CN115554206B - 一种增强细胞活力的复合发酵物及其制备方法与应用 - Google Patents
一种增强细胞活力的复合发酵物及其制备方法与应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115554206B CN115554206B CN202211292749.9A CN202211292749A CN115554206B CN 115554206 B CN115554206 B CN 115554206B CN 202211292749 A CN202211292749 A CN 202211292749A CN 115554206 B CN115554206 B CN 115554206B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- enzymolysis
- fermentation
- product
- composite
- preparation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000002131 composite material Substances 0.000 title claims abstract description 77
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 29
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 title claims abstract description 7
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 title abstract description 8
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 79
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 78
- 229920002752 Konjac Polymers 0.000 claims abstract description 41
- 240000003377 Shepherdia canadensis Species 0.000 claims abstract description 38
- 235000018324 Shepherdia canadensis Nutrition 0.000 claims abstract description 38
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 35
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 35
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims abstract description 35
- 235000010485 konjac Nutrition 0.000 claims abstract description 27
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 26
- 102000006995 beta-Glucosidase Human genes 0.000 claims abstract description 17
- 108010047754 beta-Glucosidase Proteins 0.000 claims abstract description 17
- 108010002430 hemicellulase Proteins 0.000 claims abstract description 17
- 229940059442 hemicellulase Drugs 0.000 claims abstract description 16
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims abstract description 14
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 10
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 6
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 claims abstract description 5
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 claims abstract description 4
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 37
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 31
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 claims description 26
- 235000013965 Lactobacillus plantarum Nutrition 0.000 claims description 26
- 229940072205 lactobacillus plantarum Drugs 0.000 claims description 26
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 18
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 claims description 17
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 12
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 11
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 11
- 241000186012 Bifidobacterium breve Species 0.000 claims description 10
- 241001608472 Bifidobacterium longum Species 0.000 claims description 10
- 229940009291 bifidobacterium longum Drugs 0.000 claims description 10
- 239000000413 hydrolysate Substances 0.000 claims description 10
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 5
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 claims description 3
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims description 3
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 abstract description 3
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 48
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 22
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 17
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 17
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 15
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 12
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 12
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 12
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 10
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 10
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 10
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 description 10
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 8
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 8
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 7
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 7
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 7
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 6
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 5
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 5
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 5
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 4
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 4
- HHEAADYXPMHMCT-UHFFFAOYSA-N dpph Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC([N+](=O)[O-])=CC([N+]([O-])=O)=C1[N]N(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 HHEAADYXPMHMCT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 4
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 4
- 101710088660 Filaggrin Proteins 0.000 description 3
- 102100028314 Filaggrin Human genes 0.000 description 3
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 3
- 230000002292 Radical scavenging effect Effects 0.000 description 3
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 3
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- MGJZITXUQXWAKY-UHFFFAOYSA-N diphenyl-(2,4,6-trinitrophenyl)iminoazanium Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC([N+](=O)[O-])=CC([N+]([O-])=O)=C1N=[N+](C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 MGJZITXUQXWAKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000001339 epidermal cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 3
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 3
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 3
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- LUEWUZLMQUOBSB-FSKGGBMCSA-N (2s,3s,4s,5s,6r)-2-[(2r,3s,4r,5r,6s)-6-[(2r,3s,4r,5s,6s)-4,5-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-[(2r,4r,5s,6r)-4,5,6-trihydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxan-3-yl]oxy-4,5-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol Chemical compound O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@@H](O[C@@H]2[C@H](O[C@@H](OC3[C@H](O[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H]3O)CO)[C@@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O LUEWUZLMQUOBSB-FSKGGBMCSA-N 0.000 description 2
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 2
- GOZMBJCYMQQACI-UHFFFAOYSA-N 6,7-dimethyl-3-[[methyl-[2-[methyl-[[1-[3-(trifluoromethyl)phenyl]indol-3-yl]methyl]amino]ethyl]amino]methyl]chromen-4-one;dihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.C=1OC2=CC(C)=C(C)C=C2C(=O)C=1CN(C)CCN(C)CC(C1=CC=CC=C11)=CN1C1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 GOZMBJCYMQQACI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 2
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 2
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 2
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 229920002581 Glucomannan Polymers 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 2
- 241000580938 Sapindus Species 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 2
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 2
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 2
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 2
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- 210000005175 epidermal keratinocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 2
- 229940046240 glucomannan Drugs 0.000 description 2
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N perchloric acid Chemical compound OCl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000419 plant extract Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 2
- 238000009281 ultraviolet germicidal irradiation Methods 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- MIJYXULNPSFWEK-GTOFXWBISA-N 3beta-hydroxyolean-12-en-28-oic acid Chemical compound C1C[C@H](O)C(C)(C)[C@@H]2CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@@]5(C(O)=O)CCC(C)(C)C[C@H]5C4=CC[C@@H]3[C@]21C MIJYXULNPSFWEK-GTOFXWBISA-N 0.000 description 1
- 239000005995 Aluminium silicate Substances 0.000 description 1
- 244000247812 Amorphophallus rivieri Species 0.000 description 1
- 235000001206 Amorphophallus rivieri Nutrition 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- JKLISIRFYWXLQG-UHFFFAOYSA-N Epioleonolsaeure Natural products C1CC(O)C(C)(C)C2CCC3(C)C4(C)CCC5(C(O)=O)CCC(C)(C)CC5C4CCC3C21C JKLISIRFYWXLQG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010022355 Fibroins Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- 101000917159 Homo sapiens Filaggrin Proteins 0.000 description 1
- YBRJHZPWOMJYKQ-UHFFFAOYSA-N Oleanolic acid Natural products CC1(C)CC2C3=CCC4C5(C)CCC(O)C(C)(C)C5CCC4(C)C3(C)CCC2(C1)C(=O)O YBRJHZPWOMJYKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MIJYXULNPSFWEK-UHFFFAOYSA-N Oleanolinsaeure Natural products C1CC(O)C(C)(C)C2CCC3(C)C4(C)CCC5(C(O)=O)CCC(C)(C)CC5C4=CCC3C21C MIJYXULNPSFWEK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000519406 Paphiopedilum Species 0.000 description 1
- 241001093760 Sapindaceae Species 0.000 description 1
- 235000012211 aluminium silicate Nutrition 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- RJGDLRCDCYRQOQ-UHFFFAOYSA-N anthrone Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C3=CC=CC=C3CC2=C1 RJGDLRCDCYRQOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003064 anti-oxidating effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N kaolin Chemical compound O.O.O=[Al]O[Si](=O)O[Si](=O)O[Al]=O NLYAJNPCOHFWQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000252 konjac Substances 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 229940100243 oleanolic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- HZLWUYJLOIAQFC-UHFFFAOYSA-N prosapogenin PS-A Natural products C12CC(C)(C)CCC2(C(O)=O)CCC(C2(CCC3C4(C)C)C)(C)C1=CCC2C3(C)CCC4OC1OCC(O)C(O)C1O HZLWUYJLOIAQFC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002040 relaxant effect Effects 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 229930000044 secondary metabolite Natural products 0.000 description 1
- 229930004725 sesquiterpene Natural products 0.000 description 1
- 150000004354 sesquiterpene derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000001502 supplementing effect Effects 0.000 description 1
- 229920001864 tannin Polymers 0.000 description 1
- 235000018553 tannin Nutrition 0.000 description 1
- 239000001648 tannin Substances 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 229930182493 triterpene saponin Natural products 0.000 description 1
- 238000009777 vacuum freeze-drying Methods 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
- A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
- A61K8/9783—Angiosperms [Magnoliophyta]
- A61K8/9789—Magnoliopsida [dicotyledons]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
- A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
- A61K8/9783—Angiosperms [Magnoliophyta]
- A61K8/9794—Liliopsida [monocotyledons]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q5/00—Preparations for care of the hair
- A61Q5/02—Preparations for cleaning the hair
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q5/00—Preparations for care of the hair
- A61Q5/12—Preparations containing hair conditioners
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
- A61K2800/40—Chemical, physico-chemical or functional or structural properties of particular ingredients
- A61K2800/52—Stabilizers
- A61K2800/522—Antioxidants; Radical scavengers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
- A61K2800/80—Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof
- A61K2800/805—Corresponding aspects not provided for by any of codes A61K2800/81 - A61K2800/95
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
- A61K2800/80—Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof
- A61K2800/85—Products or compounds obtained by fermentation, e.g. yoghurt, beer, wine
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Birds (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Botany (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种增强细胞活力的复合发酵物及其制备方法与应用。该复合发酵物的制备方法包括以下步骤：S1、将无患子、魔芋、复合酶混合后进行酶解，得酶解产物；所述复合酶包括半纤维素酶和β‑葡萄糖苷酶；S2、将所述酶解产物、发酵菌种和培养基混合后进行发酵，即得复合发酵物；所述发酵菌种包括乳酸菌和双歧杆菌中的至少一种。本发明通过将特定生物酶酶解和微生物发酵技术进行有机结合，使得到的复合发酵物具有显著的增强细胞活力的功效。
Description
技术领域
本发明涉及一种增强细胞活力的复合发酵物及其制备方法与应用。
背景技术
无患子属于无患子科，又名木患子、洗手果，是一种中型落叶树。无患子果皮中含有三萜皂苷、倍半萜、多糖及鞣质等成分。魔芋是一种常见的食品，含有丰富的碳水化合物、维生素和微量元素，具有减肥、降血压、降血糖、排毒通便的效用。
发明内容
本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种复合发酵物的制备方法，通过特定生物酶酶解和微生物发酵技术进行有机结合，使制得的复合发酵物具有显著的增强细胞活力的功效。
本发明还提供一种复合发酵物。
本发明还提供上述制备方法或复合发酵物的应用。
本发明还提供一种产品。
根据本发明的第一方面实施例的一种复合发酵物的制备方法，包括以下步骤：
S1、将无患子、魔芋、复合酶混合后进行酶解，得酶解产物；
所述复合酶包括半纤维素酶和β-葡萄糖苷酶；
S2、将所述酶解产物、发酵菌种和培养基混合后进行发酵，即得复合发酵物；
所述发酵菌种包括乳酸菌和双歧杆菌中的至少一种。
根据本发明实施例的制备方法，至少具有如下有益效果：
实施例的制备方法将酶解反应与发酵反应相结合，对无患子果皮和魔芋粉进行酶解，获得富含多种活性物质的酶解产物，后续发酵过程中的发酵菌种能够以活性物质为底物合成多种次级代谢产物，增加活性物质的种类，从而制备能够显著增强细胞活力、抗氧化的复合发酵物。
根据本发明的一些实施例，所述乳酸菌包括植物乳杆菌。
根据本发明的一些实施例，所述双歧杆菌包括长双歧杆菌和短双歧杆菌中的至少一种。
根据本发明的一些实施例，所述步骤S2中，所述发酵菌种的活菌数高于103CFU/g酶解产物。优选高于105CFU/g酶解产物。
根据本发明的一些实施例，所述步骤S2中，所述发酵菌种的活菌数为103CFU～107CFU/g酶解产物。优选为104CFU～106CFU/g。
根据本发明的一些实施例，所述无患子包括无患子果皮。
根据本发明的一些实施例，所述魔芋包括魔芋粉。
根据本发明的一些实施例，所述步骤S1中，所述酶解的原料还包括水。
根据本发明的一些实施例，所述步骤S1中，所述无患子和所述魔芋的总质量与所述水的质量的比为1：2～10。
根据本发明的一些实施例，所述步骤S1中，所述无患子和所述魔芋的总质量与所述水的质量的比为1：4～8。
根据本发明的一些实施例，所述步骤S1中，所述无患子和所述魔芋的总质量与所述水的质量的比为1：5～7。
根据本发明的一些实施例，所述无患子、所述魔芋、所述复合酶的质量酶活力比为1g：0.1g～2g：1000U～10000U。
根据本发明的一些实施例，所述无患子、所述魔芋、所述复合酶的质量酶活力比为1g：0.15g～1.8g：2000U～9000U。
根据本发明的一些实施例，所述无患子、所述魔芋、所述复合酶的质量酶活力比为1g：0.2g～1.5g：2500U～8000U。
根据本发明的一些实施例，所述无患子与所述魔芋的质量比为0.6～5：1。
根据本发明的一些实施例，所述无患子与所述魔芋的质量比为4～6：1或0.4～0.8：1。
根据本发明的一些实施例，所述复合酶中，所述半纤维素酶与所述β-葡萄糖苷酶的酶活力比为1：50～200。
根据本发明的一些实施例，所述复合酶中，所述半纤维素酶与所述β-葡萄糖苷酶的酶活力比为1：80～150。
根据本发明的一些实施例，所述无患子和所述魔芋的总质量与所述复合酶的质量的比为30～150：1。
根据本发明的一些实施例，所述无患子和所述魔芋的总质量与所述复合酶的质量的比为60～100：1。
根据本发明的一些实施例，所述步骤S1中，所述酶解的条件包括：pH为4.5～7。
根据本发明的一些实施例，所述步骤S1中，所述酶解的条件包括：pH为5～6.5。
根据本发明的一些实施例，所述步骤S1中，所述酶解的条件包括：pH为5.5～6。
根据本发明的一些实施例，所述酶解的条件包括：酶解时间为0.2h～4h。
根据本发明的一些实施例，所述酶解的条件包括：酶解时间为1h～3h。优选为2h。
根据本发明的一些实施例，所述酶解的条件包括：酶解温度为25℃～70℃
根据本发明的一些实施例，所述酶解的条件包括：酶解温度为40℃～60℃。优选为50℃。
根据本发明的一些实施例，所述酶解还包括搅拌，所述搅拌的速度为30rpm～250rpm。
根据本发明的一些实施例，所述搅拌的速度为30rpm～100rpm。
根据本发明的一些实施例，所述搅拌的速度为40rpm～60rpm。优选为50rpm。
根据本发明的一些实施例，所述步骤S1还包括酶解后处理。所述酶解后处理包括在110℃～130℃下处理10min～30min。
根据本发明的一些实施例，所述步骤S2中，所述发酵的温度为25℃～45℃。
根据本发明的一些实施例，所述步骤S2中，所述发酵的温度为25℃～35℃。优选为30℃。
根据本发明的一些实施例，所述发酵的时间为1h～120h。
根据本发明的一些实施例，所述发酵的时间为48h～96h。
根据本发明的一些实施例，所述发酵的时间为60h～84h。优选为72h。
根据本发明的一些实施例，所述步骤S2中，所述培养基为细菌发酵培养基。
根据本发明的一些实施例，所述培养基与所述酶解产物的用量比为1：1～200。
根据本发明的一些实施例，所述培养基与所述酶解产物的质量比为1：10～150。
根据本发明的一些实施例，所述培养基与所述酶解产物的质量比为1：25～130。
根据本发明的一些实施例，所述培养基包括MRS培养基。
根据本发明的一些实施例，所述发酵的原料还包括水，所述酶解产物与所述水的质量比为1：0.1～10。
根据本发明的一些实施例，所述酶解产物与所述水的质量比为1：1～3。
根据本发明的一些实施例，所述步骤S2还包括发酵后处理。所述发酵后处理包括离心，以去除所述发酵菌种。
根据本发明的一些实施例，所述离心的转速为3000rpm～20000rpm。优选为8000rpm。
根据本发明的一些实施例，所述离心的时间为20min～40min。优选为25min。
根据本发明的第二方面实施例的一种复合发酵物，由本发明第一方面的制备方法制备得到。
根据本发明实施例的复合发酵物，至少具有如下有益效果：
实施例的复合发酵物能够有效的提升细胞迁移运动与修复能力，具有很好的抗氧化效果，同时还能够降低UV照射后HaCat细胞产生的炎症因子IL-6和TNF-α的含量，提高兜甲蛋白和丝聚蛋白的含量，具有显著增强细胞活力的功效。
根据本发明的一些实施例，所述复合发酵物中的总多糖含量高于67mg/mL。
根据本发明的一些实施例，所述复合发酵物中的总多糖含量为67mg/mL～150mg/mL。
根据本发明的一些实施例，所述复合发酵物中的总多糖含量为67mg/mL～100mg/mL。
根据本发明的一些实施例，所述复合发酵物中的总皂苷含量高于80mg/mL。
根据本发明的一些实施例，所述复合发酵物中的总皂苷含量为80mg/mL～200mg/mL。
根据本发明的一些实施例，所述复合发酵物中的总皂苷含量为80mg/mL～150mg/mL。
根据本发明的第三方面实施例的本发明第一方面的制备方法或本发明第二方面的复合发酵物在制备产品中的应用，所述产品具有增强细胞活力、抗氧化中的至少一种功效。
根据本发明的第四方面实施例的一种产品，包括本发明第二方面的复合发酵物。由于采用了上述实施例的复合发酵物的全部技术方案，因此至少具有上述实施例的技术方案所带来的所有有益效果。
根据本发明的一些实施例，以质量百分比计，所述产品中的所述复合发酵物的用量为0.01％～10％。
根据本发明的一些实施例，以质量百分比计，所述产品中的所述复合发酵物的用量为0.1％～3％。
根据本发明的一些实施例，以质量百分比计，所述产品中的所述复合发酵物的用量为0.1％～1％。
本发明的其它特征和优点将在随后的说明书中阐述，并且，部分地从说明书中变得显而易见，或者通过实施本发明而了解。
具体实施方式
以下将结合实施例对本发明的构思及产生的技术效果进行清楚、完整地描述，以充分地理解本发明的目的、特征和效果。显然，所描述的实施例只是本发明的一部分实施例，而不是全部实施例，基于本发明的实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本发明保护的范围。
实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
在本发明的描述中，术语“包括”和“具有”以及他们的任何变形，意图在于覆盖不排他的包含，例如，包含了一系列步骤或单元的过程、方法、系统、产品或设备不必限于清楚地列出的那些步骤或单元，而是可包括没有清楚地列出的或对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤或单元。
若无特殊说明，本发明中“约”表示允许误差在±2％之内。
若无特殊说明，本发明中“室温”指25℃±5℃。
若无特殊说明，下述实施例中的培养基指MRS培养基(由广东环凯生物技术有限公司提供)。
下述实施例中的植物乳杆菌(GDMCC1.140)、长双歧杆菌(GDMCC 1.207)、酿酒酵母(GDMCC2.74)由广东省微生物菌种保藏中心提供。短双歧杆菌(CICC6185)由中国工业微生物菌种保藏管理中心提供。无患子果皮由国药(广州)国际医药卫生有限公司提供。魔芋粉由广州诺葳生物科技有限公司提供。魔芋葡甘聚糖由西安拉维亚生物科技有限公司提供。半纤维素酶(酶活力6000U/g)由山西莱克生物科技有限公司提供。β-葡萄糖苷酶(酶活力50000U/g)由重庆九箭之州生物科技有限公司提供。淀粉酶(酶活力100000U/g)由重庆九箭之州生物科技有限公司提供。
实施例1
本实施例提供一种复合发酵物，其制备方法包括如下步骤：
S1、将50g无患子果皮、10g魔芋粉、4g半纤维素酶，4gβ-葡萄糖苷酶和400g水混合，pH调节为6.0，在50℃、50rpm条件下酶解2h，随后在120℃下灭酶20min，得到酶解料液；
S2、将200g酶解料液、4mL植物乳杆菌菌液(浓度为107CFU/mL)、4g培养基和200g水混合，在30℃下发酵72h，发酵结束后将发酵液在转速为8000rpm条件下离心25min，取离心后的上清液，得到复合发酵物。
实施例2
本实施例提供一种复合发酵物，其制备方法包括如下步骤：
S1、将50g无患子果皮、10g魔芋粉、6g半纤维素酶，2gβ-葡萄糖苷酶和400g水混合，pH调节为5.5，在50℃、50rpm条件下酶解2h，随后在120℃下灭酶20min，得到酶解料液；
S2、将200g酶解料液、4mL植物乳杆菌菌液(浓度为107CFU/mL)、2g培养基和200g水混合，在30℃下发酵72h，发酵结束后将发酵液在转速为8000rpm条件下离心25min，取离心后的上清液，得到复合发酵物。
实施例3
本实施例提供一种复合发酵物，其制备方法包括如下步骤：
S1、将50g无患子果皮、10g魔芋粉、2g半纤维素酶，6gβ-葡萄糖苷酶和400g水混合，pH调节为5.5，在50℃、50rpm条件下酶解2h，随后在120℃下灭酶20min，得到酶解料液；
S2、将200g酶解料液、4mL植物乳杆菌菌液(浓度为107CFU/mL)、4g培养基和200g水混合，在30℃下发酵72h，发酵结束后将发酵液在转速为8000rpm条件下离心25min，取离心后的上清液，得到复合发酵物。
实施例4
本实施例提供一种复合发酵物，其制备方法包括如下步骤：
S1、将40g无患子果皮、40g魔芋粉、4g半纤维素酶，4gβ-葡萄糖苷酶和400g水混合，pH调节为6.0，在50℃、50rpm条件下酶解2h，随后在120℃下灭酶20min，得到酶解料液；
S2、将200g酶解料液、4mL植物乳杆菌菌液(浓度为107CFU/mL)、4g培养基和200g水混合，在30℃下发酵72h，发酵结束后将发酵液在转速为8000rpm条件下离心25min，取离心后的上清液，得到复合发酵物。
实施例5
本实施例提供一种复合发酵物，其制备方法包括如下步骤：
S1、将40g无患子果皮、40g魔芋粉、2g半纤维素酶，6gβ-葡萄糖苷酶和400g水混合，pH调节为5.5，在50℃、50rpm条件下酶解2h，随后在120℃下灭酶20min，得到酶解料液；
S2、将200g酶解料液、4mL植物乳杆菌菌液(浓度为107CFU/mL)、4g培养基和200g水混合，在30℃下发酵72h，发酵结束后将发酵液在转速为8000rpm条件下离心25min，取离心后的上清液，得到复合发酵物。
实施例6
本实施例提供一种复合发酵物，其制备方法包括如下步骤：
S1、将40g无患子果皮、40g魔芋粉、6g半纤维素酶，2gβ-葡萄糖苷酶和400g水混合，pH调节为5.5，在50℃、50rpm条件下酶解2h，随后在120℃下灭酶20min，得到酶解料液；
S2、将200g酶解料液、4mL植物乳杆菌菌液(浓度为107CFU/mL)、4g培养基和200g水混合，在30℃下发酵72h，发酵结束后将发酵液在转速为8000rpm条件下离心25min，取离心后的上清液，得到复合发酵物。
实施例7
本实施例提供一种复合发酵物，其制备方法包括如下步骤：
S1、将40g无患子果皮、60g魔芋粉、4g半纤维素酶，4gβ-葡萄糖苷酶和600g水混合，pH调节为6.0，在50℃、50rpm条件下酶解2h，随后在120℃下灭酶20min，得到酶解料液；
S2、将300g酶解料液、4mL植物乳杆菌菌液(浓度为107CFU/mL)、4g培养基和100g水混合，在30℃下发酵72h，发酵结束后将发酵液在转速为8000rpm条件下离心25min，取离心后的上清液，得到复合发酵物。
实施例8
本实施例提供一种复合发酵物，与实施例1相比，区别仅在于：将植物乳杆菌替换为长双歧杆菌。
实施例9
本实施例提供一种复合发酵物，与实施例2相比，区别仅在于：将植物乳杆菌替换为长双歧杆菌。
实施例10
本实施例提供一种复合发酵物，与实施例3相比，区别仅在于：将植物乳杆菌替换为长双歧杆菌。
实施例11
本实施例提供一种复合发酵物，与实施例4相比，区别仅在于：将植物乳杆菌替换为长双歧杆菌。
实施例12
本实施例提供一种复合发酵物，与实施例5相比，区别仅在于：将植物乳杆菌替换为长双歧杆菌。
实施例13
本实施例提供一种复合发酵物，与实施例6相比，区别仅在于：将植物乳杆菌替换为长双歧杆菌。
实施例14
本实施例提供一种复合发酵物，与实施例7相比，区别仅在于：将植物乳杆菌替换为长双歧杆菌。
实施例15
本实施例提供一种复合发酵物，与实施例1相比，区别仅在于：将植物乳杆菌替换为短双歧杆菌。
实施例16
本实施例提供一种复合发酵物，与实施例2相比，区别仅在于：将植物乳杆菌替换为短双歧杆菌。
实施例17
本实施例提供一种复合发酵物，与实施例3相比，区别仅在于：将植物乳杆菌替换为短双歧杆菌。
实施例18
本实施例提供一种复合发酵物，与实施例4相比，区别仅在于：将植物乳杆菌替换为短双歧杆菌。
实施例19
本实施例提供一种复合发酵物，与实施例5相比，区别仅在于：将植物乳杆菌替换为短双歧杆菌。
实施例20
本实施例提供一种复合发酵物，与实施例6相比，区别仅在于：将植物乳杆菌替换为短双歧杆菌。
实施例21
本实施例提供一种复合发酵物，与实施例7相比，区别仅在于：将植物乳杆菌替换为短双歧杆菌。
对比例1
本对比例提供一种复合提取物，其制备方法包括如下步骤：
将50g无患子果皮、10g魔芋粉和水400g混合后，在100℃下加热提取2h，过滤，收集滤液，得到植物提取物。
对比例2
本对比例提供一种复合提取物，其制备方法包括如下步骤：
将50g无患子果皮、10g魔芋粉和75％乙醇(V/V)400g混合后，在80℃下回流提取2h，过滤，收集滤液，得到植物提取物。
对比例3
本对比例提供一种复合发酵物，与实施例1相比，区别仅在于：缺省4g半纤维素酶。
对比例4
本对比例提供一种复合发酵物，与实施例1相比，区别仅在于：缺省4gβ-葡萄糖苷酶。
对比例5
本对比例提供一种复合发酵物，与实施例4相比，区别仅在于：缺省40g魔芋粉。
对比例6
本对比例提供一种复合发酵物，与实施例4相比，区别仅在于：缺省40g无患子果皮。
对比例7
本对比例提供一种复合发酵物，与实施例1相比，区别仅在于：缺省4mL植物乳杆菌菌液(浓度为107CFU/mL)。
对比例8
本对比例提供一种复合发酵物，与实施例1相比，区别仅在于：将植物乳杆菌替换为酿酒酵母。
对比例9
本对比例提供一种复合发酵物，与实施例1相比，区别仅在于：将魔芋粉替换为魔芋葡甘聚糖。
对比例10
本对比例提供一种复合发酵物，与实施例1相比，区别仅在于：将4g半纤维素酶和4gβ-葡萄糖苷酶替换为4g淀粉酶。
对比例11
本对比例提供一种复合发酵物，与实施例1相比，区别仅在于：缺省无患子果皮和魔芋粉。
对比例12
本对比例提供一种复合发酵物，与实施例8相比，区别仅在于：缺省无患子果皮和魔芋粉。
对比例13
本对比例提供一种复合发酵物，与实施例15相比，区别仅在于：缺省无患子果皮和魔芋粉。
测试例1
本测试例对上述实施例1-21和对比例1-10的复合发酵物或复合提取物(以下简称“样品”)进行总多糖和总皂苷含量分析。样品处理和测试方法如下：
样品处理：取20mL样品到大孔树脂AB-8层析柱，分别用2个柱体积的去离子水、2个柱体积的95％乙醇进行洗脱。收集水洗脱液和醇洗脱液，分别减压浓缩后进行真空冷冻干燥，分别得到水溶冻干粉和醇溶冻干粉。
总多糖含量测定：称取0.5g水溶冻干粉至10mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀。精确吸取该溶液100μL置于干燥洁净试管中在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min。在625nm波长下迅速测定各管吸光值。根据葡萄糖含量的标准曲线，由样品溶液吸光值计算各样品的总多糖含量。
总皂苷含量测定：称取0.5g醇溶冻干粉至10mL容量瓶中，加95％乙醇至刻度，摇匀。精确吸取该溶液100μL样品溶液于比色管中，70℃水浴挥发溶剂。溶剂挥发完后，每管加入0.4mL的5％香草醛-冰醋酸溶液和0.7mL高氯酸溶液为显色剂，摇匀后在70℃水浴加热20min，冰水中冷却3min，加入5mL冰醋酸，摇匀。在分光光度计546nm波长下测吸光值。根据齐墩果酸含量的标准曲线，由样品溶液吸光值计算各样品的总皂苷含量。
测试结果如表1所示。
表1
由表1可知，对比例1和对比例2制备的样品，不进行酶解和发酵，其总多糖和总皂苷含量均最低。实施例1-21制备的复合发酵物含有的总多糖和总皂苷，都高于对比例3-10制备的复合发酵物。这表明，采用半纤维素酶和β-葡萄糖苷酶联合应用可以高效从植物组织中提取无患子果皮和魔芋中的多糖，并使其水解，为下一步的微生物发酵提供合适的发酵条件；同时无患子果皮中的皂苷类成分也从植物组织中被高效提取。实施例1-21采用两种酶酶解和生物转化，可以提升总多糖和总皂苷的获取量。
测试例2
本测试例对上述实施例1-21和对比例1-10的复合发酵物或复合提取物(以下简称“样品”)进行红细胞溶血性评价。红细胞溶血实验基本原理是通过测定血红蛋白溶出量及变性程度来评价化学品对眼组织细胞的损伤。本实验依照欧洲替代方法验证中心的实验测试方法及分级标准。其中HD50为50％红细胞发生溶血时的样品浓度，DI为蛋白质变性指数，L/D为HD50与DI的比值。评价标准见表2。
评价结果见表3。
表2
| L/D | 分级 |
| L/D>100 | 无刺激性 |
| 10<L/D≤100 | 微刺激性 |
| 1<L/D≤10 | 轻度刺激性 |
| 0.1<L/D≤1 | 中毒刺激性 |
| L/D≤0.1 | 重度刺激性 |
表3
由表3可知，除了对比例1和对比例2的样品有微刺激性，其余样品均无刺激性。这说明经过酶解和发酵的工艺步骤，可以有效降低无患子果皮和魔芋粉的刺激性。
测试例3
本测试例对上述实施例1-21和对比例1-10的复合发酵物或复合提取物(以下简称“样品”)进行DPPH自由基清除能力评价。具体实验方法如下：
分别向板孔中加入质量浓度为50mg/L的DPPH测试液100μL和25μL样品，用无水乙醇补充至总体积300μL，摇匀，避光反应30min后，在519nm波长处测定吸光度并记为A1；分别向板孔中加入无水乙醇200μL和25μL样品，用无水乙醇补充总体积至300μL，在519nm波长处测定吸光度并记为A2；向板孔中加入DPPH测试液200μL和无水乙醇100μL，在519nm波长处测定吸光度并记为A3。计算样品的DPPH自由基清除率(T)，计算公式为：T＝[1-(A1-A2)/A3]×100％。
测试结果如表4所示。
表4
| 样品 | DPPH清除率(％) | 样品 | DPPH清除率(％) |
| 实施例1 | 76.55 | 实施例17 | 71.19 |
| 实施例2 | 72.36 | 实施例18 | 73.66 |
| 实施例3 | 71.22 | 实施例19 | 80.02 |
| 实施例4 | 79.80 | 实施例20 | 74.46 |
| 实施例5 | 75.52 | 实施例21 | 76.61 |
| 实施例6 | 71.29 | 对比例1 | 21.33 |
| 实施例7 | 68.72 | 对比例2 | 29.66 |
| 实施例8 | 71.11 | 对比例3 | 51.16 |
| 实施例9 | 69.85 | 对比例4 | 55.74 |
| 实施例10 | 73.36 | 对比例5 | 48.80 |
| 实施例11 | 74.15 | 对比例6 | 51.46 |
| 实施例12 | 72.29 | 对比例7 | 32.29 |
| 实施例13 | 70.08 | 对比例8 | 54.36 |
| 实施例14 | 72.42 | 对比例9 | 53.48 |
| 实施例15 | 69.92 | 对比例10 | 46.74 |
| 实施例16 | 73.51 |
由表4可知，实施例1-21制备的复合发酵物对DPPH自由基的清除率明显高于对比例1-10，显示出了抗氧化作用。
测试例4
本测试例对上述实施例1-21和对比例1-7的复合发酵物或复合提取物(以下简称“样品”)进行细胞修复能力评价和对细胞迁移运动的影响测试。具体测试方法如下：
用笔在6孔板背后，均匀划横线，横线间约间隔0.5-1cm。在孔中铺满人永生化表皮细胞(HaCat)，第二天，待细胞铺满孔，用枪头在孔中按照6孔板预先涂画的横线，划细胞，用PBS洗细胞3次，去除划下的细胞，加入含1％(v/v)样品的细胞培养基，在37℃，5％CO2培养箱中，培养24h，拍照，并统计24h的划痕愈合比例。以去离子水替代样品，作为空白对照组。
评价结果见表5。
表5
由表5可知，与对比例1-10相比，实施例1-21的样品能更加有效地提升细胞迁移运动与修复能力，这表明酶解和发酵之后得到的复合发酵物对表皮细胞具有很好的修护功效。无患子果皮和魔芋不经过酶解和微生物转化得到的对比例1和对比例2存在影响细胞活力的成分，缺省制备原料中的任一组份均会使得复合发酵物对表皮细胞的修护功效显著降低。
测试例5
本测试例对上述实施例1-21和对比例1-10的复合发酵物或复合提取物(以下简称“样品”)进行功效评价，具体通过样品对UV照射后人表皮角质形成原代细胞的IL-6、TNF-α、兜甲蛋白和丝聚蛋白含量的影响进行评价。
具体测试方法如下：
将人表皮角质形成原代细胞接种至6孔板中，在37℃和5％CO2的培养箱孵育过夜。待6孔板中细胞铺板率达到50％～60％时，往空白组中加入细胞培养基，不做其他处理；往模型组中加入细胞培养基，往受试样品组加入含1％(v/v)样品的细胞培养基，预处理1h后，分别进行UVB(中波紫外线)辐照40min，辐射强度为30mJ/cm2。处理后于37℃和5％CO2的培养箱中继续培养24h。培养结束后，根据Human IL-6ELISA Kit(由上海碧云天生物技术有限公司提供)、Human TNF-αELISA Kit(由上海碧云天生物技术有限公司提供)、人兜甲蛋白ELISA试剂盒(由深圳子科生物科技有限公司提供)、人丝聚蛋白ELISA试剂盒(由上海康朗生物科技有限公司提供)的说明书分别测定IL-6、TNF-α、兜甲蛋白和丝聚蛋白含量。
测试结果如表6所示。
表6
/>
由表6可知，相比于对比例1-10，实施例1-21的样品可以明显降低IL-6和TNF-α含量；实施例1-21的样品可以明显提升兜甲蛋白和丝聚蛋白的含量。缺少制备方法中的任一组份均会使得效果变差。
上面对本发明实施例作了详细说明，但本发明不限于上述实施例，在所属技术领域普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下作出各种变化。
Claims (18)
1.一种复合发酵物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、将无患子、魔芋、复合酶混合后进行酶解，得酶解产物；
所述复合酶包括半纤维素酶和β-葡萄糖苷酶；
所述无患子包括无患子果皮；
所述魔芋包括魔芋粉；
所述无患子、所述魔芋、所述复合酶的质量酶活力比为1g：0.1g~2g：1000U~10000U；
S2、将所述酶解产物、发酵菌种和培养基混合后进行发酵，即得复合发酵物；
所述发酵菌种包括乳酸菌和双歧杆菌中的至少一种；
所述乳酸菌包括植物乳杆菌；
所述双歧杆菌包括长双歧杆菌和短双歧杆菌中的至少一种；
所述步骤S2中，所述发酵菌种的活菌数高于103CFU/g酶解产物。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中，所述酶解的原料还包括水。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述无患子和所述魔芋的总质量与所述水的质量的比为1：2~10。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述复合酶中，所述半纤维素酶与所述β-葡萄糖苷酶的酶活力比为1：50~200。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中，所述酶解的条件包括：pH为4.5~7。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中，所述酶解的酶解时间为0.2h~4h。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中，所述酶解的酶解温度为25℃~70℃。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中，所述酶解还包括搅拌，所述搅拌的速度为30rpm~250rpm。
9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中，所述发酵的温度为25℃~45℃。
10.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中，所述发酵的时间为1h~120h。
11.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中，所述培养基为细菌发酵培养基。
12.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中，所述培养基与所述酶解产物的质量比为1：1~200。
13.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中，所述培养基包括MRS培养基。
14.一种复合发酵物，其特征在于，复合发酵物由权利要求1至13任一项所述的制备方法制备得到。
15.权利要求1至13任一项所述的制备方法或权利要求14所述的复合发酵物在制备产品中的应用，其特征在于，所述产品具有增强细胞活力、抗氧化中的至少一种功效。
16.一种产品，其特征在于，包括权利要求14所述的复合发酵物。
17.根据权利要求16所述的产品，其特征在于，其特征在于，以质量百分比计，所述产品中的所述复合发酵物的用量为0.01%~10%。
18.根据权利要求16所述的产品，其特征在于，以质量百分比计，所述产品中的所述复合发酵物的用量为0.1%~1%。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211292749.9A CN115554206B (zh) | 2022-10-21 | 2022-10-21 | 一种增强细胞活力的复合发酵物及其制备方法与应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211292749.9A CN115554206B (zh) | 2022-10-21 | 2022-10-21 | 一种增强细胞活力的复合发酵物及其制备方法与应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115554206A CN115554206A (zh) | 2023-01-03 |
| CN115554206B true CN115554206B (zh) | 2024-01-02 |
Family
ID=84746134
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202211292749.9A Active CN115554206B (zh) | 2022-10-21 | 2022-10-21 | 一种增强细胞活力的复合发酵物及其制备方法与应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115554206B (zh) |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102719491A (zh) * | 2012-06-21 | 2012-10-10 | 北京林业大学 | 一种无患子皂素提取物的发酵精制方法 |
| CN104323946A (zh) * | 2014-10-31 | 2015-02-04 | 西南大学 | 一种用于化妆品的脱敏魔芋粉的制备方法 |
| CN106399192A (zh) * | 2016-10-25 | 2017-02-15 | 江苏微康生物科技有限公司 | 一种乳酸菌发酵溶胞产物、制备方法及其应用 |
| CN108851199A (zh) * | 2018-05-22 | 2018-11-23 | 湖北中烟工业有限责任公司 | 一种酶解葡甘聚糖与药用菌发酵物复合保润剂的制备方法 |
| CN110663940A (zh) * | 2019-10-21 | 2020-01-10 | 上海共得健康科技集团有限公司 | 一种桑葚枸杞酵素及其制备方法 |
| CN113750008A (zh) * | 2021-09-01 | 2021-12-07 | 深圳浩涵生物科技有限公司 | 一种茉莉花酶解发酵物及其制备方法和应用 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US11102996B2 (en) * | 2018-05-08 | 2021-08-31 | Epc Natural Products Co., Ltd. | Sweetener and flavor compositions, methods of making and methods of use thereof |
-
2022
- 2022-10-21 CN CN202211292749.9A patent/CN115554206B/zh active Active
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102719491A (zh) * | 2012-06-21 | 2012-10-10 | 北京林业大学 | 一种无患子皂素提取物的发酵精制方法 |
| CN104323946A (zh) * | 2014-10-31 | 2015-02-04 | 西南大学 | 一种用于化妆品的脱敏魔芋粉的制备方法 |
| CN106399192A (zh) * | 2016-10-25 | 2017-02-15 | 江苏微康生物科技有限公司 | 一种乳酸菌发酵溶胞产物、制备方法及其应用 |
| CN108851199A (zh) * | 2018-05-22 | 2018-11-23 | 湖北中烟工业有限责任公司 | 一种酶解葡甘聚糖与药用菌发酵物复合保润剂的制备方法 |
| CN110663940A (zh) * | 2019-10-21 | 2020-01-10 | 上海共得健康科技集团有限公司 | 一种桑葚枸杞酵素及其制备方法 |
| CN113750008A (zh) * | 2021-09-01 | 2021-12-07 | 深圳浩涵生物科技有限公司 | 一种茉莉花酶解发酵物及其制备方法和应用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 国家药品监督管理局.化妆品安全技术规范（2015年版）.第93页第7项，第98页注(2). * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN115554206A (zh) | 2023-01-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN108823261B (zh) | 一种超低分子量铁皮石斛多糖及其制备与应用 | |
| CN114525322B (zh) | 一种植物乳杆菌在制备人参发酵液中的应用 | |
| CN115678805B (zh) | 一种具有修复抗衰功效的松茸酵母发酵液的制备方法及其应用 | |
| CN113773984B (zh) | 提高黄精多糖得率并调节皮肤屏障与免疫的鼠李糖乳杆菌 | |
| KR20130003944A (ko) | 발효 인삼추출물의 제조방법 | |
| CN108294224A (zh) | 一种利用植物乳杆菌发酵脱除大米中重金属镉的方法 | |
| CN113151067B (zh) | 一种乳酸菌发酵提取物的提取分离工艺 | |
| CN112691125B (zh) | 一种用于美白或者抗衰老的药物组合物及其制备方法、护肤品 | |
| CN108486002A (zh) | 一株产胞外多糖的罗汉果内生菌菌株及其生产胞外多糖的方法和胞外多糖的应用 | |
| CN115554206B (zh) | 一种增强细胞活力的复合发酵物及其制备方法与应用 | |
| CN114404344B (zh) | 酵母菌/大麦籽发酵产物，含其产品及其制备方法和应用 | |
| CN111449239A (zh) | 一种灵芝菌发酵沙棘籽粕的功能性食品添加物及其制备方法 | |
| CN114209621B (zh) | 一种保湿、抗氧化的红曲发酵物及其制备方法与应用 | |
| CN107118885B (zh) | 一种利用耐乙醇片球菌生产含gaba发酵酒的方法 | |
| CN108379284A (zh) | 黑虎掌膳食纤维提取物在制备治疗和/或预防肠道菌群失调相关疾病制剂中的用途 | |
| CN111763705B (zh) | 一种人参皂苷组合物的制备方法及其应用 | |
| CN114317616A (zh) | 一种菌类发酵产物的制备工艺及化妆品 | |
| CN106421203A (zh) | 一种剑麻麻膏的生产方法 | |
| CN108969430B (zh) | 一种西洋参发酵液作为护肤品或护肤品添加剂的应用 | |
| CN115006310B (zh) | 绿豆萌芽发酵物，含其皮肤外用剂及其制备方法和应用 | |
| CN115232773B (zh) | 一株地衣芽孢杆菌及其在降解白及多糖的应用 | |
| CN113662894B (zh) | 一种积雪草酶解发酵物及其制备方法和应用 | |
| CN114681573B (zh) | 利用复合微生物发酵液制备中药的方法、组合物及其用途 | |
| CN113444646B (zh) | 一株产β-石竹烯的霉菌及其应用 | |
| CN115364007B (zh) | 玫瑰茄花发酵物，含其皮肤外用剂，及其制备方法和应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |