CN115624178B - 一种复合型灵芝提取物孢子粉及制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种组合物，包括灵芝提取物、破壁灵芝孢子粉和胶体液，所述的胶体液中包括橄榄油10‑25份、丁香油5‑10份、鱼皮胶3‑8份、艾草纯露25‑35份。相比于单方型的破壁灵芝孢子粉，产品所含的有效成分营养更全面、有效成分含量更高，提高免疫力的效果更好。
Description
技术领域
本发明属于天然提取产物领域，具体涉及一种复合型灵芝提取物孢子粉及制备方法。
背景技术
灵芝存在子实体和孢子两种形态，二者均有增强免疫力的作用。其中灵芝孢子是灵芝生长成熟期从菌盖弹射出的极其细小的孢子，积聚了大量的灵芝多糖等活性成分。灵芝子实体也含有丰富的活性成分，包括灵芝三萜、灵芝多糖、甾醇、小分子蛋白、核苷生物碱、不饱和脂肪酸等，但灵芝子实体中的活性成分分布不集中，通过提取、浓缩、干燥使灵芝子实体中灵芝多糖、灵芝三萜等灵芝精华得到有效富集，可提高其增强免疫力功效。
研究表明灵芝子实体的水提物、醇提物均可明显增强小鼠脾淋巴细胞的转化能力及体液免疫能力，可作为扶正固本的免疫调节剂。由于灵芝提取物与破壁灵芝孢子粉所含活性物质不同，它们增强免疫力的作用机制不同，这为灵芝提取物和破壁灵芝孢子粉配伍提供了理论依据。
申请号为202111204054.6的中国专利中公开了：预防脑卒中的复方灵芝孢子油提取物及其制备方法和应用，该提取物是通过以下方法制备得到的：将灵芝子实体颗粒与灵芝孢子粉颗粒混合，用质量浓度为75％乙醇浸泡2-4h，将浸泡后的混合物进行超临界CO2萃取，萃取条件：萃取釜压力28-32MPa，萃取釜温度40-45℃，萃取时间3-4h，收集萃取液，减压蒸馏后，收集提取物；灵芝子实体颗粒与灵芝孢子粉颗粒混合比例范围1-2：2-1。该发明利用超临界CO2萃取技术将灵芝子实体和灵芝孢子粉按比例混合萃取制得的超油提取物具有显著的预防缺血性脑卒中的功效。但该方法技术要求较高，且耗时较长，对于提取物中的成分并没有确认，因此由于原料来源差异可能产生产品中有效成分浓度不一的情况，最终影响治疗效果，且由于其成分未确定，其在其他方向的应用也未可知。
申请号为201410090934.9的中国专利公开了一种灵芝孢子虫草组合物及其制备方法，该组合物由灵芝孢子粉、灵芝提取物、虫草菌丝体提取物和蜂蜜组成，其制备方法是将灵芝提取物、虫草菌丝体提取物和灵芝孢子粉按一定比例均匀混合，再加入适量蜂蜜搅拌均匀，通过制条、搓丸成形、抛光、烘干而成。与现有技术相比，四种原料均具有增强免疫力的功能，均为营养保健养生的滋补品，配合使用制成丸剂，可提高人体免疫力且服用方便。但其实际应用效果并不确定，且虫草价格昂贵，提高了组合物成本。
对含灵芝提取物和灵芝孢子体的组合物仍需付出研究，以保证其应用效果，并适于广泛应用。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了在原有配方的基础上，优化了灵芝提取物的制备方法，同时改进了灵芝提取物和破壁灵芝孢子粉的复配配方，研究了新的组合方式，使其营养更全面、有效成分含量更高、效果更好。
灵芝提取采用的是三级提取技术，此技术是在传统的中药煎煮理论上再结合现代中药提取技术，能最大程度的提取灵芝中的有效成分。
破壁灵芝孢子粉是经去瘪技术、低温剪切式破壁技术、湿热灭菌技术而成的，能最大程度保留孢子粉的活性成分，同时远离重金属和微生物的污染。
本发明中，所述的原料的份数，如无特别说明，均指重量份。
一方面，本发明提供了一种灵芝提取物和破壁灵芝孢子粉的组合物。
所述的灵芝提取物的制备方法包括：
(1)干燥后粉碎；
(2)提取：分别用20、15、13倍量水分别在高压提取罐内50-60MPa，90℃提取3次，每次提取后过滤滤渣重新提取，时长每次3h、2h、2h，合并三次滤液；双效浓缩、灭菌(100℃，40min)、喷雾干燥(进风温度190-200℃，出风温度90-105℃)。
所述的灵芝提取物中有效成分：灵芝多糖含量不低于45％(w/w)；灵芝三萜含量不低于15％(w/w)。
所述的灵芝破壁孢子粉的制备方法包括：
(1)挑拣；
(2)破壁20-30min；
(3)湿热灭菌115℃，30mi)；
(4)减压干燥，温度＜80℃，30min；
(5)过筛。
所述的组合物中包括上述制备方法制备的灵芝提取物和灵芝破壁孢子粉，还包括胶体液。
所述的胶体液中包括：橄榄油10-25份、丁香油5-10份、鱼皮胶3-8份、艾草纯露25-35份。
优选地，所述的胶体液中包括：橄榄油15-25份、丁香油8-10份、鱼皮胶4-8份、艾草纯露30-35份。
更优选地，所述的胶体液中包括：橄榄油15-20份、丁香油8-9份、鱼皮胶6-8份、艾草纯露32-35份。
在一些实施例中，所述的胶体液中包括：橄榄油15份、丁香油8份、鱼皮胶8份、艾草纯露35份。
在一些实施例中，所述的胶体液中包括：橄榄油10份、丁香油8份、鱼皮胶6份、艾草纯露30份。
在一些实施例中，所述的胶体液中包括：橄榄油15份、丁香油8份、鱼皮胶6份、艾草纯露35份。
在一些实施例中，所述的胶体液中包括：橄榄油15份、丁香油5份、鱼皮胶5份、艾草纯露25份。
在一些实施例中，所述的胶体液中包括：橄榄油20份、丁香油9份、鱼皮胶4份、艾草纯露30份。
在一些实施例中，所述的胶体液中包括：橄榄油25份、丁香油10份、鱼皮胶6份、艾草纯露30份。
所述的组合物中灵芝提取物和灵芝破壁孢子粉的重量比为1:5-5:1。
优选地，所述的组合物中灵芝提取物和灵芝破壁孢子粉的重量比为1:2-2:1。
更优选地，所述的组合物中灵芝提取物和灵芝破壁孢子粉的重量比为1:1-1:1.5。
在一些实施例中，所述的组合物中灵芝提取物和灵芝破壁孢子粉的重量比为5:1、2:4、1:1、1:1.5、1:2或1:5。
所述的组合物中含10-20％w/w的胶体液。
优选地，所述的组合物中含10-20％w/w的胶体液。
更优选地，所述的组合物中含13-18％w/w的胶体液。
在一些实施例中，所述的组合物中含15％w/w的胶体液。
所述的组合物中灵芝多糖含量为10-40％w/w，灵芝三萜含量为5-15％w/w。
优选地，所述的组合物中灵芝多糖含量为18-31％w/w，灵芝三萜含量为7-11％w/w。
更优选地，所述的组合物中灵芝多糖含量为20-31％w/w，灵芝三萜含量为7-10％w/w。
在一些实施例中，所述的组合物中灵芝多糖含量为38％w/w，灵芝三萜含量为13％w/w。
在一些实施例中，所述的组合物中灵芝多糖含量为31％w/w，灵芝三萜含量为11％w/w。
在一些实施例中，所述的组合物中灵芝多糖含量为24％w/w，灵芝三萜含量为8％w/w。
在一些实施例中，所述的组合物中灵芝多糖含量为24％w/w，灵芝三萜含量为13％w/w。
在一些实施例中，所述的组合物中灵芝多糖含量为20％w/w，灵芝三萜含量为7％w/w。
在一些实施例中，所述的组合物中灵芝多糖含量为31％w/w，灵芝三萜含量为11％w/w。
在一些实施例中，所述的组合物中灵芝多糖含量为24％w/w，灵芝三萜含量为8％w/w。
在一些实施例中，所述的组合物中灵芝多糖含量为24％w/w，灵芝三萜含量为13％w/w。
在一些实施例中，所述的组合物中灵芝多糖含量为11％w/w，灵芝三萜含量为5％w/w。
所述的胶体液的配制方法为：将橄榄油和丁香油与艾草纯露混合，再加入鱼皮胶制成悬浊液。
所述的组合物的制备方法为：将胶体液与灵芝破壁孢子粉于干燥塔内对向喷雾碰撞，塔内温度80-90℃，完全干燥后得到灵芝破壁孢子粉与胶体液制成的复合物，再与灵芝提取物混合。
又一方面，本发明还提供了前述的组合物在制备保健品中的应用。
所述的保健品的功效为提高免疫力。
所述的保健品中包括前述的组合物。
所述的保健品中还包括其他非功能性辅料。
所述的非功能性辅料可以是黏合剂、填充剂、崩解剂、润滑剂、防腐剂、抗氧剂、矫味剂、芳香剂、助溶剂、乳化剂、增溶剂、渗透压调节剂、着色剂中的一种或多种。
又一方面，本发明还提供了一种保健品。
所述的保健品的功效为提高免疫力。
所述的保健品包括前述的组合物。
所述的保健品中还包括其他非功能性辅料。
所述的非功能性辅料可以是黏合剂、填充剂、崩解剂、润滑剂、防腐剂、抗氧剂、矫味剂、芳香剂、助溶剂、乳化剂、增溶剂、渗透压调节剂、着色剂中的一种或多种。
本发明的有益效果：相比于单方型的破壁灵芝孢子粉，产品所含的有效成分营养更全面、有效成分含量更高，提高免疫力的效果更好，能够提高小鼠体内IL-2和IL-6的表达水平。
具体实施方式
下面结合具体实施例，对本发明作进一步详细的阐述，下述实施例不用于限制本发明，仅用于说明本发明。以下实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
本发明中的检测方法如无特别说明均采用本领域常规的检测方法或试剂盒，需要明确的是，检测方法并不能影响本发明组合物的技术效果。
实施例1一种灵芝提取物的制备方法
灵芝为Ganodermalucidum(Curtis:Fr)P.Karst的子实体，应符合《中华人民共和国》药典的规定。
灵芝提取物具体制备方法包括以下步骤：
分别用20、15、13倍量水分别在高压提取罐内50-60MPa，90℃提取3次，每次提取后过滤滤渣重新提取，时长每次3h、2h、2h，合并三次滤液；双效浓缩、灭菌(100℃，40min)、喷雾干燥(进风温度190-200℃，出风温度90-105℃)。
灵芝提取物的评价指标如下：
经多次实验，产物均能达到上述指标。
实施例2一种破壁灵芝孢子粉的制备方法
制备原料为：Ganodermalucidum(Curtis:Fr)P.Karst的孢子。破壁灵芝孢子粉具体制备方法包括以下步骤：
(1)挑拣；
(2)破壁20-30min；
(3)湿热灭菌115℃，30mi)；
(4)减压干燥，温度＜80℃，30min；
(5)过筛、混合、包装。
破壁灵芝孢子粉的评价指标如下：
经多次实验，产物均能达到上述指标。
实施例3一种灵芝提取物和破壁灵芝孢子粉的组合物
本实施例选用的灵芝提取物通过实施例1的方法制备得到；破壁灵芝孢子粉通过实施例2的方法制备得到。
本实施例灵芝提取物中灵芝多糖实际含量为52％，灵芝三萜实际含量为18％。
本实施例灵芝孢子粉灵芝多糖实际含量为5％，灵芝三萜实际含量为4％。
混合比例(重量比)如下：
| 编号 | 灵芝提取物 | 破壁灵芝孢子粉 |
| 3-1 | 1 | 0.2 |
| 3-2 | 1 | 0.5 |
| 3-3 | 1 | 1 |
| 3-4 | 1 | 1.5 |
| 3-5 | 1 | 2 |
| 3-6 | 1 | 5 |
灵芝提取物和破壁灵芝孢子粉按照以上比例混合后再与胶体液混合，胶体液用量为15％(w/w)。
胶体液的具体成分中以重量份计包括：橄榄油15份、丁香油8份、鱼皮胶6份、艾草纯露35份。
胶体液配制方法为：将橄榄油和丁香油与艾草纯露混合，再加入鱼皮胶制成悬浊液。
肉桂油购自吉安市国光香料厂。
鱼皮胶购自衡水宏财粘合剂有限公司。
艾草纯露购自济南山禾生物制品有限公司。
所述的组合物的制备方法为：将胶体液与灵芝破壁孢子粉于干燥塔内对向喷雾碰撞，塔内温度80-90℃，完全干燥后得到灵芝破壁孢子粉与胶体液制成的复合物，再与灵芝提取物混合，具体可参照申请号为202010662047.X的专利申请。
得到的混合产物产品质量评价标准为：
| 项目 | 指标 |
| 粗多糖(以葡萄糖计)，g/100g | 10-40 |
| 灵芝三萜(以齐墩果酸计)，g/100g | 5-15 |
| 蛋白质，％ | ≥4.0 |
| 水分，％ | ≤4.0 |
| 铅(以Pb计)，mg/kg | ≤2.0 |
| 总砷(以As计)，mg/kg | ≤1.0 |
| 总汞(以Hg计)，mg/kg | ≤0.3 |
| 菌落总数，CFU/g | ≤30000 |
| 大肠菌群，MPN/g | ≤0.92 |
| 霉菌和酵母CFU/g | ≤50 |
| 金黄色葡萄球菌 | ≤0/25g |
| 沙门氏菌 | ≤0/25g |
编号3-1到3-6的产品均符合上述产品质量评价标准。
采用ABTS试剂盒(默克)测定DPPH自由基的清除率以及超氧阴离子自由基的清除率测定，结果如下：
| 编号 | DPPH清除率(％) | 超氧阴离子清除率(％) |
| 3-1 | 95.13 | 56.72 |
| 3-2 | 96.85 | 54.31 |
| 3-3 | 98.93 | 52.34 |
| 3-4 | 97.67 | 53.64 |
| 3-5 | 95.49 | 52.58 |
| 3-6 | 95.21 | 48.36 |
实施例4胶体液剂量的调整
参照实施例3中3-3组的配方进行胶体液的调整，重量份含量具体如下：
编号4-1到4-5的产品均符合实施例3中的产品质量评价标准。
采用ABTS法测定DPPH自由基的清除率以及超氧阴离子自由基的清除率测定，结果如下：
| 编号 | DPPH清除率(％) | 超氧阴离子清除率(％) |
| 4-1 | 96.24 | 50.02 |
| 4-2 | 95.52 | 48.86 |
| 4-3 | 92.93 | 52.47 |
| 4-4 | 96.34 | 50.59 |
| 4-5 | 95.17 | 52.48 |
实施例4动物实验
对实施例3中的编号3-3的组合物进行动物实验评价，以证明其具有增强免疫力的保健功能。
实验动物选择20g±1g的ICR清洁级雄性小鼠，约三周龄。
共设置4个组别，每组7只小鼠，按以下条件喂养：
对照组：每天灌胃生理盐水2mL；
低剂量组：每天0.5g/kg体重组合物溶于生理盐水2mL灌胃；
中剂量组：每天1g/kg体重组合物溶于生理盐水2mL灌胃；
高剂量组：每天1.5g/kg体重组合物溶于生理盐水2mL灌胃；
其他条件均按照普通喂养条件进行喂养。实验持续(灌胃)14天，第15天取小鼠眼眶血，离心后取血清检测NO(一氧化氮)含量和NOS(一氧化氮合成酶)活性；试剂盒检测脾脏中IL-2和IL-6的水平(上海纪宁)。
结果如下：
结果表明，低剂量组具有一定的提高免疫力效果，但中剂量组和高剂量组效果更好，且中剂量组和高剂量组结果接近。
对比例1-5
参照实施例3中3-3组的配方设置对比例，具体如下：
| 对比例 | 与3-3的差别 |
| 对比例1 | 灵芝提取物和破壁孢子粉比例1：10 |
| 对比例2 | 灵芝提取物和破壁孢子粉比例10：1 |
| 对比例3 | 胶体液为专利202010662047.X中实施例1的胶体液 |
| 对比例4 | 将胶体液中的艾草纯露替换为水 |
| 对比例5 | 将丁香油替换为橄榄油 |
采用ABTS法测定DPPH自由基的清除率以及超氧阴离子自由基的清除率测定，具体结果如下：
采用对比例4中的组合物参照实施例4的中剂量组进行实验，并以艾草纯露2mL灌胃为阴性对照，最终检测结果如下：
| NO含量(μmol/L) | NOS活性(U/L) | IL-2(ng/mL) | IL-6(ng/mL) | |
| 对比例4 | 6.93 | 43.48 | 7.16 | 165.44 |
| 阴性对照 | 4.81 | 36.25 | 5.10 | 116.43 |
结果表明，单独灌胃艾草纯露并未对小鼠免疫力提升起到作用，但通过艾草纯露制备的组合物，相对于通过水制备，提高了组合物功效。
Claims (6)
1.一种组合物，其特征在于，包括灵芝提取物、破壁灵芝孢子粉和胶体液，所述的胶体液中包括橄榄油10-25份、丁香油5-10份、鱼皮胶3-8份和艾草纯露25-35份；
所述的组合物中含10-20%w/w的胶体液；
所述的组合物中灵芝多糖含量为10-40%w/w，灵芝三萜含量为5-15%w/w；
灵芝提取物和破壁灵芝孢子粉的重量比为：1-5:1-5；
所述的灵芝提取物的制备方法包括：
（1）干燥后粉碎；
（2）提取：分别用20、15、13倍量分别在高压提取罐内50-60MPa，90℃提取3次，每次时长3h、2h、2h，合并三次滤液；双效浓缩、灭菌、喷雾干燥；
所述的破壁灵芝孢子粉的制备方法包括：
（1）挑拣；
（2）破壁20-30min；
（3）湿热灭菌115℃，30min；
（4）减压干燥，温度＜80℃，30min；
（5）过筛。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，制备方法为：将胶体液与灵芝破壁孢子粉于干燥塔内对向喷雾碰撞，塔内温度80-90℃，完全干燥后得到灵芝破壁孢子粉与胶体液制成的复合物，再与灵芝提取物混合。
3.权利要求1-2任一项所述的组合物在制备保健品中的应用。
4.一种保健品，其特征在于，包括权利要求1-2任一项所述的组合物。
5.根据权利要求4所述的保健品，其特征在于，还包括其他非功能性辅料，所述的非功能性辅料为黏合剂、填充剂、崩解剂、润滑剂、防腐剂、抗氧剂、矫味剂、芳香剂、助溶剂、乳化剂、增溶剂、渗透压调节剂、着色剂中的一种或多种。
6.根据权利要求5所述的保健品，其特征在于，功效为增强免疫力和/或抗氧化。
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