本发明的具体实施方式作进一步说明。在此需要说明的是，对于这些实施方式 的说明用于帮助理解本发明，但并不构成对本发明的限定。此外，下面所描述的本发明各 个实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，下述实施例中所用的试验 材料，如无特殊说明，均为可通过常规的商业途径购买得到。
实施例1生物粘附纳米粒子簇PLA-Cy7.5/Al-PHNPs-PAMAM(载染料)的制备
采用乳液法制备Al-PHNPs，具体包括以下步骤：
(1)HPG(超支化聚缩水甘油醚)的合成：
在氩气保护下将4.67mmol 1,1,1-三羟甲基丙烷(TMP)加入到95℃油浴的烧瓶中，完全溶解后，添加1.4mmol KOCH3(甲醇钾)，将烧瓶连接至真空泵，并将烧瓶抽至真空 状态，10分钟后再充氩气，并一直充满整个烧瓶，反应12个半小时，同时用微量注射器 泵在这12个半小时内添加25mL缩水甘油，得到粗HPG。将粗HPG溶解在甲醇中，并 用丙酮沉淀，重复此过程两次或三次来纯化HPG；然后通过透析袋(500-1000D)在超 纯水中透析HPG，以去除一些小分子量的HPG，每5小时更换两次水，一共透析10h； 最后，加丙酮沉淀HPG再次，并将HPG置于真空下在85℃下干燥8-10h即得。
(2)PLA-HPG合成：
将5g PLA(聚乳酸)溶解在DCM(二氯甲烷，用量为能够溶解PLA的最小体积) 中，并将2.3g HPG溶解在23mL DMF(N,N-二甲基甲酰胺)中，合并两溶液，然后加 入3A分子筛(经高温活化后使用)使其干燥；干燥后转移至反应瓶中，并往反应瓶中加 入0.08mL N,N'-二异丙基碳二酰亚胺(DIC)和13.5mg 4-二甲氨基吡啶(DMAP)，在 室温下搅拌反应5天；反应后往反应瓶中加入冷乙醚进行沉淀，并通过离心收集沉淀物， 所得沉淀重新溶解在DCM中，并用冷乙醚再次沉淀，最后在真空下干燥2天即得。
(3)PLA-Cy7.5合成：
将1.95g PLA溶解在DCM(用量为能够溶解PLA的最小体积)中，再加入15mg Cy7.5和0.02mL DIC，在室温下搅拌反应一天，然后加入冷乙醚进行沉淀，并通过离心收集沉 淀物，所得沉淀在真空下干燥2天即得。
(4)用EA(乙酸乙酯)配制浓度为100mg/mL的PLA-HPG溶液和浓度为50mg/mL 的PLA-Cy7.5溶液；然后加入0.225mL的PLA-HPG溶液、0.050mL的PLA-Cy7.5溶液， 再另外加入0.300mL的EA以及0.300mL的DMSO，涡旋混合均匀后将总计0.875mL的 混合溶液边涡旋边转移至2mL超纯水中，随后转移至超声破碎仪中，超声三次(设置功 率为65W，每次超声时间10s，每次超声完毕应立即置于冰上冷却)后得到小体积纳米 乳。然后将小体积纳米乳转移至10mL处于搅拌状态下的超纯水中，搅拌三分钟；搅拌 后将全部溶液转移至圆底烧瓶内，室温下旋转蒸发至无气泡产生，得到包载染料的PHNPs 粗品。
(6)将粗产品转移至15mL、100kd的超滤管中，置于离心机中离心一次(4℃，4500rpm，15min)，总共重复超滤离心三次。离心结束后加超纯水润洗收集纳米粒子， 尽可能将超滤管内膜、内壁的PHNPs洗出，即得包载染料的非粘附性纳米粒 PLA-Cy7.5/PHNPs(即nonadhesive NPs，非粘附性NPs)。
(7)采用氧化还原法制备包载染料的Al-PHNPs(即bioadhesive nanoparticle，生物 粘附纳米颗粒)：将一体积的高碘酸钠溶液(0.1mol/L)加至相同体积包载染料的PLA-Cy7.5/PHNPs中，上下颠倒振摇，反应2min；再加入1体积的亚硫酸钠溶液(0.2mol/L) 终止反应；然后转移至超滤管中离心一次(4℃，4500rpm，15min)，水洗两次，总共重 复超滤离心三次；加超纯水润洗收集纳米粒子，尽可能将超滤膜、内壁的包载染料的 Al-PHNPs洗出，即得包载染料的生物粘附性纳米粒PLA-Cy7.5/Al-PHNPs。
(8)使用浓度为100mg/mL的PAMAM溶液(溶剂为生理盐水)与上述制备成的 PLA-Cy7.5/Al-PHNPs按照2:3的体积比混合均匀即得PLA-Cy7.5/Al-PHNPs-PAMAM纳米 粒子簇。
实施例2生物粘附纳米粒子簇DEX/Al-PHNPs-PAMAM(载药)的制备
制备方法同实施例1，不同点在于：将PLA-Cy5替换为药物DEX(右美托咪定)，即 将步骤(4)中混合溶液的制备改变为：用EA(乙酸乙酯)配制浓度为100mg/mL的 PLA-HPG溶液，用DMSO配置浓度为10mg/mL的DEX溶液；然后加入0.225mL的 PLA-HPG溶液、0.250mL的DEX溶液、再另外加入0.300mL的EA以及0.100mL的DMSO 制成混合溶液。
实验例1生物粘附纳米粒子簇PLA-Cy7.5/Al-PHNPs-PAMAM在大鼠鼻腔内的滞留时间 考察
为评估实施例1制备的纳米粒子簇PLA-Cy7.5/Al-PHNPs-PAMAM在体内鼻腔上的滞留和分布情况(以实施例1制备的PLA-Cy7.5/PHNPs以及PLA-Cy7.5/Al-PHNPs为对照)， 分别将纳米粒子浓度为10mg/mL且荧光亮度相同的PLA-Cy7.5/PHNPs、 PLA-Cy7.5/Al-PHNPs按照上下鼻孔穿插给药的方法，每次给药5uL，一共10次给药； PLA-Cy7.5/Al-PHNPs-PAMAM按上下鼻孔穿插给药时，则先给药4次Al-PHNPs，再给药 4次PAMAM，最后再给药2次Al-PHNPs到雄性SD大鼠鼻孔中，每次给药5uL，每次 向每个鼻孔给药间隔10s。并分别在不同时间点(10min,4h,8h,12h)，用小动物活体成像 仪(Perkin Elmer小动物活体成像系统，型号为Lumina XR SeriesⅢ)观察鼻腔中上纳米 粒子的残留情况。此外，还通过小动物活体成像处理软件(成像仪配套软件)对不同时间 点(10min,4h,8h,12h)下纳米粒子在鼻腔内的荧光强度进行分析。
如图1、图2所示，与PLA-Cy7.5/PHNPs和PLA-Cy7.5/Al-PHNPs相比， PLA-Cy7.5/Al-PHNPs-PAMAM在12h内于大鼠鼻腔的保留度更高，可见，生物粘性纳米 粒BNP能够在小鼠鼻腔内滞留更长的时间。
实验例2生物粘附纳米粒子簇PLA-Cy5/Al-PHNPs-PAMAM与C6/Al-PHNPs-PAMAM 在大鼠脑内的分布考察
为评估包载药物的纳米粒子簇在大鼠脑内的分布情况,以PLA-Cy5模拟纳米材料骨架， 以香豆素6模拟包载药物，设置Free PLA-Cy5、PLA-Cy5/Al-PHNPs、 PLA-Cy5/Al-PHNPs-PAMAM以及Free C6、C6/Al-PHNPs、C6/Al-PHNPs-PAMAM(制备 方法同DEX/Al-PHNPs-PAMAM)6组，分别将这些纳米药物按照上下鼻孔穿插给药的方 法，每次给药5uL，一共10次，而Al-PHNPs-PAMAM组则是先给药4次Al-PHNPs，再 给药4次PAMAM，最后再给药2次Al-PHNPs到雄性SD大鼠鼻孔中(也是每次给药5uL)。 并在7h后心脏灌流，取出大鼠脑组织，用小动物活体成像仪(Perkin Elmer小动物活体 成像系统，型号为Lumina XR SeriesⅢ)观察脑中纳米粒子的分布情况。此外，还通过小 动物活体成像处理软件(成像仪配套软件)对不同组的纳米粒子在脑的荧光强度进行分析。
由图3、图4可以看出，代表纳米材料骨架的PLA-Cy5不能进入脑内，而模拟药物 的香豆素6可以进入脑内，并且C6/Al-PHNPs-PAMAM这一组的脑内荧光有更好的分布。 实验例3载药生物粘附纳米粒子簇DEX/Al-PHNPs-PAMAM对缺血再灌注损伤大鼠的治 疗效果
对180-220gSD大鼠(购买自广州医科大学动物中心)手术得MCAO模型(构建方 法具体参照“吴浩,吉训明,赵喜庆,等.改良大鼠MCAO模型的建立[J].中华实验外科杂 志,2006,23(12):1553-1554.”)，将造模成功的SD大鼠随机分为6组【假手术组、 DEX/Al-PHNPs组、Free DEX组、静脉注射DEX组、DEX/Al-PHNPs组以及 DEX/Al-PHNPs-PAMAM组】，在MCAO模型建立30min后分别给药，其中，静脉注射DEX组(i.v.DEX)通过尾静脉注射的方式将50uL浓度为0.5mg/mL的DEX注射到大鼠 体内，DEX/Al-PHNPs组、DEX/Al-PHNPs组和Free DEX组分别将浓度为10mg/mL的 DEX/PHNPs、DEX/Al-PHNPs和0.5mg/mL浓度的Free DEX按照上下鼻孔穿插给药的方 法进行给药，每次给5uL，一共10次；DEX/Al-PHNPs-PAMAM组则按照上下鼻孔穿插 给药的方法先给药4次DEX/Al-PHNPs，再给药4次PAMAM，最后再给药2次 DEX/Al-PHNPs到雄性SD大鼠鼻孔中(也是每次给5uL)。给药30min后拔栓，造成大 鼠缺血后再灌注损伤，24h后观察其行为，并按照Longa评分法进行评分，评分后处死大 鼠，取材进行后续的药效学实验。取出大鼠脑后进行切片，用2％TTC染色液进行染色， 观察结果，其中被染成红色的部分是正常部分，没有被染成红色的是缺血部分。
由图5的TTC染色结果图以及图6的评分结果可以看出，给予 DEX/Al-PHNPs-PAMAM后大鼠脑的缺血面积最小，治疗效果最好。
综合实验例1-3可见，在PLA-HPG生物粘附性纳米粒的基础上开发的 Al-PHNPs-PAMAM可以很好地粘附在鼻腔，并且能在纳米载体材料不进入脑内的情况下 使药物聚集进入脑内，发挥治疗效果。
以上对本发明的实施方式作了详细说明，但本发明不限于所描述的实施方式。对于本 领域的技术人员而言，在不脱离本发明原理和精神的情况下，对这些实施方式进行多种变 化、修改、替换和变型，仍落入本发明的保护范围内。
Claims (7)
1.一种用于治疗脑部疾病的纳米粒子簇Al-PHNPs-PAMAM的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、HPG的合成：在充满绝水的惰性气体氛围下将1,1,1-三羟甲基丙烷置于90-100℃油浴中直至完全溶解之后加入甲醇钾，并继续抽真空，10-30分钟后再充满惰性气体，然后在反应12个半小时内添加25mL缩水甘油，得到粗HPG，粗HPG经过纯化后得到HPG；
S2、PLA-HPG合成：将PLA和HPG分别溶解在有机溶剂中，合并两溶液，干燥后再加入N,N-二异丙基碳二酰亚胺和4-二甲氨基吡啶，在室温下搅拌反应4-6天，反应后经沉淀制得；
S3、药物/PHNPs的制备：用EA(乙酸乙酯)配制PLA-HPG溶液，DMSO配制药物溶液，所述药物为用于治疗脑部疾病的药物，再另外加入EA以及DMSO，将PLA-HPG溶液、药物溶液、EA以及DMSO按0.225：0.050-0.250：0.300：0.100-0.300的体积比混合均匀后转移至一定量水中，经三次超声后得到小体积纳米乳，再次将小体积纳米乳转移至处于搅拌状态下的水中，并旋转蒸发至无气泡产生，即得药物/PHNPs粗品，粗品经纯化后得到非生物粘附性纳米粒-药物/PHNPs；
S4、药物/Al-PHNPs的制备：将高碘酸钠溶液加至药物/PHNPs中反应2-3min，所述高碘酸钠溶液的浓度为0.1mol/L，所述高碘酸钠溶液与药物/PHNPs的体积比为1-3:1；再加入亚硫酸钠溶液终止反应，最后经纯化制得治疗脑部疾病的生物粘附性纳米粒-药物/Al-PHNPs；
S5、Al-PHNPs-PAMAM的制备：将步骤S4的药物/Al-PHNPs与PAMAM混合均匀后制备得到Al-PHNPs-PAMAM纳米子簇；
步骤S5中，在与药物/Al-PHNPs混合前，先将PAMAM制成浓度为100mg/mL溶液，PAMAM溶液与药物/Al-PHNPs的体积比为2:3；
步骤S3中，PLA-HPG溶液的浓度为100mg/mL，药物溶液的浓度为10-50mg/mL。
2.根据权利要求1所述的一种用于治疗脑部疾病的纳米粒子簇Al-PHNPs-PAMAM的制备方法，其特征在于，所述脑部疾病为脑缺血再灌注损伤。
3.根据权利要求1所述的一种用于治疗脑部疾病的纳米粒子簇Al-PHNPs-PAMAM的制备方法，其特征在于，所述用于治疗脑部疾病的药物包括右美托咪定（DEX）。
4.根据权利要求1所述的一种用于治疗脑部疾病的纳米粒子簇Al-PHNPs-PAMAM的制备方法，其特征在于，Al-PHNPs-PAMAM的给药方法为：药物/Al-PHNPs和PAMAM在鼻腔内分别给药后混匀。
5.根据权利要求4所述的一种用于治疗脑部疾病的纳米粒子簇Al-PHNPs-PAMAM的制备方法，其特征在于，Al-PHNPs-PAMAM的给药方法为：先将六分之四的药物/Al-PHNPs在鼻腔内分4次给药，再将PAMAM按4次给药，最后再将剩下的药物/Al-PHNPs分2次给药，药物/Al-PHNPs每次给药的量以及PAMAM每次给药的量均为等量给药。
6.根据权利要求1所述的一种用于治疗脑部疾病的纳米粒子簇Al-PHNPs-PAMAM的制备方法，其特征在于，步骤S3和S4中的纯化均为离心三次后再水洗出纳米粒，每次离心的温度为4℃，转速为4500rpm，时间为15min。
7.采用权利要求1-6任一项所述的制备方法制备得到的用于治疗脑部疾病的纳米粒子簇Al-PHNPs-PAMAM。
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