CN115737454A - 一种双菌复合提取物及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种双菌复合提取物及其制备方法与应用，所述双菌复合提取物包括乳酸菌提取物、酵母菌提取物、槲皮素和硒元素。通过对乳酸菌和酵母菌共同培养后进行提取，得到酵母菌和乳酸菌复合提取物，其中双菌复合提取物中含有槲皮素和硒元素，在多种成分的共同作用下使得双菌复合提取物同时具有美白和抗衰的功效。
Description
技术领域
本发明涉及生物发酵领域，具体涉及一种双菌复合提取物及其制备方法与应用。
背景技术
随着人们生活水平的不断提高，人们在得到基础物质水平的满足之后，还追求享受资料消费，特别是对于个人形象方面，追求比如美白、抗衰老等功效的化妆品，这为美白抗衰老的功能性个人护理品提供了宽广的市场前景。
目前用于美白、抗衰老的现有技术有多种。例如，专利CN108653031A公开了一种美白淡斑霜及其制备方法，通过欧丁香提取物、麒麟竭提取物、七叶树提取物、青皮竹茎提取物、谷维素等来抑制或阻止黑皮肤黑色素的生成、转移，有效地达到美白提亮效果。专利CN112545961A公开了一种美白护肤化妆品的制备方法，通过复配颠茄草和莴苣缬草，减少黑色素的形成和降低酪氨酸酶的活性，使皮肤光洁透亮。然而，当如上所述化妆品的效果不明显。另外，一些现有的用于美白抗衰的产品，成分单一或者所选取的成分组合物搭配不合理，协同效果差，无法满足消费者的需求。
发明内容
本发明的主要目的是提出一种双菌复合提取物及其制备方法与应用，旨在提供一种具有优异的抗氧化、美白和抗衰效果的双菌复合提取物。
为实现上述目的，本发明提出一种双菌复合提取物，所述双菌复合提取物包括乳酸菌提取物、酵母菌提取物、槲皮素和硒元素。
可选地，所述硒元素的质量百分含量为0.1～0.3％，槲皮素的质量百分含量为5～8％。
此外，本发明还提出一种如上所述的双菌复合提取物的制备方法，所述的双菌复合提取物的制备方法包括以下步骤：
S10、在第一培养基中培育酵母细胞，并挑选富含槲皮素的酵母菌；
S20、将所述酵母菌与乳酸菌接种到第二培养基中发酵；
S30、分离所述第二培养基中酵母菌和乳酸菌，得双菌混合物；
S40、将所述双菌混合物配制成质量百分比为10～15％的双菌悬浮液，进行灭活；
S50、将灭活后的所述双菌悬浮液与至少一种蛋白酶或肽酶混合，反应后收集上清液，得双菌复合粗提物；
S60、对所述双菌复合粗提物进行膜分离、升温处理、脱色和灭菌，得双菌复合提取物。
可选地，步骤S10中，所述第一培养基中包含质量百分比为10～15％的芦丁；和/或，
所述第一培养基的pH为3～4；和/或，
在所述第一培养基中培育酵母细胞的培养时间为12～16h。
可选地，步骤S20中，所述酵母菌和所述乳酸菌的接种质量比为1:(2～6)。
可选地，步骤S30中，所述第二培养基中包含有质量百分比为3～5％的硒元素和质量百分比为8～9％的芦丁。
可选地，步骤S50中，所述反应时间为12～16h。
可选地，步骤S60中，所述膜分离采用的是截留分子量为20～500KD的超滤膜；和/或，
所述升温处理中，温度为90～100℃，保持时间为1～1.5h。
再者，本发明还提出一种如上所述的双菌复合提取物或者如上所述的制备方法制备得到的所述双菌复合提取物的应用，所述双菌提取物用于制备化妆品。
本发明技术方案中，在第一培养基中培养酵母菌并添加一定量的芦丁，芦丁在酵母细胞的吸附和转化形成槲皮素，使得酵母细胞富含槲皮素，再将富含槲皮素的酵母细胞与乳酸菌进行共同培养，同时添加一定量的硒元素，使得无机硒在酵母菌和乳酸菌的共同作用下形成有机硒，有利于硒元素作用在皮肤上，进一步地通过分离提取得到双菌复合提取物，同时含有一定量的槲皮素和硒元素，使得所制备的双菌复合提取物同时具有美白和抗衰的功效，而且由于都是生物提取物，因此能够避免对皮肤的刺激作用，能够更好的应用到皮肤上。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅为本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为本发明提供的双菌复合提取物的制备方法的一实施例的流程示意图；
本发明目的的实现、功能特点及优点将结合实施例，参照附图做进一步说明。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。另外，全文中出现的“和/或”的含义，包括三个并列的方案，以“A和/或B”为例，包括A方案、或B方案、或A和B同时满足的方案。此外，各个实施例之间的技术方案可以相互结合，但是必须是以本领域普通技术人员能够实现为基础，当技术方案的结合出现相互矛盾或无法实现时应当认为这种技术方案的结合不存在，也不在本发明要求的保护范围之内。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
目前用于美白、抗衰老的现有技术有多种。例如，专利CN108653031A公开了一种美白淡斑霜及其制备方法，通过欧丁香提取物、麒麟竭提取物、七叶树提取物、青皮竹茎提取物、谷维素等来抑制或阻止黑皮肤黑色素的生成、转移，有效地达到美白提亮效果。专利CN112545961A公开了一种美白护肤化妆品的制备方法，通过复配颠茄草和莴苣缬草，减少黑色素的形成和降低酪氨酸酶的活性，使皮肤光洁透亮。然而，当如上所述化妆品的效果不明显。另外，一些现有的用于美白抗衰的产品，成分单一或者所选取的成分组合物搭配不合理，协同效果差，无法满足消费者的需求。
鉴于此，本发明人进行了广泛的努力，以开发一种双菌复合提取物及其制备方法，该双菌复合提取物包含有槲皮素、酵母菌提取物、乳酸菌提取物及硒元素，通过各组分间的协同作用，使得复合提取物具有优异的抗氧化、美白和抗衰的功效，且对皮肤无刺激性，有望在化妆品领域得到广泛应用。所述双菌复合提取物包括乳酸菌提取物、酵母菌提取物、槲皮素和硒元素。
乳酸菌是一类能够利用可发酵碳水化合物产生大量乳酸的细菌的通称。乳酸菌是益生菌的主要菌群，是人体肠道菌群中的重要组成部分，能够维持人类身体健康、提高生活质量，被公认为是食品安全级微生物。乳酸菌发酵提取物中含有的营养成分非常丰富，能够促进细胞新陈代谢的速度使肌肤细胞迅速的更新，抑制黑色素的沉淀，有效改善雀斑，色斑等形成，坚持使用乳酸菌发酵提取物可以使肌肤更加的美白透亮。
酵母菌提取物酵是酵母细胞在有控制的外界压力(如一定剂量紫外线照射)培养条件下产生的代谢产物，经细胞破壁提取得来，又称为酵母活细胞衍生物(LiveCellYeastDerivatives，简称LYCD)。酵母这种典型的真核细胞当受到外界压力刺激时所做出的反应与人类纤维原细胞有许多相似之处，这为该活性物成分在化妆品中应用提供了理论基础。酵母溶胞物提取物是由氨基酸，糖肽，核苷酸等低相对分子质量的物质组成，该提取物作为一种奇特的保湿剂，能增加皮肤细胞中的新生蛋白质对水分的吸收，促进皮肤对氧的利用，从而使皮肤丰满。该提取物还具有促进透明质酸合成，促进弹性蛋白和胶原质的合成，抑制自由基，增加细胞有氧呼吸，舒缓、促进伤口愈合等功效。人体测试表明，该提取物能增强皮肤保湿性，增强皮肤紧致度，改善皮肤UV损伤，为皮肤重新注入能量，让肌肤保持健康状态。
槲皮素通过清除自由基可有效地减轻炎症，而且还可以保护受氧化应激对细胞带来的影响，在线的过程当中都会产生自由基，槲皮素可以有效的保护间受损细胞，事实上，槲皮素苷元和代谢，可以保护细胞所引起的损害，另外，槲皮素还可以有效的抑制体内的酶，有抗炎的作用，再者槲皮素还有一定的抗氧化作用，以及引导激酶和抑制细胞，从而诱导细胞凋亡的作用，所以对于预防癌症也有非常好的作用，槲皮素能发挥出抗癌作用。
硒元素是人体内最重要的微量元素之一，是公认的抗癌元素，并被科学家称之为人体微量元素中的“抗癌之王”，近年来硒对人体的保健作用受到越来越多的人关注，但硒元素的美容功效也是不容忽视的。硒元素在细胞内通过谷胱甘肽过氧化物酶的作用破坏机体中存在的过氧化物，防止有害自由基的形成以及对不饱和脂肪的攻击，这不仅对全身细胞有作用，同样对表皮细胞及皮下组织也有作用，可以延缓皮肤的衰老死亡。
本申请的技术方案中，通过对乳酸菌和酵母菌共同培养后进行提取，得到酵母菌和乳酸菌复合提取物，其中双菌复合提取物中含有槲皮素和硒元素，在多种成分的共同作用下使得双菌复合提取物同时具有美白、抗衰和抗氧化的功效。
进一步地，所述硒元素的质量百分含量为0.1～0.3％，槲皮素的质量百分含量为5～8％，在上述比例下，使得双菌复合提取物对皮肤的抗衰和抗氧化的效果更好。
此外，如图1所示，本申请还提出了一种上述所述双菌复合提取物的制备方法，包括以下步骤：
S10、在第一培养基中培育酵母细胞，并挑选富含槲皮素的酵母菌；
用于使酵母培养的培养基和方法在本领域广泛知晓且可从不同制造商购得。合适的培养基包含例如SigmaAldrich(Taufkirchen,德国)的YPD培养基。大量其他培养基可从不同制造商购得。酵母细胞可在本领域知晓的标准条件下培养。例如，所述细胞可在烧瓶中25-35℃间的温度下正常培养。可在搅拌下持续培养直到达到预定的细胞密度。细胞密度优选通过在600nm处的光密度(OD600)测量。优选在使细胞经受非生物胁迫前将细胞培养至OD600为0.8到1.0。
酵母细胞具有很好的吸附性能，能吸附重金属、酚类化合物、硫代化合物、芳香族化合物等，酵母细胞吸附重金属的特性已广泛地应用于污水处理，其表面的强吸附能力，也可用于食品生产中，用于改善食品的风味及口感，提高其稳定性，因此在培养酵母菌的过程中，在第一培养基中加入适量的芦丁溶液，有利于酵母菌对芦丁的吸附和转化，因此在酵母细胞体内芦丁能够被转化为槲皮素，然后再进行培养一段时间后，对所得酵母细胞进行挑选，获得富含槲皮素的酵母菌，对于酵母细胞的挑选方式属于本领域常规的手段，在这里不做过多限制。
S20、将所述酵母菌与乳酸菌接种到第二培养基中发酵；
将上述得到的富含槲皮素的酵母菌与乳酸菌按照一定的质量比接种到第二培养基中，同样对于用于双菌培养的培养基和方法在本领域广泛知晓且可从不同制造商购得。由于无机硒具有一定的毒性，不能直接将无机硒作用到皮肤上，但是硒元素可以延缓皮肤的衰老死亡，是一种很好护肤品添加金属元素，因此为了使硒元素能够更好的发挥作用，在双菌共同培养的过程中，向第二培养基中添加一定量的硒元素，使得在酵母菌和乳酸菌的共同作用下能够将硒元素转化为有机硒元素，从而可以直接作用在皮肤上发挥硒元素的抗衰老的性能。
S30、分离所述第二培养基中酵母菌和乳酸菌，得双菌混合物；
为了进一步得到双菌复合提取物，在步骤S30中，需要将第二培养基中培养获得的双菌进行分离，对于酵母菌和乳酸菌的分离方法属于本领域的常规分离工艺，这里不做过多的限制。但是需要注意的是，当分离出酵母菌和乳酸菌的混合物后，用碱性缓冲液、比如氢氧化钠缓冲液洗涤细胞。这样的洗涤步骤可用于减少来自该工艺的双菌复合提取物的味道。如果本发明方法包括用碱性缓冲液洗涤的步骤，则该方法也包括至少一个随后的用水洗涤步骤以确保残留的碱性缓冲液被移除。例如，如果双菌混合物用一定体积的碱性缓冲液洗涤，则其随后用两倍体积的水洗涤。
S40、将所述双菌混合物配制成质量百分比为10～15％的双菌悬浮液，进行灭活；
将酵母菌和乳酸菌的混合物配置成悬浮液，更有利于双菌提取物的提取，当双菌悬浮液的浓度过大时，会导致提取的物质不够彻底，容易产生沉淀，然而当双菌悬浮液的浓度过小时，会使双菌复合提取物中有效成分过低，不能起到很好的护肤效果，因此在本实施例中将双菌混合物配制成质量百分比为10～15％的双菌悬浮液，然后再进行灭活，避免双菌继续繁殖而对后续的提取产生影响。
S50、将灭活后的所述双菌悬浮液与至少一种蛋白酶或肽酶混合，反应后收集上清液，得双菌复合粗提物；
灭活后需要对乳酸菌和酵母菌进行酶解，出于此目的，用至少一种对使酵母细胞和乳酸菌细胞壁碎裂有效的肽酶培育双菌悬浮液。肽酶指催化蛋白质或肽降解的蛋白水解活性酶，包括肽酶和蛋白酶二者。用于本发明方法中合适的肽酶包括内肽酶和外肽酶两种，内肽酶指能降解蛋白质或肽中的内部肽键的任何酶，而外肽酶为能降解位于蛋白质或肽末端之一处的肽键的酶。因此，溶解可以使用至少一种内肽酶，也可以使用至少一种外肽酶或者使用至少一种内肽酶和至少一种外肽酶。酵母菌和乳酸菌被肽酶处理破坏后，细胞内的有机成分会溶解在溶液中，而且也会含有细胞壁组分、细胞器和未溶解细胞，因此需要对溶解后的物质进行离心处理，以得到溶液中溶解的有机成分。
需要说明的是，在本发明工艺中的肽酶可源于不同来源。例如，肽酶可来源于真菌、植物或动物来源。由不同制造商提供的其他酶也可使用。
S60、对所述双菌复合粗提物进行膜分离、升温处理、脱色和灭菌，得双菌复合提取物。
通过膜分离、升温处理、脱色和灭菌，使得所获得的双菌复合提取物的成分更加有利于皮肤的吸收和更加安全。
为了使酵母菌能够吸附和吸收槲皮素，在步骤S10中，所述第一培养基中包含质量百分比为10～15％的芦丁，通过在第一培养基中加入适量的芦丁，在酵母菌的作用下，芦丁能够被酶解为槲皮素，从而吸附到酵母细胞的体内。
所述第一培养基的pH为4～5，通过将第一培养基的pH调整为4～5时，更有利于酵母菌的繁殖和芦丁的转化。
在所述第一培养基中培育酵母细胞的培养时间为12～16h，通过将酵母菌的培养时间控制在12～16h之间，有利于芦丁的进一步酶解。
为了保证乳酸菌和酵母菌混合提取时有效成分的质量，在步骤S20中，所述酵母菌和所述乳酸菌的接种质量比为1:(2～6)，在上述比例下，能够保证酵母菌和乳酸菌在同一培养基中共同繁殖，进一步能够保证双菌复合提取物的有效成分。
为了使得硒元素能够更好的应用到皮肤上，在步骤S30中，所述第二培养基中包含有质量百分比为3～5％的硒元素，将上述比例的硒元素添加到第二培养基中，通过酵母菌和乳酸菌在生长过程中对硒元素的吸收和转化，使硒与酵母体内或乳酸体内的蛋白质和多糖有机结合，进一步地在乳酸菌和酵母菌的共同作用下，从而能够消除无机硒对皮肤的刺激作用。
进一步地，在第二培养基中继续加入质量百分比为8～9％的芦丁，用以保证酵母菌体内槲皮素的含量，同时通过酵母和乳酸菌在生长过程中共同对芦丁的吸收和转化，使得槲皮素更有利于被人体吸收。
为了使得酵母菌和乳酸菌酶解的效果更好，对于溶解的时间进行了优化，当酶解时间为12～16h时，酶解的效果更好。
为了保证双菌提取物更有利于人体的吸收，在步骤S60中，所述膜分离采用的是截留分子量为20～500KD的超滤膜，在该范围下，保证了双菌提物中蛋白质及核酸等的分子量在20～500KD，而处于此分子量范围内的蛋白质及核酸具有较稳定的理化性质，不易沉淀，而且具有易被肌肤吸收等优点，适合应用于化妆品领域。所述升温处理中，温度为90～100℃，保持时间为1～1.5h，此温度及时间条件，保证了原料脱色前美拉德反应充分、大分子蛋白变性充分以能够分离去除。
以下结合具体实施例和附图对本发明的技术方案作进一步详细说明，应当理解，以下实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1
(1)将YPD培养基与含有10％的芦丁溶液混合均匀，并将培养基的pH调为4，再向培养基中接种酵母菌，置于培养箱中，在37℃下培养12h，获得富含槲皮素的酵母菌；
(2)采用发酵工业通用的液体深层培养罐，根据酵母菌和乳酸菌的需要选择适宜生长的第二培养基，根据需要在第二培养基添加适量的硒元素和芦丁，使得硒元素的含量为3％、槲皮素的含量为9％，再将酵母菌和乳酸菌按照质量比为1:2的比例接种到第二培养基中，在37℃下培养24h；
(3)然后取出培养基置于无菌工作台上，对培养基中的乳酸菌和酵母菌进行分离，得到双菌混合物；
(4)将分离得到的双菌混合物配制成质量百分数为10％的双菌悬浮液，并在70℃的温度下进行灭活处理；
(5)向灭活的的双菌混合物中加入适量的肽酶(Corolase 7089,AB EnzymesGmbH,Darmstadt,德国)，在剧烈搅拌下于55℃培育12小时。使用10％氢氧化钠溶液维持pH在pH 7。然后使用标准实验室离心机(离心力5000g，离心10分钟)收集得到上清液，得到双菌复合粗提物；
(6)首先采用截留分子量为500KD的陶瓷膜对双菌复合粗提物进行膜分离，收集透过上清液，再将上清液真空浓缩至干物质质量百分含为10.2％，100℃保温处理1h，再采用盐酸调节pH为4.0，温度调节为20℃，透过大孔吸附树脂柱脱色，收集脱色液，在线检测410nm波长吸光度，待脱色液吸光度大于0.1后停止收集，最后采用超高温瞬时灭菌机进行灭菌，135℃，加热3-5s，灭菌后进行灌装，得到双菌复合提取物。
实施例2
(1)将YPD培养基与含有12％的芦丁溶液混合均匀，并将培养基的pH调为5，再向培养基中接种酵母菌，置于培养箱中，在37℃下培养14h，获得富含槲皮素的酵母菌；
(2)采用发酵工业通用的液体深层培养罐，根据酵母菌和乳酸菌的需要选择适宜生长的第二培养基，根据需要在第二培养基添加适量的硒元素和芦丁，使得硒元素的含量为4％、芦丁的含量为8％，再将酵母菌和乳酸菌按照质量比为1:4的比例接种到第二培养基中，在37℃下培养24h；
(3)然后取出培养基置于无菌工作台上，对培养基中的乳酸菌和酵母菌进行分离，得到双菌混合物；
(4)将分离得到的双菌混合物配制成质量百分数为10％的双菌悬浮液，并在70℃的温度下进行灭活处理；
(5)向灭活的的双菌混合物中加入适量的肽酶(Corolase 7089,AB EnzymesGmbH,Darmstadt,德国)，在剧烈搅拌下于55℃培育14小时。使用10％氢氧化钠溶液维持pH在pH 7。然后使用标准实验室离心机(离心力5000g，离心10分钟)收集得到上清液，得到双菌复合粗提物；
(6)首先采用截留分子量为20KD的陶瓷膜对双菌复合粗提物进行膜分离，收集透过上清液，再将上清液真空浓缩至干物质质量百分含为10.2％，98℃保温处理1.2h，再采用盐酸调节pH为4.0，温度调节为20℃，透过大孔吸附树脂柱脱色，收集脱色液，在线检测410nm波长吸光度，待脱色液吸光度大于0.1后停止收集，最后采用超高温瞬时灭菌机进行灭菌，135℃，加热3-5s，灭菌后进行灌装，得到双菌复合提取物。
实施例3
(1)将YPD培养基与含有13％的芦丁溶液混合均匀，并将培养基的pH调为5，再向培养基中接种酵母菌，置于培养箱中，在37℃下培养16h，获得富含槲皮素的酵母菌；
(2)采用发酵工业通用的液体深层培养罐，根据酵母菌和乳酸菌的需要选择适宜生长的第二培养基，根据需要在第二培养基添加适量的硒元素和芦丁，使得硒元素的含量为5％、芦丁的含量为9％，再将酵母菌和乳酸菌按照质量比为1:6的比例接种到第二培养基中，在37℃下培养24h；
(3)然后取出培养基置于无菌工作台上，对培养基中的乳酸菌和酵母菌进行分离，得到双菌混合物；
(4)将分离得到的双菌混合物配制成质量百分数为10％的双菌悬浮液，并在70℃的温度下进行灭活处理；
(5)向灭活的的双菌混合物中加入适量的肽酶(Corolase 7089,AB EnzymesGmbH,Darmstadt,德国)，在剧烈搅拌下于55℃培育16小时。使用10％氢氧化钠溶液维持pH在pH 7。然后使用标准实验室离心机(离心力5000g，离心10分钟)收集得到上清液，得到双菌复合粗提物；
(6)首先采用截留分子量为300KD的陶瓷膜对双菌复合粗提物进行膜分离，收集透过上清液，再将上清液真空浓缩至干物质质量百分含为10.2％，95℃保温处理1.4h，再采用盐酸调节pH为4.0，温度调节为20℃，透过大孔吸附树脂柱脱色，收集脱色液，在线检测410nm波长吸光度，待脱色液吸光度大于0.1后停止收集，最后采用超高温瞬时灭菌机进行灭菌，135℃，加热3-5s，灭菌后进行灌装，得到双菌复合提取物。
实施例4
(1)将YPD培养基与含有15％的芦丁溶液混合均匀，并将培养基的pH调为4，再向培养基中接种酵母菌，置于培养箱中，在37℃下培养15h，获得富含槲皮素的酵母菌；
(2)采用发酵工业通用的液体深层培养罐，根据酵母菌和乳酸菌的需要选择适宜生长的第二培养基，根据需要在第二培养基添加适量的硒元素和芦丁，使得硒元素的含量为3％、芦丁的含量为8％，再将酵母菌和乳酸菌按照质量比为1:5的比例接种到第二培养基中，在37℃下培养22h；
(3)然后取出培养基置于无菌工作台上，对培养基中的乳酸菌和酵母菌进行分离，得到双菌混合物；
(4)将分离得到的双菌混合物配制成质量百分数为10％的双菌悬浮液，并在70℃的温度下进行灭活处理；
(5)向灭活的的双菌混合物中加入适量的肽酶(Corolase 7089,AB EnzymesGmbH,Darmstadt,德国)，在剧烈搅拌下于55℃培育15小时。使用10％氢氧化钠溶液维持pH在pH 7。然后使用标准实验室离心机(离心力5000g，离心10分钟)收集得到上清液，得到双菌复合粗提物；
(6)首先采用截留分子量为100KD的陶瓷膜对双菌复合粗提物进行膜分离，收集透过上清液，再将上清液真空浓缩至干物质质量百分含为10.2％，90℃保温处理1.5h，再采用盐酸调节pH为4.0，温度调节为20℃，透过大孔吸附树脂柱脱色，收集脱色液，在线检测410nm波长吸光度，待脱色液吸光度大于0.1后停止收集，最后采用超高温瞬时灭菌机进行灭菌，135℃，加热3-5s，灭菌后进行灌装，得到双菌复合提取物。
对比例1
将实施例1中的酵母菌删除，其它条件不变，得到对比例1样品。
对比例2
将实施例1中的乳酸菌删除，其它条件不变，得到对比例2样品。
对比例3
将实施例1中的硒元素删除，其它条件不变，得到对比例3样品。
对比例4
将实施例1中的芦丁删除，其它条件不变，得到对比例4样品。
效果测试
采用本领域公知的制备方法，制备含有双菌复合提取物的化妆品，随机选取年龄在18～55岁之间的志愿者120人，在每组男女人数相同的前提下随机分为20组，每组6人，不同组的志愿者分别在每天早中晚取5mL利用实施例1～4双菌复合提取物制备的化妆品和利用对比例1-4中样品制备的化妆品及去离子水均匀涂抹在面部试用一次，试验持续30天。受试期间不使用其它护肤品或化妆品等。
(1)黑色素含量测试
每个志愿者在第1天试验进行前和第28天试验进行后2小时用德国Courage+Khazaka(德国CK公司)制造的皮肤弹性Cotometer MPA580主机，德国CK公司制造的皮肤黑色素Mexameter MX18测试探头测试皮肤中黑色素的含量。黑色素含量在室内进行，无强烈阳光或灯光直射，环境温度为20℃，湿度为40～60％。测试前对志愿者统一清洁面部皮肤，并用面巾纸擦干。面部测试区域为鼻尖与左眼瞳孔外侧连线的中间点位置。每组试验者黑色素含量取平均值，结果如表1所示。
表1
| 测试前 | 28天后 | 相对变化 | |
| 实施例1 | 150 | 93 | -38.0％ |
| 实施例2 | 153 | 95 | -37.9％ |
| 实施例3 | 155 | 97 | -37.4％ |
| 实施例4 | 148 | 98 | -33.8％ |
| 对比例1 | 150 | 144 | -4.0％ |
| 对比例2 | 149 | 125 | -16.1％ |
| 对比例3 | 152 | 135 | -11.2％ |
| 对比例4 | 148 | 120 | -18.9％ |
由表1数据可知，使用含有双菌复合提取物的化妆品的志愿者皮肤黑色素含量明显降低，说明本发明的双菌复合提取物具有较好的美白功效。
(2)皮肤弹性测试
采用皮肤弹性测试仪,分别测试第1、2、4周测试左颧部的皮肤弹性指数R2(测试过程中负压恒定为450mbar)，取使用者测试结果平均值。以测试区域清洁后30min的皮肤弹性指数值为初始值。指标说明：皮肤弹性指数R2越接近1，说明皮肤的弹性越好。试验结果如表2所示：
表2
| 0周 | 1周后 | 2周后 | 4周后 | |
| 实施例1 | 0.6428 | 0.6833 | 0.7832 | 0.9012 |
| 实施例2 | 0.6534 | 0.6922 | 0.7905 | 0.9035 |
| 实施例3 | 0.6630 | 0.6856 | 0.7825 | 0.9008 |
| 实施例4 | 0.6515 | 0.6925 | 0.7980 | 0.9073 |
| 对比例1 | 0.6677 | 0.6723 | 0.6802 | 0.6887 |
| 对比例2 | 0.6582 | 0.6635 | 0.6832 | 0.6905 |
| 对比例3 | 0.6493 | 0.6587 | 0.6634 | 0.6854 |
| 对比例4 | 0.6653 | 0.6725 | 0.6830 | 0.6901 |
由表2可知，利用本发明提取的双菌复合提取物制作的化妆品能够提高皮肤的弹性，减少皮肤细纹和皱纹的产生，具有抗衰作用。
以上仅为本发明的优选实施例，并非因此限制本发明的专利范围，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包括在本发明的专利保护范围内。
Claims (9)
1.一种双菌复合提取物，其特征在于，所述双菌复合提取物包括乳酸菌提取物、酵母菌提取物、槲皮素和硒元素。
2.如权利要求1所述的双菌复合提取物，其特征在于，所述硒元素的质量百分含量为0.1～0.3％，槲皮素的质量百分含量为5～8％。
3.一种如权利要求1至2任意一项所述的双菌复合提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S10、在第一培养基中培育酵母细胞，并挑选富含槲皮素的酵母菌；
S20、将所述酵母菌与乳酸菌接种到第二培养基中发酵；
S30、分离所述第二培养基中酵母菌和乳酸菌，得双菌混合物；
S40、将所述双菌混合物配制成质量百分比为10～15％的双菌悬浮液，进行灭活；
S50、将灭活后的所述双菌悬浮液与至少一种蛋白酶或肽酶混合，反应后收集上清液，得双菌复合粗提物；
S60、对所述双菌复合粗提物进行膜分离、升温处理、脱色和灭菌，得双菌复合提取物。
4.如权利要求3所述的双菌复合提取物的制备方法，其特征在于，步骤S10中，所述第一培养基中包含质量百分比为10～15％的芦丁；和/或，
所述第一培养基的pH为3～4；和/或，
在所述第一培养基中培育酵母细胞的培养时间为12～16h。
5.如权利要求3所述的双菌复合提取物的制备方法，其特征在于，步骤S20中，所述酵母菌和所述乳酸菌的接种质量比为1:(2～6)。
6.如权利要求3所述的双菌复合提取物的制备方法，其特征在于，步骤S20中，所述第二培养基中包含有质量百分比为3～5％的硒元素和质量百分比为8～9％的芦丁。
7.如权利要求3所述的双菌复合提取物的制备方法，其特征在于，步骤S50中，所述反应时间为12～16h。
8.如权利要求3所述的双菌复合提取物的制备方法，其特征在于，步骤S60中，所述膜分离采用的是截留分子量为20～500KD的超滤膜；和/或，
所述升温处理中，温度为90～100℃，保持时间为1～1.5h。
9.一种如权利要求1至2任意一项所述的双菌复合提取物在化妆品中的应用。
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