CN115569237A - 一种血管网络生物支架及其制备方法、用途 - Google Patents

一种血管网络生物支架及其制备方法、用途 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种血管网络生物支架及其制备方法、用途，制备方法包括：1)制备血管网络生物支架前驱体，血管网络生物支架前驱体包括血管网络软模板和刺激响应水凝胶预聚体，刺激响应水凝胶预聚体包裹于所述血管网络软模板的外表面；血管网络软模板的原料为Pluronic F‑127水凝胶；刺激响应水凝胶预聚体含有温度响应水凝胶，温度响应水凝胶的最低共溶温度为T1；2)将血管网络生物支架前驱体于0～4℃下去除所述血管网络软模板，得到血管网络生物支架膨胀体；3)收缩血管网络生物支架膨胀体，制得血管网络生物支架；收缩温度为T2，且T2＞T1。本发明利用Pluronic F‑127水凝胶低温去除，基于刺激响应水凝胶材料的收缩特性，实现血管网络膨胀补偿，得到血管网络生物支架。

Description

一种血管网络生物支架及其制备方法、用途
技术领域
本发明涉及生物医学技术领域，特别是涉及一种血管网络生物支架及其制备方法、用途。
背景技术
血管网络生物支架指的是含血管网络的体外组织，通常用于组织缺损修复，血管网络可为组织提供营养物质和氧气传输的通道，同时有利于代谢产物的排出。研究表明，相比于不含血管网络的生物支架，含血管网络的生物支架能更加快速地与宿主组织建立连接，提高组织缺损修复效率。
常见的血管网络生物支架制备方法包括模具工艺、增材制造工艺、牺牲工艺以及复合工艺。传统模具工艺制备过程较为复杂，且制备的血管网络结构较为单一，主要集中在二维结构上；增材制造工艺主要包含了3D打印与喷墨打印，虽然可以打印结构较为复杂的血管网络，但所制备的血管网络尺寸较大，制备方法扩展能力较弱；牺牲工艺灵活性较高，无论是在血管网络结构复杂程度上，还是血管网络尺寸范围上，与其他制备工艺相比都具有较高的优势。复合工艺指的是牺牲工艺与其他工艺进行配合，在体外生物支架中制备血管网络。例如，采用增材制造工艺首先制备牺牲模块，采用生物支架材料对牺牲模块进行包裹后，去除牺牲模块，获得含血管网络的生物支架，该工艺灵活度高，可根据需求制备不同尺寸的血管网络生物支架，因此得到广泛的应用。
但是，复合工艺还存在以下问题：牺牲工艺中多采用可逆相变凝胶材料作为牺牲模板，利用其在特定的温度范围内发生相转变，由固态转变为液态的原理去除，且多采用水冲洗辅助去除，由于可逆相变凝胶材料具有水凝胶吸水膨胀的特性，牺牲模板在去除工序中会发生膨胀后体积增大的现象，导致得到的血管网络生物支架会发生明显的失真变形，即实际尺寸大于设计尺寸，无法满足实际的应用需求。
发明内容
鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种血管网络生物支架及其制备方法、用途，用于解决现有复合工艺制备血管网络生物支架过程中，牺牲模板去除工序容易发生膨胀，导致血管网络生物支架失真变形的问题。
为实现上述目的及其他相关目的，本发明是通过包括以下技术方案获得的。
本发明提供一种血管网络生物支架的制备方法，包括以下步骤：
1)制备血管网络生物支架前驱体，所述血管网络生物支架前驱体包括血管网络软模板和刺激响应水凝胶预聚体，所述刺激响应水凝胶预聚体包裹于所述血管网络软模板的外表面；所述血管网络软模板的原料为Pluronic F-127水凝胶；所述刺激响应水凝胶预聚体含有温度响应水凝胶，所述温度响应水凝胶的最低共溶温度为T1；
2)将血管网络生物支架前驱体于0～4℃下去除所述血管网络软模板，得到血管网络生物支架膨胀体；
3)收缩所述血管网络生物支架膨胀体，制得血管网络生物支架；收缩温度为T2，且T2＞T1。
优选地，步骤1)中，所述温度响应水凝胶的最低共溶温度T1为30～35℃。
优选地，步骤1)中，所述温度响应水凝胶为聚N-异丙基丙烯酰胺(PNIPAM)。
优选地，步骤2)中，去除所述血管网络软模板还包括采用水辅助冲洗.
优选地，所述Pluronic F-127水凝胶的浓度为30～40w/v％。
优选地，所述血管网络软模板采用先构建血管网络三维模型，然后以Pluronic F-127水凝胶作为打印原料，采用3D打印系统打印的方式获得。
优选地，打印温度为20～25℃；打印速度为100～300μL/min。
优选地，所述刺激响应水凝胶预聚体采用将刺激响应水凝胶原料固化成型的方式获得。
优选地，所述血管网络生物支架前驱体的制备方法如下：
A)将刺激响应水凝胶原料固化成型，得第一刺激响应水凝胶预聚体；
B)构建血管网络三维模型，采用3D打印系统，在第一刺激响应水凝胶预聚体表面打印血管网络软模板；
C)在血管网络软模板周围注入刺激响应水凝胶原料，固化成型，得第二刺激响应水凝胶预聚体；所述第一刺激响应水凝胶预聚体、血管网络软模板和第二刺激响应水凝胶预聚体形成血管网络生物支架前驱体。
优选地，以所述刺激响应水凝胶原料总重量为基准，所述刺激响应水凝胶原料包括以下重量百分含量的组分：温度响应水凝胶单体8～12wt％，交联剂0.005～0.020wt％和光引发剂 0.005～0.020wt％，分散剂为水；所述固化成型为光固化成型。
优选地，所述温度响应水凝胶单体为N-异丙基丙烯酰胺(NIPAM)。
优选地，所述交联剂为N，N-亚甲基双丙烯酰胺(MBA)。
优选地，所述光引发剂为苯基-2,4,6-三甲基苯甲酰基亚磷酸锂(LAP)。
优选地，所述刺激响应水凝胶原料中还包括增强水凝胶，所述增强水凝胶选自甲基丙烯酸化明胶(GelMA)、甲基丙烯酰化透明质酸(HAMA)、甲基丙烯酰化海藻酸钠(AlgMA)、甲基丙烯酰化丝素蛋白(SilMA)、甲基丙烯酰化壳聚糖(CSMA)和甲基丙烯酰化硫酸软骨素(ChSMA)中的一种或多种。
优选地，所述增强水凝胶为所述刺激响应水凝胶总重量的1～3wt％。
优选地，用紫外光照射固化，所述紫外光的波长为360～425nm。
本发明的发明目的之二在于提供一种血管网络生物支架。
作为优选，所述高精度血管网络生物支架内具有中空的血管网络通道，所述血管网络通道的直径为150～1000μm。
本发明的发明目的之三在于提供一种高精度血管网络生物支架作为受损血管修复材料在血管修复术中的用途。
如上所述，本发明的血管网络生物支架及其制备方法、用途，具有以下有益效果：利用 Pluronic F-127水凝胶在低温下呈液态便于去除，基于含有温度响应水凝胶的刺激响应水凝胶预聚体在高于温度响应水凝胶的最低共溶温度时具有的收缩特性，协同调控刺激响应水凝胶材料的配方及各工序的参数，实现血管网络膨胀的精确补偿，得到高精度血管网络生物支架；通过添加交联剂和增强水凝胶材料，提高血管网络生物支架的机械强度和生物相容性，使制得的高精度血管网络生物支架能够作为受损血管修复材料广泛应用在血管修复术中。
附图说明
图1显示为本发明血管网络生物支架的制备方法的流程示意图之一。
图2显示为本发明实施例1制备的高精度血管网络生物支架的生物相容性测试结果图。
图1中附图标号如下：
1 第一刺激响应水凝胶预聚体
2 血管网络软模板
3 血管网络生物支架前驱体
4 血管网络生物支架膨胀体
5 膨胀血管网络通道
6 血管网络生物支架
7 血管网络通道
具体实施方式
以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。
须知，下列实施例中未具体注明的工艺设备或装置均采用本领域内的常规设备或装置。
此外应理解，本发明中提到的一个或多个方法步骤并不排斥在所述组合步骤前后还可以存在其他方法步骤或在这些明确提到的步骤之间还可以插入其他方法步骤，除非另有说明；还应理解，本发明中提到的一个或多个设备/装置之间的组合连接关系并不排斥在所述组合设备/装置前后还可以存在其他设备/装置或在这些明确提到的两个设备/装置之间还可以插入其他设备/装置，除非另有说明。而且，除非另有说明，各方法步骤的编号仅为鉴别各方法步骤的便利工具，而非为限制各方法步骤的排列次序或限定本发明可实施的范围，其相对关系的改变或调整，在无实质变更技术内容的情况下，当亦视为本发明可实施的范畴。
本申请实施例提供了一种具体的血管网络生物支架的制备方法，包括以下步骤：
1)制备血管网络生物支架前驱体，所述血管网络生物支架前驱体包括血管网络软模板和刺激响应水凝胶预聚体，所述刺激响应水凝胶预聚体包裹于所述血管网络软模板的外表面；所述血管网络软模板的原料为Pluronic F-127水凝胶；所述刺激响应水凝胶预聚体含有温度响应水凝胶，所述温度响应水凝胶的最低共溶温度为T1；
2)将血管网络生物支架前驱体于0～4℃下去除所述血管网络软模板，得到血管网络生物支架膨胀体；
3)收缩所述血管网络生物支架膨胀体，制得血管网络生物支架；收缩温度为T2，且T2＞T1。
Pluronic F-127在室温下可以保持凝胶状态，具有剪切变稀效应，适用于3D打印；在4℃下，Pluronic F-127呈液态，具有较好的流动性，易于去除。申请人研究发现，Pluronic F-127自身在温度由室温到4℃的转变过程中会发生相变导致膨胀，由此使得血管网络软模板在去除过程中会出现膨胀现象，继而致使所制备的血管网络生物支架内含有的血管网络通道出现尺寸失真，实际尺寸大于设计尺寸的结果。所述包裹指的是血管网络软模板的侧壁，其两端开口处未被包裹。
为了解决上述技术问题，本申请利用Pluronic F-127水凝胶在低温下呈液态便于去除，基于刺激响应水凝胶材料在高于最低共溶温度时具有的收缩特性，刺激响应性材料的体积收缩，补偿Pluronic F-127水凝胶膨胀导致的血管网络膨胀，并协同调控刺激响应水凝胶材料的配方及各工序的参数，实现血管网络膨胀的精确补偿，得到高精度的血管网络生物支架。
在一个具体的实施方式中，步骤1)中，所述温度响应水凝胶的最低共溶温度T1为30～35℃，如具体为30～33℃，33～35℃。由此使得，收缩温度T2可以在人体温度和细胞培养温度37℃下的体积收缩，实现血管网络膨胀补偿，得到高精度血管网络生物支架。
在一个具体的实施方式中，步骤1)中，所述温度响应水凝胶为聚N-异丙基丙烯酰胺 (PNIPAM)。PNIPAM具有最低共溶温度(Lower Critical Solution Temperature，LCST)，其LCST为33～35℃，当环境温度大于LCST时，PNIPAM体积收缩，尺寸变小；当环境温度小于LCST时，PNIPAM体积膨胀，尺寸变大。因此，PNIPAM可以在人体温度和细胞培养温度37℃下的体积收缩，实现血管网络膨胀补偿，得到高精度血管网络生物支架。
在一个具体的实施方式中，步骤2)中，去除所述血管网络软模板还包括采用水辅助冲洗.
在一个具体的实施方式中，所述Pluronic F-127水凝胶的浓度为30～40w/v％，如具体为 30～33w/v％，33～38w/v％，38～40w/v％，且在室温下呈半固态。
在一个具体的实施方式中，所述血管网络软模板采用先构建血管网络三维模型，然后以 Pluronic F-127水凝胶作为打印原料，采用3D打印系统打印的方式获得。
在一个具体的实施方式中，采用Creo软件或PRO/E软件构建血管网络三维模型；
在一个具体的实施方式中，打印温度为20～25℃，打印速度为100～300μL/min。
在一个具体的实施方式中，打印纤维的间距为0.5～10mm；打印纤维的层高为 150～800μm。所述纤维的间距指的是血管网络软模板中的纤维之间的距离；打印纤维的层高指的是血管网络软模板的高度。
在本申请的上述技术方案中，血管网络软模板的打印参数，如打印速度、温度及间距，均与去除血管网络软模板过程中带来的膨胀程度有关，本申请通过调控打印参数及刺激响应水凝胶中的温度响应水凝胶单体8～12wt％和水凝胶GelMA1～3wt％等的比例来实现不同的收缩程度，协同制得高精度血管网络生物支架。
在一个具体的实施方式中，所述刺激响应水凝胶预聚体采用将刺激响应水凝胶原料固化成型的方式获得。
在一个具体的实施方式中，所述血管网络生物支架前驱体的制备方法如下：
A)将刺激响应水凝胶原料固化成型，得第一刺激响应水凝胶预聚体；
B)构建血管网络三维模型，采用3D打印系统，在第一刺激响应水凝胶预聚体表面打印血管网络软模板；
C)在血管网络软模板周围注入刺激响应水凝胶原料，固化成型，得第二刺激响应水凝胶预聚体；所述第一刺激响应水凝胶预聚体、血管网络软模板和第二刺激响应水凝胶预聚体形成血管网络生物支架前驱体。
由于血管网络软模板具有一定的柔性，为确保其在刺激响应水凝胶内分散均匀，可以采用先将部分刺激响应水凝胶原料固化成型，再在固态的刺激响应水凝胶预聚体表面原位3D 打印血管网络软模板，然后再注入液态的刺激响应水凝胶原料，固化成型，得到血管网络生物支架前驱体。
在一个具体的实施方式中，以所述刺激响应水凝胶原料总重量为基准，所述刺激响应水凝胶原料包括以下重量百分含量的组分：温度响应水凝胶单体8～12wt％，交联剂0.005～0.020wt％和光引发剂0.005～0.020wt％，分散剂为水；所述固化成型为光固化成型。
在一个具体的实施方式中，所述温度响应水凝胶单体为N-异丙基丙烯酰胺(NIPAM)。
在一个具体的实施方式中，所述交联剂为N，N-亚甲基双丙烯酰胺(MBA)。
在一个具体的实施方式中，所述光引发剂为苯基-2,4,6-三甲基苯甲酰基亚磷酸锂 (LAP)。
在一个具体的实施方式中，用紫外光照射固化，所述紫外光的波长为360～425nm，如具体为360～425nm，360～425nm，360～425nm。
在本申请的上述技术方案中，温度响应水凝胶单体N-异丙基丙烯酰胺(NIPAM)和交联剂N，N-亚甲基双丙烯酰胺(MBA)在光引发剂LAP存在下，在紫外光照射下引发聚合反应，得到聚N-异丙基丙烯酰胺(PNIPAM)。
在一个具体的实施方式中，所述刺激响应水凝胶原料中还包括增强水凝胶，所述增强水凝胶选自甲基丙烯酸化明胶(GelMA)、甲基丙烯酰化透明质酸(HAMA)、甲基丙烯酰化海藻酸钠(AlgMA)、甲基丙烯酰化丝素蛋白(SilMA)、甲基丙烯酰化壳聚糖(CSMA) 和甲基丙烯酰化硫酸软骨素(ChSMA)中的一种或多种。
在一个具体的实施方式中，所述增强水凝胶为所述刺激响应水凝胶总重量的1～3wt％，如具体为1wt％，1.5wt％，2wt％，2.5wt％，3wt％。
在本申请的上述技术方案中，在刺激响应水凝胶中引入上述增强水凝胶，增强水凝胶既可以发生自交联作用，也可以与温度响应水凝胶聚N-异丙基丙烯酰胺(PNIPAM)交联，增强高精度血管网络生物支架的机械强度；此外，上述增强水凝胶具有较好的生物相容性，加入到刺激响应水凝胶体系中，还可以提高血管网络生物支架的生物相容性。
在一个具体的实施方式中，所述血管网络软模板直径为D1，所述血管网络生物支架膨胀体内具有膨胀血管网络通道，所述膨胀血管网络通道的直径为D2，D2＞D1；所述高精度血管网络生物支架内具有血管网络通道，所述血管网络通道的直径为D3；D3＝D1。所述血管网络软模板直径D1指的是血管网络三维模型所对应的目标设计直径。
本申请实施例还提供了一种高精度血管网络生物支架。
在一个具体的实施方式中，所述高精度血管网络生物支架内具有中空的血管网络通道，所述血管网络通道的直径为150～1000μm。
本申请实施例还提供了一种高精度血管网络生物支架作为受损血管修复材料在血管修复术中的用途。
以下由特定的具体实施例说明本发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点及功效。
本申请以下实施例中，Pluronic F-127购买自Merck(Sigma-Aldrich)公司，型号为 P2443。
实施例1
本实施例中，以所述刺激响应水凝胶原料总重量为基准，所述刺激响应水凝胶原料包括以下重量百分含量的组分：温度响应水凝胶单体10wt％，交联剂0.015wt％和光引发剂 0.015wt％，增强水凝胶2wt％，分散剂为水。其中，温度响应水凝胶单体采用N-异丙基丙烯酰胺(NIPAM)，交联剂采用N，N-亚甲基双丙烯酰胺(MBA)，光引发剂采用LAP，增强水凝胶采用甲基丙烯酸化明胶(GelMA)。
参照图1，本实施例提供了一种高精度血管网络生物支架的制备方法，包括以下步骤：
1)在培养皿(直径35mm，高度10mm)中加入1.5mL的刺激响应水凝胶原料，采用波长395nm的紫外光照射15s，控制紫外光照射距离为15cm，光引发交联固化，形成第一刺激响应水凝胶预聚体1；第一刺激响应水凝胶预聚体1中含有温度响应水凝胶聚N-异丙基丙烯酰胺(PNIPAM)，其最低共溶温度为T1为32℃；
2)采用Creo软件构建血管网络三维模型，采用3D打印系统，在第一刺激响应水凝胶预聚体表面原位打印得到血管网络软模板2，所述血管网络软模板2包含6条纤维；血管网络软模板2的直径为D1(600μm)，所述血管网络软模板的原料为浓度为35w/v％的PluronicF-127水凝胶；打印温度为25℃；打印速度为200μL/min，打印纤维的间距为5mm；打印纤维的层高为600μm；
3)在血管网络软模板周围继续注入刺激响应水凝胶原料(血管网络软模板两端未被包裹)，采用波长395nm的紫外光照射15s，控制紫外光照射距离为15cm，光引发交联固化成型，形成第二刺激响应水凝胶预聚体；所述第一刺激响应水凝胶预聚体1、血管网络软模板2和第二刺激响应水凝胶预聚体形成血管网络生物支架前驱体3；
4)将血管网络生物支架前驱体3放置在4℃下20min，去除血管网络软模板2，获得内部具有膨胀血管网络通道5血管网络生物支架膨胀体5，测得膨胀血管网络通道5的直径为 D2(750μm)，且D2＞D1；
5)将血管网络生物支架膨胀体3放置在收缩温度T2 37℃下2h，刺激响应水凝胶体积收缩，得到内部具有血管网络通道7的高精度血管网络生物支架6，经测试血管网络通道7的直径D3为600μm，与血管网络软模板的直径D1相同。
对实施例1制备的高精度血管网络生物支架的生物相容性做检测，测试方法：采用活死染试剂盒(钙黄素Calcein AM/碘化丙啶PI)对粘附高精度血管网络生物支架的细胞进行检测，Calcein AM对活细胞进行染色，呈绿色；PI对死细胞进行染色，呈红色。
测试结果如图2所示，细胞能够粘附、铺展在高精度血管网络生物支架表面，细胞呈现出较高活性，较少发现死细胞，表明了高精度血管网络生物支架较好的生物相容性。
实施例2
实施例2与实施例1的区别在于，步骤4)中，还包括采用温度为4℃的超纯水灌注辅助去除血管网络软模板，其余工艺完全相同。
实施例3
实施例3与实施例1的区别在于，血管网络软模板2的打印速度不同，具体为 300μL/min，其余工艺完全相同。
实施例4
实施例4与实施例1的区别在于，构建的血管网络三维模型不同，水凝胶的浓度不同，具体为：血管网络软模板2包含12条纤维，增强水凝胶浓度为3wt％，其余工艺完全相同。
实施例5
实施例5与实施例1的区别在于，刺激响应水凝胶原料的配方不同，其余工艺完全相同。
本实施例中，刺激响应水凝胶配方具体为：
以所述刺激响应水凝胶原料总重量为基准，所述刺激响应水凝胶原料包括以下重量百分含量的组分：温度响应水凝胶单体12wt％，交联剂0.020wt％和光引发剂0.020wt％，增强水凝胶1wt％，分散剂为水。其中，温度响应水凝胶单体采用N-异丙基丙烯酰胺(NIPAM)，交联剂采用N，N-亚甲基双丙烯酰胺(MBA)，光引发剂采用LAP，增强水凝胶采用甲基丙烯酸化明胶(GelMA)、甲基丙烯酰化海藻酸钠(AlgMA)和甲基丙烯酰化硫酸软骨素(ChSMA)按照质量比1：1：1的混合水凝胶。
分别对实施例1-5的高精度血管网络生物支架的机械强度做检测，测试方法如下：
采用万能材料试验机对血管网络生物支架的压缩强度进行检测，测得血管网络生物支架在压缩试验中压缩至破裂时所承受的最大压缩应力。结合血管网络生物支架的原始横截面积，计算出血管网络生物支架的压缩强度。
测试结果如表1所示：
表1.实施例1-5的高精度血管网络生物支架的性能检测结果
Figure RE-GDA0003941490920000091
综上所述，本发明利用Pluronic F-127水凝胶在低温下呈液态便于去除，基于含有温度响应水凝胶的刺激响应水凝胶预聚体在高于最低共溶温度时具有的收缩特性，协同调控刺激响应水凝胶材料的配方及各工序的参数，实现血管网络膨胀的精确补偿，得到高精度血管网络生物支架；通过添加交联剂和增强水凝胶材料，提高血管网络生物支架的机械强度和生物相容性，使制得的高精度血管网络生物支架能够作为受损血管修复材料广泛应用在血管修复术中。所以，本发明有效克服了现有技术中的种种缺点而具高度产业利用价值。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。

Claims (10)

1.一种血管网络生物支架的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)制备血管网络生物支架前驱体，所述血管网络生物支架前驱体包括血管网络软模板和刺激响应水凝胶预聚体，所述刺激响应水凝胶预聚体包裹于所述血管网络软模板的外表面；所述血管网络软模板的原料为Pluronic F-127水凝胶；所述刺激响应水凝胶预聚体含有温度响应水凝胶，所述温度响应水凝胶的最低共溶温度为T1；
2)将血管网络生物支架前驱体于0～4℃下去除所述血管网络软模板，得到血管网络生物支架膨胀体；
3)收缩所述血管网络生物支架膨胀体，制得血管网络生物支架；收缩温度为T2，且T2＞T1。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：
所述温度响应水凝胶的最低共溶温度T1为30～35℃；
和/或，所述温度响应水凝胶为聚N-异丙基丙烯酰胺；
和/或，去除所述血管网络软模板还包括采用水辅助冲洗；
和/或，所述Pluronic F-127水凝胶的浓度为30～40w/v％。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述血管网络软模板采用先构建血管网络三维模型，然后以Pluronic F-127水凝胶作为打印原料，采用3D打印系统打印的方式获得；
和/或，所述刺激响应水凝胶预聚体采用将刺激响应水凝胶原料固化成型的方式获得。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述血管网络生物支架前驱体的制备方法如下：
A)将刺激响应水凝胶原料固化成型，得第一刺激响应水凝胶预聚体；
B)构建血管网络三维模型，采用3D打印系统，在第一刺激响应水凝胶预聚体表面打印血管网络软模板；
C)在血管网络软模板周围注入刺激响应水凝胶原料，固化成型，得第二刺激响应水凝胶预聚体；所述第一刺激响应水凝胶预聚体、血管网络软模板和第二刺激响应水凝胶预聚体形成血管网络生物支架前驱体。
5.根据权利要求3或4所述的制备方法，其特征在于：以所述刺激响应水凝胶原料总重量为基准，所述刺激响应水凝胶原料包括以下重量百分含量的组分：温度响应水凝胶单体8～12wt％，交联剂0.005～0.020wt％和光引发剂0.005～0.020wt％，分散剂为水；所述固化成型为光固化成型。
6.权利要求5所述的制备方法，其特征在于：所述温度响应水凝胶单体为N-异丙基丙烯酰胺；
和/或，所述交联剂为N，N-亚甲基双丙烯酰胺；
和/或，所述光引发剂为苯基-2,4,6-三甲基苯甲酰基亚磷酸锂；
和/或，采用紫外光照射固化，所述紫外光的波长为360～425nm。
7.根据权利要求3或4所述的制备方法，其特征在于：所述刺激响应水凝胶原料中还包括增强水凝胶，所述增强水凝胶选自甲基丙烯酸化明胶、甲基丙烯酰化透明质酸、甲基丙烯酰化海藻酸钠、甲基丙烯酰化丝素蛋白、甲基丙烯酰化壳聚糖和甲基丙烯酰化硫酸软骨素中的一种或多种；
所述增强水凝胶为所述刺激响应水凝胶原料总重量的1～3wt％。
8.一种如权利要求1-7任一项所述的制备方法制得的血管网络生物支架。
9.根据权利要求8所述的血管网络生物支架，其特征在于：所述血管网络生物支架内具有中空的血管网络通道，所述血管网络通道的直径为150～1000μm。
10.一种如权利要求8或9所述的血管网络生物支架作为受损血管修复材料在血管修复术中的用途。
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