CN115724900A - 达玛烷型三萜皂苷类化合物及其制备方法和在制备降血糖药物中的应用 - Google Patents
达玛烷型三萜皂苷类化合物及其制备方法和在制备降血糖药物中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种达玛烷型皂苷制备方法及其在制备降糖药物中的应用。达玛烷型皂苷制采用如下操作步骤制备：S1：取10kg干燥的青钱柳叶，加入乙醇水溶液，依次加热回流提取，合并滤液，减压回收乙醇，得浸膏；S2：取浸膏1.5kg悬浮于水中，经D101大孔吸附树脂色谱柱吸附，用水清洗，然后用20%、95％乙醇洗脱，分别得到20%、95％乙醇洗脱物，该洗脱物作为富含达玛烷型三萜皂苷的青钱柳叶提取物。本发明提供的大部分达玛烷型三萜皂苷化合物均能增高3T3‑L1脂肪细胞的葡萄糖消耗，显示良好的降血糖活性，且具有浓度依赖性，可用于开发降血糖的相关药物。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，具体是一种达玛烷型三萜皂苷类化合物及其制备方法和在制备降血糖药物中的应用。
背景技术
II型糖尿病(T2DM)主要是由于胰岛素功能缺少、胰岛素分泌低而引起的疾病。胰岛素抵抗(IR)是最常见的2型糖尿病症状之一、其在整个II型糖尿病发展过程中起着关键作用。胰岛素抵抗是诱发糖尿病各类并发症的主要诱因，因此，开发、研究治疗和改善T2DM及其并发症的药物具有重要的临床意义。
青钱柳为胡桃科青钱柳属植物，为我国特有的植物，是常用药食两用植物，产于江西、广西、贵州、湖南、湖北等南方省。青钱柳性味辛、微苦、平，具有祛风止痒，降血糖的功效，用药历史悠久。
青钱柳的主要化学成分包括达玛烷型皂苷、黄酮类、酚酸类，其中达玛烷型三萜是青钱柳的指标和活性成分。现代药理学研究表明，青钱柳粗提物具有降血糖、抗炎、降血压、降血脂、抗肿瘤、抗氧化、抑菌等作用。
从青钱柳中得到的达玛烷型皂苷显著增高3T3-L1脂肪细胞葡萄糖的消耗，显示良好的降血糖活性，可用于开发降血糖的相关药物。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术的不足，而提供一种达玛烷型三萜皂苷类化合物及其制备方法和在制备降血糖药物中的应用。这种达玛烷型三萜皂苷类化合物能增高3T3-L1脂肪细胞的葡萄糖消耗，显示良好的降血糖活性，且具有浓度依赖性，可用于开发降血糖的相关药物，这种制备方法简单、易操作。
实现本发明目的的技术方案是：
一种达玛烷型三萜皂苷类化合物，所述达玛烷型三萜皂苷类化合物的结构如式(I)所示：
式(I)，其中，
[结构式1]为(3α,11α,20S,24R,25)-五羟基达玛-3-O-α-D-阿拉伯吡喃糖苷(青钱苷S)；
[结构式2]为(3α,11α,20S,24R,25)-五羟基达玛-3-O-α-L-阿拉伯吡喃糖基-11-O-β-D-吡喃鸡纳糖苷(青钱苷T)；
[结构式3]为(3α,11α,20S,24R,25)-五羟基达玛-3-O-α-L-阿拉伯呋喃糖基-11-O-β-D-鸡纳吡喃糖苷(青钱苷S)；
[结构式4]为(3α,11α,20S)-三羟基达玛-23,25-二烯-3-O-β-D-鸡纳吡喃糖基-11-O-β-D-鸡纳吡喃糖苷(青钱苷V)；
[化结构式5]为(3α,11α,25)-三羟基达玛-(20S,24R)-环氧-11-O-β-D-鸡纳吡喃糖苷(青钱苷W)；
[结构式6]为(3α,11α,25)-三羟基达玛-(20S,24R)-环氧-3-O-β-D-木吡喃糖基-11-O-β-D-鸡纳吡喃糖苷(青钱苷X)；
[结构式7]为(3α,11α,25)-三羟基达玛-(20S,24R)-环氧-3-O-(5'-O-甲酰)-α-L-阿拉伯呋喃糖基-11-O-β-D-鸡纳吡喃苷(青钱苷Y)；
[结构式8]为(3α,12β)-二羟基达玛-22-烯-(20S,25)-内酯-3-O-α-L-阿拉伯吡喃糖基-11-O-α-L-阿拉伯吡喃糖苷(青钱苷Z1)；
[结构式9]为(3α,12β)-二羟基达玛-(20S,25)-内酯-3-O-α-L-阿拉伯吡喃糖基-11-O-β-D-葡萄吡喃糖苷(青钱苷Z2)；
[结构式10]为(3α,12β)-二羟基达玛-(20S,25)-内酯-3-O-α-L-阿拉伯呋喃糖基-11-O-β-D-葡萄吡喃糖苷(青钱苷Z3)。
[结构式11]为(3α,12β)-二羟基达玛-(20S,25)-内酯-3-O-α-L-阿拉伯吡喃糖基-11-O-β-D-鸡纳吡喃糖苷(青钱苷Z4)；
[结构式12]为(3α,11α)-二羟基达玛-20-酮-3-O-α-L-阿拉伯呋喃糖基-11-O-α-L-阿拉伯吡喃糖苷(青钱苷Z5)；
[结构式13]为(3α,11α)-二羟基达玛-20-酮-3-O-α-L-阿拉伯吡喃糖基-11-O-α-L-阿拉伯吡喃糖苷(青钱苷Z6)。
制备上述达玛烷型三萜皂苷类化合物的方法，包括如下步骤：
S1：取干燥的青钱柳叶，加入乙醇水溶液，依次加热回流提取，合并滤液，减压回收乙醇，得浸膏；
S2：加水将步骤S1制备的浸膏溶解稀释，经D101大孔吸附树脂色谱柱吸附后，用水清洗，然后用20％、95％乙醇洗脱，95％乙醇洗脱物作为富含达玛烷型三萜皂苷的青钱柳叶提取物；
S3：将步骤S2制备的95％乙醇洗脱物，依次采用硅胶柱色谱、反相C18柱色谱、凝胶柱色谱和制备型C18高效液相色谱进行分离，得到式(I)所示的达玛烷型三萜皂苷类化合物。
步骤S2中所述的D101大孔吸附树脂柱色谱所用的洗脱液为醇溶剂。
步骤S3中所述的硅胶柱色谱所用的洗脱液为石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮、乙醇或甲醇中的一种溶剂或不同种溶剂的混合液。
步骤S3中所述的反相C18柱色谱采用的仪器为低压制备色谱、中压制备色谱、高效液相色谱或动态轴向压缩色谱，所用的流动相为甲醇-水溶液或乙腈-水溶液。
步骤S3中所述的凝胶柱色谱中的凝胶为Sephadex LH-20，所用的洗脱剂为水溶液、二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮、乙醇或甲醇中的一种溶剂或不同种溶剂的混合液。
上述制备方法制备的达玛烷型皂苷在制备降血糖药物中的应用，其中，所述达玛烷型三萜皂苷类化合物为上述达玛烷型三萜皂苷类化合物的任意一种或几种。
上述制备方法制备的达玛烷型皂苷在制备降血糖药物中的应用，包括上述的达玛烷型三萜皂苷类化合物的一种或几种与药学可接受的赋形剂。
本技术方案采用多种提取、分离手段，包括溶剂提取法、溶剂萃取法、大孔吸附树脂法、正反硅胶柱层析、凝胶柱层析和制备HPLC等方法，系统研究了青钱柳叶的化学成分。
本技术方案的优点：本技术方案提供的达玛烷型三萜皂苷，特别是青钱苷S、青钱苷T、青钱苷S、青钱苷V、青钱苷W、青钱苷X、青钱苷Y、青钱苷Z1、青钱苷Z2、青钱苷Z3、青钱苷Z4、青钱苷Z5和青钱苷Z6这13个化合物，均能提升3T3-L1脂肪细胞葡萄糖的消耗，显示良好的降血糖活性，且具有浓度依赖性，可用于开发降血糖的相关药物。
这种达玛烷型三萜皂苷类化合物能增高3T3-L1脂肪细胞的葡萄糖消耗，显示良好的降血糖活性，且具有浓度依赖性，可用于开发降血糖的相关药物，这种制备方法简单、易操作。
附图说明
图1为实施例中富含青钱柳三萜皂苷的提取物(25μg/mL)和达玛烷型三萜皂苷(10μM)对3T3-L1细胞萄糖消耗量的影响示意图，其中，A图为富含青钱柳三萜皂苷的提取物(25μg/mL)和达玛烷型三萜皂苷(10μM)对3T3-L1细胞萄糖消耗量的影响图；B图为化合物1、2、3、6、7和阳性对照罗格列酮(rosiglitazone)增高3T3-L1细胞萄糖消耗量的浓度依赖关系、活性化合物1、2、3、6、7增高3T3-L1细胞萄糖消耗量的浓度依赖关系图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明的内容做进一步的阐述，但不是对本发明的限定。
实施例：
一种达玛烷型皂苷在制备降血糖药物中的应用，包括式(I)所示的达玛烷型三萜皂苷：
式(I)。
本例中达玛烷型三萜皂苷从青钱柳叶中分离得到，具体来说，将青钱柳叶用含水乙醇溶液回流提取，减压回收溶剂，得到浸膏，将该浸膏悬浮于水中，经大孔吸附树脂色谱柱分离，分别得到水洗脱物、20％乙醇洗脱物、和95％乙醇洗脱物，其中95％乙醇洗脱物为富含上述达玛烷型三萜皂苷的青钱柳叶提取物，接下来，将95％乙醇洗脱物经硅胶柱层析得到多个流份，分别对各个流份进一步采用硅胶柱色谱、反相C18柱色谱、凝胶柱色谱和制备型C18高效液相色谱进行分离，从而获得上述纯的化合物1-13。
采用1H-NMR、13C-NMR等一维核磁共振谱以及1H-1HCOSY、DEPT、HSQC、HMBC、ROESY等二维核磁共振谱等波谱技术、HRESIMS质谱和化学反应对上述所得到的化合物1-13的结构进行鉴定。
本例提供一种药物组合物，包含治疗有效量的上述达玛烷型三萜皂苷的一种或几种以及任选的药学可接受的赋形剂。
上述药学可接受的赋形剂可以是药物制剂领域中任何常规的赋形剂，特定赋形剂的选择将取决于用于治疗特定患者的给药方式或疾病类型和状态，用于特定给药模式的合适药物、保健品组合物的制备方法完全在药物领域技术人员的知识范围内，可以作为药学可接受的赋形剂包括药学领域常规的稀释剂、载体、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂等。
上述药物、保健品组合物可以制成片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液、注射乳剂、注射用无菌粉针等多种形式，上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。
一种达玛烷型皂苷制备方法，包括如下步骤：
S1：取10kg干燥的青钱柳叶，加入75％乙醇水溶液，依次加热回流提取3次，时间为3小时、2小时、2小时，合并滤液，减压回收乙醇，得浸膏2.10kg；
S2：取浸膏1.5kg悬浮于20L水中，经D101大孔吸附树脂色谱柱吸附，用水清洗，然后用20％、95％乙醇洗脱，分别得到20％、95％乙醇洗脱物，该部分是富含达玛烷型三萜皂苷的洗脱物；
S3：取95％乙醇洗脱物，经硅胶柱层析，以二氯甲烷-甲醇(100:0、60:1、20:1、10:1、8:1、4:1、2:1、0:100)为洗脱剂进行梯度洗脱，得到Fr.A(22g)、Fr.B(16g)、Fr.C(23g)、Fr.D(15g)、Fr.E(27g)、Fr.F(19g)、Fr.G(13g)、Fr.H(13g)和Fr.J(6g)，将组分Fr.C(19g)经过反相C18硅胶柱层析，以水-甲醇(100：0-0:100)为洗脱剂进行梯度洗脱，得到9个组分为Fr.C-1(0.9g)、Fr.C-2(2.3g)、Fr.C-3(3.2g)、Fr.C-4(2.0g)、Fr.C-5(1.1g)、Fr.C-6(2.6g)、Fr.C-7(2.8g)、Fr.C-8(1.8g)和Fr.C-9(0.8g)，将组分Fr.C-2(2.3g)经过反相C18硅胶柱层析(水-甲醇,60:40→100:0)，得到Fr.C-2-1(260mg)、Fr.C-2-2(635mg)、Fr.C-2-3(285mg)、Fr.C-2-4(432mg)和Fr.C-2-5(351mg)，Fr.C-2-1(260mg)经过反相C18半制备液相色谱(水:乙腈溶液＝34:66,v/v)，得到化合物8(10.7mg)、化合物9(3.2mg)、化合物10(5.1mg)、化合物12(3.6mg)和化合物13(4.1mg)，将组分Fr.C-3(4.1g)经过硅胶柱层析，二氯甲烷-甲醇(100:0、60:1、20:1、10:1、8:1、4:1、2:1、0:100)进行梯度洗脱，得到9个组分为Fr.C-2-2-1(248mg)、Fr.C-2-2-2(370mg)、Fr.C-2-2-3(351mg)、Fr.C-2-2-4(354mg)、Fr.C-2-2-5(342mg)、Fr.C-2-2-6(546mg)、Fr.C-2-2-7(548mg)、Fr.C-2-2-8(278mg)和Fr.C-2-2-9(275mg)，Fr.C-3(4.1g)经葡聚糖凝胶Sephadex LH-20、反相C18硅胶柱层析及半制备液相纯化(水:乙腈溶液＝58:42,v/v)，得到化合物1(4.2mg)、化合物2(4.0mg)、化合物3(5.5mg)和化合物11(3.5mg)，将组分Fr.C-6(3.8g)经过硅胶柱层析，二氯甲烷-甲醇(12:1、10:1、6:1)进行梯度洗脱，得到3个组分为Fr.C-6-1(214mg)、Fr.C-6-2(385mg)、Fr.C-6-3(298mg)、Fr.C-6-4(472mg)、Fr.C-6-5(289mg)、Fr.C-6-6(479mg)、Fr.C-6-7(481mg)、Fr.C-6-8(305mg)和Fr.C-6-9(267mg)，Fr.C-6-2(385mg)经过半制备反相C18硅胶柱层析(水:甲醇＝15:85,v/v)，得到化合物5(4.2mg)和化合物7(5.5mg)；将组分Fr.C-6-3(298mg)经过反相C18硅胶柱层析，葡聚糖凝胶Sephadex LH-20/半制备反相C18硅胶柱层析(50％乙腈水溶液)，得到化合物4(3.6mg)和化合物6(3.5mg)。
达玛烷型三萜皂苷化合物1-13的结构鉴定：
采用包括红外、质谱、核磁共振谱(1HNMR、13CNMR、DEPT、1H-1HCOSY、HSQC、HMBC、ROESY)、质谱(MS)和旋光度等光谱技术，鉴定上述所得到的化合物1-13的结构，运用二维核磁共振谱波谱技术，确定了取代基的位置和糖的连接位置，结合高分辨质谱，对它们的全部碳信号和氢信号进行了确切的归属，对本例分离得到的化合物进行结构鉴定，最终确定结构如式(I)所示，它们均为达玛烷型三萜皂苷类化合物，化合物1-13的理化数据如下所示：
化合物1：青钱苷S(Cypaliuruside S)
白色粉末,易溶于甲醇,吡啶.
HRESIMS m/z[M+Na]+649.4297(calculated for C35H62O9Na,found:649.4292)；1H NMR(600MHz,pyridine-d5)δH3.08(1H,m,H-1a),δH 2.24(1H,m,H-1b),δH 2.00(1H,m,H-2a),δH 1.92(1H,m,H-2b),δH3.61(1H,br s,H-3),δH 1.65(1H,m,H-5),δH 1.49(1H,m,H-6a),δH 1.43(1H,m,H-6b),δH1.50(1H,m,H-7a),δH 1.18(1H,m,H-7b),δH 1.78(1H,m,H-9),δH 4.24(1H,m,H-11),δH2.75(1H,m,H-12a),δH 1.80
(1H,m,H-12b),δH 2.61(1H,m,H-13),δH 1.52(1H,m,H-15a),δH 1.04(1H,m,H-15b),δH 1.96(1H,m,H-16a),δH 1.87(1H,m,H-16b),δH2.05(1H,m,H-17),δH 1.03(3H,s,H-18),δH 1.23(3H,s,H-19),δH 1.46(3H,s,H-21),δH 2.44(1H,m,H-22a),δH 1.89(1H,m,H-22b),δH 2.00(1H,m,H-23a),δH 2.20(1H,dt,H-23b),δH 3.66(1H,m,H-24),δH 1.56(3H,s),δH 1.52(3H,s,H-27),δH 0.99(3H,s,H-28),δH 1.31(3H,s,H-29),δH 0.75(3H,s,H-30),δH 4.73(1H,d,H-1″),δH 4.42(1H,t,H-2″),δH 4.21(1H,dd,H-3″),δH 4.36(1H,t,H-4″),δH 4.33(1H,m,H-5a″),δH 3.78(1H,dd,H-5b″)；13C NMR(150MHz,pyridine-d5)δC 36.7(C-1),δC 22.3(C-2),δC 82.2(C-3),δC 38.6(C-4),δC 51.4(C-5),δC 18.8(C-6),δC 36.9(C-7),δC 50.9(C-8),δC 56.1(C-9),δC 40.1(C-10),δC 71.1(C-11),δC 35.3(C-12),δC41.7(C-13),δC 41.5(C-14),δC 32.7(C-15),δC 26.1(C-16),δC 51.1(C-17),δC 17.4(C-18),δC 17.5(C-19),δC 74.6(C-20),δC 26.8(C-21),δC 39.8(C-22),δC 22.3(C-23),δC80.6(C-24),δC 73.3(C-25),δC 26.7(C-26),δC 26.4(C-27),δC 23.6(C-28),δC 30.5(C-29),δC 17.2(C-30),δC 103.0(C-1″),δC 72.8(C-2″),δC 75.3(C-3″),δC 70.0(C-4″),δC67.3(C-5″)。
化合物2：青钱苷T(cyclocarioside T)
白色粉末,易溶于甲醇,吡啶.
HRESIMS m/z[M+Na]+795.4881(calculated for C41H72O13Na,found:795.4871)；1H NMR(600MHz,pyridine-d5)δH3.01(1H,m,H-1a),δH 1.84(1H,m,H-1b),δH 1.91(1H,m,H-2a),δH 1.66(1H,m,H-2b),δH3.64(1H,t,H-3),δH 1.61(1H,m,H-5),δH 1.60(1H,m,H-6a),δH 1.45(1H,m,H-6b),δH 1.52(1H,m,H-7a),δH 1.16(1H,m,H-7b),δH 1.93(1H,m,H-9),δH 4.42(1H,m,H-11),δH 2.99(1H,m,H-12a),δH 1.68(1H,m,H-12b),δH 2.03(1H,m,H-13),δH 1.50(1H,m,H-15a),δH1.03(1H,m,H-15b),δH 2.00(1H,m,H-16a),δH 1.80(1H,m,H-16b),δH 1.91(1H,m,H-17),δH1.08(3H,s,H-18),δH 1.39(3H,s,H-19),δH 1.47(3H,s,H-21),δH 2.65(1H,dd,H-22a),δH 2.50(1H,m,H-22b),δH 2.03(1H,m,H-23a),δH 1.98(1H,m,H-23b),δH 3.77(1H,m,H-24),δH1.52(3H,s,H-26),δH 1.47(3H,s,H-27),δH 1.01(3H,s,H-28),δH 1.27(3H,s,H-29),δH0.72(3H,s,H-30),δH 4.75(1H,d,H-1′,J＝5.7),δH 4.45(1H,t,H-2′,J＝7.4),δH4.25(1H,dd,H-3′,J＝8.3,3.7),δH 4.40(1H,dd,H-4′,J＝8.5,2.7),δH 4.33(1H,dd,H-5a′,J＝12.1,3.7),δH 3.75(1H,m,H-5b′),δH 5.00(1H,dd,H-1″,J＝7.8,2.7),δH 3.97(1H,dd,H-2″,J＝8.3,2.7),δH 4.17(1H,t,H-3″,J＝8.3),δH 3.68(1H,m,H-4″),δH 3.66(1H,t,H-5″,J＝7.8),δH 1.60(1H,d,H-6″,J＝5.9)；13C NMR(150MHz,pyridine-d5)δC 36.2(C-1),δC22.6(C-2),δC 81.8(C-3),δC 38.4(C-4),δC 51.3(C-5),δC 18.9(C-6),δC 37.0(C-7),δC50.9(C-8),δC 54.5(C-9),δC 40.4(C-10),δC 77.6(C-11),δC 35.1(C-12),δC 41.3(C-13),δC 42.0(C-14),δC 31.9(C-15),δC 26.3(C-16),δC 50.2(C-17),δC 17.3(C-18),δC 17.0(C-19),δC 74.7(C-20),δC 22.6(C-21),δC 40.4(C-22),δC 22.6(C-23),δC 80.4(C-24),δC73.4(C-25),δC 26.5(C-26),δC 18.6(C-27),δC 23.5(C-28),δC 30.2(C-29),δC 17.1(C-30),δC 102.2(C-1′),δC72.6(C-2′),δC 74.8(C-3′),δC69.3(C-4′),δC 66.7(C-5′),δC102.2(C-1″),δC 75.9(C-2″),δC78.5(C-3″),δC 77.0(C-4″),δC 73.0(C-5″),δC 18.9(C-6″)。
化合物3：青钱苷U(cypaliuruside U)
白色粉末,易溶于甲醇,吡啶.
HRESIMS m/z[M+Na]+795.4885(calculated for C41H72O13Na,found:795.4871)；1H NMR(600MHz,pyridine-d5)δH2.98(1H,m,H-1a),δH 1.79(1H,m,H-1b),δH 1.80(1H,m,H-2a),δH 1.68(1H,m,H-2b),δH3.57(1H,br s,H-3),δH 1.54(1H,m,H-5),δH 1.53(1H,m,H-6a),δH 1.44(1H,m,H-6b),δH1.51(1H,m,H-7a),δH 1.16(1H,d,H-7b,J＝12.7),δH 1.88(1H,m,H-9),δH 4.36(1H,td,H-11,J＝12.2,3.5),δH 2.98(1H,m,H-12a),δH 1.64(1H,m,H-12b),δH 2.02(1H,m,H-13),δH1.46(1H,m,H-15a),δH 1.01(1H,m,H-15b),δH 1.95(1H,m,H-16a),δH 1.83(1H,m,H-16b),δH 2.07(1H,m,H-17),δH 1.03(3H,s,H-18),δH 1.29(3H,s,H-19),δH 1.48(3H,s,H-21),δH2.46(1H,td,H-22a,J＝12.5,5.0),δH 1.86(1H,m,H-22b),δH 1.95(1H,m,H-23a),δH 1.78(1H,m,H-23b),δH 5.57(1H,m,H-24),δH 1.19(3H,s,H-26),δH 1.55(3H,s,H-27),δH0.92(3H,s,H-28),δH 1.29(3H,s,H-29),δH 0.73(3H,s,H-30),δH 5.52(1H,br s,H-1′),δH4.86(1H,t,H-2′,J＝6.8),δH 4.81(1H,t,H-3′,J＝5.4),δH 4.72(1H,t,H-4′,J＝5.7),δH 4.35(1H,dd,H-5a′,J＝12.2,5.5),δH 4.26(1H,dd,H-5b′,J＝12.2,4.7),δH 4.97(1H,d,H-1″,J＝7.7),δH 3.91(1H,t,H-2″,J＝8.4),δH 4.13(1H,t,H-3″,J＝8.8),δH 3.65(1H,t,H-4″,J＝9.1),δH 3.64(1H,m,H-5″),δH 1.56(3H,d,H-6″,J＝5.9)；13C NMR(150MHz,pyridine-d5)δC36.1(C-1),δC 21.8(C-2),δC 79.7(C-3),δC 38.4(C-4),δC 51.3(C-5),δC 18.8(C-6),δC36.6(C-7),δC 51.0(C-8),δC 54.5(C-9),δC 40.4(C-10),δC 77.4(C-11),δC 35.1(C-12),δC 41.3(C-13),δC 41.9(C-14),δC 32.0(C-15),δC 26.2(C-16),δC 49.8(C-17),δC 17.5(C-18),δC 17.3(C-19),δC 76.6(C-20),δC 27.0(C-21),δC 40.1(C-22),δC 26.4(C-23),δC80.0(C-24),δC 73.4(C-25),δC 26.7(C-26),δC 19.1(C-27),δC 23.4(C-28),δC 30.4(C-29),δC 17.3(C-30),δC106.8(C-1′),δC 84.4(C-2′),δC 79.8(C-3′),δC 86.0(C-4′),δC63.3(C-5′),δC 101.9(C-1″),δC76.0(C-2″),δC 78.6(C-3″),δC 77.3(C-4″),δC 73.1(C-5″),δC 19.1(C-6″)。
化合物4：青钱苷V(Cypaliuruside V)
白色粉末,易溶于甲醇,吡啶.
HRESIMS m/z[M+Na]+773.4823(calculated for C42H70O11Na,found:773.4816)；1H NMR(600MHz,pyridine-d5)δH3.11(1H,m,H-1a),δH 2.11(1H,m,H-1b),δH 1.81(1H,m,H-2a),δH 1.78(1H,m,H-2b),δH3.64(1H,m,H-3),δH 1.65(1H,m,H-5),δH 1.49(1H,m,H-6a),δH 1.45(1H,m,H-6b),δH1.49(1H,m,H-7a),δH 1.18(1H,m,H-7b),δH 1.92(1H,m,H-9),δH 4.42(1H,td,H-11,J＝10.5,6.0),δH 2.91(1H,m,H-12a),δH 1.59(1H,m,H-12b),δH 2.13(1H,m,H-13),δH 1.48(1H,m,H-15a),δH 1.03(1H,m,H-15b),δH 1.87(1H,m,H-16a),δH 1.79(1H,m,H-16b),δH1.91(1H,m,H-17),δH 1.07(3H,s,H-18),δH 1.38(3H,s,H-19),δH 1.40(3H,s,H-21),δH 2.63(1H,m,H-22a),δH 2.48(1H,m,H-22b),δH6.09(1H,t,H-23,J＝15.2),δH 6.41(1H,d,H-24,J＝15.8),δH 5.01(3H,s,H-26a),δH 4.92(1H,m,H-26b),δH 1.81(3H,s,H-27),δH 1.01(3H,s,H-28),δH 1.29(3H,s,H-29),δH 0.65(3H,s,H-30),δH 4.72(1H,d,H-1′,J＝7.6),δH 4.00(1H,m,H-2′),δH 4.14(1H,t,H-3′,J＝7.8),δH 3.73(1H,t,H-4′,J＝9.2),δH 4.42(1H,dd,H-5a′,J＝11.2,5.0),δH 3.62(1H,m,H-5b′),δH 1.59(3H,d,H-6′,J＝5.9),δH 4.91(1H,d,H-1″,J＝7.8),δH 3.96(1H,t,H-2″,J＝8.6),δH 4.09(1H,t,H-3″,J＝9.9),δH 3.65(1H,t,H-4″,J＝6.0),δH 3.69(1H,m,H-5″),δH 1.60(3H,d,H-6″,J＝5.9)；13C NMR(150MHz,pyridine-d5)δC36.1(C-1),δC 22.4(C-2),δC 81.6(C-3),δC 38.4(C-4),δC 51.3(C-5),δC18.7(C-6),δC 36.8(C-7),δC 50.8(C-8),δC 54.3(C-9),δC 40.2(C-10),δC 77.4(C-11),δC35.0(C-12),δC 41.3(C-13),δC 41.8(C-14),δC 31.9(C-15),δC 28.0(C-16),δC 50.7(C-17),δC 17.5(C-18),δC 17.1(C-19),δC 74.8(C-20),δC 27.4(C-21),δC 45.2(C-22),δC128.9(C-23),δC 135.7(C-24),δC143.0(C-25),δC 115.3(C-26),δC 19.1(C-27),δC 23.5(C-28),δC 30.3(C-29),δC 17.0(C-30),δC 101.8(C-1′),δC 75.9(C-2′),δC 78.9(C-3′),δC 77.4(C-4′),δC 73.1(C-5′),δC 18.9(C-6′),δC102.3(C-1″),δC 75.8(C-2″),δC 78.7(C-3″),δC 77.2(C-4″),δC 73.2(C-5″),δC 19.1(C-6″)。
化合物5：青钱苷W(Cypaliuruside W)
白色粉末,易溶于甲醇,吡啶.
HRESIMS m/z[M+Na]+645.4340(calculated for C36H62O8Na,found:645.4342)；1H NMR(600MHz,pyridine-d5)δH3.06(1H,m,H-1a),δH 2.10(1H,m,H-1b),δH 1.73(1H,m,H-2a),δH 1.46(1H,m,H-2b),δH3.65(1H,t,H-3,J＝3.7),δH 1.76(1H,m,H-5),δH 1.51(1H,m,H-6a),δH 1.45(1H,m,H-6b),δH 1.60(1H,m,H-7a),δH 1.21(1H,m,H-7b),δH 2.00(1H,m,H-9),δH 4.43(1H,td,H-11,J＝10.8,5.3),δH 2.89(1H,m,H-12a),δH 1.57(1H,m,H-12b),δH 1.81(1H,m,H-13),δH 1.42(1H,m,H-15a),δH 1.00(1H,m,H-15b),δH 2.10(1H,m,H-16a),δH 1.79(1H,m,H-16b),δH1.86(1H,m,H-17),δH 1.09(3H,s,H-18),δH 1.39(3H,s,H-19),δH 1.15(3H,s,H-21),δH1.72(1H,m,H-22a),δH 1.55(1H,m,H-22b),δH 2.02(1H,m,H-23a),δH 1.95(1H,m,H-23b),δH 3.95(1H,m,H-24),δH 1.43(3H,s,H-26),δH 1.41(3H,s,H-27),δH 0.97(3H,s,H-28),δH1.23(3H,s,H-29),δH 0.78(3H,s,H-30),δH 5.02(1H,d,H-1″,J＝9.7),δH 3.97(1H,dd,H-2″,J＝9.5,8.3),δH 4.16(1H,dd,H-3″,J＝8.6,3.5),δH 3.66(1H,dd,H-4″,J＝9.1,8.4),δH 3.69(1H,m,H-5a″),δH 1.59(3H,d,H-6″,J＝6.6)；13C NMR(150MHz,pyridine-d5)δC36.0(C-1),δC 27.4(C-2),δC 75.8(C-3),δC 39.2(C-4),δC 50.5(C-5),δC 19.0(C-6),δC37.2(C-7),δC 50.8(C-8),δC 54.9(C-9),δC 40.8(C-10),δC 77.3C-11),δC 34.9(C-12),δC 41.6(C-13),δC 42.1(C-14),δC 32.2(C-15),δC 27.5(C-16),δC 49.8(C-17),δC 17.6(C-18),δC 17.2(C-19),δC 87.0(C-20),δC 24.9(C-21),δC 34.7(C-22),δC 26.8(C-23),δC84.4(C-24),δC 71.9(C-25),δC 26.2(C-26),δC 28.3(C-27),δC 23.4(C-28),δC 30.5(C-29),δC 17.1(C-30),δC102.1(C-1″),δC 76.2(C-2″),δC 78.8(C-3″),δC 77.4(C-4″),δC73.4(C-5″),δC 19.1(C-6″)。
化合物6：青钱苷X(Cypaliuruside X)
白色粉末,易溶于甲醇,吡啶.
HRESIMS m/z[M+Na]+777.4780(calculated for C41H70O12Na,found:777.4765)；1H NMR(600MHz,pyridine-d5)δH3.16(1H,m,H-1a),δH 2.15(1H,m,H-1b),δH 1.92(1H,m,H-2a),δH 1.61(1H,m,H-2b),δH3.65(1H,m,H-3),δH 1.68(1H,m,H-5),δH 1.52(1H,m,H-6a),δH 1.46(1H,m,H-6b),δH1.52(1H,m,H-7a),δH 1.21(1H,m,H-7b),δH 1.93(1H,m,H-9),δH 4.42(1H,td,H-11,J＝10.8,4.9),δH 2.89(1H,m,H-12a),δH 1.52(1H,m,H-12b),δH 1.83(1H,m,H-13),δH 1.48(1H,m,H-15a),δH 1.00(1H,m,H-15b),δH 2.03(1H,m,H-16a),δH 1.76(1H,m,H-16b),δH1.88(1H,m,H-17),δH 1.11(3H,s,H-18),δH 1.44(3H,s,H-19),δH 1.19(3H,s,H-21),δH1.76(1H,m,H-22a),δH 1.59(1H,m,H-22b),δH 2.07(1H,m,H-23a),δH 1.99(1H,m,H-23b),δH 3.99(1H,m,H-24),δH 1.48(3H,s,H-26),δH 1.45(3H,s,H-27),δH 1.04(3H,s,H-28),δH1.31(3H,s,H-29),δH 0.64(3H,s,H-30),δH 4.75(1H,d,H-1′,J＝7.5),δH 4.00(1H,m,H-2′),δH 4.20(1H,dd,H-3′,J＝8.1,2.4),δH 4.26(1H,dd,H-4′,J＝9.3,5.2),δH 4.35(1H,dd,H-5a′,J＝11.3,5.2),δH 3.68(1H,m,H-5b′),δH 5.05(1H,d,H-1″,J＝7.7),δH 4.04(1H,t,H-2″,J＝8.0),δH 4.05(1H,dd,H-3″,J＝9.2,7.8),δH 3.71(1H,t,H-4″,J＝9.3),δH 3.85(1H,dd,H-5″,J＝9.3,6.1),δH 1.68(3H,d,H-6″,J＝5.0)；13C NMR(150MHz,pyridine-d5)δC 36.0(C-1),δC 22.3(C-2),δC 81.7(C-3),δC 38.4(C-4),δC 51.3(C-5),δC 18.6(C-6),δC 36.8(C-7),δC50.5(C-8),δC 54.2(C-9),δC 40.3(C-10),δC 76.9(C-11),δC 34.4(C-12),δC 41.5(C-13),δC41.9(C-14),δC 31.7(C-15),δC 26.7(C-16),δC 49.6(C-17),δC 17.4(C-18),δC17.1(C-19),δC86.9(C-20),δC 24.8(C-21),δC 34.5(C-22),δC 26.7(C-23),δC 84.6(C-24),δC 71.7(C-25),δC26.7(C-26),δC 28.1(C-27),δC 23.6(C-28),δC 30.2(C-29),δC17.1(C-30),δC 102.8(C-1′),δC 75.4(C-2′),δC 79.1(C-3′),δC 71.6(C-4′),δC 67.4(C-5′),δC 102.2(C-1″),δC 75.9(C-2″),δC78.8(C-3″),δC 77.2(C-4″),δC 73.2(C-5″),δC18.9(C-6″)。
化合物7：青钱苷Y(Cypaliuruside Y)
白色粉末,易溶于甲醇,吡啶.
HRESIMS m/z[M+Na]+805.4705(calculated for C42H70O13Na,found:805.4714)；1H NMR(600MHz,pyridine-d5)δH3.03(1H,m,H-1a),δH 1.83(1H,m,H-1b),δH 1.84(1H,m,H-2a),δH 1.72(1H,m,H-2b),δH3.62(1H,br s,H-3),δH 1.57(1H,m,H-5),δH 1.49(1H,m,H-6a),δH 1.42(1H,m,H-6b),δH1.54(1H,m,H-7a),δH 1.19(1H,m,H-7b),δH 1.90(1H,m,H-9),δH 4.43(1H,m,H-11),δH2.94(1H,m,H-12a),δH 1.59(1H,m,H-12b),δH 1.83(1H,m,H-13),δH 1.42(1H,m,H-15a),δH1.02(1H,m,H-15b),δH 1.96(1H,m,H-16a),δH 1.78(1H,m,H-16b),δH 1.92(1H,m,H-17),δH1.09(3H,s,H-18),δH 1.38(3H,s,H-19),δH 1.19(3H,s,H-21),δH 1.76(1H,m,H-22a),δH1.59(1H,m,H-22b),δH 2.06(1H,m,H-23a),δH 1.98(1H,m,H-23b),δH 3.99(1H,m,H-24),δH1.47(3H,s,H-26),δH 1.44(3H,s,H-27),δH 0.96(3H,s,H-28),δH 1.29(3H,s,H-29),δH0.73(3H,s,H-30),δH 5.56(1H,s,H-1′),δH 4.88(1H,t,H-2′,J＝5.6),δH 4.84(1H,m,H-3′),δH 4.75(1H,m,H-4′),δH 4.39(1H,dd,H-5a′,J＝6.7,2.8),δH 4.26(1H,m,H-5b′),δH5.06(1H,dd,H-1″,J＝7.8,2.0),δH 3.98(1H,t,H-2″,J＝7.1),δH 4.21(1H,dd,H-3″,J＝8.9,2.0),δH 3.73(1H,dd,H-4″,J＝9.4,4.7),δH 4.28(1H,m,H-5a″),δH 3.85(1H,dd,H-5b″,J＝7.1,6.0),δH 1.63(3H,d,H-6″,J＝6.1)；13C NMR(150MHz,pyridine-d5)δC 36.1(C-1),δC 21.7(C-2),δC 79.7(C-3),δC 38.5(C-4),δC 51.5(C-5),δC 18.8(C-6),δC 36.8(C-7),δC50.6(C-8),δC 54.4(C-9),δC 40.6(C-10),δC 77.3(C-11),δC 34.9(C-12),δC 41.6(C-13),δC42.0(C-14),δC 32.1(C-15),δC 27.2(C-16),δC 49.7(C-17),δC 17.5(C-18),δC17.2(C-19),δC87.1(C-20),δC 24.9(C-21),δC 34.5(C-22),δC 26.7(C-23),δC 84.8(C-24),δC 71.8(C-25),δC26.2(C-26),δC 28.2(C-27),δC 23.4(C-28),δC 30.5(C-29),δC17.3(C-30),δC 106.9(C-1′),δC 84.6(C-2′),δC 79.9(C-3′),δC 86.2(C-4′),δC 63.5(C-5′),δC 101.9(C-1″),δC 75.9(C-2″),δC 78.9(C-3″),δC 77.4(C-4″),δC 73.3(C-5″),δC19.0(C-6″),δC 171.4(CH3COO-),δC 21.0(HCOO-)。
化合物8：青钱苷Z1(Cypaliuruside Z1)
白色粉末,易溶于甲醇,吡啶.
HRESIMS m/z[M+Na]+717.3811(calculated for C37H58O12Na,found:717.3826)；1H NMR(600MHz,pyridine-d5)δH3.05(1H,m,H-1a),δH 2.00(1H,m,H-1b),δH 1.74(1H,m,H-2a),δH 1.68(1H,m,H-2b),δH3.53(1H,m,H-3),δH 1.54(1H,d,H-5,J＝11.2),δH 1.53(1H,m,H-6a),δH 1.40(1H,m,H-6b),δH 1.41(1H,m,H-7a),δH 1.06(1H,d,H-7b,J＝9.2),δH 1.80(1H,m,H-9),δH 2.70(1H,m,H-11a),δH 1.46(1H,m,H-11b),δH 4.36(1H,q,H-12,J＝10.0,9.1),δH1.80(1H,m,H-13),δH 1.32(1H,m,H-15a),δH 1.01(1H,m,H-15b),δH 1.64(1H,m,H-16a),δH 1.34(1H,m,H-16b),δH 1.53(1H,m,H-17),δH0.90(3H,s,H-18),δH 1.29(3H,s,H-19),δH 1.36(3H,s,H-21),δH 7.64(1H,d,H-22,J＝5.7),δH 6.26(1H,d,H-23,J＝5.7),δH 0.91(3H,s,H-28),δH1.20(3H,s,H-29),δH 0.55(3H,s,H-30),δH 4.68(1H,d,H-1′,J＝7.2),δH 4.38(1H,dd,H-2′,J＝9.2,7.1),δH 4.13(1H,dd,H-3′,J＝9.3,4.2),δH 4.19(1H,dd,H-4′,J＝8.2,3.6),δH 4.29(1H,dd,H-5a′,J＝8.6,3.2),δH 3.74(1H,dd,H-5b′,J＝11.9,4.7),δH 4.87(1H,d,H-1″,J＝6.5),δH4.36(1H,dd,H-2″,J＝8.0,7.2),δH 4.28(1H,dd,H-3″,J＝9.2,4.1),δH4.40(1H,q,H-4″,J＝8.0,7.2),δH 4.29(1H,dd,H-5a″,J＝8.6,3.2),δH 3.80(1H,dd,H-5b″,J＝12.5,4.5)；13C NMR(150MHz,pyridine-d5)δC 36.1(C-1),δC 22.2(C-2),δC 81.6(C-3),δC 38.5(C-4),δC51.3(C-5),δC 18.7(C-6),δC 36.8(C-7),δC 50.7(C-8),δC 54.3(C-9),δC 40.4(C-10),δC 34.1(C-11),δC 76.8(C-12),δC 42.5(C-13),δC 41.9(C-14),δC31.7(C-15),δC 25.9(C-16),δC 47.8(C-17),δC 17.5(C-18),δC 17.4(C-19),δC 92.6(C-20),δC 23.9(C-21),δC 161.2(C-22),δC121.9(C-23),δC 173.4(C-24),δC 23.5(C-28),δC30.4(C-29),δC 16.9(C-30),δC 102.1(C-1′),δC 72.9(C-2′),δC75.2(C-3′),δC 70.3(C-4′),δC 66.8(C-5′),δC 102.7(C-1″),δC 73.1(C-2″),δC75.4(C-3″),δC 69.5(C-4″),δC68.1(C-5″)。
化合物9：青钱苷Z2(Cypaliuruside Z2)
白色粉末,易溶于甲醇,吡啶.
HRESIMS m/z[M+Na]+749.4075(calculated for C38H62O13Na,found:749.4088)；1H NMR(600MHz,pyridine-d5)δH3.13(1H,m,H-1a),δH 2.08(1H,m,H-1b),δH 1.87(1H,m,H-2a),δH 1.46(1H,m,H-2b),δH3.60(1H,br s,H-3),δH 1.61(1H,m,H-5),δH 1.58(1H,m,H-6a),δH 1.46(1H,m,H-6b),δH1.48(1H,m,H-7a),δH 1.13(1H,d,H-7b,J＝11.7),δH 1.89(1H,m,H-9),δH2.65(1H,m,H-11a),δH 1.52(1H,m,H-11b),δH 4.51(1H,td,H-12,J＝10.6,4.9),δH 1.73(1H,m,H-13),δH1.35(1H,m,H-15a),δH 0.97(1H,m,H-15b),δH 1.72(1H,m,H-16a),δH 1.43(1H,m,H-16b),δH 1.49(1H,m,H-17),δH 0.98(3H,s,H-18),δH 1.38(3H,s,H-19),δH 1.28(3H,s,H-21),δH2.00(1H,m,H-22a),δH 1.88(1H,m,H-22b),δH 2.70(1H,m,H-23a),δH 2.59(1H,m,H-23b),δH 0.96(3H,s,H-28),δH 1.26(3H,s,H-29),δH 0.62(3H,s,H-30),δH 4.74(1H,d,H-1′,J＝6.5),δH 4.45(1H,d,H-2′,J＝8.9),δH 4.27(1H,dd,H-3′,J＝8.4,3.5),δH 4.42(1H,m,H-4′),δH 4.34(1H,dd,H-5a′,J＝12.1,3.7),δH 3.80(1H,m,H-5b′),δH 5.11(1H,d,H-1″,J＝7.7),δH 4.16(1H,t,H-2″,J＝8.2),δH 4.03(1H,dd,H-3″,J＝8.2,6.5),δH 4.01(1H,dd,H-4″,J＝8.4,6.5),δH 4.31(1H,d,H-5a″,J＝8.9),δH 3.78(1H,m,H-5b″),δH 4.58(1H,dd,H-6a″,J＝11.4,2.8),δH 4.38(1H,dd,H-6b″,J＝11.4,5.5)；13C NMR(150MHz,pyridine-d5)δC36.0(C-1),δC 21.4(C-2),δC 81.9(C-3),δC 38.6(C-4),δC 50.7(C-5),δC 18.8(C-6),δC36.8(C-7),δC 50.1(C-8),δC 54.3(C-9),δC 40.4(C-10),δC 34.0(C-11),δC 76.4(C-12),δC 41.6(C-13),δC 41.0(C-14),δC 31.6(C-15),δC 26.0(C-16),δC 50.6(C-17),δC 17.5(C-18),δC 17.4(C-19),δC 89.9(C-20),δC 24.9(C-21),δC 32.0(C-22),δC 29.1(C-23),δC176.8(C-24),δC23.8(C-28),δC 30.0(C-29),δC 16.8(C-30),δC 102.3(C-1′),δC 72.1(C-2′),δC 75.3(C-3′),δC69.7(C-4′),δC 66.9(C-5′),δC 102.4(C-1″),δC 75.8(C-2″),δC79.2(C-3″),δC 78.5(C-4″),δC72.9(C-5″),δC 63.9(C-6″)。
化合物10：青钱苷Z3(Cypaliuruside Z3)
白色粉末,易溶于甲醇,吡啶.
HRESIMS m/z[M+Na]+749.4096(calculated for C38H62O13Na,found:749.4088)；1H NMR(600MHz,pyridine-d5)δH3.01(1H,m,H-1a),δH 2.01(1H,m,H-1b),δH 1.91(1H,m,H-2a),δH 1.74(1H,m,H-2b),δH3.53(1H,m,H-3),δH 1.53(1H,d,H-5,J＝11.2),δH 1.60(1H,m,H-6a),δH 1.40(1H,m,H-6b),δH 1.39(1H,m,H-7a),δH 1.06(1H,d,H-7b,J＝9.2),δH 1.80(1H,m,H-9),δH 1.98(1H,m,H-11a),δH 1.84(1H,m,H-11b),δH 4.16(1H,m,H-12),δH 1.61(1H,m,H-13),δH1.32(1H,m,H-15a),δH 1.03(1H,m,H-15b),δH 1.64(1H,m,H-16a),δH 1.34(1H,m,H-16b),δH 1.53(1H,m,H-17),δH 0.90(3H,s,H-18),δH 1.34(3H,s,H-19),δH 1.47(3H,s,H-21),δH1.98(1H,m,H-22a),δH 1.87(1H,m,H-22b),δH 2.67(1H,m,H-23a),δH 2.51(1H,m,H-23b),δH0.97(3H,s,H-28),δH 1.28(3H,s,H-29),δH 0.69(3H,s,H-30),δH 5.55(1H,d,H-1′,J＝6.5),δH 4.89(1H,t,H-2′,J＝5.6),δH 4.85(1H,m,H-3′),δH 4.76(1H,dd,H-4′,J＝6.0,5.0),δH 4.40(1H,m,H-5a′),δH 4.29(1H,d,H-5b′,J＝9.4),δH 5.12(1H,d,H-1″,J＝7.6),δH 4.03(1H,t,H-2″,J＝8.3),δH 4.31(1H,t,H-3″,J＝9.1),δH 4.05(1H,m,H-4″),δH 4.18(1H,dd,H-5a″,J＝9.1,3.2),δH 3.78(1H,m,H-5b″,J＝11.1),δH 4.41(1H,m,H-6a″),δH4.30(1H,m,H-6b″)；13C NMR(150MHz,pyridine-d5)δC 36.6(C-1),δC 22.3(C-2),δC 81.9(C-3),δC 38.6(C-4),δC 51.4(C-5),δC 18.8(C-6),δC 35.9(C-7),δC 50.7(C-8),δC 54.4(C-9),δC 40.4(C-10),δC 34.0(C-11),δC 76.0(C-12),δC 42.3(C-13),δC 41.0(C-14),δC31.4(C-15),δC 25.8(C-16),δC 50.0(C-17),δC 17.1(C-18),δC 17.4(C-19),δC 89.7(C-20),δC 21.9(C-21),δC 32.7(C-22),δC 29.7(C-23),δC 176.6(C-24),δC 23.6(C-28),δC30.4(C-29),δC 16.7(C-30),δC 102.5(C-1′),δC 72.9(C-2′),δC 75.3(C-3′),δC 69.5(C-4′),δC 66.9(C-5′),δC 102.1(C-1″),δC 75.0(C-2″),δC 78.99.0(C-3″),δC 77.4(C-4″),δC 73.4(C-5″),δC 19.1(C-6″)。
化合物11：青钱苷Z4(Cypaliuruside Z4)
白色粉末,易溶于甲醇,吡啶.
HRESIMS m/z[M+Na]+733.4146(calculated for C38H62O12Na,found:733.4139)；1H NMR(600MHz,pyridine-d5)δH3.10(1H,m,H-1a),δH 2.06(1H,m,H-1b),δH 1.89(1H,m,H-2a),δH 1.78(1H,m,H-2b),δH3.62(1H,d,H-3,J＝5.1),δH 1.60(1H,m,H-5),δH 1.58(1H,m,H-6a),δH 1.46(1H,m,H-6b),δH 1.47(1H,m,H-7a),δH 1.44(1H,m,H-7b),δH 1.89(1H,m,H-9),δH 1.98(1H,m,H-11a),δH 1.84(1H,m,H-12b),δH 4.51(1H,m,H-12),δH 1.73(1H,m,H-13),δH 1.32(1H,m,H-15a),δH 1.03(1H,m,H-15b),δH 1.83(1H,m,H-16a),δH 1.72(1H,m,H-16b),δH 1.81(1H,m,H-17),δH1.03(3H,s,H-18),δH 1.38(3H,s,H-19),δH 1.25(3H,s,H-21),δH 1.98(1H,m,H-22a),δH 1.84(1H,m,H-22b),δH 2.66(1H,m,H-23a),δH 2.50(1H,m,H-23b),δH 1.00(3H,s,H-28),δH 1.28(3H,s,H-29),δH 0.61(3H,s,H-30),δH 4.75(1H,d,H-1′,J＝6.5),δH 4.44(1H,m,H-2′),δH 4.24(1H,dd,H-3′,J＝8.2,3.5),δH 4.40(1H,t,H-4′,J＝6.0),δH 4.33(1H,dd,H-5a′,J＝12.1,3.7),δH 3.79(1H,m,H-5b′),δH 5.00(1H,d,H-1″,J＝7.7),δH4.07(1H,t,H-2″,J＝9.2),δH 4.18(1H,t,H-3″,J＝8.9),δH 3.70(1H,t,H-4″,J＝9.0),δH4.41(1H,m,H-5a″),δH 3.79(1H,dd,H-5b″,J＝8.9,2.7),δH 1.66(3H,d,H-6″,J＝7.4)；13CNMR(150MHz,pyridine-d5)δC 36.1(C-1),δC 21.8(C-2),δC 79.8(C-3),δC 38.3(C-4),δC51.3(C-5),δC18.6(C-6),δC 36.5(C-7),δC 50.6(C-8),δC 54.2(C-9),δC 40.3(C-10),δC34.1(C-11),δC 76.5(C-12),δC 42.0(C-13),δC 41.6(C-14),δC 31.5(C-15),δC 25.8(C-16),δC 49.9(C-17),δC 17.2(C-18),δC 17.1(C-19),δC 89.9(C-20),δC 23.3(C-21),δC32.6(C-22),δC 29.7(C-23),δC177.3(C-24),δC 23.2(C-28),δC 30.3(C-29),δC 16.7(C-30),δC 106.9(C-1′),δC 84.6(C-2′),δC 79.9(C-3′),δC 86.0(C-4′),δC 63.4(C-5′),δC101.9(C-1″),δC 75.7(C-2″),δC 79.0(C-3″),δC 78.3(C-4″),δC 72.7(C-5″),δC 63.8(C-6″)。
化合物12：青钱苷Z5(Cypaliuruside Z5)
白色粉末,易溶于甲醇,吡啶.
HRESIMS m/z[M+Na]+663.3708(calculated for C34H56O11Na,found:663.3720)；1H NMR(600MHz,pyridine-d5)δH3.04(1H,m,H-1a),δH 1.82(1H,m,H-1b),δH 1.68(1H,m,H-2a),δH 1.60(1H,m,H-2b),δH3.55(1H,t,H-3,J＝3.2),δH 1.54(1H,m,H-5),δH 1.45(1H,m,H-6a),δH 1.41(1H,m,H-6b),δH 1.52(1H,m,H-7a),δH 1.10(1H,d,H-7b,J＝12.1),δH 2.57(1H,m,H-9),δH 4.44(1H,dt,H-11,J＝10.5,5.1),δH 2.64(1H,m,H-12a),δH 1.52(1H,m,H-12b),δH 2.21(1H,m,H-13),δH 1.49(1H,m,H-15a),δH 1.01(1H,m,H-15b),δH 1.68(1H,m,H-16a),δH1.60(1H,m,H-16b),δH 1.84(1H,m,H-17),δH 0.98(3H,s,H-18),δH 1.30(3H,s,H-19),δH2.10(3H,s,H-21),δH 0.90(3H,s,H-28),δH 1.27(3H,s,H-29),δH 0.69(3H,s,H-30),δH 5.50(1H,s,H-1′),δH 4.87(1H,t,H-2′,J＝3.8),δH 4.82(1H,dd,H-3′,J＝6.6,3.8),δH 4.40(1H,d,H-4′,J＝7.5),δH 4.38(1H,m,H-5a′),δH 4.28(1H,dd,H-5b′,J＝11.9,3.6),δH 4.76(1H,d,H-1″,J＝7.5),δH 4.35(1H,t,H-2″,J＝8.3),δH 4.10(1H,dd,H-3″,J＝9.3,3.6),δH 4.24(1H,dd,H-4″,J＝7.2,3.5),δH 4.29(1H,dd,H-5a″,J＝11.9,3.6),δH 3.61(1H,m,H-5b″)；13CNMR(150MHz,pyridine-d5)δC 36.1(C-1),δC 21.7(C-2),δC 80.0(C-3),δC 38.4(C-4),δC51.4(C-5),δC 18.7(C-6),δC 36.9(C-7),δC 50.5(C-8),δC 54.2(C-9),δC 40.5(C-10),δC 76.9(C-11),δC 33.0(C-12),δC 43.3(C-13),δC 41.9(C-14),δC 31.8(C-15),δC 27.0(C-16),δC 54.4(C-17),δC 17.4(C-18),δC 16.4(C-19),δC 211.5(C-20),δC 30.5(C-21),δC 23.4(C-28),δC30.4(C-29),δC17.2(C-30),δC 106.9(C-1′),δC 84.6(C-2′),δC 80.0(C-3′),δC 86.2(C-4′),δC63.4(C-5′),δC 103.1(C-1″),δC 73.2(C-2″),δC 75.4(C-3″),δC70.3(C-4″),δC 68.1(C-5″)。
化合物13：青钱苷Z6(Cypaliuruside Z6)
白色粉末,易溶于甲醇,吡啶.
HRESIMS m/z[M+Na]+663.3707(calculated for C34H56OZNa,found:663.3720)；1H NMR(600MHz,pyridine-d5)δH3.16(1H,m,H-1a),δH 2.02(1H,m,H-1b),δH 1.77(1H,m,H-2a),δH 1.68(1H,m,H-2b),δH3.57(1H,t,H-3,J＝2.8),δH 1.57(1H,m,H-5),δH 1.44(1H,m,H-6a),δH 1.58(1H,m,H-6b),δH 1.49(1H,m,H-7a),δH 1.10(1H,d,H-7b,J＝12.2),δH 2.54(1H,m,H-9),δH 4.43(1H,q,H-11,J＝10.7),δH 2.60(1H,m,H-12a),δH1.52(1H,m,H-12b),δH 2.20(1H,m,H-13),δH1.48(1H,m,H-15a),δH 1.01(1H,m,H-15b),δH 1.86(1H,m,H-16a),δH 1.67(1H,m,H-16b),δH 1.87(1H,m,H-17),δH 1.00(3H,s,H-18),δH 1.35(3H,s,H-19),δH 2.09(3H,s,H-21),δH0.93(3H,s,H-28),δH 1.23(3H,s,H-29),δH 0.60(3H,s,H-30),δH 4.74(1H,d,H-1′,J＝7.5),δH 4.42(1H,m,H-2′),δH 4.26(1H,t,H-3′,J＝7.1),δH 4.41(1H,m,H-4′),δH 4.32(1H,m,H-5a′),δH 3.76(1H,dd,H-5b′,J＝12.1,2.2),δH 4.69(1H,d,H-1″,J＝6.3),δH4.36(1H,dd,H-2″,J＝9.2,7.6),δH 4.10(1H,dd,H-3″,J＝9.2,3.6),δH 4.23(1H,m,H-4″),δH4.29(1H,dd,H-5a″,J＝5.6,2.9),δH 3.67(1H,d,H-5b″,J＝3.6)；13C NMR(150MHz,pyridine-d5)δC 36.0(C-1),δC 22.1(C-2),δC 81.6(C-3),δC 38.5(C-4),δC 51.4(C-5),δC18.7(C-6),δC 37.0(C-7),δC 50.4(C-8),δC 54.1(C-9),δC 40.5(C-10),δC 77.3(C-11),δC33.0(C-12),δC 43.4(C-13),δC 41.9(C-14),δC 31.8(C-15),δC 27.1(C-16),δC 54.2(C-17),δC 17.5(C-18),δC 17.5(C-19),δC 211.3(C-20),δC 30.5(C-21),δC 23.4(C-28),δC30.4(C-29),δC16.4(C-30),δC 103.1(C-1′),δC 72.7(C-2′),δC 75.0(C-3′),δC 69.3(C-4′),δC 66.5(C-5′),δC102.1(C-1″),δC 72.9(C-2″),δC 75.1(C-3″),δC 70.1(C-4″),δC67.8(C-5″)。
式(I)。
本例方法所制备的达玛烷型三萜皂苷类化合物的一种或几种在制备降血糖药物中的应用。
本例提供了一种药物制剂，包括上述的达玛烷型三萜皂苷类化合物的一种或几种与药学上可接受的载体，所述药学上可接受的载体可根据药剂学领域的常用辅料，根据剂型和实际情况进行恰当选择，例如常用的辅料有淀粉、低取代羟丙基纤维素、微粉硅胶、硬脂酸镁、淀粉浆、蔗糖、糊精、羧甲基淀粉钠、滑石粉、聚山梨酯、聚乙二醇、注射用大豆磷脂和注射用甘油等；采用本例得到的式(I)所示的达玛烷型三萜皂苷类化合物的一种或几种制备所需药物的各种剂型时，按照药剂学领域的常规生产方法制备，如将该提取物与一种或多种载体混合，然后制成相应的剂型，中药制剂的剂型包括注射剂、片剂、栓剂、软膏剂、凝胶剂、丸剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂和合剂。
本例通过对青钱柳叶进行提取，得到浸膏；然后将得到的浸膏进行分离，选择特定出峰时间的化合物，即得到式(I)所示的达玛烷型三萜皂苷类化合物的一种或几种，且通过细胞实验发现，该类达玛烷型三萜皂苷类化合物能够极显著增高3T3-L1细胞萄糖消耗量，显示极为显著的降血糖活性。
具体地：
实施例1：
制备如式(I)所示的结构(1-13)的达玛烷型三萜皂苷类化合物的方法，包括如下步骤：
1-1)将青钱柳叶用12倍量的50％乙醇在加热提取3次，每次2h，过滤，将滤液浓缩、回收乙醇得到粗浸膏；
1-2)取浸膏悬浮于20L水中，经D101大孔吸附树脂色谱柱吸附，用水清洗，然后用20％、95％乙醇洗脱，分别得到20％、95％乙醇洗脱物，该洗脱物作为富含达玛烷型三萜皂苷的青钱柳叶提取物；
1-3)取步骤1-2)中得到的95％乙醇洗脱物与80-100目硅胶以质量比1:1.4的比例进行拌样，经硅胶柱色谱分离，采用二氯甲烷-甲醇混合溶液进行梯度洗脱，所述二氯甲烷-甲醇体积比为(100:0-0:100)，洗脱出的流份用薄层色谱分析合并，收集二氯甲烷-甲醇体积比为(10-5):1洗脱部位，得硅胶柱色谱分离后的粗品；
1-4)将步骤1-3)中得到的硅胶柱色谱分离后的粗品，经反相C18动态轴向压缩柱色谱进行分离，洗脱程序为0-20min，10％-30％有机溶剂的水溶液；20-60min，30％-60％有机溶剂的水溶液；60-80min，60％-90％有机溶剂的水溶液；80-100min，100％乙腈-水溶液，收集35～60min洗脱部位，得反相柱色谱分离后的粗品；
1-5)将步骤1-4)中用C18反相柱色谱分离后的粗品，经Sephadex LH-20凝胶柱色谱分离，以二氯甲烷:甲醇(1:1)进行纯化，得到纯化后的样品；
1-6)将步骤1-5)中得到的纯化后的样品，通过制备型高效液相色谱进行分离，进行C18反相柱色谱(21.2×250mm，5μm)；以甲醇和水以及乙腈和水的混合溶液为流动相进行洗脱，流速8mL/min；检测波长为205nm，收集洗脱液减压干燥，得到式(I)所示的结构(1-13)的达玛烷型三萜皂苷类。
用紫外(UV)、一维核磁共振谱(1H NMR和13C NMR)、二维核磁共振谱(HSQC,HMBC,NOESY和TOCSY)、质谱(MS)等手段，并结合参考文献，对分离得到的单体化合物进行结构鉴定，得到如式(I)所示的结构(1-13)达玛烷型三萜皂苷类，这些化合物是新的达玛烷型三萜皂苷类。
实施例2：
制备如式(I)所示的结构(1-13)的达玛烷型三萜皂苷类化合物的方法，包括如下步骤：
2-1)将青钱柳叶用12倍量的50％乙醇在加热提取3次，每次2h，过滤，将滤液浓缩、回收乙醇得到浸膏，将粗浸膏悬浮于水中，先用石油醚萃取，在用乙酸乙酯萃取，回收溶剂，得到萃取物；
2-2)取浸膏悬浮于20L水中，经D101大孔吸附树脂色谱柱吸附，用水清洗，然后用20％、95％乙醇洗脱，分别得到20％、95％乙醇洗脱物，该洗脱物作为富含达玛烷型三萜皂苷的青钱柳叶提取物；
2-3)取步骤2-2)中得到的95％乙醇洗脱物与80-100目硅胶以质量比1:1.3的比例进行拌样，经硅胶柱色谱分离，采用二氯甲烷-甲醇混合溶液进行梯度洗脱；所述二氯甲烷-甲醇体积比为(100:0-0:100)，洗脱出的流份用薄层色谱分析合并，收集二氯甲烷-甲醇体积比为(10-5):1洗脱部位，得硅胶柱色谱分离后的粗品；
2-4)将步骤2-3)中得到的硅胶柱色谱分离后的粗品，经反相C18动态轴向压缩柱色谱进行分离，洗脱程序为0-20min，10％-30％有机溶剂的水溶液；20-60min，30％-60％有机溶剂的水溶液；60-80min，60％-90％有机溶剂的水溶液；80-100min，100％乙腈-水溶液，收集35-60min洗脱部位，得反相柱色谱分离后的粗品；
2-5)将步骤2-4)中用C18反相柱色谱分离后的粗品，经Sephadex LH-20凝胶柱色谱分离，以二氯甲烷:甲醇(1:1)进行纯化，得到纯化后的样品；
2-5)将步骤2-4)中得到的纯化后的样品，通过制备型高效液相色谱进行分离，进行C18反相柱色谱(21.2×250mm，5μm)；以甲醇和水以及乙腈和水的混合溶液为流动相进行洗脱，流速8mL/min；检测波长为205nm，收集洗脱液减压干燥，得到如式(I)所示的结构(1-13)达玛烷型三萜皂苷类。
实施例3：
制备如式(I)所示的结构(1-13)的达玛烷型三萜皂苷类化合物的方法，包括如下步骤：
3-1)将青钱柳叶用13倍量的75％乙醇在加热提取3次，每次3h，过滤，将滤液浓缩、回收乙醇得到浸膏；
3-2)取浸膏悬浮于20L水中，经D101大孔吸附树脂色谱柱吸附，用水清洗，然后用20％、95％乙醇洗脱，分别得到20％、95％乙醇洗脱物，该洗脱物作为富含达玛烷型三萜皂苷的青钱柳叶提取物；
3-3)取步骤3-2)中得到的95％乙醇洗脱物与80-100目硅胶以质量比1:1.3的比例进行拌样，经硅胶柱色谱分离，采用二氯甲烷-甲醇混合溶液进行梯度洗脱；所述二氯甲烷-甲醇体积比为(100:0-0:100)，洗脱出的流份用薄层色谱分析合并，收集二氯甲烷-甲醇体积比为(10-5):1洗脱部位，得硅胶柱色谱分离后的粗品；
3-4)将步骤3-3)中得到的硅胶柱色谱分离后的粗品，经反相C18动态轴向压缩柱色谱进行分离，洗脱程序为0-20min，10％-30％有机溶剂的水溶液；20-60min，30％-60％有机溶剂的水溶液；60-80min，60％-90％有机溶剂的水溶液；80-100min，100％乙腈-水溶液，收集35-60min洗脱部位，得反相柱色谱分离后的粗品；
3-5)将步骤3-4)中用C18反相柱色谱分离后的粗品，经Sephadex LH-20凝胶柱色谱分离，以二氯甲烷:甲醇(1:1)进行纯化，得到纯化后的样品；
3-6)将步骤3-5)中得到的纯化后的样品，通过制备型高效液相色谱进行分离，进行C18反相柱色谱(21.2×250mm，5μm)；以甲醇和水以及乙腈和水的混合溶液为流动相进行洗脱，流速8mL/min；检测波长为205nm，收集洗脱液减压干燥，得到如式(I)所示的结构(1-13)达玛烷型三萜皂苷类。
实施例4：
4-1)将青钱柳叶用14倍量的95％乙醇在加热提取3次，每次1.5h，过滤，将滤液浓缩、回收乙醇得到浸膏；
4-2)取浸膏悬浮于20L水中，经D101大孔吸附树脂色谱柱吸附，用水清洗，然后用20％、95％乙醇洗脱，分别得到20％、95％乙醇洗脱物，该洗脱物作为富含达玛烷型三萜皂苷的青钱柳叶提取物；
4-3)取步骤4-2)中得到的95％乙醇洗脱物与80-100目硅胶以质量比1:1.3的比例进行拌样，经硅胶柱色谱分离，采用二氯甲烷-甲醇混合溶液进行梯度洗脱；所述二氯甲烷-甲醇体积比为(100:0-0:100)，洗脱出的流份用薄层色谱分析合并，收集二氯甲烷-甲醇体积比为(10-5):1洗脱部位，得硅胶柱色谱分离后的粗品；
4-4)将步骤4-3)中得到的硅胶柱色谱分离后的粗品，经反相C18动态轴向压缩柱色谱进行分离，洗脱程序为0-20min，10％-30％有机溶剂的水溶液；20-60min，30％-60％有机溶剂的水溶液；60-80min，60％-90％有机溶剂的水溶液；80-100min，100％乙腈-水溶液，收集35-60min洗脱部位，得反相柱色谱分离后的粗品；
4-5)将步骤4-4)中用C18反相柱色谱分离后的粗品，经Sephadex LH-20凝胶柱色谱分离，以二氯甲烷:甲醇(1:1)进行纯化，得到纯化后的样品；
4-6)将步骤4-5)中得到的纯化后的样品，通过制备型高效液相色谱进行分离，进行C18反相柱色谱(21.2×250mm，5μm)；以甲醇和水以及乙腈和水的混合溶液为流动相进行洗脱，流速8mL/min；检测波长为205nm，收集洗脱液减压干燥，得到如式(I)所示的结构(1-13)达玛烷型三萜皂苷类。
实施例5：
对一种上述式(I)所示的结构(1-13)达玛烷型三萜皂苷类对3T3-L1细胞葡萄糖摄取的影响研究验证：
5-1)细胞培养：将3T3-L1前脂肪细胞接种于无菌培养瓶中，加入含有10％小牛血清的DMEM高糖培养液(100U/mL青、链霉素)，于37℃、5％CO2环境中培养；
5-2)MTT法检测细胞活性：为评价富含青钱柳三萜皂苷的提取物(CPBE)和达玛烷型三萜皂苷对3T3-L1细胞的安全作用浓度，取对数生长期3T3-L1细胞以104个/mL浓度接种于96孔板，加入10％新生牛血清和1μg/mL胰岛素的DMEM高糖培养基培养24h，加入浓度为25μg/mL的富含青钱柳三萜皂苷的提取物(CPBE)和10μM的达玛烷型三萜皂苷的培养液干预24h、48h、72h，每孔加入20μL 5mg/mL MTT溶液，37℃孵育4h，吸去上清，各孔加入150μLDMSO，振荡10min，于490nm处检测其吸光度值，分析富含青钱柳三萜皂苷的提取物和达玛烷型三萜皂苷对细胞活力的影响；
5-3)葡萄糖摄取检测：将3T3-L1前脂肪细胞以1×104个/孔接种于96孔板，加入10％新生牛血清和1μg/mL胰岛素的DMEM高糖培养基培养24h，分别加入浓度为25μg/mL富含青钱柳三萜皂苷的提取物(CPBE)、10μM的达玛烷型三萜皂苷、10μM罗格列酮到培养基(其中纯培养液为空白对照组)处理48h，分别加入含有20mMGlu培养液孵育1h后，分别收集培养基，培养基经离心后，采用葡萄糖测定试剂盒测定其中葡萄糖含量，计算各给药组细胞葡萄糖消耗量，即空白孔含糖量-加药孔含糖量，富含青钱柳三萜皂苷的提取物和达玛烷型三萜皂苷对3T3-L1细胞萄糖消耗量的结果见图1，从图1看到，富含青钱柳三萜皂苷的提取物和达玛烷型三萜皂苷对3T3-L1细胞萄糖消耗量均有增高，其中化合物1、2、3、6、7和阳性对照罗格列酮(rosiglitazone)增高3T3-L1细胞萄糖消耗量显著，化合物2、3增高3T3-L1细胞萄糖消耗量与阳性对照罗格列酮的几乎相当如A图，且具有浓度依赖性如B图，表明青钱柳中含有降血糖活性良好的达玛烷型三萜皂苷类化合物。
本例通过观察3T3-L1前脂肪细胞株分化为成熟脂肪细胞和诱导为胰岛素抵抗模型过程中形态的变化，建立成功的脂肪细胞胰岛素抵抗模型，然后在此基础上，观察达玛烷型皂苷对该IR模型的葡萄糖摄取的影响，为临床治疗糖尿病药物的开发提供基础。
Claims (8)
1.一种达玛烷型三萜皂苷类化合物，其特征在于，所述达玛烷型三萜皂苷类化合物的结构如式(I)所示：
式(I)，其中，
[结构式1]为(3α,11α,20S,24R,25)-五羟基达玛-3-O-α-D-阿拉伯吡喃糖苷(青钱苷S)；
[结构式2]为(3α,11α,20S,24R,25)-五羟基达玛-3-O-α-L-阿拉伯吡喃糖基-11-O-β-D-吡喃鸡纳糖苷(青钱苷T)；
[结构式3]为(3α,11α,20S,24R,25)-五羟基达玛-3-O-α-L-阿拉伯呋喃糖基-11-O-β-D-鸡纳吡喃糖苷(青钱苷S)；
[结构式4]为(3α,11α,20S)-三羟基达玛-23,25-二烯-3-O-β-D-鸡纳吡喃糖基-11-O-β-D-鸡纳吡喃糖苷(青钱苷V)；
[化结构式5]为(3α,11α,25)-三羟基达玛-(20S,24R)-环氧-11-O-β-D-鸡纳吡喃糖苷(青钱苷W)；
[结构式6]为(3α,11α,25)-三羟基达玛-(20S,24R)-环氧-3-O-β-D-木吡喃糖基-11-O-β-D-鸡纳吡喃糖苷(青钱苷X)；
[结构式7]为(3α,11α,25)-三羟基达玛-(20S,24R)-环氧-3-O-(5'-O-甲酰)-α-L-阿拉伯呋喃糖基-11-O-β-D-鸡纳吡喃苷(青钱苷Y)；
[结构式8]为(3α,12β)-二羟基达玛-22-烯-(20S,25)-内酯-3-O-α-L-阿拉伯吡喃糖基-11-O-α-L-阿拉伯吡喃糖苷(青钱苷Z1)；
[结构式9]为(3α,12β)-二羟基达玛-(20S,25)-内酯-3-O-α-L-阿拉伯吡喃糖基-11-O-β-D-葡萄吡喃糖苷(青钱苷Z2)；
[结构式10]为(3α,12β)-二羟基达玛-(20S,25)-内酯-3-O-α-L-阿拉伯呋喃糖基-11-O-β-D-葡萄吡喃糖苷(青钱苷Z3)。
[结构式11]为(3α,12β)-二羟基达玛-(20S,25)-内酯-3-O-α-L-阿拉伯吡喃糖基-11-O-β-D-鸡纳吡喃糖苷(青钱苷Z4)；
[结构式12]为(3α,11α)-二羟基达玛-20-酮-3-O-α-L-阿拉伯呋喃糖基-11-O-α-L-阿拉伯吡喃糖苷(青钱苷Z5)；
[结构式13]为(3α,11α)-二羟基达玛-20-酮-3-O-α-L-阿拉伯吡喃糖基-11-O-α-L-阿拉伯吡喃糖苷(青钱苷Z6)。
2.制备如权利要求1所述达玛烷型三萜皂苷类化合物的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
S1：取干燥的青钱柳叶，加入乙醇水溶液，依次加热回流提取，合并滤液，减压回收乙醇，得浸膏；
S2：加水将步骤S1制备的浸膏溶解稀释，经D101大孔吸附树脂色谱柱吸附后，用水清洗，然后用20％、95％乙醇洗脱，95％乙醇洗脱物作为富含达玛烷型三萜皂苷的青钱柳叶提取物；
S3：将步骤S2制备的95％乙醇洗脱物，依次采用硅胶柱色谱、反相C18柱色谱、凝胶柱色谱和制备型C18高效液相色谱进行分离，得到式(I)所示的达玛烷型三萜皂苷类化合物。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤S2中所述的D101大孔吸附树脂柱色谱所用的洗脱液为醇溶剂。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤S3中所述的硅胶柱色谱所用的洗脱液为石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮、乙醇或甲醇中的一种溶剂或不同种溶剂的混合液。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤S3中所述的反相C18柱色谱采用的仪器为低压制备色谱、中压制备色谱、高效液相色谱或动态轴向压缩色谱，所用的流动相为甲醇-水溶液或乙腈-水溶液。
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤S3中所述的凝胶柱色谱中的凝胶为Sephadex LH-20，所用的洗脱剂为水溶液、二氯甲烷、三氯甲烷、丙酮、乙醇或甲醇中的一种溶剂或不同种溶剂的混合液。
7.权利要求2-6任意一项所述的所述的制备方法制备的达玛烷型皂苷在制备降血糖药物中的应用，其中，所述达玛烷型三萜皂苷类化合物为权利要求1所述的达玛烷型三萜皂苷类化合物的任意一种或几种。
8.权利要求2-7任意一项所述的所述的制备方法制备的达玛烷型皂苷在制备降血糖药物中的应用，其特征在于，包括权利要求1所述的达玛烷型三萜皂苷类化合物的一种或几种与药学可接受的赋形剂。
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