CN115645417A

CN115645417A - 鹅去氧胆酸在制备治疗或预防猪病毒性腹泻的药物或饲料添加剂中的应用

Info

Publication number: CN115645417A
Application number: CN202211264610.3A
Authority: CN
Inventors: 吴涛; 侯永清; 易丹; 李中华
Original assignee: Wuhan Polytechnic University
Current assignee: Wuhan Polytechnic University
Priority date: 2022-10-17
Filing date: 2022-10-17
Publication date: 2023-01-31

Abstract

本发明公开了鹅去氧胆酸在制备治疗或预防猪病毒性腹泻的药物或饲料添加剂中的应用，属于猪病毒病防治技术领域。鹅去氧胆酸能够抑制猪流行性腹泻病毒、传染性胃肠炎病毒和轮状病毒的增殖，以及抑制其对细胞的感染；鹅去氧胆酸能有效防治猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和轮状病毒的感染引起的腹泻，减少猪病毒性腹泻的发生，降低发病猪的死亡率，有效提高猪的成活率和生产性能。将鹅去氧胆酸用于制备治疗或预防猪病毒性腹泻的药物或饲料添加剂，安全性高，治疗、预防效果好。

Description

鹅去氧胆酸在制备治疗或预防猪病毒性腹泻的药物或饲料添加剂中的应用

技术领域

本发明属于猪腹泻性疫病防治技术领域，具体涉及鹅去氧胆酸在制备治疗或预防猪病毒性腹泻的药物或饲料添加剂中的应用。

背景技术

鹅去氧胆酸(chenodeoxycholic acid，CDCA)，即3α,7α-二羟基-5β-胆烷酸，分子式为 C₂₄H₄₀O₄，分子量为392.56。鹅去氧胆酸是天然的初级胆汁酸，是由1个刚性的甾环和1个脂肪侧链共24个碳原子构成的甾体化合物，其甾核的A环与B环以顺式稠合形成一个凹腔，分子中的3位和7位上各有一个α羟基指向凹面，与侧链上的羧基共同形成亲水的α面，而3个甲基则指向另一面，形成疏水的β面，具有脂/水双亲特性。鹅去氧胆酸的结构如下式所示：

鹅去氧胆酸熔点167-171℃，白色针状结晶，味苦、无臭，不溶于石油酿、苯、水等，能溶于甲醇、乙醇、冰乙酸等。鹅去氧胆酸在1848年在鹅胆汁中初次被发现，1924年定名为鹅去氧胆酸，较高含量的鹅去氧胆酸存在于鸡、鸭、鹅、猪、羊等动物的胆汁中是一种疏水性、内源性胆汁酸，在人、畜、禽的胆汁中广泛存在，是鸡、鸭和鹅等家禽胆汁中的主要有机成分。自从Thistle和Schoenfield发现鹅去氧胆酸能够治疗胆结石症后，在医药方面的应用就一直受到重视。20世纪70年代以来，鹅去氧胆酸在临床上主要用于治疗胆结石疾病和其他肝胆疾病。鹅去氧胆酸还具有抗菌、抗炎、解热及调节免疫等药理作用，对哮喘、骨关节炎、脑腱黄瘤病、以及胰岛素的耐受性均有一定的效果，因此，在临床上的应用范围也不断扩大。鹅去氧胆酸除本身的药用价值外，还是制取其他药物的基础物质，特别是合成熊去氧胆酸的主要原料。然而鹅去氧胆酸在治疗或预防畜禽疫病中还未见相关报道。

猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)感染引起的猪流行性腹泻 (porcine epidemic diarrhea,PED)是一种高度接触性肠道传染病。其特征性临床症状为感染仔猪的呕吐、腹泻和脱水。该病的主要危害为对仔猪的高致死率，低于七日龄的仔猪感染后死亡率可达100％。

猪传染性胃肠炎(transmissible gastroenteritis of swine,TGE)又称幼猪的胃肠炎，是由猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)感染引起的，一种高度接触传染性，以呕吐、严重腹泻、脱水，致两周龄内仔猪高死亡率为特征的病毒性传染病。从1933年起，在美国的伊利诺斯州就有本病的记载，随后，日本在1956年，英国在1957年相继发生本病。以后许多欧洲国家，中南美洲、加拿大、朝鲜和菲律宾相继报道了本病。我国的四川、湖北等多省市也有本病的发生。 TGE对首次感染的猪群造成的危害尤为明显。在短期内能引起各种年龄的猪100％发病，病势依日龄而异，日龄越小，病情愈重，死亡率也愈高，2周龄内的仔猪死亡率达90％-100％。康复仔猪发育不良，生长迟缓，在疫区的猪群中，患病仔猪较少，但断奶仔猪有时死亡率达 50％。在1977年，法国仅由于应付TGE的暴发就耗用了1000万美元的防治费用。TGE的发生和流行有明显季节性，一般多发生于冬季和春季，发病高峰为1～2月份。病毒传播可通过猪的直接接触。母猪乳汁可以排毒，并通过乳汁传播给哺乳仔猪，也可以通过呼吸道传播。粪便带有病毒可经口、鼻感染传播。病后康复猪带毒时间可长达8周，是发病猪场主要传染源。TGEV常与大肠杆菌、轮状病毒混合感染，而导致哺乳仔猪和断奶仔猪死亡率增多。TGEV 是我国仔猪腹泻发生的主要病原，严重的阻碍了生猪养殖业的发展。

猪轮状病毒腹泻是由猪轮状病毒(Porcine Rotavirus,PoRV)引起的猪急性肠道传染病，仔猪轮状病毒性腹泻主要以腹泻、厌食、呕吐、脱水为特征，一旦暴发就可能连年发生，患病猪和隐性带毒猪是该病的主要传染源。Woode等在1974年首次从猪分离出轮状病毒。中国于1982年从腹泻猪粪便中分离到轮状病毒。澳大利亚、美国、英国等先后都有关于该病毒的报道，目前该病在全世界普遍存在。我国轮状病毒流行的特点是混合感染，由于饲养环境较差，人们往往认为这一时期仔猪腹泻是大肠埃希菌引发，其实轮状病毒是其发病的一个重要诱因。轮状病毒性腹泻对人类健康和畜牧业发展都有较大危害，在全球已成为一个重要的公共卫生问题。

目前我国畜禽重要疾病的发生和流行的防控主要靠疫苗，疫苗预防是防控病毒性感染的有效途径，但是有些病毒变异性强，疫苗的研发速率难以赶上病毒的变异，所以往往会出现免疫失败的现象。特别是在我国高密度的养殖状况，大剂量的抗病毒药物滥用，导致病毒(菌) 株的变异速度超过了疫苗研制的速度，大规模流行病时常爆发。这些都意味着我们也要清醒地认识到抗病毒药物和抗细菌药物的研发迫在眉睫。鉴于猪病毒性腹泻的防控现状，开发抗猪病毒性腹泻的药物和饲料添加剂已经迫在眉睫。截止目前，尚未见到有关鹅去氧胆酸在抗猪病毒性腹泻治疗或防控方面的应用。

发明内容

本发明的目的在于提供鹅去氧胆酸在制备治疗或预防猪病毒性腹泻的药物或饲料添加剂中的应用，具有安全性高、无毒副作用，对猪腹泻性病毒感染保护率高的效果。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

鹅去氧胆酸在制备治疗或预防猪病毒性腹泻的药物或饲料添加剂中的应用。所述的猪病毒性腹泻由下述病毒中的一种或多种感染引起：猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒。鹅去氧胆酸的有效剂量是10-50mg/kg体重，鹅去氧胆酸可单独给药，也可与辅料一起制成制剂给药；也可以单独或制成制剂后添加到饲料中或者饮水中给药。

所述的治疗或预防猪病毒性腹泻的药物或饲料添加剂可以为口服液、颗粒剂、片剂、粉剂等剂型，其可由鹅去氧胆酸与无水乙醇、注射用水、吐温-80、乳糖、可溶性淀粉和麸皮中的一种或多种按一定比例组成，采用药学上常规的制剂方法制备而成，比如采用下述方法中的一种或多种制成相应剂型：

A、将鹅去氧胆酸5g或10g与无水乙醇20mL、吐温-80 30mL、注射用水50mL溶解混匀后制成50mg/mL或100mg/mL的口服液；

B、将鹅去氧胆酸与乳糖15g、可溶性淀粉35g按此比例用常规技术制成鹅去氧胆酸含量为50％的颗粒剂或者片剂；

C、将鹅去氧胆酸50g与可溶性淀粉50g或者麸皮50g按此比例用常规技术制成鹅去氧胆酸含量为50％的粉剂。

所述的治疗或预防猪病毒性腹泻的药物或饲料添加剂的使用方法为下述方法中的一种或多种：

(1)将颗粒剂、口服液、粉剂或者片剂加入到饲料或饮水中，按照10-50mg/kg体重的剂量使用。

(2)或鹅去氧胆酸为单独给药，按照10-50mg/kg体重的剂量使用。

(3)作为平时预防猪病时添加，可以按照10mg/kg体重的添加剂量添加于饲料中，在整个饲养周期使用。

(4)当用于临床治疗猪病的时候，可以按照50mg/kg体重的剂量将口服液经口腔灌服，或者将粉剂、颗粒剂或片剂按照50mg/kg体重剂量直接饲喂，或将粉剂、颗粒剂或片剂按照 50mg/kg体重剂量与日粮混合，添加于饲料中使用，每天早中晚添加三次，连续使用一周。

鹅去氧胆酸在制备抗猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和/或猪轮状病毒的药物中的应用。

本发明与现有技术相比，具有以下优点和效果：

1、鹅去氧胆酸，安全性高，可以作为饲料添加剂长期使用，以达到预防疫病的目的，长期使用也不会导致耐药菌株产生，也不会有其他的毒副作用，这是其他抗病药物所不具备的优点。

2、鹅去氧胆酸通过抑制病毒增殖，增强机体抗氧化防御机能，提高猪的天然免疫功能和抗病毒活性，能有效防治猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和轮状病毒的感染引起的腹泻，从而降低猪腹泻病的发生及发病猪的死亡。鹅去氧胆酸作为治疗和预防猪病毒性腹泻具有显著的功效。

3、体外实验结果表明：鹅去氧胆酸具有显著抑制PEDV、TGEV和PoRV的体外增殖的效果，按50μg/mL的添加量在细胞培养基中添加鹅去氧胆酸，能够使猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和轮状病毒在相应细胞上的TCID₅₀分别降低约6-8个滴度。

4、体内实验结果表明：鹅去氧胆酸具有增强天然免疫功能、抗病毒活性，能有效防治猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和轮状病毒的感染，从而降低发病猪的死亡率，有效提高猪的成活率和生产性能。按10mg/kg体重经口服或在仔猪日常饲料中添加鹅去氧胆酸，可有效预防猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和轮状病毒感染导致的腹泻。按50mg/kg 体重经口服或在仔猪饲料中添加鹅去氧胆酸对猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和轮状病毒感染保护率可达到75-90％左右。

附图说明

图1是荧光显微镜观察鹅去氧胆酸对PEDV DR13毒株在Vero细胞增殖的影响。

具体实施方式：

下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

实施例1：

鹅去氧胆酸在制备治疗或预防猪病毒性腹泻的药物和饲料添加剂中的应用，其步骤包括：

A、称取鹅去氧胆酸10g、无水乙醇20mL、吐温-80 30mL、注射用水加至100mL。

B、制备方法：先将鹅去氧胆酸溶于无水乙醇中，接着加入吐温-80，最后缓慢加入注射用水，补足至100mL。

C、获得一种鹅去氧胆酸口服液(100mg/mL)。

D、作为平时预防猪病时使用，可以按照10mg/kg(鹅去氧胆酸/体重)的添加剂量添加于饲料中，在整个饲养周期使用。

E、用于临床治疗猪病的时候，可以按照50mg/kg体重的剂量将口服液经口腔灌服，或者将口服液按照50mg/kg体重剂量直接饲喂，或者将口服液按照50mg/kg体重剂量与日粮混合添加于饲料中使用，每天早中晚添加三次，连续使用一周。

实施例2：

A、称取鹅去氧胆酸5g、无水乙醇20mL、吐温-80 30mL、注射用水加至100mL。

C、获得一种鹅去氧胆酸口服液(50mg/mL)。

D、作为平时预防猪病时使用，可以按照10mg/kg体重的添加剂量添加于饲料中，在整个饲养周期使用。

E、用于临床治疗猪病的时候，可以按照50mg/kg体重的剂量将口服液经口腔灌服，或者将口服液按照50mg/kg体重剂量直接饲喂，或将口服液按照50mg/kg体重剂量与日粮混合，添加于饲料中使用，每天早中晚添加三次，连续使用一周。

实施例3：

A、称取鹅去氧胆酸50g、乳糖15g、可溶性淀粉35g。

B、制备方法：将鹅去氧胆酸、乳糖、可溶性淀粉混合制粒，烘干，分装即得。

C、获得一种鹅去氧胆酸颗粒剂(鹅去氧胆酸含量为50％)。

E、用于临床治疗猪病的时候，可以按照50mg/kg体重的剂量将颗粒剂直接饲喂，或将颗粒剂按照50mg/kg体重剂量与日粮混合，添加于饲料中使用，每天早中晚添加三次，连续使用一周。

实施例4：

A、称取鹅去氧胆酸50g、可溶性淀粉50g或麸皮50g。

B、制备方法：将鹅去氧胆酸与可溶性淀粉或麸皮混合均匀，过60目筛，分装即得。

C、获得一种鹅去氧胆酸粉剂(鹅去氧胆酸含量为50％)。

E、用于临床治疗猪病的时候，可以按照50mg/kg体重的剂量将粉剂直接饲喂，或将粉剂按照50mg/kg体重剂量与日粮混合，添加于饲料中使用，每天早中晚添加三次，连续使用一周。

实施例5：

A、称取鹅去氧胆酸50g、乳糖15g、可溶性淀粉35g。

B、制备方法：将鹅去氧胆酸、乳糖、可溶性淀粉混合后，用压片机压片烘干即可。

C、获得一种鹅去氧胆酸片剂(鹅去氧胆酸含量为50％)。

D、作为平时预防猪病时使用，可以按照10mg/kg体重的添加剂量将片剂添加于饲料中，在整个饲养周期使用。

E、用于临床治疗猪病的时候，可以按照50mg/kg体重的剂量将片剂直接饲喂，或将片剂按照50mg/kg体重剂量与日粮混合，添加于饲料中使用，每天早中晚添加三次，连续使用一周。

实施例6：

鹅去氧胆酸对致猪腹泻性病毒(PEDV、TGEV和PoRV)体外增殖的抑制作用

1、材料与方法：

1.1病毒：猪流行性腹泻病毒(PEDV)DR13株和YN株、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)WH1株，猪轮状病毒(PoRV)TM-a株由华中农业大学国家农业微生物重点实验室分离、保存并馈赠。

1.2细胞：非洲绿猴肾细胞(Vero细胞)，用于PEDV DR13株和YN株的增殖；猪肾细胞(PK-15)用于TGEV WH1株的增殖；恒河猴胚肾传代细胞系(MA-104细胞)用于PoRV TM-a株的增殖，所有的细胞由华中农业大学惠赠。

1.3试验药物：鹅去氧胆酸(麦克林公司，纯度90％)。

1.4试剂：DMEM培养基、EDTA、胰酶、胎牛血清和双抗(青链霉素)均购自GIBCO 公司。

1.5体外增殖抑制作用：

PEDV体外增殖抑制试验：所有的体外试验均设置三个试验组和一个空白组，试验组分别在培养基中加入不同剂量的鹅去氧胆酸，其中鹅去氧胆酸低剂量组(按照10μg/mL培养基添加)、鹅去氧胆酸中剂量组(按照25μg/mL培养基添加)、鹅去氧胆酸高剂量组(按照50μg/mL 培养基添加)和空白对照组(培养基中不添加鹅去氧胆酸)。使用PEDV DR13毒株感染Vero 细胞(MOI＝0.001)，感染同时添加不同浓度的鹅去氧胆酸。感染后36h后，利用荧光显微镜观察鹅去氧胆酸对PEDV DR13毒株体外增殖的影响。

同时PEDV YN株病毒液用DMEM维持液做10倍系列稀释，取10^-2、10^-3、10^-4、10^-5、 10^-6、10^-7六个稀释度，分别接种于已培养好的Vero细胞单层的96孔板，100μL/孔，每个组分别加入含有不同浓度鹅去氧胆酸的DMEM维持液，置37℃含5％ CO₂培养箱中继续培养 36h，观察细胞病变。统计每个稀释度的细胞孔中病变阳性孔数，利用Reed-Muench法计算出每个鹅去氧胆酸组的TCID₅₀，比较不同组TCID₅₀的值判断鹅去氧胆酸对PEDV YN株体外增殖的抑制作用，每个组做三个重复。

TGEV体外增殖抑制试验：TGEV WH1株病毒液用DMEM维持液做10倍系列稀释，取10^-2、10^-3、10^-4、10^-5、10^-6、10^-7六个稀释度，分别接种于已培养好的PK15细胞单层的96 孔板，100μL/孔，每个组分别加入含有不同浓度鹅去氧胆酸的DMEM维持液，置37℃含5％ CO₂培养箱中继续培养48h，观察细胞病变。统计每个稀释度的细胞孔中病变阳性孔数，利用Reed-Muench法计算出每个鹅去氧胆酸组的TCID₅₀，比较不同组TCID₅₀的值判断鹅去氧胆酸对PEDV体外增殖的抑制作用，每个组做三个重复。

PoRV体外增殖抑制试验：PoRV TM-a株病毒液用DMEM维持液做10倍系列稀释，取10^-2、10^-3、10^-4、10^-5、10^-6、10^-7六个稀释度，分别接种于已培养好的MA-104细胞单层的 96孔板，100μL/孔，每个组分别加入含有不同浓度鹅去氧胆酸的DMEM维持液，置37℃含 5％CO₂培养箱中继续培养48h，观察细胞病变。统计每个稀释度的细胞孔中病变阳性孔数，利用Reed-Muench法计算出每个鹅去氧胆酸组的TCID₅₀，比较不同组TCID₅₀的值判断鹅去氧胆酸对PEDV病毒体外增殖的抑制作用，每个组做三个重复。

1.7数据分析：试验数据采用SPSS 13.0统计软件中的单因素方差分析(One-wayANOVA) 和Duncan氏法多重比较，以P<0.05为差异显著性标准，以P<0.01为差异极显著标准。结果用平均值表示。

2、实验结果：

2.1鹅去氧胆酸对PEDV DR13毒株在Vero细胞增殖的荧光观察

通过荧光显微镜观察，在PEDV重组毒株DR13-EGFP感染过程中加入不同浓度的鹅去氧胆酸，感染后36h后通过荧光显微镜观察病毒的感染情况(通过EGFP反应病毒感染细胞的情况)。结果(图1)发现鹅去氧胆酸可以有效降低PEDV感染Vero细胞的数量，呈现明显的剂量依赖性，表明鹅去氧胆酸在体外具有良好的抗PEDV效果。

2.2鹅去氧胆酸对不同病毒TCID₅₀的影响

表1鹅去氧胆酸对不同病毒的TCID₅₀影响

表1结果显示：在细胞培养液中添加不同浓度的鹅去氧胆酸显著影响PEDV在Vero细胞上的TCID₅₀值，随着鹅去氧胆酸添加量的增加，PEDV在Vero细胞上的TCID₅₀显著下降，说明鹅去氧胆酸对PEDV病毒在体外培养的Vero细胞中的增殖具有一定的抑制作用。在细胞培养液中添加不同浓度的鹅去氧胆酸显著影响TGEV在PK15细胞上的TCID₅₀值，随着鹅去氧胆酸添加量的增加，TGEV在PK15细胞上的TCID₅₀显著下降，说明鹅去氧胆酸对TGEV 在体外培养的PK15细胞中的增殖具有明显的抑制作用。在细胞培养液中添加不同浓度的鹅去氧胆酸显著影响猪轮状病毒在细胞上的TCID₅₀值，随着鹅去氧胆酸添加量的增加，PoRV 在MA-104细胞上的TCID₅₀显著下降，说明鹅去氧胆酸对PoRV在体外培养的MA-104细胞中的增殖具有明显的抑制作用。

实施例7：

鹅去氧胆酸对猪流行性腹泻病毒感染仔猪的保护作用

材料与方法：

1.试验病毒：PEDV YN株由华中农业大学国家农业微生物学重点实验室馈赠。

2.鹅去氧胆酸：鹅去氧胆酸(麦克林公司，纯度90％)。

3.试验动物：挑选品种、来源相同，体重相近，没有母源抗体的7日龄健康仔猪，进行攻毒试验，试验仔猪分为三个鹅去氧胆酸添加组、一个空白对照组和一个PEDV组。鹅去氧胆酸溶于牛奶中，定容至3mL灌服，其中鹅去氧胆酸低剂量组(按照10mg/kg体重剂量添加)、鹅去氧胆酸中剂量组(按照50mg/kg体重剂量添加)和鹅去氧胆酸高剂量组(按照100mg/kg体重剂量添加)和空白对照组(灌喂等剂量的牛奶，不添加鹅去氧胆酸)，每个组10头仔猪。

4.攻毒试验：试验持续12天，于第4天至第11天对三个实验组仔猪按照一定的剂量口腔灌服溶解在牛奶中的鹅去氧胆酸，其他组只灌服溶剂。于第8天以10⁷TCID₅₀/mL的PEDV(NY株)攻毒，每头口服灌注5.0mL，然后连续观察4天，于第12天时前腔静脉处采血，麻醉后屠宰取十二指肠、空肠、回肠、结肠，液氮冷冻后转至-80℃冰箱保存。

5.观察指标：试验期间，记录每组的采食量，在正式试验开始前，在攻毒前和屠宰取样前称取每头仔猪的重量，统计饲料转化率和料重比；分别于试验第0天、第4天、第9天、第11天的第一次喂食之前测量仔猪体重。试验全程定时观察试验动物腹泻情况，并对粪便形态进行评分，评分标准为：无腹泻情况记为0分；粪便糊状记1分；粪便呈酸奶状记2分；液体粪便记3分。攻毒后每天观察试验仔猪的腹泻情况，试验期满屠宰试验仔猪观察肠道病变，同时统计死亡猪数，计算腹泻率；屠宰前一小时灌喂D-木糖，然后采血，测定其血液生化指标和血液中D-木糖和DAO的含量；同时对肠道组织进行切片观察，统计其绒毛高、隐窝深和二者之间的比值，评价肠道损伤情况；通过实时定量PCR检测仔猪肠道黏膜中PEDV 结构基因N或M的表达量来确定鹅去氧胆酸对PEDV病毒的抑制作用。

6.数据分析：平均日增重、粪便评分、血浆生化和血细胞计数的试验数据采用SPSSv21 单因素方差分析，差异显著后根据Duncan多重比较分析差异，检测指标结果记为“平均值±标准差”，P<0.05则认为差异显著，以P<0.01为差异极显著标准。结果用平均值表示。

实验结果：

饲料中添加不同剂量的鹅去氧胆酸后，对仔猪平均日增重、粪便形态评分和腹泻率见表 2。结果显示：PEDV攻毒前，各组仔猪粪便形态评分无显著差异，腹泻率无显著差异，但是添加鹅去氧胆酸后，仔猪的平均日增重显著增加(P<0.05)。PEDV攻毒后，各组仔猪粪便形态评分显著差异，随着鹅去氧胆酸添加量的增加，粪便形态评分降低，水便明显减少(P<0.05)，腹泻率也显著降低(P<0.05)；仔猪的平均日增重显著增加(P<0.05)。试验结果充分表明：鹅去氧胆酸添加后能显著提高仔猪的日增重，降低腹泻率，改善粪便形态。

表2鹅去氧胆酸对仔猪平均日增重和粪便形态评分的影响

饲料中添加不同剂量的鹅去氧胆酸后，PEDV感染仔猪肠道PEDV基因相对表达量见表 3。结果显示：与对照组相比，PEDV组仔猪十二指肠、空肠、回肠以及结肠中的PEDV-M基因与PEDV-N基因的相对表达量显著上调(P<0.05)；与PEDV组相比，添加鹅去氧胆酸后仔猪十二指肠、空肠、回肠和结肠中PEDV-N基因和PEDV-M基因的相对表达量显著下调 (P<0.05)。试验结果充分表明：添加鹅去氧胆酸可以显著降低PEDV的N和M基因表达量，鹅去氧胆酸添加后能显著降低PEDV毒力，抑制PEDV复制。

表3鹅去氧胆酸对PEDV感染仔猪肠道PEDV基因相对表达量的影响

实施例8：

鹅去氧胆酸对猪传染性胃肠炎病毒感染仔猪的保护作用

材料与方法：

1.试验病毒：TGEV WH1株由华中农业大学国家农业微生物学重点实验室馈赠。

2.鹅去氧胆酸：鹅去氧胆酸(麦克林公司，纯度90％)。

3.试验动物：挑选品种、来源相同，体重相近，没有母源抗体的7日龄健康仔猪，进行攻毒试验，试验仔猪分为三个试验组和一个空白对照组，鹅去氧胆酸溶于牛奶中，定容至3mL 灌服，其中鹅去氧胆酸低剂量组(按照10mg/kg体重剂量添加)、鹅去氧胆酸中剂量组(按照 50mg/kg体重剂量添加)和鹅去氧胆酸高剂量组(按照100mg/kg体重剂量添加)和空白对照组(饲料中不添加鹅去氧胆酸)，每个组10头仔猪。

4.攻毒试验：各个组仔猪在饲喂1周后，以10⁶TCID₅₀/mL的TGEV WH1株攻毒，每头口服灌注5.0mL，然后隔离饲养，然后隔离饲养，连续观察7天至试验结束。

5.观察指标：每天观察试验仔猪的腹泻情况，试验期满屠宰试验仔猪观察肠道病变，同时统计死亡猪数，计算腹泻率、死亡率。

6.数据分析：试验数据采用SPSS 13.0统计软件中的单因素方差分析(One-wayANOVA) 和Duncan氏法多重比较，以P<0.05为差异显著性标准，以P<0.01为差异极显著标准。结果用平均值表示。

实验结果：

饲料中添加不同剂量的鹅去氧胆酸后，各组仔猪发病率与死亡率见表4。

表4鹅去氧胆酸对TGEV感染仔猪的保护

表4结果显示：仔猪口服不同剂量的鹅去氧胆酸能够显著降低TGEV感染仔猪的发病率与死亡率，与空白组相比，随着剂量的增加，感染TGEV仔猪的腹泻率下降30％～90％；而发病猪的死亡率下降20％～90％；试验结果充分表明：鹅去氧胆酸添加后能显著提高仔猪对 TGEV感染的保护率。

实施例9：

鹅去氧胆酸对猪轮状病毒感染仔猪的保护作用

材料与方法：

1.试验病毒：猪轮状病毒(PoRV)TM-a株由华中农业大学国家农业微生物重点实验室馈赠。

2.鹅去氧胆酸：鹅去氧胆酸(麦克林公司，纯度90％)。

3.试验动物：挑选品种、来源相同，体重相近，没有母源抗体的3日龄健康仔猪，进行攻毒试验，试验仔猪分为三个试验组和一个空白对照组，鹅去氧胆酸溶于牛奶中，定容至3mL 灌服，其中鹅去氧胆酸低剂量组(按照10mg/kg体重剂量添加)、鹅去氧胆酸中剂量组(按照 50mg/kg体重剂量添加)和鹅去氧胆酸高剂量组(按照100mg/kg体重剂量添加)和空白对照组(饲料中不添加鹅去氧胆酸)，每个组10头仔猪。

4.攻毒试验：各个组仔猪在饲喂1周后，以10⁷TCID₅₀/mL的PoRV TM-a株攻毒，每头口服灌注5.0mL，然后隔离饲养，然后隔离饲养，连续观察7天至试验结束。

实验结果：

饲料中添加不同剂量的鹅去氧胆酸后，各组仔猪发病率与死亡率见表5。

表5鹅去氧胆酸对PoRV感染仔猪的保护

表5结果显示：仔猪口服不同剂量的鹅去氧胆酸能够显著降低PoRV感染仔猪的发病率与死亡率，与空白组相比，随着剂量的增加，感染PoRV仔猪的腹泻率下降30.0％～90.0％；而发病猪的死亡率下降20.0％～50.0％；试验结果充分表明：鹅去氧胆酸添加后能显著提高仔猪对PoRV感染的保护率。

Claims

1.鹅去氧胆酸在制备治疗或预防猪病毒性腹泻的药物或饲料添加剂中的应用，其特征在于：所述的猪病毒性腹泻由下述病毒中的一种或多种感染引起：猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的药物或饲料添加剂为鹅去氧胆酸；或所述的药物或饲料添加剂为以鹅去氧胆酸作为有效成分添加辅料制成的制剂，所述的制剂包括口服液、颗粒剂、片剂、粉剂。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述的药物或饲料添加剂由鹅去氧胆酸与无水乙醇、注射用水、吐温-80、乳糖、可溶性淀粉和麸皮中的一种或多种组成。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：鹅去氧胆酸的剂量为10-50mg/kg体重。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：预防猪病毒性腹泻时，鹅去氧胆酸的剂量为10mg/kg体重，在猪的整个饲养周期使用所述的药物或饲料添加剂。

6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：治疗猪病毒性腹泻时，鹅去氧胆酸的剂量为50mg/kg体重，每天早中晚往饲料中添加三次所述的药物或饲料添加剂，连续使用一周。

7.鹅去氧胆酸在制备抗猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和/或猪轮状病毒的药物中的应用。