CN115536672A - 他克莫司粗品的提取方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种他克莫司粗品的提取方法和应用，涉及生物医药技术领域。包括将浓缩后的菌丝体浸提物分别用水萃洗和用第一极性溶剂萃洗，将萃洗后得到的第一固体进行重结晶处理；第一极性溶剂包括正己烷、正庚烷、正戊烷、环己烷、异辛烷和石油醚中的任一种。通过将浓缩后的菌丝体浸提物分别用水萃洗和用第一极性溶剂萃洗后重结晶，水萃洗可以除去他克莫司中的水溶性杂质，第一极性溶剂可以除去他克莫司中的油脂等低极性杂质，通过两步萃洗将他克莫司中的杂质去除获得纯度及含量较高的他克莫司粗品，萃洗工艺简便，生产周期短，适宜工业化使用。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，具体而言，涉及一种他克莫司粗品的提取方法和应用。
背景技术
他克莫司(FK506)是一种新型的二十三元大环内酯类强效免疫抑制剂，具有毒副作用小、死亡率低、移植存活率高、依赖性小等优点，临床广泛应用于多种皮炎、银屑病、红斑狼疮、扁平苔癣、白癜风、Nethenton综合症和抑制宿主病等自身免疫疾病的治疗，以及预防肝脏、肾脏、心脏、肺、胰腺等器官移植术后的排斥反应。
他克莫司来源于发酵产品，从发酵液中制备他克莫司的工艺一般包含从发酵液中提取获得粗品、粗品分离纯化获得他克莫司。因发酵液中他克莫司结构类似物(子囊霉素、二氢他克莫司)占他克莫司的5～10％，子囊霉素及二氢他克莫司因其结构与他克莫司极为相似，无法用常规手段去除，通常只能采用柱层析分离。因此，粗品中杂质含量对柱层析分离效果有较大的影响。
发酵液中除他克莫司及结构类似物外，还含有油脂、蛋白质等副产物，以及无机盐、糖类等物质。由于他克莫司中的杂质含量较多，杂质种类复杂，为了收集到纯度及含量较高的他克莫司，目前从发酵液中提取他克莫司粗品的方法，普遍存在生产效率低下，生产周期长的问题。在一些方案中为了提高生产效率采用纳滤膜、超临界萃取设备等特殊设备，操作较繁琐，生产周期长，不利于工业化；或使用了离子液体等特殊试剂，废液难以处理，对环境不友好。
鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的目的在于提供一种他克莫司粗品的提取方法和应用。
本发明是这样实现的：
第一方面，本发明提供一种他克莫司粗品的提取方法，包括将浓缩后的菌丝体浸提物分别用水萃洗和用第一极性溶剂萃洗，将萃洗后的浸提浓缩物过滤后的固体进行重结晶处理；第一极性溶剂的极性小于乙酸丁酯。
在可选的实施方式中，第一极性溶剂包括正己烷、正庚烷、正戊烷、环己烷、异辛烷和石油醚中的任一种；优选为正己烷。
优选地，第一极性溶剂的添加量为菌丝体的1～3倍重量。
优选地，水的每次添加量为菌丝体的0.5～1倍重量。
在可选的实施方式中，重结晶包括将萃洗后的浸提浓缩物过滤后的固体溶解于非水溶性有机溶剂中，再加入第二极性溶剂重结晶。
优选地，第二极性溶剂的加入方式为滴加，滴加时间为50～70min。
优选地，第二极性溶剂滴加完成后搅拌4～8h，再过滤、干燥，干燥温度为55～65℃。
优选地，非水溶性有机溶剂包括乙酸乙酯、乙酸异丙酯、乙酸丁酯、甲苯和二甲苯中的任一种，更优选为乙酸乙酯。
优选地，第二极性溶剂包括正己烷、正庚烷、正戊烷、环己烷、异辛烷和石油醚中的任一种，更优选为正己烷。
优选地，非水溶性有机溶剂的加入量为萃洗后的浸提浓缩物过滤后的固体总重的0.5～5倍重量，更优选为1～2倍重量。
优选地，第二极性溶剂的加入量为非水溶性有机溶剂加入量的0.5～5倍重量，更优选为1～3倍重量。
在可选的实施方式中，加入第二极性溶剂前还包括分水处理，分水处理包括将含有他克莫司的非水溶性有机相和水相分离。
在可选的实施方式中，重结晶为常温重结晶，重结晶温度为20～30℃。
在可选的实施方式中，制备浓缩后的菌丝体浸提物的方法包括：将他克莫司发酵液固液分离，得到浸提液，并对浸提液浓缩。
在可选的实施方式中，浸提包括使用含水的水溶性有机溶剂浸提。
优选地，含水的水溶性有机溶剂中有机溶剂的浓度为40～85％，更优选为50～75％。
优选地，含水的水溶性有机溶剂的添加量为菌丝体重量的0.5～10倍，更优选为1～3倍。
优选地，水溶性有机溶剂包括乙醇、丙酮、异丙醇和四氢呋喃中的任一种。
在可选的实施方式中，浓缩包括将浸提液浓缩至水溶性有机溶剂的含量为＜1％。
在可选的实施方式中，浓缩温度为30～90℃，更优选为60～80℃。
第二方面，本发明提供一种如前述实施方式任一项的提取方法在制备他克莫司中的应用。
本发明具有以下有益效果：
本发明提供了一种他克莫司粗品的提取方法和应用，通过将浓缩后的菌丝体浸提物分别用水萃洗和用第一极性溶剂萃洗后重结晶，水萃洗可以除去他克莫司中的水溶性杂质，第一极性溶剂可以除去他克莫司中的油脂等低极性杂质，通过两步萃洗将他克莫司中的杂质去除获得纯度及含量较高的他克莫司粗品，同时萃洗的工艺简便、生产周期短，适宜工业化使用。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为本发明实施例1制得的他克莫司粗品的高效液相色谱图；
图2为本发明对比例1制得的他克莫司粗品的高效液相色谱图。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
第一方面，本发明提供了一种他克莫司粗品的提取方法，其步骤如下：
S01、获得菌丝体
取他克莫司发酵液，放入压滤机中过滤，滤饼用水顶洗直至流出液为浅黄色，然后压干菌丝，得到菌丝体。
本发明不限定原料他克莫司发酵液的来源，例如可以为链霉菌菌株发酵得到的，或其他任何现有技术制备得到的他克莫司发酵液均可用于本发明。
S02、制备浸提液
向菌丝体中加入含水的水溶性有机溶剂搅拌浸提2～5小时，浸提结束后过滤并收集浸提液。
优选地，含水的水溶性有机溶剂中有机溶剂的浓度为40～85％，更优选为50～75％。
优选地，含水的水溶性有机溶剂的添加量为菌丝体重量的0.5～10倍，更优选为1～3倍。
优选地，水溶性有机溶剂包括乙醇、丙酮、异丙醇和四氢呋喃中的任一种。
S03、浓缩
将浸提液浓缩至水溶性有机溶剂的含量＜1％，得到浓缩后的菌丝体浸提物。
在可选的实施方式中，浓缩温度为30～90℃，更优选为60～80℃。
浓缩可以除去浸提液中的有机溶剂，由于他克莫司极易形成一水合物，因此浓缩后的菌丝体浸提物中包含他克莫司一水合物固体、子囊霉素、二氢他克莫司、水和其他杂质。
S04、萃洗
将浓缩后的菌丝体浸提物分别用水萃洗和用第一极性溶剂萃洗。
第一极性溶剂为小极性溶剂，第一极性溶剂的极性低于乙酸丁酯。较佳的，第一极性溶剂包括正己烷、正庚烷、正戊烷、环己烷、异辛烷和石油醚中的任一种。
可以理解的是，水萃洗和第一极性溶剂萃洗的顺序本发明不做限定，只要将浓缩后的浸提物分别采用水和第一极性溶剂萃洗即可。
萃洗的次数为水萃洗2～4次，第一极性溶剂萃洗1～2次，水萃洗次数的标准为洗至洗余液为无色即可。
优选地，第一极性溶剂为正己烷。
优选地，第一极性溶剂的添加量为菌丝体的1～3倍重量。
优选地，水的每次添加量为菌丝体的0.5～1倍重量。
他克莫司来源于发酵产品，将发酵后的菌丝体制成浸提浓缩物再采用至少两步萃洗，水萃洗能够除去菌丝体中的水溶性杂质，第一极性溶剂可以除去他克莫司中的油脂等低极性杂质，通过两步萃洗将他克莫司中的杂质去除获得纯度及含量较高的他克莫司粗品，同时萃洗的工艺简便、生产周期短，适宜工业化使用。
S05、重结晶
将萃洗后的浸提浓缩物过滤后的固体溶解于非水溶性有机溶剂中再加入第二极性溶剂重结晶。
优选地，非水溶性有机溶剂包括乙酸乙酯、乙酸异丙酯、乙酸丁酯、甲苯和二甲苯中的任一种，更优选为乙酸乙酯。
其中需要注意的是，目前并不存在完全不溶于水的物质，上述提到的非水溶性有机溶剂是指该物质在水中的溶解度小，但仍能溶解少量水。例如25℃时乙酸乙酯在水中溶解8.08％水，水在乙酸乙酯中溶解2.94％。
优选地，第二极性溶剂包括正己烷、正庚烷、正戊烷、环己烷、异辛烷和石油醚中的任一种，更优选为正己烷。
优选地，非水溶性有机溶剂的加入量为萃洗后的浸提浓缩物过滤后的固体0.5～5倍重量，更优选为1～2倍重量。
优选地，第二极性溶剂的加入量为非水溶性有机溶剂加入量的0.5～5倍重量，更优选为1～3倍重量。
在可选的实施方式中，加入第二极性溶剂前还包括分水处理，分水处理包括将含有他克莫司的非水溶性有机相和水相分离。
在可选的实施方式中，重结晶为常温重结晶，重结晶温度为20～30℃。
优选地，第二极性溶剂的加入方式为滴加，滴加时间为50～70min。
优选地，第二极性溶剂滴加完成后搅拌4～8h，再过滤、干燥，干燥温度为55～65℃。
萃洗后的浸提浓缩物过滤后的固体仍存在大量的水，当体系中存在水时，他克莫司极易与水结合形成一水合物。本发明将萃洗后的浸提浓缩物过滤后的固体与非水溶性有机溶剂混合，他克莫司溶解于非水溶性有机溶剂中，固体中多余的水分与他克莫司溶液分离，经过分水处理后分离水相。向非水溶性有机相中加入第二极性溶剂，由于他克莫司不溶于第二极性溶剂，通过控制第二极性溶剂的添加量，可以使他克莫司在常温条件下，就可以从非水溶性有机溶剂中析出；同时，由于非水溶性有机溶剂中仍存在少量的水，第二极性溶剂加入后有利于他克莫司一水合物的形成，使得他克莫司的析出速度更快，获得的他克莫司粗品品质较好。
本发明通过上述方法提取他克莫司，相较于现有技术采用树脂工艺而言，极大地提高了生产效率，缩短了生产周期，也解决了由于树脂工艺难以有效去除油脂等、小极性杂质会在树脂层析柱中慢慢累积造成树脂层析柱效缓慢降低、生产效率下降以及产品质量的降低的问题。此外，该方法相较于纳滤膜或超临界萃取法，不使用特殊设备，操作简单，生产效率高。相对于使用了离子液体等特殊试剂处理，不产生难处理的废液，对环境友好，为他克莫司粗品的提取提供了新的思路。
此外，需要说明的是，本发明提取得到的他克莫司经过柱层析进一步分离纯化，能够得到纯度较高的他克莫司原料，且由于本发明的他克莫司粗品纯度及含量较高，可以提高柱层析的分离效率，也可以延长层析柱的使用周期。
第二方面，本发明提供一种如前述实施方式任一项的提取方法在制备他克莫司中的应用。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
实施例1
本实施例提供了一种他克莫司粗品的提取方法，包括如下步骤：
S01、获得菌丝体
取2700L发酵液，含3.11kg他克莫司，放入压滤机中过滤，滤饼用水顶洗直至流出液为浅黄色，然后压干菌丝，得到142.38kg菌丝体。
S02、制备浸提液
菌丝体先用250kg 50％的乙醇水溶液搅拌浸提，再用250kg 70％的乙醇水溶液搅拌浸提，合并两次浸提液。
S03、浓缩
将浸提液置于70～80℃下减压浓缩，当酒精计检测乙醇含量为0％时，得到浸提浓缩物。
S04、萃洗
浸提浓缩物用200L正己烷萃洗，静置分层，弃去下层，固液悬浮层每次用100L水萃洗3次，洗至水相颜色为无色后过滤，得4.64Kg固体。
S05、重结晶
固体60℃溶解于6.96kg乙酸乙酯中，静置分层，弃去下层水相，上层非水溶性有机相趁热过滤，滤液降温至22～25℃，1h内滴加13.92kg正己烷，搅拌析晶4h，过滤，滤饼于55～60℃干燥，得2.94kg类白色固体，对其进行HPLC外标法检测，粗品含子囊霉素2.3％，二氢他克莫司3.6％，他克莫司92.3％，收率87.3％。
实施例2
本实施例提供了一种他克莫司粗品的提取方法，包括如下步骤：
S01、获得菌丝体
取2800L发酵液，含3.23kg他克莫司，放入压滤机中过滤，滤饼用水顶洗直至流出液为浅黄色，然后压干菌丝，得到131.93kg菌丝体。
S02、制备浸提液
菌丝体先用250kg 50％的乙醇水溶液搅拌浸提，再用250kg 70％的乙醇水溶液搅拌浸提，合并两次浸提液。
S03、浓缩
将浸提液置于70～80℃下减压浓缩，当酒精计检测乙醇含量为0％时，得到浸提浓缩物。
S04、萃洗
浸提浓缩物用200L正己烷萃洗，静置分层，弃去下层，固液悬浮层每次用100L水萃洗3次，洗至水相颜色为无色后过滤，得4.49Kg固体。
S05、重结晶
固体60℃溶解于17.96kg乙酸乙酯中，静置分层，弃去下层水相，上层非水溶性有机相趁热过滤，滤液降温至25～28℃，1h内滴加35.92kg正己烷，搅拌析晶4h，过滤，滤饼于55～60℃干燥，得2.80kg类白色固体，对其进行HPLC外标法检测，粗品含子囊霉素2.7％，二氢他克莫司3.8％，他克莫司89.1％，收率77.2％。
实施例3
本实施例提供了一种他克莫司粗品的提取方法，包括如下步骤：
S01、获得菌丝体
取2850L发酵液，含3.62kg他克莫司，放入压滤机中过滤，滤饼用水顶洗直至流出液为浅黄色，然后压干菌丝，得到148.81kg菌丝体。
S02、制备浸提液
菌丝体先用250kg 50％的乙醇水溶液搅拌浸提，再用250kg 70％的乙醇水溶液搅拌浸提，合并两次浸提液。
S03、浓缩
将浸提液置于60～70℃下减压浓缩，当酒精计检测乙醇含量小于1％时，得到浸提浓缩物。
S04、萃洗
浸提浓缩物每次用100L水萃洗3次，洗至水相颜色为无色，加入200L正己烷萃洗过滤，得5.16Kg固体。
S05、重结晶
固体60℃溶解于10.32kg乙酸乙酯中，静置分层，弃去下层水相，上层非水溶性有机相趁热过滤，滤液降温至21～24℃，搅拌下1h内滴加20.64kg正己烷，搅拌析晶6h，过滤，滤饼于55～60℃干燥，得3.19kg类白色固体，对其进行HPLC外标法检测，粗品含子囊霉素2.4％，二氢他克莫司3.7％，他克莫司92.2％，收率81.2％。
实施例4
本实施例提供了一种他克莫司粗品的提取方法，包括如下步骤：
S01、获得菌丝体
取2700L发酵液，含3.24kg他克莫司，其放入压滤机中过滤，滤饼用水顶洗直至流出液为浅黄色，然后压干菌丝，得129.33kg菌丝体。
S02、制备浸提液
菌丝体先用250kg 50％的乙醇水溶液搅拌浸提，再用250kg 70％的乙醇水溶液搅拌浸提，合并两次浸提液。
S03、浓缩
浸提液置于60～70℃下减压浓缩，当酒精计检测乙醇含量为小于1％时，得到浸提浓缩物。
S04、萃洗
浸提浓缩物每次用100L水萃洗3次，洗至水相颜色为无色，加入200L正己烷萃洗过滤，得4.82Kg固体。
S05、重结晶
固体60℃溶解于19.28kg乙酸乙酯中，静置分层，弃去下层水相，上层非水溶性有机相趁热过滤，滤液降温至23～28℃，1h内滴加57.84kg正己烷，搅拌析晶6h过滤，滤饼于60～65℃干燥，得3.03kg类白色固体，对其进行HPLC外标法检测，粗品含子囊霉素2.2％，二氢他克莫司3.9％，他克莫司89.4％，收率83.6％。
实施例5
本实施例提供了一种他克莫司粗品的提取方法，包括如下步骤：
S01、获得菌丝体
取2600L发酵液，含3.10kg他克莫司，放入压滤机中过滤，滤饼用水顶洗直至流出液为浅黄色，然后压干菌丝，得到138.22kg菌丝体。
S02、制备浸提液
菌丝体先用250kg 50％的乙醇水溶液搅拌浸提，再用250kg 70％的乙醇水溶液搅拌浸提，合并两次浸提液。
S03、浓缩
浸提液置于60～70℃下减压浓缩，当酒精计检测乙醇含量为0％时，得到浸提浓缩物。
S04、萃洗
浸提浓缩物每次用100L水萃洗3次，洗至水相颜色为无色，加入200L正己烷萃洗过滤，得4.68Kg固体。
S05、重结晶
固体60℃溶解于14.04kg乙酸乙酯中，静置分层，弃去下层水相，上层非水溶性有机相趁热过滤，滤液降温至26～28℃，1h内滴加56.16kg正己烷，搅拌析晶8h过滤，滤饼于60～65℃干燥，得2.93kg类白色固体，对其进行HPLC外标法检测，粗品含子囊霉素2.3％，二氢他克莫司3.8％，他克莫司85.7％，收率81.0％。
实施例6
本实施例提供了一种他克莫司粗品的提取方法，包括如下步骤：
S01、获得菌丝体
取发27L发酵液，含33.41g他克莫司，抽滤，滤饼用水顶洗直至流出液为浅黄色，然后压干菌丝，得1.32kg菌丝体。
S02、制备浸提液
菌丝体先用2.5kg 50％的乙醇水溶液搅拌浸提，再用2.5kg 70％的乙醇水溶液搅拌浸提，合并两次浸提液。
S03、浓缩
浸提液置于60～70℃下减压浓缩，当酒精计检测乙醇含量为0％时，得到浸提浓缩物。
S04、萃洗
浸提浓缩物每次用1L水萃洗3次，洗至水相颜色为无色，加入2L正己烷萃洗过滤，得46.82g固体。
S05、重结晶
固体60℃溶解于70.5g乙酸乙酯中，静置分层，弃去下层水相，上层非水溶性有机相趁热过滤，滤液降温至23～28℃，1h内滴加211.5g正己烷，搅拌析晶4h过滤，滤饼于55～60℃干燥，得32.51g类白色固体，对其进行HPLC外标法检测，粗品含子囊霉素2.5％，二氢他克莫司3.6％，他克莫司90.2％，收率87.8％。
实施例7
本实施例提供了一种他克莫司粗品的提取方法，包括如下步骤：
S01、获得菌丝体
取26.5L发酵液，含34.23g他克莫司，抽滤，滤饼用水顶洗直至流出液为浅黄色，然后压干菌丝，得到1.42kg菌丝体。
S02、制备浸提液
菌丝体先用2.5kg 50％的乙醇水溶液搅拌浸提，再用2.5kg 70％的乙醇水溶液搅拌浸提，合并两次浸提液。
S03、浓缩
浸提液置于60～70℃下减压浓缩，当酒精计检测乙醇含量为0％时，得到浸提浓缩物。
S04、萃洗
浸提浓缩物每次用1L水萃洗3次，洗至水相颜色为无色，加入2L正己烷萃洗过滤，得52.19g固体。
S05、重结晶
固体60℃溶解于104.4g乙酸乙酯中，静置分层，弃去下层水相，上层非水溶性有机相趁热过滤，滤液降温至25～28℃，1h内滴加208.8g正己烷，搅拌析晶8h过滤，滤饼于55～65℃干燥，得32.38g类白色固体，对其进行HPLC外标法检测，粗品含子囊霉素2.6％，二氢他克莫司3.9％，他克莫司90.7％，收率85.8％。
实施例8
本实施例提供了一种他克莫司粗品的提取方法，包括如下步骤：
S01、获得菌丝体
取发酵27L发酵液，含34.07g他克莫司，抽滤，滤饼用水顶洗直至流出液为浅黄色，然后压干菌丝，得到1.96kg菌丝体。
S02、制备浸提液
菌丝体先用2.5kg 50％的丙酮水溶液搅拌浸提，再用2.5kg 70％的丙酮水溶液搅拌浸提，合并两次浸提液。
S03、浓缩
浸提液置于60～70℃下减压浓缩，当酒精计检测丙酮含量为0％时，得到浸提浓缩物。
S04、萃洗
浸提浓缩物每次用1L水萃洗3次，洗至水相颜色为无色，加入2L正己烷萃洗过滤，得50.31g固体。
S05、重结晶
固体60℃溶解于71.6g乙酸乙酯中，静置分层，弃去下层水相，上层非水溶性有机相趁热过滤，滤液降温至26～29℃，1h内缓慢滴加143.2g正己烷，搅拌析晶4h过滤，滤饼于55～60℃干燥，得32.81g类白色固体，对其进行HPLC外标法检测，粗品含子囊霉素2.4％，二氢他克莫司4.1％，他克莫司90.3％，收率87.0％。
实施例9
本实施例提供了一种他克莫司粗品的提取方法，包括如下步骤：
S01、获得菌丝体
取27L发酵液，含32.19g他克莫司，抽滤，滤饼用水顶洗直至流出液为浅黄色，然后压干菌丝，得到1.72kg菌丝体。
S02、制备浸提液
菌丝体先用2.5kg 50％的乙醇水溶液搅拌浸提，再用2.5kg 70％的乙醇水溶液搅拌浸提，合并两次浸提液。
S03、浓缩
浸提液置于70～80℃下减压浓缩，当酒精计检测乙醇含量为0％时，得到浸提浓缩物。
S04、萃洗
浸提浓缩物每次用1L水萃洗3次，洗至水相颜色为无色。加入2L正己烷萃洗过滤，得49.39g固体。
S05、重结晶
固体60℃溶解于71.4g乙酸乙酯中，静置分层，弃去下层水相，上层非水溶性有机相趁热过滤，滤液降温至25～28℃，1h内滴加142.8g正庚烷，搅拌析晶6h过滤，滤饼于60～65℃干燥，得31.33g类白色固体，对其进行HPLC外标法检测，粗品含子囊霉素2.8％，二氢他克莫司3.6％，他克莫司90.3％，收率87.9％。
实施例10
本实施例提供了一种他克莫司粗品的提取方法，包括如下步骤：
S01、获得菌丝体
取27L发酵液，含31.47g他克莫司，抽滤，滤饼用水顶洗直至流出液为浅黄色，然后压干菌丝，得到1.45kg菌丝体。
S02、制备浸提液
菌丝体先用2.5kg 50％的乙醇水溶液搅拌浸提，再用2.5kg 70％的乙醇水溶液搅拌浸提，合并两次浸提液。
S03、浓缩
浸提液置于70～80℃下减压浓缩，当酒精计检测乙醇含量为0％时，得到浸提浓缩物。
S04、萃洗
浸提浓缩物每次用1L水萃洗3次，洗至水相颜色为无色。加入2L正己烷萃洗过滤，得45.19g固体。
S05、重结晶
固体60℃溶解于67.8g乙酸乙酯中，静置分层，弃去下层水相，上层非水溶性有机相趁热过滤，滤液降温至23～26℃，1h内滴加135.6g石油醚，搅拌析晶8h过滤，滤饼于55～65℃干燥，得30.25g类白色固体，对其进行HPLC外标法检测，粗品含子囊霉素2.3％，二氢他克莫司3.7％，他克莫司89.6％，收率86.1％。
实施例11
本实施例提供了一种他克莫司粗品的提取方法，包括如下步骤：
S01、获得菌丝体
取发27L发酵液，含31.47g他克莫司，抽滤，滤饼用水顶洗直至流出液为浅黄色，然后压干菌丝，得到1.54kg菌丝体。
S02、制备浸提液
菌丝体先用2.5kg 50％的乙醇水溶液搅拌浸提，再用2.5kg 70％的乙醇水溶液搅拌浸提，合并两次浸提液。
S03、浓缩
浸提液置于60～80℃下减压浓缩，当酒精计检测乙醇含量为0％时，得到浸提浓缩物。
S04、萃洗
浸提浓缩物每次用1L水萃洗3次，洗至水相颜色为无色。加入2L正己烷萃洗过滤，得46.62g固体。
S05、重结晶
固体60℃溶解于69.2g乙酸丁酯中，静置分层，弃去下层水相，上层非水溶性有机相趁热过滤，滤液降温至26～30℃，搅拌下1h内滴加138.4g正己烷，搅拌析晶6h过滤，滤饼于55～60℃干燥，得29.39g类白色固体，对其进行HPLC外标法检测，粗品含子囊霉素2.3％，二氢他克莫司3.6％，他克莫司88.6％，收率82.7％。
对比例1
本对比例提供了一种他克莫司粗品的提取方法，包括如下步骤：
S01、获得菌丝体
取2750L发酵液，含3.28kg他克莫司，放入压滤机中过滤，滤饼用水顶洗直至流出液为浅黄色，然后压干菌丝，得到141.23kg菌丝体。
S02、制备浸提液
菌丝体先用250kg 50％的乙醇水溶液搅拌浸提，再用250kg 70％的乙醇水溶液搅拌浸提，合并两次浸提液。
S03、树脂吸附
浸提液用50kg大孔树脂吸附，以1.5L/min的流速用100kg乙醇水溶液(45％，v/v)前洗，再用100kg乙醇水溶液(65％，v/v)解吸，分段收集解吸液。
S04、浓缩
解吸液于60～80℃真空浓缩至乙醇低于10％，浓缩液用100kg乙酸乙酯萃取两次，合并有机相，萃取液于60～80℃真空浓缩至无馏出物，得4.23kg浓缩物。
S05、重结晶
浓缩物60℃溶解于4.23kg乙酸乙酯后中，趁热过滤，滤液降温至23～27℃，搅拌下1h内滴加12.69kg石油醚，搅拌析晶20h。过滤，滤饼于60～65℃真空干燥，得3.09kg淡黄色固体。其进行HPLC外标法检测，粗品含子囊霉素2.7％，二氢他克莫司3.5％，他克莫司85.9％，收率80.9％。
对比例2
本实施例提供了一种他克莫司粗品的提取方法，包括如下步骤：
S01、获得菌丝体
取27L发酵液，含34.22g他克莫司，抽滤，滤饼用水顶洗直至流出液为浅黄色，然后压干菌丝，得到1.29kg菌丝体。
S02、制备浸提液
菌丝体先用2.5kg 50％的乙醇水溶液搅拌浸提，再用2.5kg 70％的乙醇水溶液搅拌浸提，合并两次浸提液。
S03、浓缩
浸提液置于70～80℃下减压浓缩，当酒精计检测乙醇含量为0％时，得到浸提浓缩物。
S04、萃洗
浸提浓缩物每次用1L水萃洗3次，洗至水相颜色为无色。加入2L乙酸丁酯萃洗过滤，得22.44g固体。
S05、重结晶
固体60℃溶解于44.9g乙酸乙酯中，静置分层，弃去下层水相，上层非水溶性有机相趁热过滤，滤液降温至23～28℃，搅拌下1h内滴加89.8g正己烷，搅拌析晶4h过滤，滤饼于55～60℃干燥，得15.51g类白色固体。其进行HPLC外标法检测，粗品含子囊霉素2.6％，二氢他克莫司3.4％，他克莫司82.3％，收率37.3％。
对比例3
本对比例提供了一种他克莫司粗品的提取方法，包括如下步骤：
S01、获得菌丝体
取27L发酵液，含34.22g他克莫司，抽滤，滤饼用水顶洗至流出液为浅黄色，压干菌丝，得1.30kg菌丝体。
S02、制备浸提液
菌丝体先用2.5kg 50％的乙醇水溶液搅拌浸提，再用2.5kg 70％的乙醇水溶液搅拌浸提，合并两次浸提液。
S03、浓缩
浸提液置于60～80℃下减压浓缩，当酒精计检测乙醇含量为0％时，得到浸提浓缩物。
S04、萃洗
浸提浓缩物用2L正己烷萃洗，静置分层，弃去下层，固液悬浮层每次用水1L萃洗3次，洗至水相颜色为无色后过滤，收集滤饼，得44.25g固体。
S05、重结晶
固体60℃溶解于300g乙酸乙酯，静置分层，弃去下层水相，上层有机相趁热过滤，滤液浓缩至泡沫状固体，KF水分为3.7％，用乙酸乙酯带水3次，每次150g，得泡沫状固体，KF水分为0.6％。
泡沫状固体60℃溶解于66.4g乙酸乙酯中，趁热过滤，滤液降温至23～25℃，搅拌下1h内滴加132.8g正己烷，常温敞口搅拌析晶48h，过滤，滤饼于55～60℃干燥，得22.08g类白色固体，进其行HPLC外标法检测，粗品含子囊霉素2.3％，二氢他克莫司3.5％，他克莫司88.2％，收率56.9％。
对比例4
本对比例提供了一种他克莫司粗品的提取方法，包括如下步骤：
S01、获得菌丝体
取29L发酵液，含35.62g他克莫司，抽滤，滤饼用水顶洗直至流出液为浅黄色，压干菌丝，得到1.47kg菌丝体。
S02、制备浸提液
菌丝体先用2.5kg 50％的乙醇水溶液搅拌浸提，再用2.5kg 70％的乙醇水溶液搅拌浸提，合并两次浸提液。
S03、浓缩
浸提液置于60～80℃下减压浓缩，当酒精计检测乙醇含量为0％时，得到浸提浓缩物。
S04、萃洗
浸提浓缩物用2L正己烷萃洗，静置分层，弃去下层，固液悬浮层每次用水1L萃洗3次，洗至水相颜色为无色后过滤，收集滤饼，得46.62g固体。
S05、重结晶
固体60℃溶解于乙酸乙酯280ml中，趁热过滤，滤液降温至4℃，搅拌下缓慢加入正己烷14ml，搅拌析晶48h，过滤，滤饼于55～60℃干燥，得类白色固体21.32g，对其进行HPLC外标法检测，粗品含子囊霉素2.4％，二氢他克莫司3.6％，他克莫司80.6％，收率48.2％。
试验例1
采用高效液相色谱法对实施例1和对比例1制得的他克莫司粗品进行检测，色谱条件如下：色谱柱：Agilent ZORBAX-SB C18 4.6mm×250mm，5μm；柱温：70℃；流速1.5ml/min；流动相：溶液A:6mmol/L磷酸,溶液B:乙腈-甲基叔丁基醚(91:19),溶液C:溶液A-溶液B(4:1),溶液D:溶液A-溶液B(1:4)；梯度程序：0min(72％溶液C)→30min(72％溶液C)→53min(15％溶液C)→54min(72％溶液C)]→60min(72％溶液C)。得到如图1和图2所示结果。
由图1和2可知，图2的杂质峰相对于图1的数量增加，因此，采用对比例1的树脂吸附法提取他克莫司，长期使用后他克莫司粗品中的杂质含量增加，影响产品纯度。
试验例2
将本申请实施例1和对比例1～4制得的他克莫司粗品采用中国专利CN103554133B实施例7中的方法进行进一步分离纯化，去除他克莫司结构类似物后制得他克莫司，对他克莫司粗品和得到的他克莫司进行有关物质检测。提取工艺、生产周期、他克莫司粗品含量、收率及他克莫司含量、收率、纯化步骤生产周期等对比结果如表1所示。
表1不同提取工艺获得的粗品经柱层析纯化后的结果对比
由表1可知，对于提取工艺：除对比例1采用大孔树脂吸附工艺生产周期长外，其余实施例和对比采用萃洗工艺，生产周期显著缩短，生产效率显著提高；与实施例1对比，对比例2采用乙酸丁酯萃洗，因乙酸丁酯的极性较大，萃洗除杂效果较差，且因为他克莫司在乙酸丁酯中溶解性较好，萃洗时损失较大，收率较低。
对于提取工艺后端的重结晶工艺：与实施例比较，对比例3除去了结晶体系中的水，重结晶过程中的水需要从环境中缓慢吸附水分以形成水合物，因此重结晶时间明显变长且收率明显降低。
对于本申请技术的应用效果，实施例1与各对比列获得的粗品，经制备色谱柱层析后，产品含量没有明显变化，实施例1粗品的纯化收率明显高于各对比例，实施例1粗品的纯化生产周期也高于各对比例。
综上所述，本发明实施例提供的一种他克莫司粗品的提取方法和应用，其至少具有以下优点：
1)将发酵后的菌丝体制成浸提浓缩物再采用至少两步萃洗，水萃洗能够除去菌丝体中的水溶性杂质，第一极性溶剂可以除去菌丝体中的油脂等低极性杂质，通过两步萃洗将他克莫司中的杂质去除获得纯度和含量较高的他克莫司粗品，同时萃洗的工艺简便，生产周期短，适宜工业化使用。
2)萃洗后的浸提浓缩物过滤后的固体中存在大量的水，当体系中存在水时，他克莫司极易与水结合形成一水合物。本发明将萃洗后的浸提浓缩物过滤后的固体与非水溶性有机溶剂混合，他克莫司溶解于非水溶性有机溶剂中，固体中多余的水分与他克莫司分离，经过分水处理后排出水相。向非水溶性有机相中加入第二极性溶剂，由于他克莫司不溶于第二极性溶剂，通过控制第二极性溶剂的添加量，可以使他克莫司在常温条件下，就可以从非水溶性有机溶剂中析出；同时，由于非水溶性有机溶剂中仍存在少量的水，第二极性溶剂加入后有利于他克莫司水合物的形成，使得他克莫司的析出速度更快，获得的他克莫司粗品品质较好。
3)在使用同一根层析柱分离大孔树脂法获得的他克莫司粗品，平均分离收率为70～80％，得到产品液色素浓重，且使用的层析柱需半年拆柱并活化填料；经本步骤提取后的粗品柱层析平均分离收率为85～90％，得到产品液色素偏淡，进行柱层析时无需拆柱活化填料。
以上仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种他克莫司粗品的提取方法，其特征在于，包括将浓缩后的菌丝体浸提物分别用水萃洗和用第一极性溶剂萃洗，将萃洗后得到的浸提浓缩物过滤后的固体进行重结晶处理；
所述第一极性溶剂的极性小于乙酸丁酯。
2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述第一极性溶剂包括正己烷、正庚烷、正戊烷、环己烷、异辛烷和石油醚中的任一种；优选为正己烷；
优选地，所述第一极性溶剂的添加量为菌丝体的1～3倍重量；
优选地，所述水萃洗中每次添加的水量为菌丝体的0.5～1倍重量。
3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述重结晶包括将萃洗后的浸提浓缩物过滤后的固体溶解于非水溶性有机溶剂中，再加入第二极性溶剂重结晶；
优选地，所述第二极性溶剂的加入方式为滴加，滴加时间为50～70min；
优选地，所述第二极性溶剂滴加完成后搅拌4～8h，再过滤、干燥，干燥温度为55～65℃；
优选地，所述非水溶性有机溶剂包括乙酸乙酯、乙酸异丙酯、乙酸丁酯、甲苯和二甲苯中的任一种，更优选为乙酸乙酯；
优选地，所述第二极性溶剂包括正己烷、正庚烷、正戊烷、环己烷、异辛烷和石油醚中的任一种，更优选为正己烷；
优选地，所述非水溶性有机溶剂的加入量为萃洗后的浸提浓缩物过滤后的固体的0.5～5倍重量，更优选为1～2倍重量；
优选地，所述第二极性溶剂的加入量为所述非水溶性有机溶剂加入量的0.5～5倍重量，更优选为1～3倍重量。
4.根据权利要求3所述的提取方法，其特征在于，加入第二极性溶剂前还包括分水处理，所述分水处理包括将含有他克莫司的非水溶性有机相和水相分离。
5.根据权利要求3所述的提取方法，其特征在于，所述重结晶为常温重结晶，重结晶温度为20～30℃。
6.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，制备所述浸提浓缩物的方法包括：将他克莫司发酵液固液分离，得到浸提液，并对浸提液浓缩。
7.根据权利要求6所述的提取方法，其特征在于，所述浸提包括使用含水的水溶性有机溶剂浸提；
优选地，所述含水的水溶性有机溶剂中有机溶剂的浓度为40～85％，更优选为50～75％；
优选地，所述含水的水溶性有机溶剂的添加量为菌丝体重量的0.5～10倍，更优选为1～3倍；
优选地，所述水溶性有机溶剂包括乙醇、丙酮、异丙醇和四氢呋喃中的任一种。
8.根据权利要求6所述的提取方法，其特征在于，所述浓缩包括将浸提液浓缩至水溶性有机溶剂的含量为＜1％。
9.根据权利要求6所述的提取方法，其特征在于，所述浓缩温度为30～90℃，更优选为60～80℃。
10.一种如权利要求1～9任一项所述的提取方法在制备他克莫司中的应用。
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Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20030166924A1 (en) * | 2002-02-13 | 2003-09-04 | Vilmos Keri | Method for extracting a macrolide from biomatter |
| CN1768066A (zh) * | 2003-03-31 | 2006-05-03 | 特瓦药厂有限公司 | 大环内酯物质的结晶与纯化 |
| CN101712685A (zh) * | 2009-06-22 | 2010-05-26 | 鲁南制药集团股份有限公司 | 一种他克莫司粗品的精制方法 |
| CN113372360A (zh) * | 2021-06-06 | 2021-09-10 | 台州市厚普生物科技有限公司 | 一种新型的他克莫司粗品提取方法 |
-
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Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20030166924A1 (en) * | 2002-02-13 | 2003-09-04 | Vilmos Keri | Method for extracting a macrolide from biomatter |
| CN1768066A (zh) * | 2003-03-31 | 2006-05-03 | 特瓦药厂有限公司 | 大环内酯物质的结晶与纯化 |
| CN101712685A (zh) * | 2009-06-22 | 2010-05-26 | 鲁南制药集团股份有限公司 | 一种他克莫司粗品的精制方法 |
| CN113372360A (zh) * | 2021-06-06 | 2021-09-10 | 台州市厚普生物科技有限公司 | 一种新型的他克莫司粗品提取方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 吕祖平: "他克莫司的生产工艺研究", 中国优秀硕士学位论文全文数据库 工程科技Ⅰ辑, pages 30 - 31 * |
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