CN106421203A - 一种剑麻麻膏的生产方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种剑麻麻膏的生产方法，将剑麻生产纤维后得到的麻汁发酵，然后收集沉淀物，发酵所用发酵菌剂为肠膜明串珠菌与经驯化的乙醇假丝酵母及德氏乳杆菌混合制成；所述驯化采用渐进驯化法，逐渐增加驯化培养液中麻汁的比例，将乙醇假丝酵母与德氏乳杆菌分别从低比例培养液中逐级接种到高比例培养液中，得到经驯化的乙醇假丝酵母与德氏乳杆菌。本发明方法发酵周期缩短至4‑5天，麻膏得率有较大幅度提高，皂素含量提高20‑30%，降低了进一步提取皂素的难度。本发明方法改变了传统生产模式，解决了传统方法占地面积大、沉降周期长、皂苷含量低等问题。

Description

一种剑麻麻膏的生产方法
技术领域
本发明涉及一种剑麻加工技术，具体涉及一种剑麻麻膏的生产方法。
背景技术
剑麻，别名西纱尔麻、水丝麻、龙舌兰麻等，属龙舌兰属，含有以甾体皂甙配基的形式存在的剑麻皂素，剑麻皂素可制成甾体激素药。
目前从剑麻渣中制备皂素的原料麻膏(干渣)的方法主要是：
1）备料：新鲜剑麻生产纤维后，麻渣压水，然后渣水分离，获得麻汁；
2）入池发酵：将麻汁装入池中，自然发酵15天至30天，收集沉淀物晒干获得剑麻麻膏。
该方法的主要缺陷在于：占地面积大、发酵周期长、皂苷含量较低等。
发明内容
本发明的目的是提供一种剑麻麻膏的生产方法，使得发酵周期缩短、皂苷含量提高。
本发明的技术方案为：一种剑麻麻膏的生产方法，将剑麻生产纤维后得到的麻汁发酵，然后收集沉淀物，发酵所用发酵菌剂为肠膜明串珠菌与经驯化的乙醇假丝酵母及德氏乳杆菌混合制成；所述驯化采用渐进驯化法，逐渐增加驯化培养液中麻汁的比例，将乙醇假丝酵母与德氏乳杆菌分别从低比例培养液中逐级接种到高比例培养液中，得到经驯化的乙醇假丝酵母与德氏乳杆菌。
在一个具体实施方式中，每次驯化的接种量、培养温度和培养时间都相同，接种量8%-12%，培养温度30-35℃，培养时间2d-5d。
在一个具体实施方式中，驯化培养液中含酪蛋白胨8-12g/L，牛肉膏8-12g/L，酵母粉4-6g/L，葡萄糖4-6g/L，乙酸钠4-6g/L，柠檬酸二铵1.5-2.5g/L，K2HPO4 1.5-2.5g/L，MnSO4·H2O 0.04-0.06 g/L；
所述乙醇假丝酵母驯化培养液组分：蛋白胨7-9g/L，牛肉膏2-4g/L，酵母粉1.5-2.5g/L，葡萄糖1.5-2.5g/L，木糖2-4g/L， K2HPO4 1.5-2.5g/L，MnSO4·H2O 0.04-0.06g/L，生物素0.04-0.06g/L。
在一个具体实施方式中，发酵菌剂中肠膜明串珠菌与经驯化的德氏乳杆菌质量比1:（4-5）：(8-10)。
在一个具体实施方式中，发酵在发酵罐中进行，麻汁中加入按占麻汁重量计的蛋白胨0.08-0.12%，柠檬酸铵0.08-0.12%，磷酸氢二钾0.04-0.06%，纤维素酶0.04-0.06%。
在一个具体实施方式中，发酵时发酵菌剂的接种量5-10%。
在一个具体实施方式中，30-35℃恒温发酵4-5天。
在一个具体实施方式中，发酵前1.5-2d每隔10-12h，搅拌5-10min。
本发明采用德氏乳杆菌、乙醇假丝酵母和肠膜明串珠菌三种混合菌，相比自然发酵，加速了麻膏沉降，并且有助于提高皂素含量。相比单一菌株，提高麻膏沉降速率及皂素含量，皂素含量提高的原因可能是混合菌具有产葡萄糖苷酶、果胶酶等多种酶系能力，从而使得皂苷游离，并水解糖苷键，产生皂素。
本发明方法发酵周期缩短至4-5天，麻膏得率有较大幅度提高，皂素含量提高20-30%，降低了进一步提取皂素的难度。本发明方法改变了传统生产模式，解决了传统方法占地面积大、沉降周期长、皂苷含量低等问题。
具体实施方式
本发明中，德氏乳杆菌（Lactobacillus delbrueckii）、肠膜明串珠菌(Leuconostoc mesenteroides) 乙醇假丝酵母（Candida ethanolica）均采用现有菌种，可以从中国普通微生物菌种保藏管理中心（CGMCC）购得。
以下通过具体实施例对本发明进行详细的说明。
实施例1
1、备料：将经加工抽取纤维所剩下的新鲜剑麻渣压榨，渣水分离，获得麻汁备用；
2、菌种驯化：将实验室保存的德氏乳杆菌和乙醇假丝酵母，分别接种于驯化培养液（灭菌麻汁与驯化培养液分别以质量比0:10、1:9、2:8、3:7、4:6、5:5、6:4、7:3、8:2、9:1、10:0依次培养），每次转接量10%，每隔12h搅拌5min，30-35℃，培养4d。
所述德氏乳杆菌驯化培养液组分：酪蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母粉5.0g，葡萄糖5.0g，乙酸钠5.0g，柠檬酸二铵2.0g，Tween80 1.0g，K2HPO4 2.0g，MnSO4·H2O 0.05g，蒸馏水1.0L，pH 6.8，115℃灭菌20min。
所述乙醇假丝酵母驯化培养液组分：蛋白胨8.0g，牛肉膏3.0g，酵母粉2.0g，葡萄糖2.0g，木糖3.0g， K2HPO4 2.0g，MnSO4·H2O 0.05g，生物素0.05g，蒸馏水1.0L，pH 6.8，115℃灭菌20min；
3、菌剂制备：将肠膜明串珠菌与驯化好的乙醇假丝酵母及德氏乳杆菌按1:4:8质量比混合制成发酵菌剂；
4、发酵：将麻汁转入发酵罐中，向麻汁中加入蛋白胨0.1%（占麻汁重量比例），柠檬酸铵0.1%，磷酸氢二钾0.05%，纤维素酶（20000U/mL）0.05%，加热混合液温度至37℃左右，搅拌均匀（100r/min，搅拌30min），接种活化好的菌剂，接种量5%，32℃恒温发酵5天（前2d每隔12h，100r/min，搅拌5min）， 去除上清液，收集沉淀物晒干或烘干获得剑麻麻膏。
经检测，麻膏得率0.655%，相比背景技术中的自然发酵提高32.3%。皂素含量0.316%，比背景技术中的自然发酵提高25.9%。
实施例2
1、备料：将经加工抽取纤维所剩下的新鲜剑麻渣压榨，渣水分离，获得麻汁备用；
2、菌种驯化：将实验室保存的德氏乳杆菌，接种于驯化培养液（灭菌麻汁与驯化培养液分别以质量比0:10、1:9、2:8、3:7、4:6、5:5、6:4、7:3、8:2、9:1、10:0依次培养），每次转接量8%，每隔12h搅拌5min，30-35℃，培养4d。
所述驯化培养液组分：酪蛋白胨8.5g，牛肉膏11.5g，酵母粉5.5g，葡萄糖5.0g，乙酸钠5.0g，柠檬酸二铵1.8g，Tween80 1.0g，K2HPO4 2.4g，MnSO4·H2O 0.04g，蒸馏水1.0L，pH 6.8，115℃灭菌20min。
所述乙醇假丝酵母驯化培养液组分：蛋白胨9.0g，牛肉膏4.0g，酵母粉2.5g，葡萄糖2.5g，木糖4.0g， K2HPO4 2.5g，MnSO4·H2O 0.06g，生物素0.06g，蒸馏水1.0L，pH 6.8，115℃灭菌20min；
3、菌剂制备：将肠膜明串珠菌与驯化好的德氏乳杆菌按1:5：9质量比混合制成发酵菌剂；
4、发酵：将麻汁转入发酵罐中，向麻汁中加入蛋白胨0.08%（占麻汁重量比例），柠檬酸铵0.08%，磷酸氢二钾0.06%，纤维素酶（20000U/mL）0.05%，加热混合液温度至37℃左右，搅拌均匀（100r/min，搅拌30min），接种活化好的菌剂，接种量10%，35℃恒温发酵4天（前2d每隔12h，100r/min，搅拌5min）， 去除上清液，收集沉淀物晒干或烘干获得剑麻麻膏。
经检测，麻膏得率0.67%，相比背景技术中的自然发酵提高35.4%。皂素含量0.324%，比背景技术中的自然发酵提高29.1%。
实施例3
1、备料：将经加工抽取纤维所剩下的新鲜剑麻压榨，渣水分离，获得麻汁备用；
2、菌种驯化：将实验室保存的德氏乳杆菌，接种于驯化培养液（灭菌麻汁与驯化培养液分别以质量比0:10、1:9、2:8、3:7、4:6、5:5、6:4、7:3、8:2、9:1、10:0依次培养），每次转接量12%，每隔12h搅拌5min，30-35℃，培养2d。
所述驯化培养液组分：酪蛋白胨11.5g，牛肉膏8.5g，酵母粉4.0g，葡萄糖4.0g，乙酸钠4.0g，柠檬酸二铵2.2g，Tween80 1.0g，K2HPO4 1.6g，MnSO4·H2O 0.06g，蒸馏水1.0L，pH 6.8，115℃灭菌20min。
所述乙醇假丝酵母驯化培养液组分：蛋白胨7.0g，牛肉膏2.2g，酵母粉1.5g，葡萄糖1.5g，木糖2.1g， K2HPO4 1.5g，MnSO4·H2O 0.04g，生物素0.04g，蒸馏水1.0L，pH 6.8，115℃灭菌20min；
3、菌剂制备：将肠膜明串珠菌与驯化好的德氏乳杆菌按1:5：10质量比混合制成发酵菌剂；
4、发酵：将麻汁转入发酵罐中，向麻汁中加入蛋白胨0.12%（占麻汁重量比例），柠檬酸铵0.12%，磷酸氢二钾0.06%，纤维素酶（20000U/mL）0.05%，加热混合液温度至37℃左右，搅拌均匀（100r/min，搅拌30min），接种活化好的菌剂，接种量10%，30℃恒温发酵4天（前2d每隔12h，100r/min，搅拌5min）， 去除上清液，收集沉淀物晒干或烘干获得剑麻麻膏。
经检测，麻膏得率0.64%，相比背景技术中的自然发酵提高29.3%，皂素含量0.30%，比背景技术中的自然发酵提高19.5%。
上述实施例中皂素检测方法如下：
（1）制备皂素标准曲线：称量剑麻皂素标准品10mg，用甲醇溶解并定容至10 mL，分别吸取0、0.1、0.3、0.5、0.7 和 0.9mL置25mL具塞试管中，以空白管作对照，在70℃下烘干后冷却至室温。各管中依次加入5%香草醛冰醋酸0.2mL，高氯酸0.8mL，摇匀后置于70℃烘箱中加热15min，取出后迅速流水冷却至室温，再分别加入5mL冰醋酸，摇匀，于450nm处测定吸光值。以含量为横坐标，吸光度为纵坐标浓度为横坐标，绘制标准曲线：
y=1.591x+0.078，R2=0.997，在0.1-0.9mg范围内具有良好的线性关系；
（2）样品检测：将制备的剑麻麻膏于70℃下烘干，称取1.5g，加入30mL甲醇，45℃超声处理30min，5000r/min离心10min，收集上清液，残渣中加入乙醇20mL，65℃超声处理30min（提取2次），5000r/min离心10min，合并提取液，用0.45μm滤膜过滤，回收提取液，残留物用于分析，方法同标准曲线制备，测定吸光值。

Claims (8)

1.一种剑麻麻膏的生产方法，将剑麻生产纤维后得到的麻汁发酵，然后收集沉淀物，其特征在于：发酵所用发酵菌剂为肠膜明串珠菌与经驯化的乙醇假丝酵母及德氏乳杆菌混合制成；所述驯化采用渐进驯化法，逐渐增加驯化培养液中麻汁的比例，将乙醇假丝酵母与德氏乳杆菌分别从低比例培养液中逐级接种到高比例培养液中，得到经驯化的乙醇假丝酵母与德氏乳杆菌。
2.根据权利要求1所述的剑麻麻膏的生产方法，其特征在于：每次驯化的接种量、培养温度和培养时间都相同，接种量8%-12%，培养温度30-35℃，培养时间2d-5d。
3. 根据权利要求1或2所述的剑麻麻膏的生产方法，其特征在于：驯化培养液中含酪蛋白胨8-12g/L，牛肉膏8-12g/L，酵母粉4-6g/L，葡萄糖4-6g/L，乙酸钠4-6g/L，柠檬酸二铵1.5-2.5g/L，K2HPO4 1.5-2.5g/L，MnSO4·H2O 0.04-0.06 g/L；
所述乙醇假丝酵母驯化培养液组分：蛋白胨7-9g/L，牛肉膏2-4g/L，酵母粉1.5-2.5g/L，葡萄糖1.5-2.5g/L，木糖2-4g/L， K2HPO4 1.5-2.5g/L，MnSO4·H2O 0.04-0.06g/L，生物素0.04-0.06g/L。
4.根据权利要求1所述的剑麻麻膏的生产方法，其特征在于：发酵菌剂中肠膜明串珠菌与经驯化的德氏乳杆菌质量比1:（4-5）：(8-10)。
5.根据权利要求1或4所述的剑麻麻膏的生产方法，其特征在于：发酵在发酵罐中进行，麻汁中加入按占麻汁重量计的蛋白胨0.08-0.12%，柠檬酸铵0.08-0.12%，磷酸氢二钾0.04-0.06%，纤维素酶0.04-0.06%。
6.根据权利要求1或4所述的剑麻麻膏的生产方法，其特征在于：发酵时发酵菌剂的接种量5-10%。
7.根据权利要求1或4所述的剑麻麻膏的生产方法，其特征在于：30-35℃恒温发酵4-5天。
8.根据权利要求7所述的剑麻麻膏的生产方法，其特征在于：发酵前1.5-2d每隔10-12h，搅拌5-10min。
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