CN110205253A - 一种低产异戊醇、高产β-苯乙醇的酵母及其分离培养方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种低产异戊醇、高产β‑苯乙醇的酵母及其分离培养方法和应用。所述低产异戊醇、高产β‑苯乙醇的酵母命名为扁平云假丝酵母(Candida humilis)YS023A菌株，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间为2019年2月25日，保藏编号为CGMCC No.17257，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。其具有低产异戊醇、高产β‑苯乙醇的优良特性，且具有优异的耐糖、耐醇、耐酸性能，同时其糖分利用率、发酵力和产乙醇能力均很好。该菌种用于浓香型和米香型白酒生产对提高原酒的优质品率及出酒率均具有重要的意义。

Description

一种低产异戊醇、高产β-苯乙醇的酵母及其分离培养方法和 应用

技术领域

本发明属于酿酒技术领域，具体涉及一种酵母及其分离培养方法和应用，尤其涉及一种低产异戊醇、高产β-苯乙醇的酵母及其分离培养方法和应用。

背景技术

白酒是中国人传承了几千年的一种酒类，也是中国人最常喝的一种酒类，对其酿造工艺的研究也非常多，但是现在传统的白酒酿造工艺酿造的白酒普遍存在着口感不够温和、风味不佳等弊端。

CN105886414A公开了一株高产有机酸酿酒酵母菌及在葡萄酒生产中的应用，该菌株是从中国新疆阜康地区葡萄表面分离得到的，其筛选方法是酿酒葡萄原料，使用培养基的方法对酵母菌进行分离和纯化，然后经过初筛、复筛和发酵试验，发酵液采用离子交换色谱检测有机酸成分及含量，挑选总酸含量高的酿酒酵母菌株。使用该菌株能有效的提高葡萄酒的酸度，解决低酸高糖产区生产优质葡萄酒的难题，生产的葡萄酒口感清爽、柔和，酸甜平衡，极具特色，挥发性香气成分平衡，葡萄酒特征香气更加明显。

CN107475012A公开了一种多菌种强化大曲发酵酿造清香型白酒的生产方法。利用汾酒新鲜酒醅筛选高产酯酿酒酵母、产淀粉酶的米根霉、耐酸耐酒精的烟色红曲霉和耐高温且具蛋白酶淀粉酶活性的枯草芽孢杆菌，制成酿酒酵母生产用酒母、米根霉生产用麸曲、烟色红曲霉生产用米曲、枯草芽孢杆菌生产用菌液，然后以一定比例与生产用大曲加到糁料中，入缸发酵获得清香型白酒。成本降低，所得酒乙/乳比高、总酸含量高、出酒率高、解决了清香型白酒乙/乳比低，酸低导致酒香小、香气不协调、欠醇厚、后味短的难题。

浓香型白酒是以粮食为原料，中高温大曲为糖化发酵剂，利用自然界微生物在窖池中进行边糖化边发酵的缓慢生化反应，形成具有独特风格的白酒。酵母菌是白酒发酵过程中的主要菌群，在酒醅发酵过程中，随着氧气耗尽及酸度和乙醇的升高，酵母菌的繁殖代谢能力均受到抑制，原料利用率低导致优质白酒生产周期长、效率低、成本高。

米香型白酒是以大米为原料，小曲为糖化发酵剂，经固态培菌糖化、液态发酵、液态蒸馏，具有以乳酸乙酯、乙酸乙酯、β-苯乙醇为主体复合香的蒸馏酒。其风格特点是：“蜜香清雅，入口柔绵，落口爽洌，回味怡畅”。米香型酒的香气组成是乳酸乙酯含量大于乙酸乙酯，高级醇含量也较多，共同形成它的主体香。但白酒中主要高级醇异戊醇含量过高时将会影响米香型白酒的风味和口感，饮后会“上头”而严重影响到白酒的质量，而β-苯乙醇具有玫瑰的优雅芳香，在米香型白酒香气中起到举足轻重的作用。

现有技术中还缺少一种针对性强的低产异戊醇、高产β-苯乙醇的优良酵母，因此，开发一种选育低产异戊醇、高产β-苯乙醇的优良酵母的方法，对提升浓香型和米香型白酒生产、对提高原酒的优质品率及出酒率均具有重要的意义。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种酵母及其分离培养方法和应用，尤其涉及一种低产异戊醇、高产β-苯乙醇的酵母及其分离培养方法和应用。

为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：

一方面，本发明提供一种低产异戊醇、高产β-苯乙醇的酵母，所述低产异戊醇、高产β-苯乙醇的酵母命名为扁平云假丝酵母(Candida humilis)YS023A菌株，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间为2019年2月25日，保藏编号为CGMCC No.17257，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

本发明所述“低产异戊醇、高产β-苯乙醇”是指酵母接入到12°BX玉米糖液培养基中，28℃恒温培养48h后，异戊醇和β-苯乙醇的含量分别为4.51mg/100mL和9.49mg/100mL。

本发明所涉及的酵母具有低产异戊醇、高产β-苯乙醇的优良特性，且具有优异的耐糖、耐醇、耐酸性能，同时其糖分利用率、发酵力和产乙醇能力均很好。该菌种用于浓香型和米香型白酒生产对提高原酒的优质品率及出酒率均具有重要的意义。

在本发明中，所述低产异戊醇、高产β-苯乙醇的酵母是从浓香型发酵酒醅中分离筛选得到的。

优选地，所述浓香型发酵酒醅的发酵时间为1-10天，例如1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天或10天等。

所述浓香型发酵酒醅的发酵时间只有特定选择上述时间范围内，分离得到的酵母才能具有低产异戊醇、高产β-苯乙醇、高耐糖、高耐醇、高耐酸、高糖分利用率、高发酵力和高产乙醇等优异的性能。

所述浓香型发酵酒醅为江苏今世缘酒业股份有限公司生产的浓香型发酵酒醅。

另一方面，本发明提供一种如上所述的低产异戊醇、高产β-苯乙醇的酵母的分离培养方法，所述分离培养方法包括如下步骤：

(1)将浓香型发酵酒醅与无菌水混合后得到菌悬液；

(2)将步骤(1)得到的菌悬液稀释后于无菌改良YPD固体培养基上进行培养，获得菌落；

(3)挑取步骤(2)中形态规则的菌落在无菌改良YPD固体培养基上进行分离纯化，获得单个纯种菌落并筛选出所述低产异戊醇、高产β-苯乙醇的酵母。

优选地，所述无菌改良YPD固体培养基按质量百分比计包括如下组分：葡萄糖1-5％、蛋白胨1-5％、酵母膏0.5-2％、琼脂粉1-5％、酒醅浸提液10-50％，其余为无菌水。

所述酒醅浸提液为上述浓香型发酵酒醅的蒸煮冷却后(固液比1:10)浸提液。

所述无菌改良YPD固体培养基是影响本发明所述具有优异性能酵母分离培养的关键因素之一，其组分中的葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、琼脂粉和酒醅浸提液只有在上述数值范围内，才能配合发挥最好的效果，即菌悬液只有在上述具有特定含量配比组分的培养基中进行培养和纯化，才能获得具有低产异戊醇、高产β-苯乙醇、高耐糖、高耐醇、高耐酸、高糖分利用率、高发酵力和高产乙醇等优异性能的酵母。

所述葡萄糖的质量百分含量可以为1％、2％、2.5％、3％、3.5％、4％或5％等。

所述蛋白胨的质量百分含量可以为1％、2％、2.5％、3％、3.5％、4％或5％等。

所述酵母膏的质量百分含量可以为0.5％、0.7％、0.8％、1％、1.2％、1.5％、1.7％、1.8％或2％等。

所述琼脂粉的质量百分含量可以为1％、2％、2.5％、3％、3.5％、4％或5％等。

所述酒醅浸提液的质量百分含量可以为10％、20％、25％、30％、35％、40％或50％等。

优选地，所述无菌改良YPD固体培养基按质量百分比计包括如下组分：葡萄糖2％、蛋白胨2％、酵母膏1％、琼脂粉2％、酒醅浸提液20％，其余为无菌水。

优选地，步骤(2)中是将步骤(1)得到的菌悬液稀释后用滚珠法涂布于无菌改良YPD固体培养基上进行培养。

优选地，所述培养的温度为28-30℃，例如28℃、29℃或30℃等。

优选地，所述培养的时间为2-3天，例如48h、50h、55h、58h、60h、65h、70h或72h等。

优选地，步骤(3)所述分离纯化的方法为：挑取步骤(2)中形态规则的菌落在无菌改良YPD固体培养基上划线培养，进行5-10次(5次、6次、7次、8次、9次或10次等)重复的操作达到分离纯化的目的。

优选地，步骤(3)所述筛选是采用26S rDNA序列同源性分析法进行筛选，其具体操作方法为：提取酵母的基因组，用酵母菌26S rDNA D1/D2片段NL1和NL4为扩增引物，从酵母的基因组DNA扩增其26S rDNA序列，将扩增成功的PCR产物进行测序，并在NCBI数据库中进行BLAST序列比对。

优选地，所述筛选得到的低产异戊醇、高产β-苯乙醇的酵母保藏于无菌改良YPD固体斜面培养基中备用。

本发明从浓香型发酵前期的酒醅中分离筛选得到酵母菌株，经过26S rDNA鉴定，其中本发明的扁平云假丝酵母(Candida humilis)YS023A菌株的数量最多，为优势菌群。

作为本发明的优选技术方案，所述分离培养方法包括如下步骤：

(1)将浓香型发酵酒醅与无菌水混合后得到菌悬液；

(2)将步骤(1)得到的菌悬液稀释后用滚珠法涂布于无菌改良YPD固体培养基上在28-30℃下进行培养2-3天，获得菌落；

(3)挑取步骤(2)中形态规则的菌落在无菌改良YPD固体培养基上划线培养，进行5-10次重复的操作分离纯化，获得单个纯种菌落并采用26S rDNA序列同源性分析法筛选出所述低产异戊醇、高产β-苯乙醇的酵母。

再一方面，本发明提供一种如上所述的低产异戊醇、高产β-苯乙醇的酵母在酿酒中的应用。

相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：

本发明所涉及的酵母具有低产异戊醇、高产β-苯乙醇的优良特性，且具有优异的耐糖、耐醇、耐酸性能，同时其糖分利用率、发酵力和产乙醇能力均很好。该菌种用于浓香型和米香型白酒生产对提高原酒的优质品率及出酒率均具有重要的意义。

附图说明

图1是本发明所述低产异戊醇、高产β-苯乙醇的酵母在光学显微镜下单细胞形态图(放大倍数10×40)；

图2是本发明所述低产异戊醇、高产β-苯乙醇的酵母在培养基上的菌落形态图。

具体实施方式

下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。

下述实施例所涉及的玉米糖液均按如下制备方法进行制备：将玉米和水按照玉米:水＝1:3的比例进行混合并搅拌，在搅拌状态下，通入蒸汽加热至沸腾，在此条件下保持60min，冷却至60℃后加入0.2-0.3％糖化酶(5万单位)，搅拌15min，然后保温(55-62℃)糖化4h，糖化过程中每半小时搅拌一次。通蒸汽至沸腾，蒸煮20min杀菌杀酶，冷却至30℃，此时糖液糖度在12-14°BX之间。

实施例1

本实施例提供一种低产异戊醇、高产β-苯乙醇的酵母，分离培养方法包括如下步骤：

(1)取浓香型酿酒窖池中发酵5天的酒醅10g于装有90mL无菌水的三角瓶中，震荡30min得到菌悬液；

(2)将步骤(1)得到的菌悬液用10倍法稀释后用滚珠法涂布于无菌改良YPD固体培养基上在28℃下倒置培养3天，获得菌落；

(3)挑取步骤(2)中形态规则的菌落在无菌改良YPD固体培养基上划线培养，进行8次重复的操作分离纯化，获得单个纯种菌落，镜检确定为酵母菌，再采用26S rDNA序列同源性分析法筛选出扁平云假丝酵母即本发明所述低产异戊醇、高产β-苯乙醇的酵母，保藏于改良YPD固体斜面备用。其中无菌改良YPD固体培养基按质量百分比计包括如下组分：葡萄糖2％、蛋白胨2％、酵母膏1％、琼脂粉2％、酒醅浸提液20％，其余为无菌水，115℃灭菌20min。

所述筛选的操作为：提取上述酵母基因组，用酵母菌26S rDNA D1/D2片段NL1和NL4为扩增引物，从酵母的基因组DNA扩增其26S rDNA序列，将扩增成功的PCR产物送至上海生工进行测序，并在NCBI数据库中进行BLAST序列比对。鉴定结果如表1所示。

表1

由表1可知：纯化得到的菌落种类相对丰富，其中分离到Candida humilis扁平云假丝酵母的数量最多，为本发明所涉及的浓香型酒醅发酵的优势菌群。其26S rDNA序列为：

CCCCGGGGATGCCTCAGTACGGCGAGTGAGCGGCAAAAGCTCAAATTTGAAATCTGGTACCTTCGGTGCCCGAGTTGTAATTTGTAGAGGGCGACTTTGGGGCGGCTCCTTGTCTATGTTCCTTGGAACAGGACGTCATAGAGGGTGAGAATCCCGTGTGGCGAGGAGTGCGGTTCCGTGTAAAGCGCTCTCGAAGAGTCGAGTTGTTTGGGAATGCAGCTCTAAGTGGGTGGTAAATTCCATCTAAAGCTAAATATTGGCGAGAGACCGATAGCGAACAAGTACAGTGATGGAAAGATGAAAAGAACTTTGAAAAGAGAGTGAAAAAGTACGTGAAATTGTTGAAAGGGAAGGGCATTTGATCAGACATGGTGTTTTGCGCCCCCCGCTCCTTGTGGGTGGGGGACTCTCGCAGCTCACTGGGCCAGCATCAGTTTTGGCGGCCGGACAAAACTGCAGGAACGTAGCTTGCTTCGGGAAGTGTTACAGCCTGCAGGAATACGGCCAGCCGGGACTGAGGAATGCGATTCGTCAAGGATGCTGGCATAATGGTTATATGCCGCCCGTCTTGAA。

所述低产异戊醇、高产β-苯乙醇的酵母在光学显微镜下单细胞形态图(放大倍数10×40)如图1所示：光学显微镜下单细胞为卵形至椭球形。所述低产异戊醇、高产β-苯乙醇的酵母在培养基上的菌落形态如图2所示：菌落呈圆形，扁平，表面湿润、乳白色、边缘整齐。

实施例2

本实施例提供一种低产异戊醇、高产β-苯乙醇的酵母，分离培养方法包括如下步骤：

(1)取浓香型酿酒窖池中发酵10天的酒醅10g于装有90mL无菌水的三角瓶中，震荡30min得到菌悬液；

(2)将步骤(1)得到的菌悬液用10倍法稀释后用滚珠法涂布于无菌改良YPD固体培养基上在30℃下倒置培养2天，获得菌落；

(3)挑取步骤(2)中形态规则的菌落在无菌改良YPD固体培养基上划线培养，进行10次重复的操作分离纯化，获得单个纯种菌落，镜检确定为酵母菌，再采用与实施例1相同的26S rDNA序列同源性分析法筛选出扁平云假丝酵母即本发明所述低产异戊醇、高产β-苯乙醇的酵母，保藏于改良YPD固体斜面备用。其中无菌改良YPD固体培养基按质量百分比计包括如下组分：葡萄糖5％、蛋白胨1％、酵母膏2％、琼脂粉1％、酒醅浸提液10％，其余为无菌水，115℃灭菌20min。

实施例3

本实施例提供一种低产异戊醇、高产β-苯乙醇的酵母，分离培养方法包括如下步骤：

(1)取浓香型酿酒窖池中发酵1天的酒醅10g于装有90mL无菌水的三角瓶中，震荡30min得到菌悬液；

(2)将步骤(1)得到的菌悬液用10倍法稀释后用滚珠法涂布于无菌改良YPD固体培养基上在30℃下倒置培养3天，获得菌落；

(3)挑取步骤(2)中形态规则的菌落在无菌改良YPD固体培养基上划线培养，进行5次重复的操作分离纯化，获得单个纯种菌落，镜检确定为酵母菌，再采用与实施例1相同的26S rDNA序列同源性分析法筛选出扁平云假丝酵母即本发明所述低产异戊醇、高产β-苯乙醇的酵母，保藏于改良YPD固体斜面备用。其中无菌改良YPD固体培养基按质量百分比计包括如下组分：葡萄糖1％、蛋白胨5％、酵母膏0.5％、琼脂粉5％、酒醅浸提液50％，其余为无菌水，115℃灭菌20min。

实施例4

本实施例提供一种扁平云假丝酵母A，其分离培养方法与实施例1的区别仅在于将“取浓香型酿酒窖池中发酵5天的酒醅”替换为“取浓香型酿酒窖池中发酵15天的酒醅”，其他均保持不变。

实施例5

本实施例提供一种扁平云假丝酵母B，其分离培养方法与实施例1的区别仅在于不含有酒醅浸提液，其他均保持不变。

实施例6

本实施例提供一种扁平云假丝酵母C，其分离培养方法与实施例1的区别仅在于无菌改良YPD固体培养基按质量百分比计包括如下组分：葡萄糖2％、蛋白胨2％、酵母膏4％、琼脂粉1％、酒醅浸提液70％，其余为无菌水。其他均保持不变。

实施例7

菌种耐糖发酵性能试验

将实施例1获得的Candida humilis扁平云假丝酵母YS023A、实施例4获得的扁平云假丝酵母A、实施例5获得的扁平云假丝酵母B、实施例6获得的扁平云假丝酵母C与其它9株酵母分别接入到12°BX和24°BX的玉米糖液培养基中，28℃恒温培养5天后采用CO₂失重法和蒸馏法，对比不同酵母的发酵性能。结果如表2所示。

表2

由表2结果可知：本发明所涉及的低产异戊醇、高产β-苯乙醇的酵母具有很好的发酵性能，而且相对于实施例4-6分离得到的酵母，其发酵性能更有优势，说明酒醅的发酵时间、培养基中是否含有酒醅浸提液以及酒醅浸提液的浓度都对本发明酵母的发酵性能产生重要影响。

实施例8

菌种耐醇、耐酸性能试验

将实施例1获得的Candida humilis扁平云假丝酵母YS023A、实施例4获得的扁平云假丝酵母A、实施例5获得的扁平云假丝酵母B、实施例6获得的扁平云假丝酵母C与其它5株酵母分别进行乙醇、乳酸、丁酸、乙酸和己酸不同浓度的耐受性实验，将不同酵母菌分别接入到12°BX玉米糖液培养基中，28℃恒温培养48h后采用CO₂失重法和蒸馏法，对比不同酵母的发酵性能。结果如表3和表4所示。

表3

表4

由表3和表4结果可知：本发明所涉及的低产异戊醇、高产β-苯乙醇的酵母具有很好的耐醇性能和耐酸性能，而且相对于实施例4-6分离得到的酵母，其耐醇性能和耐酸性能更有优势，说明酒醅的发酵时间、培养基中是否含有酒醅浸提液以及酒醅浸提液的浓度都对本发明酵母的耐醇、耐酸性能产生重要影响。

实施例9

菌种发酵性能及代谢产物检测

将实施例1获得的Candida humilis扁平云假丝酵母YS023A、实施例4获得的扁平云假丝酵母A、实施例5获得的扁平云假丝酵母B、实施例6获得的扁平云假丝酵母C与其它5株酵母分别接入到12°BX玉米糖液培养基中，28℃恒温培养48h后检测其酸度、残糖、发酵力(包括48h和72h)、酒精度，并通过气相色谱测定高级醇如异戊醇和β-苯乙醇的含量。结果如表5所示。其中酸度采用酸碱中和法，其检测方法参照沈怡方主编的《白酒生产技术全书》；残糖采用斐林试剂测定，其检测方法参考《GBT5009.7-2008食品中还原糖的测定》；发酵力采用CO₂失重法测定；酒精度采用酒精计法，其检测方法参照沈怡方主编的《白酒生产技术全书》。

表5

由表5结果可知：本发明所涉及的低产异戊醇、高产β-苯乙醇的酵母具有特殊的低产异戊醇、高产β-苯乙醇的性质，这是其他酵母所没有的性质；而且相对于实施例4-6分离得到的酵母，这种性质体现得更加明显，说明酒醅的发酵时间、培养基中是否含有酒醅浸提液以及酒醅浸提液的浓度都对本发明酵母的低产异戊醇、高产β-苯乙醇性能产生重要影响。

申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的一种低产异戊醇、高产β-苯乙醇的酵母及其分离培养方法和应用，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。

另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。

序列表

<110> 江苏今世缘酒业股份有限公司

<120> 一种低产异戊醇、高产β-苯乙醇的酵母及其分离培养方法和应用

<130> 2019

<150> 2019105117230

<151> 2019-06-20

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 573

<212> DNA

<213> 人工合成序列()

<400> 1

ccccggggat gcctcagtac ggcgagtgag cggcaaaagc tcaaatttga aatctggtac 60

cttcggtgcc cgagttgtaa tttgtagagg gcgactttgg ggcggctcct tgtctatgtt 120

ccttggaaca ggacgtcata gagggtgaga atcccgtgtg gcgaggagtg cggttccgtg 180

taaagcgctc tcgaagagtc gagttgtttg ggaatgcagc tctaagtggg tggtaaattc 240

catctaaagc taaatattgg cgagagaccg atagcgaaca agtacagtga tggaaagatg 300

aaaagaactt tgaaaagaga gtgaaaaagt acgtgaaatt gttgaaaggg aagggcattt 360

gatcagacat ggtgttttgc gccccccgct ccttgtgggt gggggactct cgcagctcac 420

tgggccagca tcagttttgg cggccggaca aaactgcagg aacgtagctt gcttcgggaa 480

gtgttacagc ctgcaggaat acggccagcc gggactgagg aatgcgattc gtcaaggatg 540

ctggcataat ggttatatgc cgcccgtctt gaa 573

Claims (10)

1.一种低产异戊醇、高产β-苯乙醇的酵母，其特征在于，所述低产异戊醇、高产β-苯乙醇的酵母命名为扁平云假丝酵母(Candida humilis)YS023A菌株，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏时间为2019年2月25日，保藏编号为CGMCCNo.17257，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

2.如权利要求1所述的低产异戊醇、高产β-苯乙醇的酵母，其特征在于，所述低产异戊醇、高产β-苯乙醇的酵母是从浓香型发酵酒醅中分离筛选得到的；

优选地，所述浓香型发酵酒醅的发酵时间为1-10天。

3.如权利要求1或2所述的低产异戊醇、高产β-苯乙醇的酵母的分离培养方法，其特征在于，所述分离培养方法包括如下步骤：

(1)将浓香型发酵酒醅与无菌水混合后得到菌悬液；

(2)将步骤(1)得到的菌悬液稀释后于无菌改良YPD固体培养基上进行培养，获得菌落；

(3)挑取步骤(2)中形态规则的菌落在无菌改良YPD固体培养基上进行分离纯化，获得单个纯种菌落并筛选出所述低产异戊醇、高产β-苯乙醇的酵母。

4.如权利要求3所述的低产异戊醇、高产β-苯乙醇的酵母的分离培养方法，其特征在于，步骤(2)所述无菌改良YPD固体培养基按质量百分比计包括如下组分：葡萄糖1-5％、蛋白胨1-5％、酵母膏0.5-2％、琼脂粉1-5％、酒醅浸提液10-50％，其余为无菌水。

5.如权利要求3或4所述的低产异戊醇、高产β-苯乙醇的酵母的分离培养方法，其特征在于，步骤(2)所述无菌改良YPD固体培养基按质量百分比计包括如下组分：葡萄糖2％、蛋白胨2％、酵母膏1％、琼脂粉2％、酒醅浸提液20％，其余为无菌水。

6.如权利要求3-5中任一项所述的低产异戊醇、高产β-苯乙醇的酵母的分离培养方法，其特征在于，步骤(2)中是将步骤(1)得到的菌悬液稀释后用滚珠法涂布于无菌改良YPD固体培养基上进行培养；

优选地，所述培养的温度为28-30℃；

优选地，所述培养的时间为2-3天。

7.如权利要求3-6中任一项所述的低产异戊醇、高产β-苯乙醇的酵母的分离培养方法，其特征在于，步骤(3)所述分离纯化的方法为：挑取步骤(2)中形态规则的菌落在无菌改良YPD固体培养基上划线培养，进行5-10次重复的操作达到分离纯化的目的。

8.如权利要求3-7中任一项所述的低产异戊醇、高产β-苯乙醇的酵母的分离培养方法，其特征在于，步骤(3)所述筛选是采用26S rDNA序列同源性分析法进行筛选；

优选地，所述筛选得到的低产异戊醇、高产β-苯乙醇的酵母保藏于无菌改良YPD固体斜面培养基中备用。

9.如权利要求3-8中任一项所述的低产异戊醇、高产β-苯乙醇的酵母的分离培养方法，其特征在于，所述分离培养方法包括如下步骤：

(1)将浓香型发酵酒醅与无菌水混合后得到菌悬液；

(2)将步骤(1)得到的菌悬液稀释后用滚珠法涂布于无菌改良YPD固体培养基上在28-30℃下进行培养2-3天，获得菌落；

(3)挑取步骤(2)中形态规则的菌落在无菌改良YPD固体培养基上划线培养，进行5-10次重复的操作分离纯化，获得单个纯种菌落并采用26S rDNA序列同源性分析法筛选出所述低产异戊醇、高产β-苯乙醇的酵母。

10.如权利要求1或2所述的低产异戊醇、高产β-苯乙醇的酵母在酿酒中的应用。