CN115581798B - 一种改善肤色暗沉的液体伤口敷料及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种改善肤色暗沉的液体伤口敷料及其制备方法，属于医疗器械的敷料技术领域，所述液体伤口敷料包括如下重量份的原料：0.1‑10重量份的增稠剂、0.2‑30重量份的左旋乳酸、1‑15重量份的缓冲液和45‑95重量份的纯化水；制备方法为：(1)配置磷酸盐缓冲液；(2)配置混合液A；(3)配置混合液B；(4)制备液体伤口敷料。本发明优化了左旋乳酸的制备方法，得到较高收率的左旋乳酸；添加了左旋乳酸、羧甲基纤维素钠，形成复杂的网络结构，调节pH，保持了溶剂在反应体系中极好的稳定性，同时，左旋乳酸刺激伤口中细胞再生，加速胶原蛋白合成，从而达到加速创面愈合、褪黑、改善肤色暗沉和修复痘印痘坑的作用。

Description

一种改善肤色暗沉的液体伤口敷料及其制备方法
技术领域
本发明属于医疗器械的敷料技术领域，具体地，涉及一种改善肤色暗沉的液体伤口敷料及其制备方法。
背景技术
皮肤在人的正常生理活动中发挥了极其重要的作用，它作为人体最大的器官，是维持人体内环境稳态的重要保障，而医美、普通外科手术或者皮肤创伤都会造成一定的创面，如果用传统医用敷料，如纱布、棉垫、棉絮等，容易导致肉芽组织长入纱布网眼中，导致肉布粘连结痂、易感染且易滋生细菌，此外，传统医用敷料恢复时间较长，恢复过程中可能由于饮用或食用含有较深色素的食品，如酱油、咖啡、辛辣刺激性食物等，导致色沉难以消除、留下疤痕；
因此，目前亟需一款能加速创面愈合、修复痘印痘坑和起到褪黑作用，使用安全的液体伤口敷料。
发明内容
本发明的目的在于提供一种改善肤色暗沉的液体伤口敷料及其制备方法，本发明优化了左旋乳酸的制备方法，得到较高收率的左旋乳酸；加入左旋乳酸，在体内降解为乳酸单体，与羧甲基纤维素钠形成复杂的网络结构，在磷酸盐缓冲液的作用下调节pH，保持了溶剂在反应体系中极好的稳定性，同时，左旋乳酸刺激伤口中细胞再生，加速胶原蛋白合成，从而达到加速创面愈合、褪黑、改善肤色暗沉和修复痘印痘坑的作用。
本发明要解决的技术问题：研制一款加速创面愈合和起到褪黑作用的液体伤口敷料。
本发明的目的可以通过以下技术方案实现：
一种改善肤色暗沉的液体伤口敷料，包括如下重量份的原料：0.1-10重量份的增稠剂、0.2-30重量份的左旋乳酸、1-15重量份的缓冲液和45-95重量份的纯化水。
进一步地，所述缓冲液为pH＝7.4的磷酸盐缓冲液。
进一步地，所述增稠剂包括羧甲基纤维素钠和交联羧甲基纤维素钠中的一种，优选地，本发明采用羧甲基纤维素钠；羧甲基纤维素钠无臭、无味、无毒、能溶于水，有很强吸湿性，相较于其他溶剂，羧甲基纤维素钠对于制作液体伤口敷料效果更佳，加入的羧甲基纤维素钠能与乳酸单体形成复杂的网络结构，迎合了现代伤口护理的“湿润愈合理论”，使伤口的表面处在一个封闭、湿润的环境下进行愈合，阻止或减少了有碍创面修复细胞移入的焦痂的形成，并有利于加快皮肤表面创面的恢复速度，进而达到加速创面愈合、收缩毛孔的作用。
进一步地，所述左旋乳酸制备步骤为：
(1)双酶解、厌氧发酵：将25-45重量份玉米于60-70℃水中浸0.5-1h，调节破壁压力为10-15MPa、破壁温度50-55℃、破壁时间10-15min，对玉米进行超临界CO2破壁，破壁完成后加入22-32重量份蒸馏水和14-21重量份复合酶，搅拌均匀，于45-55℃水浴下振荡酶解，得到酶解液，将酶解液和乳酸发酵营养源加入厌氧发酵罐，得到待提纯发酵液；
(2)多滤膜分离纯化：将待提纯发酵液泵入微滤膜，由微滤膜透出的发酵液直接泵入纳滤膜，经纳滤膜纯化透出的稀乳酸泵入反渗透膜进行浓缩、蒸馏提纯，得到左旋乳酸。
左旋乳酸具有很好的水溶性及很强的透皮作用，可以调控创面处胶原蛋白的合成，持续不断地刺激伤口中细胞再生，加速胶原蛋白合成，重新生成纤维组织，促进深层网状纤维结构的重建，从而达到褪黑、改善肤色暗沉和修复痘印痘坑的作用。
进一步地，所述复合酶为质量比为3：1的糖化酶与纤维素酶复合酶。
进一步地，一种所述改善肤色暗沉的液体伤口敷料的制备方法，包括以下步骤：
(1)配置磷酸盐缓冲液：称取磷酸二氢钾，加入氢氧化钠溶液，用水稀释，得到磷酸盐缓冲液；
(2)配置混合液A：按照配方取纯化水和增稠剂，将纯化水升温后加入增稠剂，保温搅拌，得到混合液A；
(3)配置混合液B：将步骤(2)制得的混合液A降温，加入配方量乳酸，搅拌，加入配方量缓冲液，调节pH值，得到混合液B；
(4)制备液体伤口敷料：将步骤(3)制得的混合液B搅拌后出料，灌装，得到一种改善肤色暗沉的液体伤口敷料。
进一步地，步骤(1)中所述磷酸二氢钾、氢氧化钠溶液的用量比为1.36g：79mL，所述氢氧化钠溶液浓度为0.1mol/L，所述用水稀释为稀释至200mL。
进一步地，步骤(2)中所述升温温度为80-90℃，优选地，升温至85℃后停止升温，所述保温搅拌时间为0.5-1.5h，搅拌程度为直至增稠剂完全溶解，于85℃下保温搅拌，有利于减少反应体系中的水分蒸发，改善和稳定体系环境。
进一步地，步骤(3)中所述降温温度为30-50℃，所述搅拌时间为20-50min，优选地，降温至40℃，搅拌时间为30min。
进一步地，步骤(3)中所述pH值为6.0-8.0，pH值在该范围内时，含有羧甲基纤维素钠的溶液稳定性极好。
进一步地，步骤(4)中所述搅拌时间为20-40min，装罐仪器为全自动灌装机、西林瓶灌装机和预灌封注射器灌装机中的一种，优选地，本发明采用全自动灌装机完成灌装。
本发明的有益效果：
(1)本发明制备的一种改善肤色暗沉的液体伤口敷料各原料配比科学有效，使得原料间协同发挥作用；左旋乳酸在体内通过非酶促水解的方式降解为乳酸单体，与羧甲基纤维素钠形成相互作用，羧甲基纤维素钠中的亲水基团氢氧根和乳酸单体中的碳酰基之间以氢键的方式相互结合，形成复杂的网络结构，在磷酸盐缓冲液的作用下调节适宜的pH值，使羧甲基纤维素钠和左旋乳酸形成的溶液保持极好的稳定性，同时，左旋乳酸持续不断地刺激伤口中细胞再生，加速胶原蛋白合成，重新生成纤维组织，促进深层网状纤维结构的重建，从而达到褪黑、改善肤色暗沉和修复痘印痘坑的作用。
(2)本产品加入的羧甲基纤维素钠能与乳酸单体形成复杂的网络结构，迎合了现代伤口护理的“湿润愈合理论”，使伤口的表面处在一个封闭、湿润的环境下进行愈合，阻止或减少了有碍创面修复细胞移入的焦痂的形成，并有利于加快皮肤表面创面的恢复速度，进而达到加速创面愈合、收缩毛孔的作用。
(3)本产品配置混合液A的过程中先升温至85℃后严格保温85℃搅拌，配置混合液B的过程中降温至40℃后搅拌30min，整个产品的制备过程严格控制温度和搅拌时间，在此设置的温度下搅拌有利于减少反应体系中的水分蒸发且形成均一稳定的混合液，同时改善反应体系环境，保证了液体伤口敷料具有极好的延展性和渗透性。
(4)本发明优化了左旋乳酸的制备方法，采用双酶解、厌氧发酵得到待提纯发酵液，再待提纯发酵液用多滤膜分离纯化法提纯，将得到较高收率的左旋乳酸。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
左旋乳酸的制备方法，包括如下步骤：
(1)双酶解、厌氧发酵：将25重量份玉米于65℃水中浸1h，调节破壁压力为12MPa、破壁温度52℃、破壁时间12min，对玉米进行超临界CO2破壁，破壁完成后加入22重量份蒸馏水和14重量份质量比为3：1的糖化酶与纤维素酶复合酶，搅拌均匀，于50℃水浴下振荡酶解，得到酶解液，将酶解液和乳酸发酵营养源加入厌氧发酵罐，得到待提纯发酵液；
(2)多滤膜分离纯化：将待提纯发酵液泵入微滤膜，由微滤膜透出的发酵液直接泵入纳滤膜，经纳滤膜纯化透出的稀乳酸泵入反渗透膜进行浓缩，将浓缩液蒸馏提纯，得到左旋乳酸。
经检测，该方法制得的左旋乳酸收率达94.3％。
实施例2
左旋乳酸的制备方法，包括如下步骤：
(1)双酶解、厌氧发酵：将35重量份玉米于65℃水中浸1h，调节破壁压力为12MPa、破壁温度52℃、破壁时间12min，对玉米进行超临界CO2破壁，破壁完成后加入27重量份蒸馏水和17重量份质量比为3：1的糖化酶与纤维素酶复合酶，搅拌均匀，于50℃水浴下振荡酶解，得到酶解液，将酶解液和乳酸发酵营养源加入厌氧发酵罐，得到待提纯发酵液；
(2)多滤膜分离纯化：将待提纯发酵液泵入微滤膜，由微滤膜透出的发酵液直接泵入纳滤膜，经纳滤膜纯化透出的稀乳酸泵入反渗透膜进行浓缩，将浓缩液蒸馏提纯，得到左旋乳酸。
经检测，该方法制得的左旋乳酸收率达94.7％。
实施例3
左旋乳酸的制备方法，包括如下步骤：
(1)双酶解、厌氧发酵：将45重量份玉米于65℃水中浸1h，调节破壁压力为12MPa、破壁温度52℃、破壁时间12min，对玉米进行超临界CO2破壁，破壁完成后加入32重量份蒸馏水和21重量份质量比为3：1的糖化酶与纤维素酶复合酶，搅拌均匀，于50℃水浴下振荡酶解，得到酶解液，将酶解液和乳酸发酵营养源加入厌氧发酵罐，得到待提纯发酵液；
(2)多滤膜分离纯化：将待提纯发酵液泵入微滤膜，由微滤膜透出的发酵液直接泵入纳滤膜，经纳滤膜纯化透出的稀乳酸泵入反渗透膜进行浓缩，将浓缩液蒸馏提纯，得到左旋乳酸。
经检测，该方法制得的左旋乳酸收率达95.1％。
对比例1
与实施例3相比，步骤(1)中采用单酶解、厌氧发酵法，即添加的复合酶改为添加单一的糖化酶，其余制备步骤和参数均相同。
经检测，该方法制得的左旋乳酸收率达88.3％。
对比例2
与实施例3相比，步骤(1)中采用单酶解、厌氧发酵法，即添加的复合酶改为添加单一的纤维素酶，其余制备步骤和参数均相同。
经检测，该方法制得的左旋乳酸收率达87.1％。
对比例3
与实施例3相比，步骤(1)中不对玉米进行超临界CO2破壁，直接进行酶解，其余制备步骤和参数均相同。
对比例4
与实施例3相比，步骤(1)中得到酶解液后直接进行步骤(2)多滤膜分离纯化，其余制备步骤和参数均相同。
经检测，该方法制得的左旋乳酸收率达89.2％。
对比例5
与实施例3相比，步骤(2)中采用单滤膜分离纯化法，即待提纯发酵液泵入微滤膜后直接进行浓缩、蒸馏提纯，其余制备步骤和参数均相同。
经检测，该方法制得的左旋乳酸收率达90.3％。
对比例6
与实施例3相比，步骤(2)中采用双滤膜分离纯化法，即待提纯发酵液泵入微滤膜、纳滤膜后直接进行浓缩、蒸馏提纯，其余制备步骤和参数均相同。
经检测，该方法制得的左旋乳酸收率达91.5％。
由对比例1-2可得，本发明采用的双酶酶解制得的左旋乳酸收率比单酶酶解制得的左旋乳酸收率高；
由对比例3可得，采用超临界CO2破壁制得的左旋乳酸收率较高，这是由于破壁处理对玉米细胞壁起到了破坏作用，增加了与复合酶的接触位点，有利于增加反应体系中的反应点；
由对比例4-6可得，多滤膜分离纯化的方法相比于单滤膜、双滤膜膜分离纯化法，更有利于提高左旋乳酸的收率。
实施例4
一种改善肤色暗沉的液体伤口敷料的制备方法，包括如下步骤：
(1)配置磷酸盐缓冲液：称取1.36g磷酸二氢钾，加入79mL浓度为0.1mol/L的氢氧化钠溶液，用水稀释至200mL，得到pH＝7.4的磷酸盐缓冲液；
(2)配置混合液A：在乳化锅中加入45重量份纯化水，升温至85℃后停止升温，加入0.1重量份羧甲基纤维素钠，保温搅拌0.5h，至羧甲基纤维素钠完全溶解，得到混合液A；
(3)配置混合液B：将乳化锅内步骤(2)制得的混合液A降温至40℃后，加入0.2重量份左旋乳酸，搅拌30min，加入1重量份磷酸盐缓冲液调节pH值为6.0，得到混合液B；
(4)制备液体伤口敷料：将步骤(3)制得的混合液B继续搅拌20min后出料，使用全自动灌装机完成灌装，得到一种改善肤色暗沉的液体伤口敷料。
本发明制备的液体伤口敷料以聚左旋乳酸的皮肤应用为主。
实施例5
一种改善肤色暗沉的液体伤口敷料的制备方法，包括如下步骤：
(1)配置磷酸盐缓冲液：称取1.36g磷酸二氢钾，加入79mL浓度为0.1mol/L的氢氧化钠溶液，用水稀释至200mL，得到pH＝7.4的磷酸盐缓冲液；
(2)配置混合液A：在乳化锅中加入92.5重量份纯化水，升温至85℃后停止升温，加入5重量份羧甲基纤维素钠，保温搅拌1h，至羧甲基纤维素钠完全溶解，得到混合液A；
(3)配置混合液B：将乳化锅内步骤(2)制得的混合液A降温至40℃后，加入0.5重量份左旋乳酸，搅拌30min，加入2重量份磷酸盐缓冲液调节pH值为7.0，得到混合液B；
(4)制备液体伤口敷料：将步骤(3)制得的混合液B继续搅拌30min后出料，使用全自动灌装机完成灌装，得到一种改善肤色暗沉的液体伤口敷料。
本发明制备的液体伤口敷料以聚左旋乳酸的皮肤应用为主。
实施例6
一种改善肤色暗沉的液体伤口敷料的制备方法，包括如下步骤：
(1)配置磷酸盐缓冲液：称取1.36g磷酸二氢钾，加入79mL浓度为0.1mol/L的氢氧化钠溶液，用水稀释至200mL，得到pH＝7.4的磷酸盐缓冲液；
(2)配置混合液A：在乳化锅中加入95重量份纯化水，升温至85℃后停止升温，加入10重量份羧甲基纤维素钠，保温搅拌1.5h，至羧甲基纤维素钠完全溶解，得到混合液A；
(3)配置混合液B：将乳化锅内步骤(2)制得的混合液A降温至40℃后，加入30重量份左旋乳酸，搅拌30min，加入6重量份磷酸盐缓冲液调节pH值为8.0，得到混合液B；
(4)制备液体伤口敷料：将步骤(3)制得的混合液B继续搅拌40min后出料，使用全自动灌装机完成灌装，得到一种改善肤色暗沉的液体伤口敷料。
本发明制备的液体伤口敷料以聚左旋乳酸的皮肤应用为主。
对比例
(1)与实施例5相比，对比例7-12中所用原料如表1所示，其余制备步骤和参数均相同。
(2)与实施例5相比，对比例13-24制备过程中的工艺参数如表2所示，其余制备步骤和参数均相同。
表1
Figure BDA0003921030210000091
Figure BDA0003921030210000101
表2
Figure BDA0003921030210000102
性能检测
(1)采用德国Courage+Khazaka Electronic Gmbh(CK)公司生产的黑色素皮肤检测仪
Figure BDA0003921030210000103
MX 18，对使用实施例4-6、对比例7-24制得的液体伤口敷料用户及不使用本产品的用户1-3的平均皮肤黑色素含量进行测试，其结果如表3所示。
(2)在垫板的0刻度处挤出0.05mL产品，使用涂布棒拖曳，观察其拖曳痕迹的长度，对实施例4-6和对比例7-24制得的液体伤口敷料的延展性进行测试；
判定方法：拖曳痕迹的长度为3-7cm属于尚可，8-12cm属于均匀，大于12cm属于较好；其结果如表4所示。
(3)将制得的液体伤口敷料挤出0.05mL覆盖至10层的棉片(厚度
10mm)上，观察其渗透程度，对实施例1-3和对比例1-18制得的液体伤口敷料的渗透性进行测试；
判定方法：1-3层属于尚可；4-7层属于较好；大于7层属于优秀；其结果如表4所示。
(4)选择360位志愿者进行非慢性创面皮肤屏障修复测试，据统计，其中有120位为果酸换肤创伤，120位为激光创伤，120位为毛孔粗大、痘印痘坑多的志愿者，将其随机分为24组，每组15人，分别使用实施例4-6、对比例7-24和市售伤口敷料1-3进行对比。
效果测定：
1)显效：创面/疤痕/痘印痘坑平均修复面积达到100％，无过敏、红肿、渗液且毛孔收缩明显；
2)有效：创面/疤痕/痘印痘坑平均修复面积为50～80％，无过敏、渗液，有轻微红肿，毛孔轻微收缩；
3)无效：创面/疤痕/痘印痘坑平均修复面积低于50％，有红肿、有渗液，毛孔几乎无收缩。
其结果如表5所示。
表3
Figure BDA0003921030210000111
Figure BDA0003921030210000121
表4
延展性(cm) 渗透性(层)
实施例4 11.41 9
实施例5 11.83 9
实施例6 11.56 9
对比例7 6.83 7
对比例8 6.79 6
对比例9 7.35 5
对比例10 7.28 6
对比例11 7.56 4
对比例12 7.97 5
对比例13 7.62 6
对比例14 7.07 5
对比例15 8.55 7
对比例16 8.02 6
对比例17 8.89 6
对比例18 7.50 5
对比例19 6.65 7
对比例20 6.75 7
对比例21 8.71 6
对比例22 8.19 5
对比例23 7.79 5
对比例24 7.19 6
表5
Figure BDA0003921030210000141
Figure BDA0003921030210000151
由表3、表5所示，本发明制备的一种改善肤色暗沉的液体伤口敷料具有优异的褪黑色素、改善肤色暗沉、淡化痘印痘坑、毛孔收缩作用；
由表3可知，4周后实施例4-6的平均黑色素含量远低于改变原料配比的对比例7-12、和不使用本产品的用户1-3、略低于改变制备过程中工艺参数的对比例13-24，说明本产品各原料配比科学有效，使得原料间协同发挥作用；左旋乳酸在体内通过非酶促水解的方式降解为乳酸单体，与羧甲基纤维素钠相互作用，形成复杂的网络结构，在磷酸盐缓冲液的作用下调节适宜pH值，使羧甲基纤维素钠和左旋乳酸形成的溶液保持极好的稳定性，同时，左旋乳酸持续不断地刺激伤口中细胞再生，加速胶原蛋白合成，重新生成纤维组织，促进深层网状纤维结构的重建，从而达到褪黑、改善肤色暗沉和修复痘印痘坑的作用；
由表5可知，实施例4-6的非慢性创面皮肤屏障修复测试的显效率和有效率远高于对比例7-12和市售伤口敷料1-3、略高于对比例13-24，说明本产品加入的羧甲基纤维素钠羧中的亲水基团氢氧根和乳酸单体中的碳酰基之间以氢键的方式相互结合，形成复杂的网络结构，迎合了现代伤口护理的“湿润愈合理论”，使伤口的表面处在一个封闭、湿润的环境下进行愈合，阻止或减少了有碍创面修复细胞移入的焦痂的形成，并有利于加快皮肤表面创面的恢复速度，进而达到加速创面愈合、收缩毛孔的作用。
由表4所示，本发明制备的一种改善肤色暗沉的液体伤口敷料具有极好的延展性和渗透性，本产品配置混合液A的过程中先升温至85℃后严格保温85℃搅拌，配置混合液B的过程中降温至40℃后搅拌30min，整个产品的制备过程严格控制温度和搅拌时间，在此设置的温度下搅拌有利于减少反应体系中的水分蒸发且形成均一稳定的混合液，同时改善反应体系环境，保证了液体伤口敷料具有极好的延展性和渗透性。
在说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“示例”、“具体示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
以上内容仅仅是对本发明所作的举例和说明，所属本技术领域的技术人员对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，只要不偏离发明或者超越本权利要求书所定义的范围，均应属于本发明的保护范围。

Claims (2)

1.一种改善肤色暗沉的液体伤口敷料，其特征在于，所述液体伤口敷料包括如下重量份的原料：0.1-10重量份的增稠剂、0.2-30重量份的左旋乳酸、1-15重量份的缓冲液和45-95重量份的纯化水；
所述增稠剂包括羧甲基纤维素钠和交联羧甲基纤维素钠中的一种；
所述左旋乳酸制备步骤为：
（1）双酶解、厌氧发酵：将25-45重量份玉米于60-70℃水中浸0.5-1h，调节破壁压力为10-15MPa、破壁温度50-55℃、破壁时间10-15min，对玉米进行超临界CO2破壁，破壁完成后加入22-32重量份蒸馏水和14-21重量份复合酶，搅拌均匀，于45-55℃水浴下振荡酶解，得到酶解液，将酶解液和乳酸发酵营养源加入厌氧发酵罐，得到待提纯发酵液；
（2）多滤膜分离纯化：将待提纯发酵液泵入微滤膜，由微滤膜透出的发酵液直接泵入纳滤膜，经纳滤膜纯化透出的稀乳酸泵入反渗透膜进行浓缩、蒸馏提纯，得到左旋乳酸；
所述缓冲液为pH=7.4的磷酸盐缓冲液；
所述改善肤色暗沉的液体伤口敷料的制备方法包括以下步骤：
（1）配置磷酸盐缓冲液：称取磷酸二氢钾，加入氢氧化钠溶液，用水稀释，得到磷酸盐缓冲液；
（2）配置混合液A：按照配方取纯化水和增稠剂，将纯化水升温后加入增稠剂，保温搅拌，得到混合液A；
所述升温温度为80-90℃，所述保温搅拌时间为0.5-1.5h，搅拌程度为直至增稠剂完全溶解；
（3）配置混合液B：将步骤（2）制得的混合液A降温，加入配方量乳酸，搅拌，加入配方量缓冲液，调节pH值，得到混合液B；
所述降温温度为30-50℃，所述搅拌时间为20-50min；所述pH值为6.0-8.0；
（4）制备液体伤口敷料：将步骤（3）制得的混合液B搅拌后出料，灌装，得到一种改善肤色暗沉的液体伤口敷料；
所述搅拌时间为20-40min，装罐仪器为全自动灌装机、西林瓶灌装机和预灌封注射器灌装机中的一种。
2.根据权利要求1所述的一种改善肤色暗沉的液体伤口敷料，其特征在于，步骤（1）中所述磷酸二氢钾、氢氧化钠溶液的用量比为1.36g:79mL，所述氢氧化钠溶液浓度为0.1mol/L，所述用水稀释为稀释至200mL。
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