CN108379284A - 黑虎掌膳食纤维提取物在制备治疗和/或预防肠道菌群失调相关疾病制剂中的用途 - Google Patents
黑虎掌膳食纤维提取物在制备治疗和/或预防肠道菌群失调相关疾病制剂中的用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108379284A CN108379284A CN201810210281.1A CN201810210281A CN108379284A CN 108379284 A CN108379284 A CN 108379284A CN 201810210281 A CN201810210281 A CN 201810210281A CN 108379284 A CN108379284 A CN 108379284A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- dietary fiber
- black tiger
- preparation
- fiber extract
- ethyl alcohol
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000000284 extract Substances 0.000 title claims abstract description 61
- 235000013325 dietary fiber Nutrition 0.000 title claims abstract description 57
- 241000569924 Pinanga maculata Species 0.000 title claims abstract description 52
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 title claims abstract description 43
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 34
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 title claims abstract description 32
- 201000010099 disease Diseases 0.000 title claims abstract description 28
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 title claims abstract 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 19
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 15
- 230000036541 health Effects 0.000 claims abstract description 9
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 claims abstract description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 68
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 claims description 39
- 238000010992 reflux Methods 0.000 claims description 20
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 19
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 13
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 12
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 10
- 241000282376 Panthera tigris Species 0.000 claims description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 9
- 238000009835 boiling Methods 0.000 claims description 8
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 7
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 claims description 6
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 6
- 229940055729 papain Drugs 0.000 claims description 6
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 claims description 6
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 claims description 5
- 230000037213 diet Effects 0.000 claims description 5
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims description 5
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 5
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 4
- 238000001976 enzyme digestion Methods 0.000 claims description 4
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 claims description 4
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 4
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 claims description 4
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 claims description 4
- -1 95% ethyl alcohol Chemical compound 0.000 claims description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 3
- 239000000835 fiber Substances 0.000 claims description 3
- 208000033065 inborn errors of immunity Diseases 0.000 claims description 3
- 208000028529 primary immunodeficiency disease Diseases 0.000 claims description 3
- 206010009887 colitis Diseases 0.000 claims description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 2
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 claims description 2
- 244000189799 Asimina triloba Species 0.000 claims 1
- 235000006264 Asimina triloba Nutrition 0.000 claims 1
- 235000009467 Carica papaya Nutrition 0.000 claims 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 claims 1
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 claims 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 abstract description 3
- 244000005709 gut microbiome Species 0.000 abstract description 3
- 244000005706 microflora Species 0.000 abstract description 3
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 abstract 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 20
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 20
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 17
- 241000304886 Bacilli Species 0.000 description 11
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 10
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 10
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- 235000009200 high fat diet Nutrition 0.000 description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 8
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 description 7
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 6
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 6
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 description 5
- 108010023302 HDL Cholesterol Proteins 0.000 description 5
- 108010028554 LDL Cholesterol Proteins 0.000 description 5
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 4
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 4
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 4
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 4
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- FRXSZNDVFUDTIR-UHFFFAOYSA-N 6-methoxy-1,2,3,4-tetrahydroquinoline Chemical compound N1CCCC2=CC(OC)=CC=C21 FRXSZNDVFUDTIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000605059 Bacteroidetes Species 0.000 description 3
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 3
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 3
- 241000702460 Akkermansia Species 0.000 description 2
- 241000731710 Allobaculum Species 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001143779 Dorea Species 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 2
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 2
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 210000005252 bulbus oculi Anatomy 0.000 description 2
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 238000003304 gavage Methods 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 108010074109 interleukin-22 Proteins 0.000 description 2
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 2
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 2
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 2
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 2
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Natural products OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 241000186018 Bifidobacterium adolescentis Species 0.000 description 1
- 241000186012 Bifidobacterium breve Species 0.000 description 1
- 241001608472 Bifidobacterium longum Species 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 206010020880 Hypertrophy Diseases 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 238000008214 LDL Cholesterol Methods 0.000 description 1
- 108010007622 LDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007330 LDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 240000001046 Lactobacillus acidophilus Species 0.000 description 1
- 235000013956 Lactobacillus acidophilus Nutrition 0.000 description 1
- 244000199866 Lactobacillus casei Species 0.000 description 1
- 235000013958 Lactobacillus casei Nutrition 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- ZYFVNVRFVHJEIU-UHFFFAOYSA-N PicoGreen Chemical compound CN(C)CCCN(CCCN(C)C)C1=CC(=CC2=[N+](C3=CC=CC=C3S2)C)C2=CC=CC=C2N1C1=CC=CC=C1 ZYFVNVRFVHJEIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 241000577937 Sarcodon imbricatus Species 0.000 description 1
- 244000273618 Sphenoclea zeylanica Species 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 244000126002 Ziziphus vulgaris Species 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940009291 bifidobacterium longum Drugs 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000012267 brine Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 235000013351 cheese Nutrition 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 239000002285 corn oil Substances 0.000 description 1
- 235000005687 corn oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 208000016097 disease of metabolism Diseases 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 238000010201 enrichment analysis Methods 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 235000021107 fermented food Nutrition 0.000 description 1
- 239000004459 forage Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000003205 fragrance Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- TYQCGQRIZGCHNB-JLAZNSOCSA-N l-ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(O)=C(O)C1=O TYQCGQRIZGCHNB-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 1
- 229940039695 lactobacillus acidophilus Drugs 0.000 description 1
- 229940017800 lactobacillus casei Drugs 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000001272 neurogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 235000021590 normal diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 229920000724 poly(L-arginine) polymer Polymers 0.000 description 1
- 108010011110 polyarginine Proteins 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000002040 relaxant effect Effects 0.000 description 1
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 239000002893 slag Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 235000019605 sweet taste sensations Nutrition 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 1
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/20—Reducing nutritive value; Dietetic products with reduced nutritive value
- A23L33/21—Addition of substantially indigestible substances, e.g. dietary fibres
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/0003—General processes for their isolation or fractionation, e.g. purification or extraction from biomass
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/06—Fungi, e.g. yeasts
- A61K36/07—Basidiomycota, e.g. Cryptococcus
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Mycology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及黑虎掌膳食纤维提取物在制药领域中的用途，尤其涉及一种黑虎掌膳食纤维提取物在制备治疗和/或预防肠道菌群失调相关疾病的制剂中的用途。本发明的黑虎掌膳食纤维提取物不仅能明显有助于肠道内优势菌群结构恢复，有助于菌群多样化，而且还对与肠道菌群结构相关的疾病表现出明显的治疗和/或预防效果，例如能有效抑制炎症因子的表达，有效缓解炎症的恶化，改善免疫相关的各项生理病理指标，可以用于药物、保健品等各种领域中，具有极大的经济和社会价值。
Description
技术领域
本发明涉及黑虎掌膳食纤维提取物在药品、保健品或保健食品领域中的用途，尤其涉及一种黑虎掌膳食纤维提取物在制备治疗和/或预防与肠道菌群失调相关疾病的制剂中的用途。
背景技术
近年来，关于肠道菌群的研究不断涌现，肠道菌群在人类健康中的作用也越来越得到人们关注。肠道菌群是人体肠道的所有微生物，种类繁多(包括细菌、真菌和病毒)，数目更是惊人。据估算，一个正常成人体内，肠道细菌总重量可达1～1.5kg。它们能够影响体重、消化和吸收能力，抵御感染和自身免疫疾病等的患病风险；除此之外，还与一些内分泌代谢性疾病、肾脏疾病、神经性疾病、心血管疾病、呼吸系统疾病以及癌症的发生具有密切关联。
肠道菌群按一定的比例组合，各菌间互相制约，互相依存，在质和量上形成一种生态平衡，一旦机体内外环境发生变化，例如包括长期应用广谱抗生素，敏感肠菌被抑制而未被抑制的细菌乘机繁殖，从而引起菌群失调，其正常生理组合被破坏，从而产生病理性组合，引起临床症状，称为肠道菌群失调症。
目前国内外研究开发的具有调节肠道菌群功能的物质主要有两种：一是有益活菌制剂，主要是以双歧杆菌和各种乳酸菌为主，二是有益菌增值促进剂，即通过这类物质使机体自身的生理性固有的菌增殖，形成以有益菌占优势的肠道生态环境。
在古代，就已经采用乳酸菌来发酵食品，特别是显微镜发明后，一些细菌开始逐渐被人们所利用，从此开始有了益生菌(probiotics)的雏形。人们对于益生菌的定义存在着不同的看法，但基本上都包含了益生菌的一些基本特点，即益生菌及其制品使用后能保持宿主机体的健康，抑制不良状态的产生。
益生菌制品是指由细菌为生产者发酵的产品，如酸奶，乳酪等。益生菌还包括单纯活的菌体、死亡细菌的菌体、以及细菌分泌的一些酶及代谢产物等。益生菌通常是一些同属或不同属细菌组成的复合物，也包含单种细菌的益生菌。益生菌在属分类水平上，主要是双歧杆菌属和乳杆菌属细菌，双歧杆菌主要包括长双歧杆菌、短双歧杆菌、青春双歧杆菌、婴儿双歧杆菌；肠道内乳杆菌属主要包括干酪乳杆菌和嗜酸乳杆菌等。
黑虎掌菌(Saarcodon imbricatum(L.:Fr.)Karst.)，菌帽肉质肥厚、香气浓郁，新鲜时为灰白色或灰褐色，干后变成暗灰白或灰褐色，形如虎爪，下表面长满一层纤细的灰白色刺状茸毛，菌柄粗壮多中空，长的有点偏。黑虎掌野外分布区很小，我国仅有西南部分地区出产，十分珍贵。黑虎掌菌在历史上很早就被视为名贵山珍，为历朝历代宫廷喜爱的贡品之一。欧美地区对黑虎掌菌没有食用习惯，中国西南、日本以及东南亚一带是黑虎掌消费的主要地区。该菌性平味甘，有追风散寒、舒筋活血之功效，民间也用其作壮阳之用,有降低血中胆固醇的作用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种黑虎掌膳食纤维提取物的制备方法，并运用黑虎掌膳食纤维提取物制备治疗和/或预防肠道菌群失调相关疾病制剂。
在本发明的第一方面，提供一种黑虎掌膳食纤维提取物在制备治疗和/或预防肠道菌群失调相关疾病的制剂中的用途。
其中，所述肠道菌群失调相关疾病包括肠道菌群失调症、免疫力低下、肠道组织损伤、炎症例如肠道炎症、结肠炎等。
优选的，所述黑虎掌膳食纤维提取物在制备治疗和/或预防肠道菌群失调症、免疫力低下、肠道组织损伤、炎症疾病的制剂中的用途。
优选的，所述黑虎掌膳食纤维提取物在制备免疫增强的制剂中的用途。
在本发明的第二方面，一种黑虎掌膳食纤维提取物的制备方法，包括将样品粉碎后，采用乙醇回流提取，滤渣采用水回流提取，再经酶解，醇沉，洗脱处理，最终得到黑虎掌膳食纤维提取物。
优选的，所述乙醇回流提取包括：采用料液比为1:8-1:15的乙醇，回流提取2-4小时。
优选的，所述滤渣采用水回流提取包括：采用料液比为1:8-1:15的水，回流提取2-4小时。
优选的，所述酶解包括采用木瓜蛋白酶酶解。
进一步优选的，所述酶解用量为提取液的0.2％体积，所述酶活性为75万u/g-85万u/g。
进一步优选的，所述酶解温度为50℃-70℃，时间为1-2小时。
优选的，所述沉淀为采用醇类试剂沉淀，例如乙醇、甲醇。
进一步优选的，所述沉淀为加入酶解后液体4-6倍量的乙醇，沉淀12-24小时。
优选的，所述洗脱为将得到的沉淀采用纯度递增的乙醇、丙酮进行梯度洗脱。
进一步优选的，所述洗脱为将得到的沉淀采用78％乙醇、95％乙醇、无水乙醇、丙酮进行梯度洗脱。
优选的，所述黑虎掌膳食纤维提取物的制备方法包括以下步骤：
(1)将黑虎掌干燥例如烘干后粉碎，按照料液比为1:8-1:15(质量体积比)加入乙醇例如95％乙醇，用乙醇煮沸回流提取2-4小时，抽滤，得到滤渣；
(2)按照料液比为1:8-1:15(质量体积比)向滤渣中加水，煮沸回流提取2-4小时；
(3)待温度降至50℃-60℃左右时，调节pH值至6-7，向步骤(2)得到的滤渣中加入木瓜蛋白酶酶解，酶量为0.2％重量百分比提取液，50-70℃水浴酶解1-2小时，不停搅拌；
(4)酶解结束后，加入提取液体积4-6倍量的95％乙醇沉淀过夜，抽滤，得到滤渣；
(5)将滤渣采用78％乙醇、95％乙醇、无水乙醇、丙酮进行梯度洗脱，烘干，粉碎，得到黑虎掌膳食纤维提取物。
在一个优选的实施例中，所述黑虎掌膳食纤维提取物的制备方法包括以下步骤：
(1)黑虎掌干燥例如烘干后粉碎，按照料液比为1：10加入乙醇例如95％乙醇，用乙醇煮沸回流提取2h，抽滤，得到滤渣；
(2)按照料液比为1:10向滤渣中加水，煮沸回流提取2小时；
(3)待温度降至50℃-60℃左右时，调节pH值至6-7，向步骤(2)得到的滤渣中加入木瓜蛋白酶酶解，酶量为0.2％重量百分比，60℃水浴酶解1小时，不停搅拌；
(4)酶解结束后，加入提取液体积4倍量的95％乙醇沉淀过夜，抽滤，得到滤渣；
(5)将滤渣采用78％乙醇、95％乙醇、无水乙醇、丙酮进行梯度洗脱，烘干，粉碎，优选过80目筛网，得到黑虎掌膳食纤维。
本发明的第三方面，一种治疗和/或预防肠道菌群失调相关疾病的制剂，所述制剂包括药物、保健品或食品，所述制剂包含黑虎掌膳食纤维提取物。
在本发明的第四方面，一种预防和/或治疗肠道菌群失调相关疾病的药物，包含黑虎掌膳食纤维提取物和药学上可接受的载体。
所述黑虎掌膳食纤维提取物优选为上述制备方法制备得到的黑虎掌膳食纤维提取物。
本发明中所述的“药学上可接受的载体”还可以理解为“稀释剂”或“辅料”等，在医药领域内众所周知且描述于例如雷明顿医药科学(Remington’s PharmaceuticalSciences)，马克出版公司(Mack Publishing Co.)(A·R·格纳诺(A.R.Gennaro)编，1985)。这些物质在所使用的剂量和浓度下对接受者来说是无毒，包括诸如磷酸盐、柠檬酸盐、乙酸盐和其它有机酸盐等缓冲液；诸如抗坏血酸等抗氧化剂；诸如聚精氨酸等低分子量(小于约10个残基)肽；诸如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白等蛋白质；诸如聚乙烯吡咯烷酮等亲水聚合物；诸如甘氨酸、谷氨酸、天冬氨酸或精氨酸等氨基酸；单糖、二糖和包括纤维素或其衍生物、葡萄糖、甘露糖或糊精的其它碳水化合物；诸如EDTA等螯合剂；诸如甘露醇或山梨醇等糖醇；诸如钠等抗衡离子；和/或诸如吐温(Tween)、泊洛尼克(Pluronics)或聚乙二醇等非离子型表面活性剂；还包括包括无菌水、盐水、葡萄糖、油(如玉米油、花生油及类似物)、酸。进一步还可以包括防腐剂、润湿剂、乳化剂、及类似物等。
本发明的黑虎掌膳食纤维提取物或药物的给药剂量可以随具体给药方法和被治疗的客体或类型而变化。该剂量足以产生预期的有益效果，并且可以配制用于单一剂量施用或多重剂量施用。
本发明中所述的药物可以通过本领域技术人员已知的任何途径施用，包括口服、肌内、静脉内、真皮内、病灶内等途径。施用可以是局部、表面或者全身的。在任何给定的情况下最合适的途径取决于多种因素，例如疾病的性质、疾病的进程、疾病的严重性等。作为优选，本发明的黑虎掌膳食纤维提取物或包含黑虎掌膳食纤维提取物在内的药物通过口服给药。
本发明的所述黑虎掌膳食纤维提取物还可以与第二活性化合物/第二治疗剂一起施用，同时、相继或并行施用。在分别施用时，本发明的所述黑虎掌膳食纤维提取物或包含黑虎掌膳食纤维提取物的药物与第二活性化合物或第二治疗剂可以以不同的用药频率或间隔施用。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
(1)本发明的制备方法简单易行、运行成本低，本发明的制备方法中的提取溶剂只使用了乙醇和水，乙醇可以回收再利用，无有机试剂残留风险，保证了黑虎掌膳食纤维提取物的天然品质的同时且对环境友好，属于绿色制造技术。
(2)本发明采用乙醇提取黑虎掌，去除醇溶性物质，采用木瓜蛋白酶酶解样品中的蛋白质，去除蛋白质，提高黑虎掌膳食纤维的提取率和纯度。
(3)本发明的黑虎掌膳食纤维提取物不仅能明显有助于肠道内优势菌群结构恢复，有助于菌群多样化，而且还对与肠道菌群结构相关的疾病表现出明显的治疗和/或预防效果，例如能有效抑制炎症因子的表达，有效缓解炎症的恶化，改善免疫相关的各项生理病理指标，可以用于药物、保健品等各种领域中，具有极大的经济和社会价值。
附图说明
图1为实施例2的小肠组织HE染色病理切片。
具体实施方式
本发明中所述的“失调”可以理解为“紊乱”、或“疾病”等。
如本文中所使用，术语“包含”或“包括”指方法包括所列举的要素，但不排除其它要素。
本发明所述的黑虎掌菌学名枣翘鳞肉齿菌，是著名的出口食用菌之一。菌体粗壮肥大、肉质细嫩，含有丰富的胞外多糖，不易破烂且营养丰富。据分析测定，其干品含17种氨基酸，其中有占总量41.46％的7种人体必需氨基酸，以及11种矿物质和微量元素。这种食用菌价值极高，在粤北地区有产，价格1000多元一斤。
以下结合具体实施例对本发明进行进一步说明。
实施例1：黑虎掌膳食纤维提取物的制备方法
具体包括以下步骤：
(1)样品烘干后粉碎并称重，料液比为1：10，用95％乙醇煮沸回流提取2h，抽滤，保留滤渣；
(2)滤渣加水，料液比为1:10，煮沸回流提取2h；
(3)待温度降至60℃左右时，调pH值至6-7，加入木瓜蛋白酶酶解，酶量为称样量的0.2％，60℃水浴酶解1h，期间不停搅拌；
(4)酶解结束，加入酶解后提取液体积4倍量的95％乙醇沉淀过夜，抽滤，保留滤渣；
(5)滤渣采用78％乙醇、95％乙醇、无水乙醇、丙酮进行梯度洗脱，烘干，粉碎，过80目筛网，制得到膳食纤维。
对于得到的黑虎掌膳食纤维提取物，其提取率为：提取物质量/样品称样量×100％＝49.55％。
对于制备得到的黑虎掌膳食纤维提取物进行理化性质的测定：膨胀力为7.21ml/g，膨胀率为7.12ml/ml，持水力为5.98g/g，持油力为0.63g/g，吸附胆固醇能力为34.21mg/g(pH2.0)、41.29mg/g(pH7.0)。
对于制备得到的黑虎掌膳食纤维提取物进行成分分析(质量百分比)：水分4.98％，蛋白质6.85％，灰分5.66％，总膳食纤维84.37％。
实施例2：黑虎掌膳食纤维提取物对高脂饮食致小鼠肠道菌群失调相关疾病的改善作用
1、试剂：
总胆固醇(T-CHO)测试盒：南京建成生物工程研究所。
甘油三酯(TG)测试盒：南京建成生物工程研究所。
低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)测试盒：南京建成生物工程研究所。
高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)测试盒：南京建成生物工程研究所。
雌性C57小鼠30只，SPF级，体重12-14g，日龄28-30d，购自于广东省医学实验动物中心，许可证号为SCXK(粤)2013-0002。
大小鼠维持饲料：广东省医学实验动物中心，许可证号SCXK(粤)2013-0002。
高脂高胆固醇饲料配方如表1所示：
1表1高脂高胆固醇饲料的主要成分及能量构成
黑虎掌膳食纤维提取物按本发明实验例1制备得到。
2、方法
高脂饮食诱导肥胖小鼠模型的制备：受试动物饲养在广东省微生物所动物实验中心，饲养温度与湿度：23 1℃，55±10％，采用12h昼夜间断照明；饲养室条件始终保持稳定，以保证试验结果的可靠性。小鼠自由进食饮水。期间每日检查动物一次，未发现不健康的动物，取全部健康小鼠进行实验。30只C57小鼠经适应性饲养7d后，随机分成正常组、模型组和给药组，每组10只。正常组用普通饲料喂养，模型组和给药组用高脂高胆固醇饲料喂养，连续喂养一个月。
造模成功后，开始给药，给药组给予黑虎掌膳食纤维提取物灌胃，1g膳食纤维提取物用15ml蒸馏水稀释，每只小鼠每天灌胃0.6ml，连续给药2个月，同时正常组小鼠继续用普通饲料喂养，给药组和模型组小鼠继续用高脂高胆固醇饲料喂养。
3、结果观察
每天观察动物的外观体态(毛、色、形)和动态并作相应记录，每隔3d测量动物体重一次。
血液：停药24h后，动物取材测定指标。采集血样，摘眼球取血，血浆经3000RPM，10min离心两次收集血清，测定血清中T-CHO、TG、LDL-C和HDL-C水平。测定炎症因子包括细胞因子白细胞介素IL-2、IL-6、IL-22，肿瘤坏死因子TNF-α，和Foxo3a。
小肠组织：摘眼球取血后，处死并解剖小鼠，取小鼠小肠组织，固定在4％多聚甲醛中。小肠组织被制成石蜡切片，采用HE法染色，进行病理切片观察。
4、数据处理
所有数据以均数±标准差表示。多组间均数的比较采用单因素方差分析(One-Way ANOVA)，组间均数两两比较，方差齐时采用LSD法；方差不齐时采用Dunnett’s T3法。由SPSS软件完成，α＝0.05。
观察发现，给药组的动物的毛皮比模型组的毛皮更平滑。
各组的体重变化如表2所示。
表2小鼠体重变化
#P<0.05，##P<0.01，###P<0.001vs正常组；*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001vs模型组
从表2可以看出，经过治疗的动物的毛皮比模型组的毛皮更平滑。正常组和模型组之间的平均体重差异极其显著(P<0.001)，模型组小鼠在开始时平均体重约20.35g，在实验结束时平均体重为35.29g，说明高脂饮食诱导肥胖小鼠模型造模成功；与模型组相比，给药组小鼠平均体重显著下降(P<0.01)(表2)。这表明：在高脂饮食中添加适量的膳食纤维可以显著减缓体重增加。
各组的血脂四项检测结果如表3所示。
表3小鼠血清生化指标(mmol/L)
#P<0.05，##P<0.01，###P<0.001vs正常组；*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001vs模型组
从表3可以看出，模型组中总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇比正常组显著升高(P<0.001或P<0.01)，高密度脂蛋白胆固醇比正常组显著降低(P<0.001)；与模型组相比，给药组中甘油三酯、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇水平显著下降(P<0.05或P<0.01)，高密度脂蛋白胆固醇水平显著升高(P<0.05)。这表明：在高脂饮食中添加适量的膳食纤维可以显著降低血清中的总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白水平。
各组的炎症因子检测结果如表4所示。
表4炎症因子检测结果
#P<0.05，##P<0.01，###P<0.001vs正常组；*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001vs模型组
从表4可以看出，与正常组相比，模型组血清中所有细胞因子水平均偏离正常，TNF-α、IL-2、IL-6、IL-22、Foxo3差异显著(p<0.05)；与模型组相比，给药组所有这些细胞因子明显恢复，从而表明黑虎掌膳食纤维可以改善炎症环境。
小肠组织HE染色病理切片结果如图1所示，从图1可见，正常组小肠组织绒毛长而完整，模型组肠绒毛脱落严重，说明高脂饮食能够对小鼠的肠道造成损伤，说明模型是成功的。与模型组相比，经过药物处理后，给药组能够缓解损伤，促进肠道的修复。
实施例3：黑虎掌膳食纤维提取物对高脂饮食诱导肥胖小鼠肠道菌群失调相关疾病的改善作用
1、实验方法
采集实施例2中动物实验结束时小鼠粪便，经过液氮快速冷冻后，保存在-80℃冰箱中。从粪便样品中提取DNA，并通过0.8％琼脂糖凝胶电泳检测DNA提取质量，同时采用紫外分光光度计对DNA进行定量。采用正向引物5’-ACTCCTACGGGAGGCAGCA-3’和反向引物5'-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3'对小鼠16S rRNA的V3-V4区基因进行扩增。PCR扩增产物通过2％琼脂糖凝胶电泳进行检测，并对目标片段进行切胶回收，回收采用AXYGEN公司的凝胶回收试剂盒。参照电泳初步定量结果，将PCR扩增回收产物进行荧光定量，荧光试剂为Quant-iTPicoGreen dsDNA Assay Kit，定量仪器为Microplate reader(BioTek，FLx800)。根据荧光定量结果，按照每个样本的测序量需求，对各样本按相应比例进行混合。采用Illumina公司的TruSeq Nano DNALT Library Prep Kit制备测序文库。使用MiSeq测序仪进行2×300bp的双端测序，相应试剂为MiSeq Reagent Kit V3(600cycles)。
2、实验结果
各组的肠道菌群多样性结果如表5所示。
表5小鼠肠道菌群多样性指数
#P<0.05，##P<0.01，###P<0.001vs正常组；*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001vs模型组
从表5可以看出，与正常组相比，模型组小鼠肠道菌群的Alpha多样性指数Simpson和Shannon显著下降(P<0.05)，说明高脂饮食改变了小鼠肠道菌群结构，使其多样性降低；与模型组相比，给药组小鼠肠道菌群多样性指数Simpson和Shannon显著升高(P<0.05)，说明高脂饮食诱导的肥胖小鼠肠道菌群给予黑虎掌膳食纤维提取物治疗后，肠道菌群多样性显著增加。
各组的OTU丰度分析如表6和表7所示。
表6小鼠肠道菌群在门水平上的丰度
#P<0.05，##P<0.01，###P<0.001vs正常组；*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001vs模型组
表7小鼠肠道菌群在属水平上的丰度
#P<0.05，##P<0.01，###P<0.001vs正常组；*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001vs模型组
从表6可以看出，在门水平上，与正常组相比，模型组小鼠肠道菌群Bacteroidetes和Firmicutes丰度发生了显著变化，Bacteroidetes丰度显著降低(P<0.001)，Firmicutes丰度显著增加(P<0.001)，与模型组相比，给药组Bacteroidetes丰度显著增加(P<0.01)，Firmicutes丰度显著降低(P<0.01)。
从表7可以看出，在属水平上，与正常组相比，模型组有益菌Akkermansia、Bifidobacterium和Lactobacillus显著降低(P<0.01)，有害菌Allobaculum(P<0.001)和Dorea(P<0.05)显著增加，与模型组相比，给药组有益菌Akkermansia、Bifidobacterium和Lactobacillus显著增加(P<0.01)，有害菌Allobaculum(P<0.05)和Dorea(P<0.05)显著降低。
这说明，本发明的黑虎掌膳食纤维提取物具有调节肠道菌群失调的功能。
综上可以看到，黑虎掌膳食纤维提取物不仅能明显有助于肠道内优势菌群结构恢复，有助于菌群多样化，而且还对与肠道菌群结构相关的疾病表现出明显的治疗和/或预防效果，能有效抑制炎症因子的表达，有效缓解炎症的恶化，改善免疫相关的各项生理病理指标，可以用于药物、保健品等各种领域中，具有极大的经济和社会价值。
以上所述，仅为本发明的较佳的具体实施例，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围内。
Claims (10)
1.一种黑虎掌膳食纤维提取物在制备治疗和/或预防肠道菌群失调相关疾病的制剂中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述肠道菌群失调相关疾病包括肠道菌群失调症、免疫力低下、肠道组织损伤、炎症例如肠道炎症、结肠炎。
3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述黑虎掌膳食纤维提取物在制备治疗和/或预防肠道菌群失调症、免疫力低下、肠道组织损伤、炎症疾病的制剂中的用途；或，所述黑虎掌膳食纤维提取物在制备免疫增强制剂中的用途。
4.一种黑虎掌膳食纤维提取物的制备方法，其特征在于，包括将黑虎掌粉碎后，采用乙醇回流提取，将滤渣采用水回流提取，再将提取液经酶解、沉淀、洗脱处理，得到黑虎掌膳食纤维提取物。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述乙醇回流提取包括：采用料液比为1:8-1:15的乙醇，回流提取2-4小时；和/或，所述滤渣采用水回流提取包括：采用料液比为1:8-1:15的水，回流提取2-4小时。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述酶解为采用木瓜蛋白酶酶解，优选的，所述酶解用量为提取液的0.2％体积，所述酶活性为75万u/g-85万u/g；和/或，所述酶解温度为50℃-70℃，时间为1-2小时。
7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述沉淀为采用醇类试剂沉淀，例如乙醇、甲醇；和/或，所沉淀为加入酶解后液体4-6倍量的乙醇，沉淀12-24小时；和/或，所述洗脱为将得到的沉淀采用78％乙醇、95％乙醇、无水乙醇、丙酮进行梯度洗脱。
8.根据权利要求4至7中任一所述的制备方法，包括以下步骤：
(1)将黑虎掌干燥例如烘干后粉碎，按照料液比为1：10加入乙醇例如95％乙醇，用乙醇煮沸回流提取2h，抽滤，得到滤渣；
(2)按照料液比为1:10向滤渣中加水，煮沸回流提取2小时；
(3)待温度降至50℃-60℃左右时，调节pH值至6-7，向步骤(2)得到的滤渣中加入木瓜蛋白酶酶解，酶量为0.2％重量百分比，60℃水浴酶解1小时，不停搅拌；
(4)酶解结束后，加入提取液体积4倍量的95％乙醇沉淀过夜，抽滤，得到滤渣；
(5)将滤渣采用78％乙醇、95％乙醇、无水乙醇、丙酮进行梯度洗脱，烘干，粉碎，优选过80目筛网，得到黑虎掌膳食纤维提取物。
9.一种治疗和/或预防肠道菌群失调相关疾病的制剂，所述制剂包含黑虎掌膳食纤维提取物，所述制剂包括药物、保健品或食品，所述黑虎掌膳食纤维提取物优选权利要求4至8中任一所述的制备方法制备得到的黑虎掌膳食纤维提取物。
10.一种预防和/或治疗肠道菌群失调相关疾病的药物，所述药物包含黑虎掌膳食纤维提取物和药学上可接受的载体，所述黑虎掌膳食纤维提取物优选权利要求4至8中任一所述的制备方法制备得到的黑虎掌膳食纤维提取物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810210281.1A CN108379284A (zh) | 2018-03-14 | 2018-03-14 | 黑虎掌膳食纤维提取物在制备治疗和/或预防肠道菌群失调相关疾病制剂中的用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810210281.1A CN108379284A (zh) | 2018-03-14 | 2018-03-14 | 黑虎掌膳食纤维提取物在制备治疗和/或预防肠道菌群失调相关疾病制剂中的用途 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN108379284A true CN108379284A (zh) | 2018-08-10 |
Family
ID=63067358
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201810210281.1A Pending CN108379284A (zh) | 2018-03-14 | 2018-03-14 | 黑虎掌膳食纤维提取物在制备治疗和/或预防肠道菌群失调相关疾病制剂中的用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN108379284A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108523143A (zh) * | 2018-03-14 | 2018-09-14 | 广东省微生物研究所（广东省微生物分析检测中心） | 黑虎掌膳食纤维提取物在制备治疗和/或预防高脂饮食致肝损伤相关疾病的制剂中的用途 |
| CN111635417A (zh) * | 2020-06-12 | 2020-09-08 | 西藏自治区高原生物研究所 | 用于调节肥胖人群肠道菌群的白肉虎掌菌多酚制备方法及其应用 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006304785A (ja) * | 2005-03-30 | 2006-11-09 | Satoru Tokashiki | 麦若葉ともろみ酢由来の健康補助食品 |
| CN107496467A (zh) * | 2017-09-28 | 2017-12-22 | 广东省微生物研究所（广东省微生物分析检测中心） | 卵孢奥德蘑提取物在制备治疗和/或肠道菌群失调相关疾病的制剂中的用途 |
-
2018
- 2018-03-14 CN CN201810210281.1A patent/CN108379284A/zh active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006304785A (ja) * | 2005-03-30 | 2006-11-09 | Satoru Tokashiki | 麦若葉ともろみ酢由来の健康補助食品 |
| CN107496467A (zh) * | 2017-09-28 | 2017-12-22 | 广东省微生物研究所（广东省微生物分析检测中心） | 卵孢奥德蘑提取物在制备治疗和/或肠道菌群失调相关疾病的制剂中的用途 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 刘莉: "《蔬菜营养学》", 30 June 2014, 天津大学出版社 * |
| 黄兴奇: "《云南作物种质资源（食用菌篇、桑树篇、烟草篇、茶叶篇）》", 31 August 2007, 云南科技出版社 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108523143A (zh) * | 2018-03-14 | 2018-09-14 | 广东省微生物研究所（广东省微生物分析检测中心） | 黑虎掌膳食纤维提取物在制备治疗和/或预防高脂饮食致肝损伤相关疾病的制剂中的用途 |
| CN111635417A (zh) * | 2020-06-12 | 2020-09-08 | 西藏自治区高原生物研究所 | 用于调节肥胖人群肠道菌群的白肉虎掌菌多酚制备方法及其应用 |
| CN111635417B (zh) * | 2020-06-12 | 2022-12-23 | 西藏自治区高原生物研究所 | 用于调节肥胖人群肠道菌群的白肉虎掌菌多酚制备方法及其应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN105343133B (zh) | 一种治疗溃疡性结肠炎的复合益生菌、药物及其制备方法 | |
| CN115105452B (zh) | 一种红茶发酵滤液及其制备方法和应用 | |
| CN109789173A (zh) | 源自芽孢杆菌细菌的纳米囊泡及其用途 | |
| CN110176305A (zh) | 一种利用高通量基因测序评估肠道菌群健康的方法 | |
| CN110325198A (zh) | 益生菌在治疗和/或预防银屑病中的用途 | |
| CN106962933B (zh) | 香水莲花提取物及其组合物在预防肥胖、改善肠道菌群方面的用途 | |
| CN108142923A (zh) | 香菇膳食纤维提取物在制备治疗和/或预防肠道菌群失调相关疾病的制剂中的用途 | |
| CN105768106A (zh) | 一种有助于肝营养改善的功能性食品 | |
| CN116555076A (zh) | 一株长双歧杆菌长亚种my1及其在制备通便和护肠食品药品中的应用 | |
| CN109112225A (zh) | 一种诺丽自然发酵过程中关键微生物甄别及筛选的方法 | |
| CN108379284A (zh) | 黑虎掌膳食纤维提取物在制备治疗和/或预防肠道菌群失调相关疾病制剂中的用途 | |
| CN105663444A (zh) | 一种复方免疫增强及抗衰老剂及其制备方法 | |
| CN108042456A (zh) | 一种铁皮石斛发酵物的制备方法和应用 | |
| CN108159090A (zh) | 灵芝孢子粉膳食纤维提取物在制备治疗和/或预防肠道菌群失调相关疾病制剂中的用途 | |
| CN109771453A (zh) | 桦树茸提取物在制备治疗和/或预防肠道菌群失调症及相关疾病的制剂中的用途 | |
| CN109876020A (zh) | 蝉花碱水提取物在制备治疗和/或预防肠道菌群失调症及相关疾病的制剂中的用途 | |
| CN109758485A (zh) | 红菇提取物在制备治疗和/或预防肠道菌群失调症及相关疾病的制剂中的用途 | |
| CN116355816A (zh) | 一种发酵翅果油种子的微生物及其降血脂组合物 | |
| CN108379286A (zh) | 香菇膳食纤维提取物在制备治疗和/或预防高脂饮食致肝损伤相关疾病的制剂中的用途 | |
| CN109771457A (zh) | 红菇提取物在制备治疗和/或预防高脂饮食致肝损伤相关疾病的制剂中的用途 | |
| CN115887343A (zh) | 一种以桦树汁为溶剂的发酵配方及发酵方法 | |
| CN115337238A (zh) | 一种咖啡发酵物的制备方法和应用 | |
| Ma et al. | Inhibitory effect of fermented flammulina velutipes polysaccharides on mice intestinal inflammation | |
| CN115093985A (zh) | 一种乳双歧杆菌及其发酵方法和应用 | |
| CN108201122A (zh) | 具有改善肠道菌群结构作用的蛹虫草组合物及制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20180810 |