CN113016673A - 一种规模化生产壳黄/壳黑三倍体福建牡蛎的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种规模化生产壳黄/壳黑三倍体福建牡蛎的方法，属于水产养殖育种技术领域。规模化生产三倍体福建牡蛎的方法以壳色(黄色/黑色)和体重作为目标性状，通过连续4～6代群体选育出生长速度快、贝壳黄色/壳黑的福建牡蛎新品系；然后以壳黄/壳黑福建牡蛎新品系诱导出壳黄/壳黑福建牡蛎四倍体，经连续2～3代群体自繁生产出倍性稳定的壳黄/壳黑福建牡蛎四倍体；最后，通过壳黄/壳黑福建牡蛎二倍体和壳黄/壳黑福建牡蛎四倍体杂交，从而规模化生产出性状稳性的壳黄/壳黑福建牡蛎全三倍体。该方法生产出的三倍体具有生长速度快、壳黄色或壳黑色、品质好等优点，可以作为生食牡蛎打入高端消费市场，具有较高的商业价值。
Description
技术领域
本发明属于水产养殖育种技术领域，具体涉及一种规模化生产壳黄/壳黑三倍体福建牡蛎的方法。
背景技术
牡蛎是一种重要的海洋经济生物之一，因其肉味鲜美、营养价值较高，被称为“海中牛奶”。牡蛎地理分布广，生长快，产量高，具有很高的经济价值，是世界各国重要的海水养殖对象。我国牡蛎养殖面积和产量均位居全球首位，是世界最主要牡蛎生产大国和消费大国之一。2019年我国牡蛎养殖面积14.51万公顷，产量522.56万吨；其中，福建牡蛎养殖面积3.69万公顷，养殖产量201.26万吨，均位居全国之首。
近年来，随着牡蛎高端市场需求不断增长，养殖三倍体牡蛎正在我国掀起一股新的热潮。因为三倍体牡蛎多一组染色体，具有高度不育、生长速度快、抗逆性强等优势，特别是在繁殖期不会因繁殖活动而导致软体部消瘦，全年保持较高的糖原含量和品质，口感好，非常适合国内外牡蛎生食消费市场。与此同时，如果牡蛎壳色是绚丽多彩的金色、黑色等，必将进一步提高三倍体牡蛎在高端市场知名度，从而推动我国牡蛎产业向高端消费市场转型升级，促进我国牡蛎养殖业可持续健康绿色发展。
目前，用于诱导牡蛎三倍体的方法包括低温休克法和6-DMAP诱导法，现有技术报道，低温休克在三倍体诱导率方面较低且不稳定，6-DMAP法诱导三倍体率相对高些且稳定，在生长方面，低温休克法诱导的三倍体在养成期的生长和成活均差于6-DMAP法诱导效果。然而6-DMAP诱导法存在一些局限，不能针对目标性状进行诱导选育，只能进行盲目诱导，不适合工厂规模化生产。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种规模化生产壳黄/壳黑三倍体福建牡蛎的方法，采用该方法能够大规模生产得到壳色绚丽多彩、生长有明显优势的三倍体福建牡蛎，能够提高在高端牡蛎消费市场知名度。
本发明提供一种规模化生产壳黄/壳黑三倍体福建牡蛎的方法，包括以下步骤：
1)以壳色纯正的福建牡蛎个体为筛选群体，选择体重排名前10％～15％的牡蛎个体作为繁殖亲本，经过连续4～6代群体选育，得到速长系F4～F6；
2)以步骤1)中所述速长系F4～F6为亲本，用细胞松弛素B处理受精卵，诱导得到福建牡蛎三倍体，再以所述福建牡蛎三倍体为亲本，用细胞松弛素B处理受精卵，诱导得到福建牡蛎四倍体G；
3)将步骤2)所述福建牡蛎四倍体G连续2～3代群体自繁，得到倍性稳定的福建牡蛎四倍体G2～G3；
4)将步骤3)所述福建牡蛎四倍体G2作为父本，以步骤1)中速长系F4～F6作为母本进行杂交，培育得到三倍体福建牡蛎。
优选的，步骤1)所述壳色包括黄壳和黑壳。
优选的，步骤1)中繁殖亲本的体重为90～150g。
优选的，步骤2)中所述细胞松弛素B的浓度为0.4～0.6mg/L。
优选的，步骤2)中所述细胞松弛素B的处理时间为25～35min。
优选的，步骤2)中所述诱导后，还包括对诱导后的受精卵进行流式细胞筛选，得到倍性为3N的福建牡蛎三倍体和倍性为4N的福建牡蛎四倍体G。
优选的，步骤1)中所述壳色纯正的福建牡蛎个体的来源包括养殖牡蛎和/或野生牡蛎。
优选的，所述养殖牡蛎和/或野生牡蛎为2～3龄牡蛎；
所述养殖牡蛎和/或野生牡蛎的数量包括5000～10000个。
优选的，步骤1)中筛选群体的数量包括2000～3000个。
优选的，步骤1)中所述繁殖亲本的数量包括100～300个。
本发明提供的规模化生产壳黄/壳黑三倍体福建牡蛎的方法，以福建牡蛎贝壳颜色和体重作为目标性状，采用群体选育方法，开展壳黄/壳黑福建牡蛎速长系选育，然后用速长系诱导出福建牡蛎四倍体并进行群体自繁，最后通过壳黄/壳黑速长系和四倍体自繁后代杂交，从而规模化生产出壳黄/壳黑福建牡蛎全三倍体。该方法生产的壳黄/壳黑三倍体牡蛎品种具有贝壳颜色纯正、生长速度快、抗逆性强等优点，非常适合我国沿海养殖，其推广应用前景广阔，有利于提高三倍体牡蛎在高端消费市场的知名度，从而推动我国牡蛎产业向高端消费市场转型升级，促进我国牡蛎养殖业可持续健康绿色发展。
附图说明
图1为规模化生产壳黄/壳黑三倍体福建牡蛎技术路线图；
图2为壳黄三倍体福建牡蛎海区生长情况；
图3为壳黑三倍体福建牡蛎海区生长情况；
图4为四倍体福建牡蛎诱导峰值图；
图5为全三倍体福建牡蛎检测峰值图。
具体实施方式
本发明提供一种规模化生产壳黄/壳黑三倍体福建牡蛎的方法，包括以下步骤：
1)以壳色纯正的福建牡蛎个体为筛选群体，选择体重排名前10％～15％的牡蛎个体作为繁殖亲本，经过连续4～6代群体选育，得到速长系F4～F6；
2)以步骤1)中所述速长系F4～F6为亲本，用细胞松弛素B处理受精卵，诱导得到福建牡蛎三倍体，再以所述福建牡蛎三倍体为亲本，用细胞松弛素B处理受精卵，诱导得到福建牡蛎四倍体G；
3)将步骤2)所述福建牡蛎四倍体G连续2～3代群体自繁，得到倍性稳定的福建牡蛎四倍体G2～G3；
4)将步骤3)所述福建牡蛎四倍体G2～G3作为父本，以步骤1)中速长系F4～F6作为母本进行杂交，培育得到三倍体福建牡蛎。
本发明以壳色纯正的福建牡蛎个体为筛选群体，选择体重排名前10％～15％的牡蛎个体作为繁殖亲本，经过连续4～6代群体选育，得到速长系F4～F6。
在本发明中，所述壳色纯正的福建牡蛎个体的来源优选包括养殖牡蛎和/或野生牡蛎。所述养殖牡蛎和/或野生牡蛎优选为2～3龄牡蛎，更优选为2龄牡蛎。所述养殖牡蛎和/或野生牡蛎的数量优选包括5000～10000个，更优选为6000～8000个。筛选群体的数量优选包括2000～3000个。所述壳色优选包括黄壳和黑壳。所述筛选群体还优选包括壳形整齐的目标性状。所述繁殖亲本的体重优选为90～150g，更优选为100～120g。所述繁殖亲本的壳长优选为8～15cm，更优选为9～12cm。所述繁殖父本的数量优选包括100～300个。所述群体选育的方法优选为将选择的繁殖亲本收集精子和卵子，采用人工授精方法获得D型幼虫，所述D型幼虫在室内养殖池中培育至眼点幼虫，投放附着基，附着生长至壳长为1～2mm时牡蛎稚贝，移到自然海区进行养殖至牡蛎成贝，按照壳色纯正、壳形整齐且体重排名前10％～15％的标准再次筛选，如此连续4代群体选育，得到速长系F4，如此连续5代群体选育得到速长系F5，如此连续6代群体选育得到速长系F6。实验表明，群体选育的代数较短不利于后续杂交时三倍体福建牡蛎保持牡蛎壳颜色纯黑或纯黄，容易出现壳色不均一现象。
得到速长系F4后，本发明以所述速长系F4～F6为亲本，用细胞松弛素B处理受精卵，诱导得到福建牡蛎三倍体，再以所述福建牡蛎三倍体为亲本，用细胞松弛素B处理受精卵，诱导得到福建牡蛎四倍体G。
在本发明中，将性腺成熟的所述速长系F4～F6的雌贝和雄贝分别解剖，分别收集精子和卵子，人工授精，待受精卵发育至第一极体时，用所述细胞松弛素B处理。所述人工授精时，卵子和精子的数量比为1:5～10，更优选为1:6～8，最优选为1:7。所述细胞松弛素B的浓度优选为0.4～0.6mg/L，更优选为0.5mg/L；所述细胞松弛素B的处理时间优选为25～35min，更优选为30min。细胞松弛素B处理受精卵后，优选用含1％二甲基亚砜的海水浸泡15min，之后在进行常规孵化、幼虫培育及海区养殖。实验表明，细胞松弛素B浓度过高或过低或者处理时间过长或过短，对受精卵的诱导均效果不理想。与对照组相比，本发明提供的诱导方法能够显著提高三倍体福建牡蛎和四倍体福建牡蛎的诱导率，诱导率分别达到90％以上和50％以上。
在本发明中，诱导四倍体福建牡蛎时，受精卵优选以所述福建牡蛎三倍体为母本，以速长系F4作为父本进行人工授精得到。诱导福建牡蛎四倍体G的方法与福建牡蛎三倍体的诱导方法操作步骤相同，在此不做赘述。
在本发明中，所述诱导后，优选还包括对诱导后的受精卵进行流式细胞筛选，得到倍性为3N的福建牡蛎三倍体和倍性为4N的福建牡蛎四倍体G。
得到福建牡蛎四倍体G后，本发明将所述福建牡蛎四倍体G连续2～3代群体自繁，得到倍性稳定的福建牡蛎四倍体G2～G3。
在本发明中，所述群体自繁的方法优选为福建牡蛎四倍体G的雌贝和雄贝中分别收集卵子和精子，人工授精，得到的受精卵发育至D型幼虫时，调整密度培育，当幼虫发育至眼点时，投放附着基；当稚贝生长至1～2mm时，放入上升流系统进行养殖；当稚贝生长至1cm以上时脱基，获得单体牡蛎装笼移至自然海区养成。所述D型幼虫培育密度为1～2个/ml。所述附着基优选包括牡蛎壳、扇贝壳、塑料片、水泥块、水泥条、水泥饼等。按照所述群体自繁方法连续2代培育，得到倍性稳定的福建牡蛎四倍体G2。
得到福建牡蛎四倍体G2后，本发明将所述福建牡蛎四倍体G2作为父本，以所述速长系F6作为母本进行杂交，培育得到三倍体福建牡蛎。
在本发明中，所述杂交的方法没有特殊限制，采用本领域所熟知的体外杂交方法即可。
在本发明中，采用上述方法能够规模化生产壳黄/壳黑三倍体福建牡蛎，且培育的三倍体福建牡蛎具有生长速度快、壳颜色纯黑或纯黄、体重大，满足高端牡蛎市场的要求。
下面结合实施例对本发明提供的一种规模化生产福建牡蛎全三倍体的方法进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
一种规模化生产壳黑三倍体福建牡蛎的方法
(a)壳黑福建牡蛎群体F选育：收集10000个福建牡蛎养殖和野生2龄群体，从中挑选出贝壳颜色黑色、壳型整齐的个体2000个，然后截取体重前10％的个体200个作为繁殖亲贝，所述繁殖亲贝的体重为100～135g，壳体颜色纯黑，壳体长度为10～13cm。通过人工授精方法获得D型幼虫，幼虫在室内水泥池中培育至眼点幼虫，投放牡蛎壳作为附着基；当牡蛎稚贝生长至1～2mm时，移到自然海区进行养成。最后以相同选育目标、育苗技术和养成方法等，经过连续4代群体选育出壳黑福建牡蛎速长系F4，再经过连续2代群体选育出壳黑福建牡蛎速长系F6。
(b)壳黑福建牡蛎四倍体G诱导：①三倍体诱导：解剖100个性腺成熟的壳黑福建牡蛎速长系F4亲本，用显微镜分出雌(60个)雄(40个)；挤出性腺较好的40对雌雄分别获得精卵，精子用500目筛绢网过滤杂质，卵子先用300目筛绢网过滤再用500目筛绢网过滤；采用单对单的方法进行受精，同时控制每个卵子周围有5～10个精子；当10％受精卵发育第一极体时，马上加入0.5mg/L细胞松弛素B，处理受精卵30min，之后用海水(含1％二甲基亚砜)浸泡15min；将各组受精卵收集放入室内水泥池进行孵化、幼虫培育，用流式细胞仪检测三倍体诱导率在90％以上，最后在海区养成。②四倍体诱导：解剖性腺成熟的壳黑福建牡蛎三倍体，利用流式细胞仪检测出倍性为3N的个体80个，通过显微镜观察，筛选出45个卵子发育良好的雌性3N个体作为母本；解剖100个性腺成熟的壳黑福建牡蛎速长系F4亲本，用显微镜辨别雌雄，选择性腺饱满、精子活力强的45个个体作为父本；分别挤出精卵，精子用500目筛绢网过滤杂质，卵子先用300目筛绢网过滤再用500目筛绢网过滤；采用单对单的方法进行受精，同时控制每个卵子周围有5～10个精子；当50％受精卵发育第一极体时，马上加入0.5mg/L细胞松弛素B，处理受精卵30min，之后用海水(含1％二甲基亚砜)浸泡15min；将各组受精卵收集放入室内水泥池进行孵化、幼虫培育，用流式细胞仪检测四倍体诱导率在50％以上，最后在海区养成壳黑福建牡蛎四倍体约5000个。
(c)壳黑福建牡蛎四倍体群体G自繁：在牡蛎繁殖季节，以壳黑福建牡蛎四倍体G为基础群体，通过流式细胞仪筛选出倍性为4N雌雄个体60个；分别挤出精卵，精子用500目筛绢网过滤杂质，卵子先用300目筛绢网过滤再用500目筛绢网过滤；在人工授精过程中，控制每个卵子周围有3-5个精子；受精卵发育至D型幼虫时，全池收集幼虫并放入新的消毒好的水泥池中培育，幼虫培育密度为1～2个/ml；当幼虫发育至眼点时，投放塑料壳作为附着基；当稚贝生长至1～2mm时，将塑料片分散放入上升流系统进行养殖；当稚贝生长至1cm以上时，采用脱基方法获得单体牡蛎，并将单体牡蛎装笼移至自然海区养成。采用相同方法进行连续2代四倍体群体自繁，从而生产出倍性稳定的壳黑福建牡蛎四倍体G2。
(d)壳黑福建牡蛎全三倍体生产：将5000个壳黑福建牡蛎速长系F6个体和300个壳黑福建牡蛎四倍体G2个体移到室内水泥池进行恒温(25℃)促熟，生物饵料为人工培育的金藻、角毛藻和小球藻等；当性腺成熟后，通过流式细胞仪检测和显微镜观察获得壳黑四倍体G2雄性个体60个，待用；解剖3000个壳黑速长系F6个体，通过显微镜观察，挑选出雌性个体1800个待用；以G2雄性个体为父本，以F6雌性个体为母本，进行杂交，具体从亲本中挤出精卵，精子用500目筛绢网过滤杂质，卵子先用300目筛绢网过滤再用500目筛绢网过滤；在人工授精过程中，控制每个卵子周围有3-5个精子；受精后，将受精卵平均分到30口30m2水泥池中进行孵化；发育至D型幼虫时，用400目筛绢网收集并获得D型幼虫1500g(约75亿)；将D型幼虫平均分到70口消毒好的30m2水泥池中进行幼虫培育，控制培育密度1～3个/ml；待幼虫发育至眼点幼虫时，投放扇贝壳，幼虫变态率30％以上；当稚贝生长至1～2mm时，移到自然海区进行暂养；暂养1个月后进行人工分苗，再移到自然海区养成。经过海区1周年养殖，平均全重达63.5g、平均壳高8.6cm，成活率75％以上。通过壳黑福建牡蛎速长系F6母本和壳黑四倍体G2父本杂交，可以规模化生产出壳黑福建牡蛎全三倍体。福建牡蛎中蛋白质、牛磺酸、锌、硒、钙含量测定分别采用GB 5009.5-2016《食品中蛋白质的测定》、GB5009.169-2006《食品中牛磺酸的测定》、GB 5009.14-2017《食品中锌的测定》、GB 5009.93-2017《食品中硒的测定》、GB 5009.92-2016《食品中钙的测定》的方法，糖原含量测定采用试剂盒法(EnzyChromTM糖原试剂盒，BioAssay Systems,USA)。测定结果见表1。本发明培育的全三倍体福建牡蛎具有肉质蛋白、糖原含量丰富的特点，且福建牡蛎中牛磺酸、锌、硒、钙等微量元素含量优于市场上普通牡蛎，具有较高的营养价值。
表1壳黑福建牡蛎全三倍体干粉中蛋白质、糖原等含量分析结果
实施例2
一种规模化生产壳黄三倍体福建牡蛎的方法
(a)壳黄福建牡蛎群体F选育：收集5000个福建牡蛎养殖和野生2龄群体，从中挑选出贝壳颜色黄色、壳型整齐的个体1200个，然后截取体重前10％的个体120个作为繁殖亲贝，所述繁殖亲贝的体重为95～140g，壳体颜色纯黑，壳体长度为8～13cm。通过人工授精方法获得D型幼虫，幼虫在室内水泥池中培育至眼点幼虫，投放牡蛎壳作为附着基；当牡蛎稚贝生长至1～2mm时，移到自然海区进行养成。以相同选育目标、育苗技术和养成方法等，经过连续4代群体选育出壳黄福建牡蛎速长系F4，再经过连续2代群体选育出壳黄福建牡蛎速长系F6。
(b)壳黄福建牡蛎四倍体G诱导：①三倍体诱导：解剖100个性腺成熟的壳黄福建牡蛎速长系F4亲本，用显微镜分出雌贝(55个)雄贝(45个)；挤出性腺较好的30对雌雄分别获得精卵，精子用500目筛绢网过滤杂质，卵子先用300目筛绢网过滤再用500目筛绢网过滤；采用单对单的方法进行受精，同时控制每个卵子周围有5～10个精子；当受精卵发育第一极体时，马上加入0.5mg/L细胞松弛素B，处理受精卵30min，之后用海水(含1％二甲基亚砜)浸泡15min；将各组受精卵收集放入室内水泥池进行孵化、幼虫培育，用流式细胞仪检测三倍体诱导率在90％以上，最后在海区养成。②四倍体诱导：解剖性腺成熟的壳黄福建牡蛎三倍体，利用流式细胞仪检测出倍性为3N的个体60个，通过显微镜观察，筛选出24个卵子发育良好的雌性3N个体作为母本；解剖50个性腺成熟的壳黄福建牡蛎速长系F4种贝，用显微镜辨别雌雄，选择性腺饱满、精子活力强的15个个体作为父本；分别挤出精卵，精子用500目筛绢网过滤杂质，卵子先用300目筛绢网过滤再用500目筛绢网过滤；采用单对单的方法进行受精，同时控制每个卵子周围有5～10个精子；当50％受精卵发育第一极体时，马上加入0.5mg/L细胞松弛素B，处理受精卵30min，之后用海水(含1％二甲基亚砜)浸泡15min；将各组受精卵收集放入室内水泥池进行孵化、幼虫培育，最后在海区养成壳黄福建牡蛎四倍体约1万个。
(c)壳黄福建牡蛎四倍体群体G自繁：在牡蛎繁殖季节，以壳黄福建牡蛎四倍体G为基础群体，通过流式细胞仪筛选出倍性为4N雌雄个体100个；分别挤出精卵，精子用500目筛绢网过滤杂质，卵子先用300目筛绢网过滤再用500目筛绢网过滤；在人工授精过程中，控制每个卵子周围有3-5个精子；受精卵发育至D型幼虫时，全池收集幼虫并放入新的消毒好的水泥池中培育，幼虫培育密度为1～2个/ml；当幼虫发育至眼点时，投放塑料壳作为附着基；当稚贝生长至1～2mm时，将塑料片分散放入上升流系统进行养殖；当稚贝生长至1cm以上时，采用脱基方法获得单体牡蛎，并将单体牡蛎装笼移至自然海区养成。采用相同方法进行连续2代四倍体群体自繁，从而生产出倍性稳定的壳黄福建牡蛎四倍体G2。
(d)壳黄福建牡蛎全三倍体生产：将2000个壳黄福建牡蛎速长系F6个体和200个四倍体G2个体移到室内水泥池进行恒温(25℃)促熟，生物饵料为人工培育的金藻、角毛藻和小球藻等；当性腺成熟后，通过流式细胞仪检测和显微镜观察方法获得四倍体G2雄性个体50个，待用；解剖2000个速长系F6个体，通过显微镜观察，挑选出雌性个体1200个，待用。以G2雄性个体为父本，以F6雌性个体为母本，进行杂交，具体从亲本中分别挤出精卵，精子用500目筛绢网过滤杂质，卵子先用300目筛绢网过滤再用500目筛绢网过滤；在人工授精过程中，控制每个卵子周围有3～5个精子；受精后，将受精卵平均分到20口30m2水泥池中进行孵化；发育至D型幼虫时，用400目筛绢网收集并获得D型幼虫1000g(约50亿)；将D型幼虫平均分到50口消毒好的30m2水泥池中进行幼虫培育，控制培育密度1～3个/ml；待幼虫发育至眼点幼虫时，投放附着基(牡蛎壳、扇贝壳、塑料片、水泥块、水泥条、水泥饼等)，幼虫变态率30％以上；当稚贝生长至1～2mm时，移到海区进行暂养；暂养1个月后进行人工分苗，再移到自然海区养成。经4个月海区养殖后，平均全重达18.5g、平均壳高5.8cm，成活率98％(表2)。通过壳黄福建牡蛎速长系F6母本和四倍体G2父本进行杂交，可以规模化生产出壳黄福建牡蛎全三倍体。
表2壳黄福建牡蛎全三倍体海区生长情况
对比例1
一种生产壳黑三倍体福建牡蛎的方法
(a)壳黑福建牡蛎群体F选育：收集10000个福建牡蛎养殖和野生2龄群体，从中挑选出贝壳颜色黑色、壳型整齐的个体2000个，然后截取体重前10％的个体200个作为繁殖亲贝。通过人工授精方法获得D型幼虫，幼虫在室内水泥池中培育至眼点幼虫，投放牡蛎壳作为附着基；当牡蛎稚贝生长至1～2mm时，移到自然海区进行养成。最后以相同选育目标、育苗技术和养成方法等，经过连续4代群体选育出壳黑福建牡蛎速长系F4。
(b)壳黑三倍体福建牡蛎诱导：解剖100个性腺成熟的壳黑福建牡蛎速长系F4亲本，用显微镜分出雌(60个)雄(40个)；挤出性腺较好的40对雌雄分别获得精卵，精子用500目筛绢网过滤杂质，卵子先用300目筛绢网过滤再用500目筛绢网过滤；采用单对单的方法进行受精，同时控制每个卵子周围有5～10个精子；当10％受精卵发育第一极体时，马上加入0.5mg/L细胞松弛素B，处理受精卵30min，之后用海水(含1％二甲基亚砜)浸泡15min；将各组受精卵收集放入室内水泥池进行孵化、幼虫培育，最后在海区养成。
采用细胞松弛素B诱导的方法虽然能够得到三倍体福建牡蛎个体，但是诱导不稳定，诱导率达不到98％以上，个体数量较少，成本高，操作重复性差，且得到的三倍体福建牡蛎残留一定的细胞松弛素B毒性，三倍体遗传稳定性较差，不能实现大规模三倍体福建牡蛎生产的要求。
对比例2
按照实施例2的方法规模化生产壳黄三倍体福建牡蛎，不同之处在于步骤(b)壳黄福建牡蛎四倍体G诱导中涉及三倍体诱导和四倍体诱导时，受精卵划分为4组，在受精卵发育第一极体时，分别加入终浓度为0.25mg/L、0.5mg/L、0.75mg/L、1.0mg/L的细胞松弛素B溶液，处理受精卵30min，之后用海水(含1％二甲基亚砜)浸泡15min。采用流式细胞仪分别测定海区养成的三倍体福建牡蛎和四倍体福建牡蛎的个体，统计诱导成功率。结果见表3。
表3不同浓度细胞松弛素B诱导三倍体福建牡蛎和四倍体福建牡蛎结果
| 细胞松弛素B浓度 | 0.25mg/L | 0.5mg/L | 0.75mg/L | 1.0mg/L |
| 三倍体福建牡蛎诱导率 | 65％ | 90％ | 82％ | 75％ |
| 四倍体福建牡蛎诱导率 | 6％ | 55％ | 42％ | 35％ |
对比例3
按照实施例2的方法规模化生产壳黄三倍体福建牡蛎，不同之处在于步骤(b)壳黄福建牡蛎四倍体G诱导中涉及三倍体诱导和四倍体诱导时，受精卵划分为4组，待受精卵发育第一极体时，分别加入终浓度为0.5mg/L的细胞松弛素B溶液，分别处理15min、30min、45min、60min，之后用海水(含1％二甲基亚砜)浸泡15min。采用流式细胞仪分别测定海区养成的三倍体福建牡蛎和四倍体福建牡蛎的个体，统计诱导成功率。结果见表4。
表4不同浓度细胞松弛素B诱导三倍体福建牡蛎和四倍体福建牡蛎结果
| 细胞松弛素B处理时间 | 15min | 30min | 45min | 60min |
| 三倍体福建牡蛎诱导率 | 35％ | 90％ | 71％ | 21％ |
| 四倍体福建牡蛎诱导率 | 2％ | 55％ | 36％ | 0％ |
对比例4
一种规模化生产壳黑三倍体福建牡蛎的方法
按照实施例1的方法规模化生产壳黑三倍体福建牡蛎，不同之处在于步骤(d)壳黄福建牡蛎全三倍体生产，以速长系F2个体作为母本，以G2作为父本进行杂交。
收集海区养成的三倍体福建牡蛎，观察壳表面颜色，结果发现该方法培育的三倍体福建牡蛎壳体颜色不纯正，出现一半黑一半白的情况，不能满足高端市场的要求。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种规模化生产壳黄/壳黑三倍体福建牡蛎的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)以壳色纯正的福建牡蛎个体为筛选群体，选择体重排名前10％～15％的牡蛎个体作为繁殖亲本，经过连续4～6代群体选育，得到速长系F4～F6；
2)以步骤1)中所述速长系F4～F6为亲本，用细胞松弛素B处理受精卵，诱导得到福建牡蛎三倍体，再以所述福建牡蛎三倍体为亲本，用细胞松弛素B处理福建牡蛎三倍体受精卵，诱导得到福建牡蛎四倍体G；
3)将步骤2)所述福建牡蛎四倍体G连续2～3代群体自繁，得到倍性稳定的福建牡蛎四倍体G2～G3；
4)将步骤3)所述福建牡蛎四倍体G2～G3作为父本，以步骤1)中速长系F4～F6作为母本进行杂交，培育得到三倍体福建牡蛎。
2.根据权利要求1所述规模化生产壳黄/壳黑三倍体福建牡蛎的方法，其特征在于，步骤1)所述壳色包括黄壳和黑壳。
3.根据权利要求1所述规模化生产壳黄/壳黑三倍体福建牡蛎的方法，其特征在于，步骤1)中繁殖亲本的体重为90～150g。
4.根据权利要求1所述规模化生产壳黄/壳黑三倍体福建牡蛎的方法，其特征在于，步骤2)中所述细胞松弛素B的浓度为0.4～0.6mg/L。
5.根据权利要求1所述规模化生产壳黄/壳黑三倍体福建牡蛎的方法，其特征在于，步骤2)中所述细胞松弛素B的处理时间为25～35min。
6.根据权利要求1所述规模化生产壳黄/壳黑三倍体福建牡蛎的方法，其特征在于，步骤2)中所述诱导后，还包括对诱导后的受精卵进行流式细胞筛选，得到倍性为3N的福建牡蛎三倍体和倍性为4N的福建牡蛎四倍体G。
7.根据权利要求1所述规模化生产壳黄/壳黑三倍体福建牡蛎的方法，其特征在于，步骤1)中所述壳色纯正的福建牡蛎个体的来源包括养殖牡蛎和/或野生牡蛎。
8.根据权利要求7所述规模化生产壳黄/壳黑三倍体福建牡蛎的方法，其特征在于，所述养殖牡蛎和/或野生牡蛎为2～3龄牡蛎；
所述养殖牡蛎和/或野生牡蛎的数量包括5000～10000个。
9.根据权利要求8所述规模化生产三倍体福建牡蛎的方法，其特征在于，步骤1)中筛选群体的数量包括1000～2000个。
10.根据权利要求1～9任意一项所述规模化生产三倍体福建牡蛎的方法，其特征在于，步骤1)中所述繁殖亲本的数量包括100～300个。
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| CN114158500A (zh) * | 2021-11-22 | 2022-03-11 | 中国科学院南海海洋研究所 | 一种牡蛎三倍体快速生长新品系的培育方法 |
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- 2021-03-03 CN CN202110233987.1A patent/CN113016673A/zh not_active Withdrawn
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