CN115589949A - 一种多花黄精种子一步成苗及扩繁的组织培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种多花黄精种子一步成苗及扩繁的组织培养方法，包括以下步骤：（1）多花黄精种子的获得与消毒；（2）多花黄精种子一步成苗培养；（3）诱导愈伤组织培养；（4）愈伤组织诱导成苗。选取当年发育成熟的多花黄精果实，将种子从果实中剥离，进行消毒处理；将消毒的多花黄精种子进行一步成苗培养；将一步成苗的根和芽分别作为外植体进行愈伤组织诱导培养；将诱导后的愈伤组织进行芽诱导与生根同步培养。本发明方法简单，无需打破种子休眠，通过多种培养基配方组合，使多花黄精种子从接种到扩繁长出幼苗植株仅需5个月，且一步成苗率最高可达到85％以上，有效缩短多花黄精的育苗周期，为获得大量无菌多花黄精幼苗提供保障。
Description
技术领域
本发明涉及植物组织培养领域，具体涉及一种多花黄精种子一步成苗及扩繁的组织培养方法。
技术背景
多花黄精是百合科黄精属的多年生草木植物，根状茎肥厚，少有近圆柱形，茎高可达100厘米，叶互生，椭圆形、卵状披针形至矩圆状披针形，伞形花序，花被黄绿色，花期5～6月，浆果黑色，果期8～10月。多花黄精的根茎是传统中药。目前采用种子繁殖是多花黄精繁殖的重要方式之一。但在自然状态下，多花黄精种子具有休眠特性，要经历2个冬季休眠后才能长出一片真叶，从播种到采收需要5～6年时间，耗时过长。
植物组培技术具有提纯复壮、短时间内产生大量种苗等优点，在作物种苗繁育中得到广泛应用。许多学者研究黄精、多花黄精及滇黄精等黄精属植物的组织培养技术的研究，主要集中于块茎等外植体。但以多花黄精的块茎作为外植体进行组织培养，繁殖周期长，繁殖效率低。如何利用组织培养技术使得多花黄精种子萌发，快速扩繁取得多花黄精的无菌苗，对促进多花黄精的使用具有重要意义。
目前，采用多花黄精种子为外植体的组织培养方法主要是利用植物激素打破多花黄精种子休眠，比如公开号为CN108260532A的中国专利和公开号为CN107864861A的中国专利。均存在着步骤较为繁琐缺点。
发明内容
有鉴于此，本发明专利的目的在于提供一种多花黄精种子一步成苗及扩繁的组织培养方法，无须打破多花黄精种子休眠，通过多种培养基配方组合，使多花黄精种子从接种到扩繁长出幼苗植株仅需5个月，有效缩短多花黄精的育苗周期，为获得大量无菌多花黄精幼苗提供保障。
为实现上述目的，本发明的技术方案是：
一种多花黄精种子一步成苗及扩繁的组织培养方法，包括以下步骤：
（1）多花黄精种子的获得与消毒：
处理多花黄精果实，选择当年发育成熟的多花黄精果实，将种子从果实中剥离，洗净后置于干燥通风处阴干；将多花黄精种子先用75％乙醇消毒1min后，无菌水冲洗2～3次，再用８％的次氯酸钠消毒10min配合0.1％的升汞消毒10min～20min，无菌蒸馏水清洗5次；
（2）多花黄精种子一步成苗培养：
将消毒的多花黄精种子接种于盛有MS+ 6-BA 0.2mg/L培养基的培养瓶中进行一步成苗培养，待其萌发出根和幼叶；
（3）诱导愈伤组织培养：
将步骤（2）产生的丛生芽切下根和芽分别作为外植体接种于盛有MS+ 6-BA2.0mg/L+ NAA 0.2mg/L+2，4-D 1.0mg/L的培养基中进行愈伤组织诱导培养；
（4）愈伤组织诱导成苗：
将诱导后的愈伤组织接种于盛有MS+ 6-BA 2.0mg/L+ NAA 1.0mg/L的培养基中进行芽诱导与生根同步培养。
所述步骤（1）中干燥通风处温度为25℃。
所述步骤（2）中一步成苗的培养条件为：光照时间12h/d，光照强度2000-3000Lx，培养温度26±1℃，所述一步成苗培养时间为90～100d。
所述步骤（3）中诱导愈伤组织的培养条件为：光照时间12h/d，光照强度2000-3000Lx，培养温度26±1℃，所述诱导愈伤组织培养时间为20～30d。
所述步骤（4）中愈伤组织诱导成苗的培养条件为：光照时间12h/d，光照强度2000-3000Lx，培养温度26±1℃。
本发明具有以下有益效果：
1、多花黄精种子先用75％乙醇消毒1min后，无菌水冲洗2～3次，再用８％的次氯酸钠消毒10min配合0.1％的升汞消毒10min-20min，无菌蒸馏水清洗5次能够有效控制各种细菌和真菌的滋生。
2、本发明无需打破多花黄精种子休眠，从接种到扩繁长出幼苗植株仅需5个月，且一步成苗率最高可达到85％以上。
3、本发明专利通过多种培养基配方组合，能够简便、快速扩繁，在短时间内得到数量较多的多花黄精无菌苗，整个培养过程简单可控、容易实现，有效拓宽了获得多花黄精无菌苗的途径。
附图说明
图1为接种的多花黄精种子；
图2为多花黄精愈伤组织诱导的生根苗。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：
（1）多花黄精种子的获得与消毒：
处理多花黄精果实，选择当年发育成熟的多花黄精果实，将种子从果实中剥离，洗净后置于干燥通风处阴干；将多花黄精种子先用75％乙醇消毒1min后，无菌水冲洗2～3次，再用８％的次氯酸钠消毒10min配合0.1％的升汞消毒10min，无菌蒸馏水清洗5次；
（2）多花黄精种子一步成苗培养：
将消毒的多花黄精种子接种于盛有MS+ 6-BA 0.2mg/L培养基的培养瓶中进行一步成苗培养，待其萌发出根和幼叶；
（3）诱导愈伤组织培养：
将步骤（2）产生的丛生芽切下根和芽分别作为外植体接种于盛有MS+ 6-BA2.0mg/L+ NAA 0.2mg/L+2，4-D 1.0mg/L的培养基中进行愈伤组织诱导培养；
（4）愈伤组织诱导成苗：
将诱导后的愈伤组织接种于盛有MS+ 6-BA 2.0mg/L+ NAA 1.0mg/L的培养基中进行芽诱导与生根同步培养；
所述步骤（1）中干燥通风处温度为25℃。
所述步骤（2）中一步成苗的培养条件为：光照时间12h/d，光照强度2000-3000Lx，培养温度26±1℃，所述一步成苗培养时间为90～100d。
所述步骤（3）中诱导愈伤组织的培养条件为：光照时间12h/d，光照强度2000-3000Lx，培养温度26±1℃，所述诱导愈伤组织培养时间为20～30d。
所述步骤（4）中愈伤组织诱导成苗的培养条件为：光照时间12h/d，光照强度2000-3000Lx，培养温度26±1℃。
实施例2
本实施例中一种多花黄精种子一步成苗及扩繁的组织培养方法同实施例1，在此不再赘述，不同之处在于，本实施例中（1）用0.1％的升汞消毒15min。
实施例3
本实施例中一种多花黄精种子一步成苗及扩繁的组织培养方法同实施例1，在此不再赘述，不同之处在于，本实施例中（1）用0.1％的升汞消毒20min。
表1：不同消毒方式下的成苗率、生根率和一步成苗天数
表2：愈伤组织诱导的再分化率和成苗天数
根据实验结果可以看出无需打破多花黄精种子休眠，从接种到扩繁长出幼苗植株仅需5个月，且一步成苗率最高可达到85％以上。
Claims (5)
1.一种多花黄精种子一步成苗及扩繁的组织培养方法，其特征在于：
（1）多花黄精种子的获得与消毒：
处理多花黄精果实，选择当年发育成熟的多花黄精果实，将种子从果实中剥离，洗净后置于干燥通风处阴干；将多花黄精种子先用75％乙醇消毒1min后，无菌水冲洗2～3次，再用８％的次氯酸钠消毒10min配合0.1％的升汞消毒10min，无菌蒸馏水清洗5次；
（2）多花黄精种子一步成苗培养：
将消毒的多花黄精种子接种于盛有MS+ 6-BA 0.2mg/L培养基的培养瓶中进行一步成苗培养，待其萌发出根和幼叶；
（3）诱导愈伤组织培养：
将步骤（2）产生的丛生芽切下根和芽分别作为外植体接种于盛有MS+ 6-BA 2.0mg/L+NAA 0.2mg/L+2，4-D 1.0mg/L的培养基中进行愈伤组织诱导培养；
（4）愈伤组织诱导成苗：
将诱导后的愈伤组织接种于盛有MS+ 6-BA 2.0mg/L+ NAA 1.0mg/L的培养基中进行芽诱导与生根同步培养。
2.如权利要求1所述的一种多花黄精种子一步成苗及扩繁的组织培养方法，其特征在于，所述步骤（1）中干燥通风处温度为25℃。
3.如权利要求1所述的一种多花黄精种子一步成苗及扩繁的组织培养方法，其特征在于，所述步骤（2）中一步成苗的培养条件为：光照时间12h/d，光照强度2000-3000Lx，培养温度26±1℃，所述一步成苗培养时间为90～100d。
4.如权利要求1所述的一种多花黄精种子一步成苗及扩繁的组织培养方法，其特征在于，所述步骤（3）中诱导愈伤组织的培养条件为：光照时间12h/d，光照强度2000-3000Lx，培养温度26±1℃，所述诱导愈伤组织培养时间为20～30d。
5.如权利要求1所述的一种多花黄精种子一步成苗及扩繁的组织培养方法，其特征在于，所述步骤（4）中愈伤组织诱导成苗的培养条件为：光照时间12h/d，光照强度2000-3000Lx，培养温度26±1℃。
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