CN115553234B - 一种广谱抗菌罗非鱼优良品种的选育方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种广谱抗菌罗非鱼优良品种的选育方法，通过刺激群体、群体选种代罗非鱼、对代罗非鱼进行免疫球蛋白的分离纯化及测定、繁殖后代代，筛选广谱抗菌代罗非鱼，再次建立广谱抗菌代罗非鱼亲鱼种群、对罗非鱼进行繁殖培育代、对代繁殖培育代并验证
Description
技术领域
本发明属于鱼类育种技术领域，具体是一种广谱抗菌罗非鱼优良品种的选育方法。
背景技术
罗非鱼是联合国粮农组织推广养殖的国际性养殖鱼类和贸易水产品，在国内外具有广阔的消费市场，是我国水产养殖的主导养殖品种。近十年来,随着罗非鱼养殖规模化、集约化的快速发展,病害也日趋严重,其中以链球菌引起的罗非鱼链球菌病最为棘手。该病死亡率高，死亡速度和传播速度极快，治疗起来极其困难。我国广东、海南、广西、云南及福建等罗非鱼主产地区连年爆发链球菌病，发病死亡率为30～80％，该病已成为罗非鱼养殖过程中的“恶魔”，严重阻碍了罗非鱼产业的可持续健康发展，至今尚未找到有效的治疗良策。
罗非鱼养殖生活环境中存在多种病原菌，多种病原菌共同作用导致罗非鱼免疫力下降，当对某种病原菌抵抗能力尤其差时，该病原菌成为主要致病菌，罗非鱼就会感染相应的疾病，因此罗非鱼常见疾病的爆发实际是以致病菌为主的多种病原菌共同作用引起的。所以单纯研究培养单一针对性强的抗某种病菌的抗体，效果并不显著。因此开展广谱抗菌品种选育研究，培育鱼类自有基因产生抗体免疫球蛋白，使其对以链球菌为主的多种病源菌有效，是解决此病害问题的关键。
我国主要养殖的罗非鱼种类有尼罗罗非鱼、奥利亚罗非鱼以及杂交种奥尼鱼等，尼罗罗非鱼具有个体大、生长速度快、食性杂、耐低氧、繁殖快的特点，是我国养殖最为普遍的罗非鱼种类，开展罗非鱼广谱抗菌品种选育首选还是尼罗罗非鱼。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种广谱抗菌罗非鱼优良品种的选育方法，利用多种病原菌刺激罗非鱼，培育罗非鱼自有基因产生抗体免疫球蛋白，进行广谱抗菌罗非鱼的选育，选育出的广谱抗菌罗非鱼具有规格大、不易生病的优点。
本发明发明内容所述的罗非鱼指尼罗罗非鱼。
一种广谱抗菌罗非鱼优良品种的选育方法。具体操作步骤如下：
S01.投放代罗非鱼鱼苗
准备2亩的土池为养殖池，土池中注入水，水中接入链球菌、嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌、柱状黄杆菌、诺卡氏菌等病原菌，所述稀释后水中链球菌、嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌、柱状黄杆菌及诺卡氏菌的细菌含量分别是1.2×~8.7×/>cfu/ml、1.5×/>~6.8×/>cfu/ml、1.7×/>~8.5×/>cfu/ml、1.6×/>~8.5×/>cfu/ml、1.2×/>~4.7×cfu/ml，将3000-5000尾/>代罗非鱼鱼苗投放至所述养殖池内，养殖池配置2台1.5kw的水车式增氧机，24小时增氧，按时投放饵料，每3日测定水中上述细菌浓度并记录，观察/>代罗非鱼生长状况及存活状况，及时捕捞死鱼和病鱼。
S02.选择代罗非鱼亲鱼
对代罗非鱼进行群体选育，选育出规格大、生长速度快的/>代罗非鱼亲鱼，具体选育过程包括以下步骤：
（1）.以体表鲜艳、活力强的代罗非鱼作为选育基础群体；
（2）.从基础群体中挑选出体型大、性成熟的代罗非鱼建立核心选育群体；
S03.代罗非鱼免疫球蛋白的分离纯化及测定
对S02所选的代罗非鱼进行血清收集，进行免疫球蛋白的分离纯化及测定，将有免疫球蛋白的/>代罗非鱼选为后备亲鱼。
S04.繁殖代罗非鱼
对S03所选的代罗非鱼亲鱼，繁殖后代/>代，将/>代鱼苗继续养殖在S01所述的2亩土池中，按S01步骤养殖。
S05.筛选广谱抗菌代罗非鱼，并建立/>代罗非鱼亲鱼种群
挑选体型大的代罗非鱼成鱼，准备5个1m³的玻璃钢桶，5个玻璃钢桶分别接入不同链球细菌含量的链球菌为主的多种病菌，所述5个玻璃钢桶链球细菌含量分别是7.2×~9.8×/>cfu/ml浓度、1.3×/>~4.8×/>cfu/ml浓度、7.2×/>~8.5×/>cfu/ml浓度、3.5×/>~6.5×/>cfu/ml浓度、1.1×/>~3.1×/>cfu/ml浓度，每个玻璃钢桶投放30-50尾/>代罗非鱼成鱼，按时投放饵料，每3日测定水中上述细菌浓度并记录，观察存活情况，根据玻璃钢桶存活情况筛选出具有广谱性抑菌的/>代罗非鱼，建立/>代罗非鱼亲鱼种群。
S06. 对罗非鱼进行繁殖培育/>代，/>代繁殖培育/>代
将S05所选的代罗非鱼成鱼养在S01所述的2亩土池中，繁殖培育/>代罗非鱼，按S01步骤养殖，挑选体型大的/>代罗非鱼成鱼，重复步骤S05，根据玻璃钢桶存活情况筛选出具有广谱性抑菌的/>代罗非鱼，建立/>代罗非鱼亲鱼种群，繁殖培育/>代罗非鱼，按S01步骤养殖。
S07.对代罗非鱼进行广谱性验证
挑选预定数量的体型大的代罗非鱼成鱼，重复S05步骤，记录存活情况，验证/>代罗非鱼广谱性，挑选预定数量的活力强的/>代罗非鱼，对其进行免疫球蛋白的分离纯化及测定，再次验证/>代罗非鱼广谱性。
进一步的，S01所述的土池为壤土池。
进一步的，S01所述的土池养殖水中接入55L链球菌、50L嗜水气单胞菌、45L维氏气单胞菌、45L柱状黄杆菌、40L诺卡氏菌等病原菌，所述链球菌细菌含量7.5×~3.5×/>cfu/ml浓度、嗜水气单胞菌细菌含量3.4×/>~9.8×/>cfu/ml、维氏气单胞菌细菌含量3.7×/>~9.7×/>cfu/ml、柱状黄杆菌细菌含量4.5×/>~9.8×/>cfu/ml、诺卡氏菌细菌含量3.5×/>~9.6×/>cfu/ml。
进一步的，S05步骤中准备5个1m³的玻璃钢桶，5个玻璃钢桶分别接入60ml的不同链球细菌含量的链球菌为主的多种病菌，链球菌浓度具体分别为7.2×~9.8×/>cfu/ml、2.3×/>~5.8×/>cfu/ml、6.8×/>~8.5×/>cfu/ml、1.6×/>~3.7×/>cfu/ml、7.2×/>~9.3×/>cfu/ml。
进一步的，S05步骤中建立代罗非鱼亲鱼种群，具体操作为：统计7.2×/>~9.8×/>cfu/ml、1.3×/>~4.8×/>cfu/ml和7.2×/>~8.5×/>cfu/ml这3组不同浓度的链球菌为主的多种病菌玻璃钢桶中/>代罗非鱼存活情况，从中挑选体型大、活力强的成鱼建立/>代罗非鱼亲鱼种群。
进一步的，S06步骤中建立代罗非鱼亲鱼种群，具体操作为：统计7.2×/>~9.8×/>cfu/ml和1.3×/>~4.8×/>cfu/ml这2组不同浓度的链球菌为主的多种病菌玻璃钢桶中/>代罗非鱼存活情况，从中挑选体型大、活力强的成鱼建立/>代罗非鱼亲鱼种群。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。
本实施例所述的罗非鱼指尼罗罗非鱼。
本发明提供一种广谱抗菌罗非鱼优良品种的选育方法，其特征在于，所述一种广谱抗菌罗非鱼优良品种的选育方法包括如下步骤：
S01.投放代罗非鱼鱼苗
准备2亩的壤土池为养殖池，土池中注入水，水中接入55L细菌含量7.5×~3.5×/>cfu/ml浓度的链球菌、50L细菌含量3.4×/>~9.8×/>cfu/ml的嗜水气单胞菌、45L细菌含量3.7×/>~9.7×/>cfu/ml的维氏气单胞菌、45L细菌含量4.5×/>~9.8×/>cfu/ml的柱状黄杆菌、40L细菌含量3.5×/>~9.6×/>cfu/ml的诺卡氏菌等病原菌，稀释后水中链球菌、嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌、柱状黄杆菌及诺卡氏菌的细菌含量分别是1.2×/>~8.7×/>cfu/ml、1.5×/>~6.8×/>cfu/ml、1.7×/>~8.5×/>cfu/ml、1.6×/>~8.5×/>cfu/ml、1.2×/>~4.7×/>cfu/ml，将5000尾/>代罗非鱼鱼苗投放至所述养殖池内，养殖池配置2台1.5kw的水车式增氧机，24小时增氧，按时投放饵料，每3日测定水中上述细菌浓度并记录，观察/>代罗非鱼生长状况及存活状况，及时捕捞死鱼和病鱼。
S02.选择代罗非鱼亲鱼
对代罗非鱼进行群体选育，选育出规格大、生长速度快的/>代罗非鱼亲鱼，具体选育过程包括以下步骤：
（1）.以体表鲜艳、活力强的代罗非鱼作为选育基础群体；
（2）.从基础群体中挑选出体型大、性成熟的代罗非鱼建立核心选育群体。
S03.代罗非鱼免疫球蛋白的分离纯化及测定
对S02所选的代罗非鱼进行血清收集，进行免疫球蛋白的分离纯化及测定，将有免疫球蛋白的/>代罗非鱼选为后备亲鱼。
S04.繁殖代罗非鱼
对S03所选的代罗非鱼亲鱼，繁殖后代/>代，将/>代鱼苗继续养殖在S01所述的2亩土池中，按S01步骤养殖。
S05.筛选广谱抗菌代罗非鱼，并建立/>代罗非鱼亲鱼种群
挑选体型大的代罗非鱼成鱼，准备5个1m³的玻璃钢桶，5个玻璃钢桶分别接入60ml的不同浓度的链球菌为主的多种病菌，链球菌细菌含量分别为7.2×/>~9.8×/>cfu/ml、2.3×/>~5.8×/>cfu/ml、6.8×/>~8.5×/>cfu/ml、1.6×/>~3.7×/>cfu/ml、7.2×/>~9.3×/>cfu/ml，稀释后5个玻璃钢桶的链球菌含量分别是7.2×/>~9.8×cfu/ml、1.3×/>~4.8×/>cfu/ml、7.2×/>~8.5×/>cfu/ml、3.5×/>~6.5×/>cfu/ml、1.1×/>~3.1×/>cfu/ml，每个玻璃钢桶投放50尾/>代罗非鱼成鱼，按时投放饵料，每3日测定水中上述细菌浓度并记录，观察存活情况，统计7.2×/>~9.8×/>cfu/ml、1.3×/>~4.8×/>cfu/ml和7.2×/>~8.5×/>cfu/ml这3组不同浓度的链球菌为主的多种病菌玻璃钢桶中/>代罗非鱼存活情况，从中挑选体型大、活力强的成鱼建立/>代罗非鱼亲鱼种群。
S06.对罗非鱼进行繁殖培育/>代，/>代繁殖培育/>代
将S05所选的代罗非鱼成鱼养在S01所述的2亩土池中，繁殖培育/>代罗非鱼，按S01步骤养殖，挑选体型大的/>代罗非鱼成鱼，重复步骤S05，统计7.2×/>~9.8×/>cfu/ml和1.3×/>~4.8×/>cfu/ml这2组不同浓度的链球菌为主的多种病菌玻璃钢桶中代罗非鱼存活情况，从中挑选体型大、活力强的成鱼建立/>代罗非鱼亲鱼种群，繁殖培育/>代罗非鱼，按S01步骤养殖。
S07.对代罗非鱼进行广谱性验证
挑选250尾的体型大的代罗非鱼成鱼，重复S05步骤，记录存活情况，验证/>代罗非鱼广谱性，挑选30尾活力强的/>代罗非鱼，对其进行免疫球蛋白的分离纯化及测定，再次验证/>代罗非鱼广谱性。
本发明选育出的广谱抗菌的罗非鱼4月放苗，按常规养殖，养至10月底再出鱼，平均重量可达0.7kg，未选育罗非鱼出鱼平均重量为0.5kg，本发明选育出的广谱抗菌的罗非鱼普遍体重可提高35%以上。
Claims (6)
1.一种广谱抗菌罗非鱼优良品种的选育方法，具体操作步骤如下：
S01.投放F0代罗非鱼鱼苗
准备2亩的土池为养殖池，土池中注入水，水中接入链球菌、嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌、柱状黄杆菌、诺卡氏菌病原菌，稀释后水中链球菌、嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌、柱状黄杆菌及诺卡氏菌的细菌含量分别是1.2×103～8.7×103cfu/ml、1.5×103～6.8×103cfu/ml、1.7×103～8.5×103cfu/ml、1.6×103～8.5×103cfu/ml、1.2×103～4.7×103cfu/ml，将3000-5000尾F0代罗非鱼鱼苗投放至所述养殖池内，养殖池配置2台1.5kw的水车式增氧机，24小时增氧，按时投放饵料，每3日测定水中上述细菌浓度并记录，观察F0代罗非鱼生长状况及存活状况，及时捕捞死鱼和病鱼；
S02.选择F0代罗非鱼亲鱼
对F0代罗非鱼进行群体选育，选育出规格大、生长速度快的F0代罗非鱼亲鱼，具体选育过程包括以下步骤：
(1).以体表鲜艳、活力强的F0代罗非鱼作为选育基础群体；
(2).从基础群体中挑选出体型大、性成熟的F0代罗非鱼建立核心选育群体；
S03.F0代罗非鱼免疫球蛋白的分离纯化及测定
对S02所选的F0代罗非鱼进行血清收集，进行免疫球蛋白的分离纯化及测定，将有免疫球蛋白的F0代罗非鱼选为后备亲鱼；
S04.繁殖F1代罗非鱼
对S03所选的F0罗非鱼亲鱼，繁殖后代F1代，将F1代鱼苗继续养殖在S01所述的2亩土池中，按S01步骤养殖；
S05.筛选广谱抗菌罗非鱼，并建立F1代罗非鱼亲鱼种群
挑选体型大的F1代罗非鱼成鱼，准备5个1m3的玻璃钢桶，5个玻璃钢桶分别接入不同链球细菌含量的链球菌为主的多种病菌，所述5个玻璃钢桶链球细菌含量分别是7.2×105～9.8×105cfu/ml、1.3×105～4.8×105cfu/ml、7.2×104～8.5×104cfu/ml、3.5×104～6.5×104cfu/ml、1.1×104～3.1×104cfu/ml，每个玻璃钢桶投放30-50尾F1代罗非鱼成鱼，按时投放饵料，每3日测定水中上述细菌浓度并记录，观察存活情况，根据玻璃钢桶存活情况筛选出具有广谱性抑菌的5组不同浓度的F1代罗非鱼，建立F1代罗非鱼亲鱼种群；
S06.对F1代罗非鱼进行繁殖培育F2代，F2代繁殖培育F3代
将S05所选的5组F1代罗非鱼成鱼混养在S01所述的2亩土池中，繁殖培育F2代罗非鱼，按S01步骤养殖，挑选体型大的F2代罗非鱼成鱼，重复步骤S05，根据玻璃钢桶存活情况筛选出具有广谱性抑菌的F2代罗非鱼，繁殖培育F3代罗非鱼，按S01步骤养殖；
S07.对F3代罗非鱼进行广谱性验证
挑选预定数量的体型大的F3代罗非鱼成鱼，重复S05步骤，记录存活情况，验证F3代罗非鱼广谱性，挑选预定数量的活力强的F3代罗非鱼，对其进行免疫球蛋白的分离纯化及测定，再次验证F3代罗非鱼广谱性。
2.根据权利要求1所述的一种广谱抗菌罗非鱼优良品种的选育方法，所述土池为壤土池。
3.根据权利要求1所述的一种广谱抗菌罗非鱼优良品种的选育方法，S01所述的土池养殖水中接入55L链球菌、50L嗜水气单胞菌、45L维氏气单胞菌、45L柱状黄杆菌、40L诺卡氏菌病原菌，所述链球菌细菌含量7.5×108～3.5×109cfu/ml、嗜水气单胞菌细菌含量3.4×107～9.8×107cfu/ml、维氏气单胞菌细菌含量3.7×107～9.7×107cfu/ml、柱状黄杆菌细菌含量4.5×107～9.8×107cfu/ml、诺卡氏菌细菌含量3.5×107～9.6×107cfu/ml。
4.根据权利要求1所述的一种广谱抗菌罗非鱼优良品种的选育方法，S05步骤中准备5个1m3的玻璃钢桶，5个玻璃钢桶分别接入60ml的不同链球细菌含量的链球菌为主的多种病菌，链球菌浓度具体分别为7.2×109～9.8×109cfu/ml、2.3×109～5.8×109cfu/ml、6.8×108～8.5×108cfu/ml、1.6×108～3.7×108cfu/ml、7.2×107～9.3×107cfu/ml。
5.根据权利要求1所述的一种广谱抗菌罗非鱼优良品种的选育方法，S05步骤中建立F1代罗非鱼亲鱼种群，具体操作为：统计7.2×105～9.8×105cfu/ml、1.3×105～4.8×105cfu/ml和7.2×104～8.5×104cfu/ml这3组不同浓度的链球菌为主的多种病菌玻璃钢桶中F1代罗非鱼存活情况，从中挑选体型大、活力强的成鱼建立F1代罗非鱼亲鱼种群。
6.根据权利要求1所述的一种广谱抗菌罗非鱼优良品种的选育方法，S06步骤中建立F2代罗非鱼亲鱼种群，具体操作为：统计7.2×105～9.8×105cfu/ml和1.3×105～4.8×105cfu/ml这2组不同浓度的链球菌为主的多种病菌玻璃钢桶中F2代罗非鱼存活情况，从中挑选体型大、活力强的成鱼建立F2代罗非鱼亲鱼种群。
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2022
- 2022-03-17 CN CN202210262618.XA patent/CN115553234B/zh active Active
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