CN115634232A - 融合魏斯氏菌j4-1胞外多糖抗结直肠癌的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及医疗技术领域，公开了融合魏斯氏菌(Weissella confusa)J4‑1胞外多糖抗结直肠癌的应用，融合魏斯氏菌(Weissella confusa)J4‑1的保藏编号为CCTCC M 20221189。本发明通过设置实验动物及分组，构建裸鼠皮下瘤模型，对实验分组进行处理，制作病理标本，小鼠肿瘤组织及心肝脾肺肾组织病理学检查，细胞实验分组及处理，检测结肠癌细胞增殖情况，细胞周期检测，J4‑1胞外多糖抗结肠癌细胞增殖机制验证和实验结果十个步骤，通过采用瘤内注射J4‑1胞外多糖，能明显抑制结肠癌细胞的G0/G1期细胞周期进展，抑制细胞增殖，有效的发挥抗结肠癌作用。同时兼有对小鼠体重和生长状态无影响、对小鼠重要脏器无损伤的安全性。
Description
技术领域
本发明涉及医疗技术领域，具体为融合魏斯氏菌J4-1胞外多糖抗结直肠癌的应用。
背景技术
结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)是一种不仅发病率高，且死亡率高的癌症。早期CRC的临床症状多不明显，患者常常不能及时发现，大部分CRC患者发现病情时已是中晚期。治疗方案经过了数十年的逐步更新优化使结直肠癌晚期疾病患者的总生存期有所延长，死亡率有一定程度下降，但是由于人口基数大，CRC依然严重威胁着中国及全球人类的生命健康，同时化疗、靶向治疗也伴随着因人而异的毒副作用，甚至危及生命。因此，寻找更新更有效的CRC治疗方法具有重要意义。
越来越多的研究证明肠道微生物，菌体成分或者代谢产物(后生元)可以抑制结直肠癌。EPS作为乳酸菌的重要组成部分，具有多种促进健康的生物活性，可以发挥部分或者全部乳酸菌功能。因此，乳酸菌产生的EPS在人类健康包括肿瘤防治中的作用越来越吸引研究者的兴趣。
融合魏斯氏菌(Weissella confusa)，属于乳酸菌的一种，在自然界中占据重要的生态地位，广泛存在于唾液、母乳、人类胃肠道以及传统发酵食品中。目前，W.confusa的EPS主要集中于食品工业领域。但W.confusa的EPS已表现出可观的益生特性，比如抗菌、抗氧化、促进益生菌生长以及免疫调节潜力等。但目前为止，W.confusa及其衍生物EPS在抗肿瘤包括结直肠癌领域的研究，还未有报道。
发明内容
(一)解决的技术问题
针对现有技术的不足，本发明提供了融合魏斯氏菌J4-1胞外多糖抗结直肠癌的应用，具备明显抑制结肠癌细胞，有效的发挥抗结肠癌作用等优点，解决了背景技术中提出的问题。
(二)技术方案
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
本发明要解决的另一技术问题是提供融合魏斯氏菌J4-1胞外多糖抗结直肠癌的应用，包括以下步骤：
1)实验动物及分组：选取SPF级4-5周雌性BALB/C nudle雌性裸鼠，体重约14-17g，实验分组为瘤内注射PBS组(NC组)，瘤内注射低剂量胞外多糖组(Low-dose组)和瘤内注射高剂量胞外多糖组(High-dose组)。。
2)构建裸鼠皮下瘤模型：将HT29结肠癌细胞系用胰酶消化， 1000rpm，5min离心后收细胞，PBS重悬。在BALB/C nudle裸鼠右腋皮下注射100μL HT29结肠癌细胞悬液(5×106个细胞/只)成瘤。
3)对实验分组进行处理：NC组：在裸鼠皮下瘤模型构建后，瘤体积达200mm3左右，每4天瘤内注射PBS 100μL，持续至实验终点为止。Low-dose组和High-dose组：在裸鼠皮下瘤模型构建后，瘤体积达200mm3左右，两组均每4天瘤内注射胞外多糖溶液100μL，持续至实验终点为止。Low-dose组每只裸鼠每次瘤内注射胞外多糖 1.5mg，High-dose组每只鼠每次瘤内注射胞外多糖2.5mg。在此期间密切观察小鼠进食、精神状态及活动反应等。于造模后隔天称量小鼠体重及肿瘤大小，给药后每天称量小鼠体重及肿瘤大小。皮下瘤体积＝最大径×最小径2×0.5。
4)制作病理标本：待4次瘤内注射完毕后处死小鼠，剥离皮下肿瘤组织并收集小鼠心肝脾肺肾标本，进行后续实验操作。
5)小鼠肿瘤组织及心肝脾肺肾组织病理学检查：收集小鼠心脏、肝脏、脾脏、肺和肾组织，进行处理，置于组织固定液中固定24-48 小时。经H&E染色，分析心肝脾肺肾等重要脏器的组织结构变化。
6)细胞实验分组及处理：在实验组(J4-1组)加入1mg/mL的J4-1 胞外多糖溶液2mL，在对照组(NC组)细胞加入完全培养基2mL，细胞系：结肠癌细胞系HT29和SW480细胞，SW480细胞由DMEM 高糖完全培养基培养，HT29由RPMI 1640完全培养基培养。
7)检测结肠癌细胞增殖情况：取生长状态良好的SW480细胞和 HT29细胞，待单层细胞至瓶底面积80％以上时，消化重悬细胞并计数。96孔板的每孔中加入100μl细胞悬液，1000cell/well，保温培养，观察细胞基本贴壁后，取出96孔板并吸除旧的培养基，每孔中加入 100μL含对应样品浓度(0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.5mg/mL)J4-1 胞外多糖的完全培养基，每个浓度做3～6个复孔。培养箱中孵育 72h；每孔加入10μL CCK8溶液，培养箱中避光孵育1-3个小时。用全波长酶标仪测定在450nm处各组细胞的OD值大小。
8)细胞周期检测：取状态良好的SW480细胞和HT29细胞，加入2mL含1mg/mL J4-1胞外多糖的完全培养基作为实验组，对照组细胞加入2ml完全培养基，共培养72h。胰酶消化收集6孔板细胞，加入1ml预冷乙醇重悬细胞，4℃静置12h，1200rpm离心5min沉淀细胞。弃上清，用1ml预冷PBS洗1-2遍固定好的细胞。每个样品中加入碘化丙啶染色液500μl重悬细胞，避光4℃染色30min，24h内上机检测。
9)J4-1胞外多糖抗结肠癌细胞增殖机制验证：取状态良好的 HT29细胞，加入2mL含1mg/mL J4-1胞外多糖的完全培养基作为实验组，对照组细胞加入2mL完全培养基，共培养72h。按99：1的比例混合RIPA和PMSF配制裂解液，各孔加入500μL裂解液，冰上反应30min，使蛋白充分裂解，4℃12000rpm离心30min，取上清。BCA 法检测蛋白浓度并调平，加入蛋白体积1/4的(5×)loading buffer后混匀，100℃加热5min，充分变性蛋白。存于-20℃用于后续Western blot实验。
10)实验结果：1.生长情况：PBS组：小鼠进食和排便正常，活动情况良好，实验过程中体重维持或轻微下降，未出现死亡；Low-dose 组：小鼠进食和排便正常，活动状况良好，实验过程中体重维持或轻微下降，未出现死亡：High-dose组：小鼠进食和排便正常，活动状况良好，实验过程中体重维持或轻微下降，未出现死亡。2.心肝脾肺肾重要脏器损伤情况：PBS组：模型终点，小鼠心肝脾肺肾组织形态正常；Low-dose组：模型终点，小鼠心肝脾肺肾组织形态正常；High-dose组：模型终点，小鼠心肝脾肺肾组织形态正常。3.肿瘤体积变化情况：PBS组：小鼠肿瘤体积由给药前的263立方毫米增加至约1149立方毫米；Low-dose组：小鼠给药前肿瘤体积平均369立方毫米，处死时肿瘤体积平均为787立方毫米，增长速度显著低于PBS 组；High-dose组：小鼠肿瘤体积由给药前的408立方毫米小幅度增加至700立方毫米，随着给药次数的增加，在给药第7天即第2次给药后，累计给药量5mg/只，肿瘤体积停止增长并维持，在第3次给药后，累计给药量7.5mg/只时肿瘤体积开始缩小，处死时肿瘤体积469 立方毫米。4.CCK8实验检测结肠癌细胞增殖情况：在J4-1胞外多糖处理72H时，SW480细胞增殖率表现出浓度依赖性的抑制作用，其中1mg/mL浓度的细胞增殖率为57.13％，明显低于对照组，增殖抑制最明显。在HT29细胞系中，当样品浓度为1mg/mL浓度时，细胞增殖率为71.29％，该浓度对细胞增殖的抑制最显著。5.克隆形成实验检测结肠癌细胞增殖情况：与完全培养基处理的对照组相比， J4-1胞外多糖显著抑制SW480和HT29细胞的克隆形成能力。6.细胞周期实验检测结肠癌细胞增殖情况：1mg/mL的J4-1胞外多糖处理 HT29细胞和SW480细胞72H后，HT29细胞对照组G0/G1期比例是 58.72％，实验组是63.09％，该胞外多糖可阻滞HT29细胞的G0/G1 期。在SW480细胞中，实验组处于G0/G1期的细胞比例53.07％，高于对照组的33.84％，对照组S期细胞占47.33％，实验组35.44％，对照组G2期细胞占18.72％，实验组11.42％。因此J4-1胞外多糖主要阻滞SW480的G0/G1期。7.4-1胞外多糖抗结肠癌细胞增殖机制中相关蛋白表达情况：1mg/mL的J4-1胞外多糖处理HT29细胞72H后，与对照组(NC组)HT29细胞相比，J4-1组细胞P21高表达。
优选的，所述步骤五中处理方式及结果为予以生理盐水冲洗，清除腔内外血液后。
优选的，所述步骤七中保温培养为置于5％ CO2的细胞培养箱中温度设定在37℃，培养时间为12h。
优选的，所述步骤九中加热时采用金属浴。
(三)有益效果
与现有技术相比，本发明提供了融合魏斯氏菌J4-1胞外多糖抗结直肠癌的应用，具备以下有益效果：
该融合魏斯氏菌J4-1胞外多糖抗结直肠癌的应用，通过采用瘤内注射J4-1胞外多糖，能明显抑制结肠癌细胞的G0/G1期细胞周期进展，抑制细胞增殖，有效的发挥抗结肠癌作用。同时兼有对小鼠体重和生长状态无影响、对小鼠重要脏器无损伤的安全性。
附图说明
图1为本发明J4-1胞外多糖对裸鼠结肠癌异种移植瘤、体重和重要器官的影响的示意图；
图2为本发明J4-1胞外多糖对SW480和HT29细胞增殖和周期的影响的示意图；
图3为本发明J4-1胞外多糖影响细胞增殖的机制的示意图。
具体实施方式
下面将结合本发明的实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例一：融合魏斯氏菌J4-1胞外多糖抗结直肠癌的应用，包括以下步骤：
步骤一：实验动物及分组：选取SPF级4-5周雌性BALB/C nudle雌性裸鼠，体重约14-17g，实验分组为瘤内注射PBS组(NC 组)，瘤内注射低剂量胞外多糖组(Low-dose组)和瘤内注射高剂量胞外多糖组(High-dose组)。
步骤二：构建裸鼠皮下瘤模型：将HT29结肠癌细胞系用胰酶消化，1000rpm，5min离心后收细胞，PBS重悬。在BALB/C nudle 裸鼠右腋皮下注射100μL HT29结肠癌细胞悬液(5×106个细胞/只) 成瘤。
步骤三：对实验分组进行处理：NC组：在裸鼠皮下瘤模型构建后，瘤体积达200mm3左右，每4天瘤内注射PBS 100μL，持续至实验终点为止。Low-dose组和High-dose组：在裸鼠皮下瘤模型构建后，瘤体积达200mm3左右，两组均每4天瘤内注射胞外多糖溶液 100μL，持续至实验终点为止。Low-dose组每只裸鼠每次瘤内注射胞外多糖1.5mg，High-dose组每只鼠每次瘤内注射胞外多糖2.5mg。在此期间密切观察小鼠进食、精神状态及活动反应等。于造模后隔天称量小鼠体重及肿瘤大小，给药后每天称量小鼠体重及肿瘤大小。皮下瘤体积＝最大径×最小径2×0.5。
步骤四：制作病理标本：待4次瘤内注射完毕后处死小鼠，剥离皮下肿瘤组织并收集小鼠心肝脾肺肾标本，进行后续实验操作。
步骤五：小鼠肿瘤组织及心肝脾肺肾组织病理学检查：收集小鼠心脏、肝脏、脾脏、肺和肾组织，进行处理，处理方式及结果为予以生理盐水冲洗，清除腔内外血液后，置于组织固定液中固定24-48小时。经H&E染色，分析心肝脾肺肾等重要脏器的组织结构变化。
步骤六：细胞实验分组及处理：在实验组(J4-1组)加入1mg/mL 的J4-1胞外多糖溶液2mL，在对照组(NC组)细胞加入完全培养基2mL，细胞系：结肠癌细胞系HT29和SW480细胞，SW480细胞由DMEM高糖完全培养基培养，HT29由RPMI 1640完全培养基培养。
步骤七：检测结肠癌细胞增殖情况：取生长状态良好的SW480 细胞和HT29细胞，待单层细胞至瓶底面积80％以上时，消化重悬细胞并计数。96孔板的每孔中加入100μl细胞悬液，1000cell/well，保温培养，保温培养为置于5％ CO2的细胞培养箱中温度设定在37℃，培养时间为12h，观察细胞基本贴壁后，取出96孔板并吸除旧的培养基，每孔中加入100μL含对应样品浓度(0.2，0.4，0.6，0.8，1.0， 1.2，1.5mg/mL)J4-1胞外多糖的完全培养基，每个浓度做3～6个复孔。培养箱中孵育72h；每孔加入10μL CCK8溶液，培养箱中避光孵育1-3个小时。用全波长酶标仪测定在450nm处各组细胞的OD值大小。
步骤八：细胞周期检测：取状态良好的SW480细胞和HT29细胞，加入2mL含1mg/mLJ4-1胞外多糖的完全培养基作为实验组，对照组细胞加入2ml完全培养基，共培养72h。胰酶消化收集6孔板细胞，加入1ml预冷乙醇重悬细胞，4℃静置12h，1200rpm离心5min 沉淀细胞。弃上清，用1ml预冷PBS洗1-2遍固定好的细胞。每个样品中加入碘化丙啶染色液500μl重悬细胞，避光4℃染色30min，24h 内上机检测。
步骤九：J4-1胞外多糖抗结肠癌细胞增殖机制验证：取状态良好的HT29细胞，加入2mL含1mg/mL J4-1胞外多糖的完全培养基作为实验组，对照组细胞加入2mL完全培养基，共培养72h。按99：1 的比例混合RIPA和PMSF配制裂解液，各孔加入500μL裂解液，冰上反应30min，使蛋白充分裂解，4℃12000rpm离心30min，取上清。 BCA法检测蛋白浓度并调平，加入蛋白体积1/4的(5×)loading buffer后混匀，100℃采用金属浴加热5min，充分变性蛋白。存于-20℃用于后续Western blot实验。
步骤十：实验结果：1.生长情况：PBS组：小鼠进食和排便正常，活动情况良好，实验过程中体重维持或轻微下降，未出现死亡； Low-dose组：小鼠进食和排便正常，活动状况良好，实验过程中体重维持或轻微下降，未出现死亡：High-dose组：小鼠进食和排便正常，活动状况良好，实验过程中体重维持或轻微下降，未出现死亡。 2.心肝脾肺肾重要脏器损伤情况：PBS组：模型终点，小鼠心肝脾肺肾组织形态正常；Low-dose组：模型终点，小鼠心肝脾肺肾组织形态正常；High-dose组：模型终点，小鼠心肝脾肺肾组织形态正常。3. 肿瘤体积变化情况：PBS组：小鼠肿瘤体积由给药前的263立方毫米增加至约1149立方毫米；Low-dose组：小鼠给药前肿瘤体积平均369 立方毫米，处死时肿瘤体积平均为787立方毫米，增长速度显著低于 PBS组；High-dose组：小鼠肿瘤体积由给药前的408立方毫米小幅度增加至700立方毫米，随着给药次数的增加，在给药第7天即第2 次给药后，累计给药量5mg/只，肿瘤体积停止增长并维持，在第3 次给药后，累计给药量7.5mg/只时肿瘤体积开始缩小，处死时肿瘤体积469立方毫米。4.CCK8实验检测结肠癌细胞增殖情况：在J4-1 胞外多糖处理72H时，SW480细胞增殖率表现出浓度依赖性的抑制作用，其中1mg/mL浓度的细胞增殖率为57.13％，明显低于对照组，增殖抑制最明显。在HT29细胞系中，当样品浓度为1mg/mL浓度时，细胞增殖率为71.29％，该浓度对细胞增殖的抑制最显著。5.克隆形成实验检测结肠癌细胞增殖情况：与完全培养基处理的对照组相比， J4-1胞外多糖显著抑制SW480和HT29细胞的克隆形成能力。6.细胞周期实验检测结肠癌细胞增殖情况：1mg/mL的J4-1胞外多糖处理 HT29细胞和SW480细胞72H后，HT29细胞对照组G0/G1期比例是 58.72％，实验组是63.09％，该胞外多糖可阻滞HT29细胞的G0/G1 期。在SW480细胞中，实验组处于G0/G1期的细胞比例53.07％，高于对照组的33.84％，对照组S期细胞占47.33％，实验组35.44％，对照组G2期细胞占18.72％，实验组11.42％。因此J4-1胞外多糖主要阻滞SW480的G0/G1期。7.4-1胞外多糖抗结肠癌细胞增殖机制中相关蛋白表达情况：1mg/mL的J4-1胞外多糖处理HT29细胞72H后，与对照组(NC组)HT29细胞相比，J4-1组细胞P21高表达。
Claims (4)
1.融合魏斯氏菌J4-1胞外多糖抗结直肠癌的应用，其特征在于：包括以下步骤：
1)实验动物及分组：选取SPF级4-5周雌性BALB/C nudle雌性裸鼠，体重约14-17g，实验分组为瘤内注射PBS组(NC组)，瘤内注射低剂量胞外多糖组(Low-dose组)和瘤内注射高剂量胞外多糖组(High-dose组)。
2)构建裸鼠皮下瘤模型：将HT29结肠癌细胞系用胰酶消化，1000rpm，5min离心后收细胞，PBS重悬。在BALB/C nudle裸鼠右腋皮下注射100μL HT29结肠癌细胞悬液(5×106个细胞/只)成瘤。
3)对实验分组进行处理：NC组：在裸鼠皮下瘤模型构建后，瘤体积达200mm3左右，每4天瘤内注射PBS 100μL，持续至实验终点为止。Low-dose组和High-dose组：在裸鼠皮下瘤模型构建后，瘤体积达200mm3左右，两组均每4天瘤内注射胞外多糖溶液100μL，持续至实验终点为止。Low-dose组每只裸鼠每次瘤内注射胞外多糖1.5mg，High-dose组每只鼠每次瘤内注射胞外多糖2.5mg。在此期间密切观察小鼠进食、精神状态及活动反应等。于造模后隔天称量小鼠体重及肿瘤大小，给药后每天称量小鼠体重及肿瘤大小。皮下瘤体积＝最大径×最小径2×0.5。
4)制作病理标本：待4次瘤内注射完毕后处死小鼠，剥离皮下肿瘤组织并收集小鼠心肝脾肺肾标本，进行后续实验操作。
5)小鼠肿瘤组织及心肝脾肺肾组织病理学检查：收集小鼠心脏、肝脏、脾脏、肺和肾组织，进行处理，置于组织固定液中固定24-48小时。经H&E染色，分析心肝脾肺肾等重要脏器的组织结构变化。
6)细胞实验分组及处理：在实验组(J4-1组)加入1mg/mL的J4-1胞外多糖溶液2mL，在对照组(NC组)细胞加入完全培养基2mL，细胞系：结肠癌细胞系HT29和SW480细胞，SW480细胞由DMEM高糖完全培养基培养，HT29由RPMI 1640完全培养基培养。
7)检测结肠癌细胞增殖情况：取生长状态良好的SW480细胞和HT29细胞，待单层细胞至瓶底面积80％以上时，消化重悬细胞并计数。96孔板的每孔中加入100μl细胞悬液，1000cell/well，保温培养，观察细胞基本贴壁后，取出96孔板并吸除旧的培养基，每孔中加入100μL含对应样品浓度(0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.5mg/mL)J4-1胞外多糖的完全培养基，每个浓度做3～6个复孔。培养箱中孵育72h；每孔加入10μL CCK8溶液，培养箱中避光孵育1-3个小时。用全波长酶标仪测定在450nm处各组细胞的OD值大小。
8)细胞周期检测：取状态良好的SW480细胞和HT29细胞，加入2mL含1mg/mL J4-1胞外多糖的完全培养基作为实验组，对照组细胞加入2ml完全培养基，共培养72h。胰酶消化收集6孔板细胞，加入1ml预冷乙醇重悬细胞，4℃静置12h，1200rpm离心5min沉淀细胞。弃上清，用1ml预冷PBS洗1-2遍固定好的细胞。每个样品中加入碘化丙啶染色液500μl重悬细胞，避光4℃染色30min，24h内上机检测。
9)J4-1胞外多糖抗结肠癌细胞增殖机制验证：取状态良好的HT29细胞，加入2mL含1mg/mL J4-1胞外多糖的完全培养基作为实验组，对照组细胞加入2mL完全培养基，共培养72h。按99：1的比例混合RIPA和PMSF配制裂解液，各孔加入500μL裂解液，冰上反应30min，使蛋白充分裂解，4℃12000rpm离心30min，取上清。BCA法检测蛋白浓度并调平，加入蛋白体积1/4的(5×)loading buffer后混匀，100℃加热5min，充分变性蛋白。存于-20℃用于后续Western blot实验。
10)实验结果：1.生长情况：PBS组：小鼠进食和排便正常，活动情况良好，实验过程中体重维持或轻微下降，未出现死亡；Low-dose组：小鼠进食和排便正常，活动状况良好，实验过程中体重维持或轻微下降，未出现死亡：High-dose组：小鼠进食和排便正常，活动状况良好，实验过程中体重维持或轻微下降，未出现死亡。2.心肝脾肺肾重要脏器损伤情况：PBS组：模型终点，小鼠心肝脾肺肾组织形态正常；Low-dose组：模型终点，小鼠心肝脾肺肾组织形态正常；High-dose组：模型终点，小鼠心肝脾肺肾组织形态正常。3.肿瘤体积变化情况：PBS组：小鼠肿瘤体积由给药前的263立方毫米增加至约1149立方毫米；Low-dose组：小鼠给药前肿瘤体积平均369立方毫米，处死时肿瘤体积平均为787立方毫米，增长速度显著低于PBS组；High-dose组：小鼠肿瘤体积由给药前的408立方毫米小幅度增加至700立方毫米，随着给药次数的增加，在给药第7天即第2次给药后，累计给药量5mg/只，肿瘤体积停止增长并维持，在第3次给药后，累计给药量7.5mg/只时肿瘤体积开始缩小，处死时肿瘤体积469立方毫米。4.CCK8实验检测结肠癌细胞增殖情况：在J4-1胞外多糖处理72H时，SW480细胞增殖率表现出浓度依赖性的抑制作用，其中1mg/mL浓度的细胞增殖率为57.13％，明显低于对照组，增殖抑制最明显。在HT29细胞系中，当样品浓度为1mg/mL浓度时，细胞增殖率为71.29％，该浓度对细胞增殖的抑制最显著。5.克隆形成实验检测结肠癌细胞增殖情况：与完全培养基处理的对照组相比，J4-1胞外多糖显著抑制SW480和HT29细胞的克隆形成能力。6.细胞周期实验检测结肠癌细胞增殖情况：1mg/mL的J4-1胞外多糖处理HT29细胞和SW480细胞72H后，HT29细胞对照组G0/G1期比例是58.72％，实验组是63.09％，该胞外多糖可阻滞HT29细胞的G0/G1期。在SW480细胞中，实验组处于G0/G1期的细胞比例53.07％，高于对照组的33.84％，对照组S期细胞占47.33％，实验组35.44％，对照组G2期细胞占18.72％，实验组11.42％。因此J4-1胞外多糖主要阻滞SW480的G0/G1期。7.4-1胞外多糖抗结肠癌细胞增殖机制中相关蛋白表达情况：1mg/mL的J4-1胞外多糖处理HT29细胞72H后，与对照组(NC组)HT29细胞相比，J4-1组细胞P21高表达。
2.根据权利要求1所述的融合魏斯氏菌J4-1胞外多糖抗结直肠癌的应用，其特征在于：所述步骤五中处理方式及结果为予以生理盐水冲洗，清除腔内外血液后。
3.根据权利要求1所述的融合魏斯氏菌J4-1胞外多糖抗结直肠癌的应用，其特征在于：所述步骤七中保温培养为置于5％CO2的细胞培养箱中温度设定在37℃，培养时间为12h。
4.根据权利要求1所述的融合魏斯氏菌J4-1胞外多糖抗结直肠癌的应用，其特征在于：所述步骤九中加热时采用金属浴。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20230124 |
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