CN107637551A - 一种北方耐低温熊本牡蛎新品系的培育方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种北方耐低温熊本牡蛎新品系的培育方法，选取熊本牡蛎和长牡蛎都属于巨蛎属，利用长牡蛎和熊本牡蛎不同耐温、耐盐品种之间杂交后再进行自交，再进行纯化，杂交、自交连续多代选育，最终得到耐低温熊本牡蛎新品系。实践证明，利用本发明得到的耐低温熊本牡蛎新品系在养殖中突出的优点是耐低温、成活率高、生长速度大大提高,与普通品种的熊本牡蛎相比，生长速度可提高30%以上，成活率提高了50%以上，耐低温提高了5‑6℃。利用本发明得到的熊本牡蛎新品系能够克服目前北方熊本牡蛎冬季死亡问题，保证了熊本牡蛎养殖产业可持续发展。
Description
技术领域
本发明涉及一种熊本牡蛎育种技术，具体是涉及一种北方利用低温及杂交、自交育种进行耐低温熊本牡蛎新品种的培育方法。
背景技术
熊本牡蛎（Crassostrea sikamea），属牡蛎科（Ostridae）巨蛎属（Crassostrea），主要分布在日本有明海海域，在我国江苏、广东以及福建等沿海地区也有野生的熊本牡蛎亚种分布，但其单体个体较小,肉质口感差,基本没有可食用价值。而美国养殖的熊本牡蛎群体是20世纪50年代由日本引种到美国东海岸而形成的美国群体。
熊本牡蛎相对于长牡蛎，具有生长慢、不耐低温、适宜高温和低盐环境生长的特性，壳厚、个体偏小,但其软体部相对饱满，肉质细腻具甜味，气味芬芳，颇受消费者的青睐，是高档酒店进口高档牡蛎的主要品种之一，价格昂贵, 价格也是长牡蛎的1倍以上，国内外市场需求量极大。因此，熊本牡蛎是最新开发的优良牡蛎养殖种类之一。
但是，由于熊本牡蛎不耐低温，我国北方在养殖熊本牡蛎时，冬季死亡率非常高，极大地限制了熊本牡蛎在我国的产业发展。而与熊本牡蛎属于巨蛎属的长牡蛎(Crassostrea gigas)，目前是我国北方主要贝类养殖品种之一,适温范围广，特别耐低温，在-5℃以下的温度下也能存活，但耐低盐能力差些。夏季是长牡蛎的繁殖季节，这一时期的牡蛎肥满度低，口感极差，不能满足夏季牡蛎市场的需求。但熊本牡蛎的产卵期较其长牡蛎晚，夏季的熊本牡蛎肉质依旧可口细腻，这也恰巧填补了夏季牡蛎市场的空白。
发明内容
本发明的目的是提供一种北方耐低温熊本牡蛎新品系的培育方法，以克服熊本牡蛎养殖过程中因低温等原因引起的死亡，不耐高盐及生长速度慢等的问题。
为了解决北方近年来熊本牡蛎冬季低温期死亡率高的问题，利用熊本牡蛎和长牡蛎都属于巨蛎属，长牡蛎耐低温、不耐高温，而熊本牡蛎耐高温、不耐低温、耐低盐以及不耐高盐的生物学特点，将熊本牡蛎和长牡蛎进行杂交培育，但二者繁殖是在春、夏二个不同季节，即如何解决熊本牡蛎和长牡蛎的发育同步性是当前两者杂交培育的关键问题之一。
为达到上述目的，本发明采取的具体技术方案为：
一种北方耐低温熊本牡蛎新品系的培育方法，包括以下步骤：
a、亲本采集：采集经分子标记确定熊本牡蛎和长牡蛎作为纯种亲本；
b、同步促熟培育：在室内培育池进行升温促熟培育，为使熊本牡蛎和长牡蛎性腺发育同步，熊本牡蛎要比长牡蛎提前40-60天入池培育，长牡蛎根据熊本牡蛎升温促熟性腺发育到解剖后获得的精、卵可以正常受精发育，熊本牡蛎的个别雄贝有少量排精后，入池进行促熟培育，以实现熊本牡蛎和长牡蛎的同步发育成熟；
c、剖取精、卵及杂交培育：当熊本牡蛎和长牡蛎亲贝性腺同步发育成熟以后，通过解剖、镜检区分雌、雄贝，严格分离，获取熊本牡蛎成熟卵子和长牡蛎精子，进行两物种间杂交受精，得到两个亲本的杂交子代；
d、子代培育：当获得了杂交子代以后，进行子代培育，按照牡蛎常规人工育苗方法进行培育管理，经过幼虫培育获得杂交稚贝，稚贝经过中间育成及养成获得杂交子一代F1；
f、杂交F1耐低温淘汰选择：以d步骤培育的杂交新品系F1作为苗种,经过连续2-3年北方冬季耐低温养殖，从存活下来的个体中，筛选耐低温的熊本牡蛎杂交大个体做为杂交亲本；
g.杂交品系一对一自交：以f步骤得到的杂交亲本，经促熟培育成熟后，进行一对一自交，再进行子代培育及养成，淘汰具有长牡蛎特征的个体,保留耐低温、耐高盐和生长速度快的个体；
h.耐低温熊本牡蛎新品种的纯化：将g步骤选育出的耐低温熊本牡蛎个体再进行一对一杂交纯化，经遗传纯化，得到性状不再分离的个体；
i.品系纯化：将f,g和h步骤如此反复培育1-2代，即可获得适应北方耐低温熊本牡蛎新品系。
进一步的，上述步骤（b）的具体做法为：对每个种做好标记，在室内进行性腺促熟培育，根据熊本牡蛎生物学特点，挑选壳高在5-7cm的2-3龄熊本牡蛎做亲贝，在室内培育池进行升温促熟培育，为使熊本牡蛎和长牡蛎性腺发育同步，熊本牡蛎要比长牡蛎提前40-60天入池培育，入池水温应在熊本牡蛎性腺发育的生物学最低温度15℃以上，亲贝稳定生长2-3天后，每天升温1℃，且保持在26-28℃温度下培育亲贝成熟待产；熊本牡蛎入池海水盐度先在盐度20-22ppt中培育12-15天后，再在25-26ppt的海水中培育15-18天，最后放入正常的30-32ppt的正常海水中培育至产卵、排精；长牡蛎根据熊本牡蛎升温促熟性腺发育情况后，入池进行促熟培育，以实现熊本牡蛎和长牡蛎的同步发育成熟。
进一步的，上述培育方法在子代培育后，还包括步骤（e）遗传鉴定：在幼虫培育过程中，采用微卫星和SNP检测分子标记确认杂交子一代是熊本牡蛎和长牡蛎杂交子一代。
进一步的，上述步骤（f）中通过截头选择法筛选耐低温的5-10％熊本牡蛎杂交大个体做为亲本。
本发明的优点和技术效果：
本发明提供的培育方法利用长牡蛎和熊本牡蛎不同耐温、耐盐品种之间杂交后再进行自交，再进行纯化，杂交、自交连续多代选育，最终得到耐低温熊本牡蛎新品系。
实践证明，利用本发明得到的耐低温熊本牡蛎新品系在养殖中突出的优点是耐低温、成活率高、生长速度大大提高,与普通品种的熊本牡蛎相比，生长速度可提高30%以上，成活率提高了50%以上，耐低温提高了5-6℃。利用本发明得到的熊本牡蛎新品系能够克服目前北方熊本牡蛎冬季死亡问题，保证熊本牡蛎养殖产业可持续发展。
具体实施方式
以下通过具体实施例对本发明进一步说明。
实施例：
一种北方耐低温熊本牡蛎新品系的培育方法，包括以下步骤：
a、亲本采集：采集经分子标记确定从美国引进的熊本牡蛎和长牡蛎作为纯种亲本；
b、同步促熟培育：在室内培育池进行升温促熟培育，为使熊本牡蛎和长牡蛎性腺发育同步，熊本牡蛎要比长牡蛎提前40-60天入池培育，长牡蛎根据熊本牡蛎升温促熟性腺发育情况后，入池进行促熟培育，以实现熊本牡蛎和长牡蛎的同步发育成熟；对每个种做好标记，在室内进行性腺促熟培育，根据熊本牡蛎生物学特点，挑选壳高在5-7cm的2-3龄熊本牡蛎做亲贝，在室内培育池进行升温促熟培育，为使熊本牡蛎和长牡蛎性腺发育同步，熊本牡蛎要比长牡蛎提前40-60天入池培育，入池水温应在熊本牡蛎性腺发育的生物学最低温度15℃以上，亲贝稳定生长2-3天后，每天升温1℃，且保持在26-28℃温度下培育亲贝成熟待产；熊本牡蛎入池海水盐度先在盐度20-22ppt中培育12-15天后，再在25-26ppt的海水中培育15-18天，最后放入正常的30-32ppt的正常海水中培育至产卵、排精；长牡蛎根据熊本牡蛎升温促熟性腺发育情况后，入池进行促熟培育，以实现熊本牡蛎和长牡蛎的同步发育成熟；
c、剖取精、卵及杂交培育：当熊本牡蛎和长牡蛎亲贝性腺同步发育成熟以后，通过解剖、镜检区分雌、雄贝，严格分离，获取熊本牡蛎成熟卵子和长牡蛎精子，进行两物种间杂交受精，得到两个亲本的杂交子代；
d、子代培育：当获得了杂交子代以后，进行子代培育，按照牡蛎常规人工育苗方法进行培育管理，经过幼虫培育获得杂交稚贝，稚贝经过中间育成及养成获得杂交子一代F1；
f、杂交F1耐低温淘汰选择：以d步骤培育的杂交新品系F1作为苗种,经过连续2-3年北方冬季耐低温养殖，从存活下来的个体，通过截头选择法筛选耐低温的5-10％熊本牡蛎杂交大个体做为亲本；
g.杂交品系一对一自交：以f步骤得到的杂交亲本，经促熟培育成熟后，进行一对一自交，再进行子代培育及养成，淘汰具有长牡蛎特征的个体,保留耐低温、耐高盐和生长速度快的个体；
h.耐低温熊本牡蛎新品种的纯化：将g步骤选育出的耐低温熊本牡蛎个体再进行一对一杂交纯化，经遗传纯化，得到性状不再分离的个体；
i.品系纯化：将f,g和h步骤如此反复培育1-2代，即可获得适应北方耐低温熊本牡蛎新品系。
上述培育方法在子代培育后，还包括步骤（e）遗传鉴定：在幼虫培育过程中，采用微卫星和SNP检测分子标记确认杂交子一代是熊本牡蛎和长牡蛎杂交子一代。
实践证明，经上述方法得到的熊本牡蛎新品系在养殖中突出的优点是耐低温、成活率高、生长快速,与普通品种的熊本牡蛎相比，生长速度可提高30%以上，成活率提高了50%以上，耐低温提高了5-6℃。
上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明精神实质所做的等效变换或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围内。
Claims (4)
1.一种北方耐低温熊本牡蛎新品系的培育方法，其特征在于，包括以下步骤：
a、亲本采集：采集经分子标记确定熊本牡蛎和长牡蛎作为纯种亲本；
b、同步促熟培育：在室内培育池进行升温促熟培育，为使熊本牡蛎和长牡蛎性腺发育同步，熊本牡蛎要比长牡蛎提前40-60天入池培育，长牡蛎根据熊本牡蛎升温促熟性腺发育到解剖后获得的精、卵可以正常受精发育，熊本牡蛎的个别雄贝有少量排精后，入池进行促熟培育，以实现熊本牡蛎和长牡蛎的同步发育成熟；
c、剖取精、卵及杂交培育：当熊本牡蛎和长牡蛎亲贝性腺同步发育成熟以后，通过解剖、镜检区分雌、雄贝，严格分离，获取熊本牡蛎成熟卵子和长牡蛎精子，进行两物种间杂交受精，得到两个亲本的杂交子代；
d、子代培育：当获得了杂交子代以后，进行子代培育，按照牡蛎常规人工育苗方法进行培育管理，经过幼虫培育获得杂交稚贝，稚贝经过中间育成及养成获得杂交子一代F1；
f、杂交F1耐低温淘汰选择：以d步骤培育的杂交新品系F1作为苗种,经过连续2-3年北方冬季耐低温养殖，从存活下来的个体中，筛选耐低温的熊本牡蛎杂交大个体做为杂交亲本；
g.杂交品系一对一自交：以f步骤得到的杂交亲本，经促熟培育成熟后，进行一对一自交，再进行子代培育及养成，淘汰具有长牡蛎特征的个体,保留耐低温、耐高盐和生长速度快的个体；
h.耐低温熊本牡蛎新品种的纯化：将g步骤选育出的耐低温熊本牡蛎个体再进行一对一杂交纯化，经遗传纯化，得到性状不再分离的个体；
i.品系纯化：将f,g和h步骤如此反复培育1-2代，即可获得适应北方耐低温熊本牡蛎新品系。
2.如权利要求1所述的培育方法，其特征在于，所述步骤（b）的具体做法为：对每个种做好标记，在室内进行性腺促熟培育，根据熊本牡蛎生物学特点，挑选壳高在5-7cm的2-3龄熊本牡蛎做亲贝，在室内培育池进行升温促熟培育，为使熊本牡蛎和长牡蛎性腺发育同步，熊本牡蛎要比长牡蛎提前40-60天入池培育，入池水温应在熊本牡蛎性腺发育的生物学最低温度15℃以上，亲贝稳定生长2-3天后，每天升温1℃，且保持在26-28℃温度下培育亲贝成熟待产；熊本牡蛎入池海水盐度先在盐度20-22ppt中培育12-15天后，再在25-26ppt的海水中培育15-18天，最后放入正常的30-32ppt的正常海水中培育至产卵、排精；长牡蛎根据熊本牡蛎升温促熟性腺发育情况后，入池进行促熟培育，以实现熊本牡蛎和长牡蛎的同步发育成熟。
3.如权利要求1所述的培育方法，其特征在于，所述培育方法在子代培育后，还包括步骤（e）遗传鉴定：在幼虫培育过程中，采用微卫星和SNP检测分子标记确认杂交子一代是熊本牡蛎和长牡蛎杂交子一代。
4.如权利要求1所述的培育方法，其特征在于，所述步骤（f）中通过截头选择法筛选耐低温的5-10％熊本牡蛎杂交大个体做为亲本。
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