CN103834713A - 一种剑麻皂素的提取方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及剑麻皂素，尤其涉及一种剑麻皂素的提取方法。本发明公开了一种剑麻皂素的提取方法，将丝状真菌接种至培养基上，发酵结束后，将发酵液过滤，得到剑麻皂苷水解酶粗酶液，调节pH，搅拌反应后静置24～48小时，使剑麻皂素自然沉淀；收集沉淀，烘干、粉碎后得到剑麻皂素粗品；往剑麻皂素粗品中加入氯仿或正丁醇，过滤，浓缩滤液，冷却、结晶、离心收集沉淀、烘干得到剑麻皂素。本发明提取出的剑麻皂素，不用强酸，没有酸污染，工艺简单，易于扩大生产规模。

Description

一种剑麻皂素的提取方法
技术领域
本发明涉及剑麻皂素，尤其涉及一种剑麻皂素的提取方法。
背景技术
剑麻皂素（tigogenin）具有抗炎、镇痛、增强免疫、降低血糖、抗肿瘤、抗癌、抗菌、降血脂、降血压等作用，应用广泛，可用于合成120多种激素类药物，还可应用于食品、化妆品及畜牧业等行业。剑麻皂素在剑麻中以甾体皂苷配基的形式存在，在其C3位和C26位等通过糖苷键与糖链（由葡萄糖、木糖、鼠李糖、半乳糖、阿拉伯糖等组成）相连，形成剑麻皂苷。生产剑麻皂素的关键工序是水解剑麻皂苷中与其直接相连的糖苷键。目前，国内生产剑麻皂素的工艺都是强酸水解法，用强酸来水解剑麻皂苷，其反应条件剧烈，设备要求高，污染严重，而且常伴有脱水、构型改变等副反应发生，影响产品质量。
发明内容
为了解决上述强酸水解法生产剑麻皂素技术的不足之处，本发明的目的在于提供一种剑麻皂素的提取方法，先用剑麻皂苷水解酶降解剑麻皂苷，然后再从含有剑麻皂素的水解液提取剑麻皂素的方法。
本发明的目的通过如下技术方案实现：
1、一种剑麻皂素的提取方法，包括以下步骤：
(1)发酵产酶：将丝状真菌接种至培养基上，发酵结束后，将发酵液过滤，得到剑麻皂苷水解酶粗酶液；
(2)降解剑麻皂苷：将剑麻皂苷加入剑麻皂苷水解酶粗酶液，调节pH，搅拌反应后静置24～48小时，使剑麻皂素自然沉淀；
(3)离心收集剑麻皂素：将步骤(2)酶促反应液的上清液排出，5000～8000转/分钟离心分离沉淀液，收集沉淀，烘干、粉碎后得到剑麻皂素粗品；
(4)剑麻皂素的纯化：往剑麻皂素粗品中加入氯仿或正丁醇，过滤，浓缩滤液，冷却、结晶、离心收集沉淀；
(5)烘干沉淀：将步骤(4)离心收集的剑麻皂素沉淀烘干，得到剑麻皂素。
优选的是：步骤(1)所述的丝状真菌包括黑曲霉、链孢霉菌、青霉；所述的培养基为：每100ml水含有0.5～2g可溶性淀粉、0.1～2g胰蛋白胨、0.1～1gK2HPO4、0.01～0.8g MgSO4、0.001～0.20g KCl、0.001～0.018g FeSO4、0.5～3g剑麻渣粉末，培养基pH为7.0，接种量0.5～2％，发酵温度为30℃，发酵时间为42～54小时。
优选的是：步骤(2)中按1︰50～1︰100质量体积比将剑麻皂苷加入粗酶液。
优选的是：步骤(2)中调节pH4～6，搅拌反应温度为38～45℃，搅拌反应时间为15～22小时。
优选的是：步骤(4)中剑麻皂素粗品和氯仿按1︰8质量体积比加入，剑麻皂素粗品和正丁醇按1︰10质量体积比加入；浓缩滤液为原体积的10％，冷却温度为0～10℃。
优选的是：步骤(5)中烘干温度为100～110℃。
本发明用剑麻皂苷水解酶来水解剑麻皂苷，释放出剑麻皂素，然后将剑麻皂素提取出来。与强酸法制备剑麻皂素的工艺相比，酶法制备剑麻皂素具有环保、专一性高等特点，本发明提取出的剑麻皂素，不用强酸，没有酸污染，工艺简单，易于扩大生产规模。
具体实施方式
下面结合具体实施例，对本发明作进一步详细的阐述，但本发明的实施方式并不局限于实施例表示的范围。这些实施例仅用于说明本发明，而非用于限制本发明的范围。此外，在阅读本发明的内容后，本领域的技术人员可以对本发明作各种修改，这些等价变化同样落于本发明所附权利要求书所限定的范围。
实施例1
将产剑麻皂苷水解酶活力高的黑曲霉菌种（从土壤中筛选分离出来）接种至产酶培养基（每100ml水含有0.5g可溶性淀粉、0.1g胰蛋白胨、0.1gK2HPO4、0.01g MgSO4、0.001g KCl、0.001g FeSO4、0.5g剑麻渣粉末、pH7.0），接种量为0.5%，在30℃发酵条件下发酵产酶42小时后，用100目滤布将发酵液过滤，得到剑麻皂苷水解酶粗酶液。按1︰50质量体积比的比例将剑麻皂苷加入粗酶液，用HCl（2mol/L）调pH4，于38℃条件下搅拌(120r/min)反应22小时后，于室温下静置24小时，先将上清液排出，用高速碟片离心机离心（5000转/分钟）收集沉淀液的剑麻皂素，105℃条件下烘干后粉碎，得到剑麻皂素粗品。按1︰8质量体积比的比例，用氯仿提取剑麻皂素粗品中的剑麻皂素，用200目滤布过滤去除不溶性杂质，将滤液真空浓缩至原体积的10％，将浓缩液冷却至0℃，使剑麻皂素结晶、析出，大容量离心机离心(4000转/分钟)收集沉淀，100℃条件下烘干沉淀，得到纯度较高的剑麻皂素。实施例2
将产剑麻皂苷水解酶活力高的链孢霉菌种（从土壤中筛选分离出来）接种至产酶培养基（每100ml水含有1.8g可溶性淀粉、1g胰蛋白胨、0.2gK2HPO4、0.05g MgSO4、0.02g KCl、0.01g FeSO4、2g剑麻渣粉末，pH7.0），接种量为1%，在30℃发酵条件下发酵产酶48小时后，用100目滤布将发酵液过滤，得到剑麻皂苷水解酶粗酶液。按1︰90质量体积比的比例将剑麻皂苷加入粗酶液，用HCl（2mol/L）调pH5，于40℃条件下搅拌(120r/min)反应18小时后，于室温下静置30小时，先将上清液排出，用高速碟片离心机离心（7300转/分钟）收集沉淀液的剑麻皂素，105℃条件下烘干后粉碎，得到剑麻皂素粗品。按1︰10质量体积比的比例，用正丁醇提取剑麻皂素粗品中的剑麻皂素，用250目滤布过滤去除不溶性杂质，将滤液真空浓缩至原体积的10％，将浓缩液冷却至4℃，使剑麻皂素结晶、析出，大容量离心机离心(4000转/分钟)收集沉淀，105℃条件下烘干沉淀，得到纯度较高的剑麻皂素。
实施例3
将产剑麻皂苷水解酶活力高的青霉菌种（从土壤中筛选分离出来）接种至产酶培养基（每100ml水含有2g可溶性淀粉、2g胰蛋白胨、1g K2HPO4、0.8g MgSO4、0.20g KCl、0.018g FeSO4、3g剑麻渣粉末，pH7.0），接种量为2%，在30℃发酵条件下发酵产酶54小时后，用60目滤布将发酵液过滤，得到剑麻皂苷水解酶粗酶液。按1︰100质量体积比的比例将剑麻皂苷加入粗酶液，用HCl（2mol/L）调pH6，于45℃条件下搅拌(120r/min)反应15小时后，于室温下静置48小时，先将上清液排出，用高速碟片离心机离心（8300转/分钟）收集沉淀液的剑麻皂素，105℃条件下烘干后粉碎，得到剑麻皂素粗品。按1︰8质量体积比的比例，用氯仿提取剑麻皂素粗品中的剑麻皂素，用250目滤布过滤去除不溶性杂质，将滤液真空浓缩至原体积的10％，将浓缩液冷却至10℃，使剑麻皂素结晶、析出，大容量离心机离心(4000转/分钟)收集沉淀，110℃条件下烘干沉淀，得到纯度较高的剑麻皂素。
经用上述方法提取出剑麻皂素，不用强酸，也不需高温，避免了强酸的污染，降低了设备抗酸腐蚀的要求，提取工艺简单，产品纯度较高，易于扩大生产规模。

Claims (6)

1.一种剑麻皂素的提取方法，其特征在于：该提取方法包括以下步骤：
(1)发酵产酶：将丝状真菌接种至培养基上，发酵结束后，将发酵液过滤，得到剑麻皂苷水解酶粗酶液；
(2)降解剑麻皂苷：将剑麻皂苷加入剑麻皂苷水解酶粗酶液，调节pH，搅拌反应后静置24～48小时，使剑麻皂素自然沉淀；
(3)离心收集剑麻皂素：将步骤(2)酶促反应液的上清液排出，5000～8000转/分钟离心分离沉淀液，收集沉淀，烘干、粉碎后得到剑麻皂素粗品；
(4)剑麻皂素的纯化：往剑麻皂素粗品中加入氯仿或正丁醇，过滤，浓缩滤液，冷却、结晶、离心收集沉淀；
(5)烘干沉淀：将步骤(4)离心收集的剑麻皂素沉淀烘干，得到剑麻皂素。
2.根据权利要求1所述的剑麻皂素的提取方法，其特征在于：步骤(1)所述的丝状真菌包括黑曲霉、链孢霉菌、青霉；所述的培养基为：每100ml水含有0.5～2g可溶性淀粉、0.1～2g胰蛋白胨、0.1～1g K2HPO4、0.01～0.8gMgSO4、0.001～0.20g KCl、0.001～0.018g FeSO4、0.5～3g剑麻渣粉末，培养基pH为7.0，接种量0.5～2％，发酵温度为30℃，发酵时间为42～54小时。
3.根据权利要求1所述的剑麻皂素的提取方法，其特征在于：步骤(2)中按1︰50～1︰100质量体积比将剑麻皂苷加入粗酶液。
4.根据权利要求1所述的剑麻皂素的提取方法，其特征在于：步骤(2)中调节pH4～6，搅拌反应温度为38～45℃，搅拌反应时间为15～22小时。
5.根据权利要求1所述的剑麻皂素的提取方法，其特征在于：步骤(4)中剑麻皂素粗品和氯仿按1︰8质量体积比加入，剑麻皂素粗品和正丁醇按1︰10质量体积比加入；浓缩滤液为原体积的10％，冷却温度为0～10℃。
6.根据权利要求1所述的剑麻皂素的提取方法，其特征在于：步骤(5)中烘干温度为100～110℃。
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Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105616297A (zh) * 2016-02-18 2016-06-01 黄圭鹏 剑麻牙膏
CN106421203A (zh) * 2016-12-07 2017-02-22 中国农业科学院麻类研究所 一种剑麻麻膏的生产方法
CN106636288A (zh) * 2017-01-16 2017-05-10 中国农业科学院麻类研究所 一种发酵提取剑麻皂素的方法
CN107557424A (zh) * 2017-09-15 2018-01-09 中国农业科学院麻类研究所 一种利用复合发酵液提取剑麻皂素的方法
CN108912204A (zh) * 2018-06-28 2018-11-30 广西浙缘农业科技有限公司 一种从剑麻渣提取剑麻皂素的方法
CN110590900A (zh) * 2019-09-29 2019-12-20 石门红太阳生物科技有限公司 一种剑麻皂素生产中脱蜡的方法
CN113943771A (zh) * 2020-07-15 2022-01-18 湖南怡田美农业科技有限公司 一种剑麻皂素的发酵制备方法

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103087143A (zh) * 2013-01-09 2013-05-08 广西南剑生物科技有限公司 一种从剑麻渣榨汁提取剑麻皂素的方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103087143A (zh) * 2013-01-09 2013-05-08 广西南剑生物科技有限公司 一种从剑麻渣榨汁提取剑麻皂素的方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
周寅等: "剑麻皂素的分离纯化工艺研究", 《安徽农业科学》 *
邓天发 等: "产剑麻皂苷水解酶菌株的筛选与鉴定", 《食品与药品》 *
郑汝: "《广西科技产业化指南》", 31 December 1993 *

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105616297A (zh) * 2016-02-18 2016-06-01 黄圭鹏 剑麻牙膏
CN106421203A (zh) * 2016-12-07 2017-02-22 中国农业科学院麻类研究所 一种剑麻麻膏的生产方法
CN106636288A (zh) * 2017-01-16 2017-05-10 中国农业科学院麻类研究所 一种发酵提取剑麻皂素的方法
CN106636288B (zh) * 2017-01-16 2020-05-15 中国农业科学院麻类研究所 一种发酵提取剑麻皂素的方法
CN107557424A (zh) * 2017-09-15 2018-01-09 中国农业科学院麻类研究所 一种利用复合发酵液提取剑麻皂素的方法
CN108912204A (zh) * 2018-06-28 2018-11-30 广西浙缘农业科技有限公司 一种从剑麻渣提取剑麻皂素的方法
CN108912204B (zh) * 2018-06-28 2021-02-09 台州中知英健机械自动化有限公司 一种从剑麻渣提取剑麻皂素的方法
CN110590900A (zh) * 2019-09-29 2019-12-20 石门红太阳生物科技有限公司 一种剑麻皂素生产中脱蜡的方法
CN113943771A (zh) * 2020-07-15 2022-01-18 湖南怡田美农业科技有限公司 一种剑麻皂素的发酵制备方法

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