CN115521889A - 一株产γ-氨基丁酸的植物乳杆菌WL02及其用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一株高产γ‑氨基丁酸的植物乳杆菌WL02及其用途，属于生物技术领域。所述菌株为植物乳杆菌Lactobacillus plantarum WL02，该菌株于2021年12月27日保藏于中国微生物菌种保藏中心，保藏编号为：CGMCC NO:24200。通过优化培养基与发酵条件，经高效液相色谱法测定发酵液中γ‑氨基丁酸的含量，筛选出具有高产γ‑氨基丁酸能力和较高产酸能力及活力的乳酸菌；经16rDNA测序分析将筛选出的菌株WL02鉴定为植物乳杆菌。本发明的菌株的耐酸耐胆盐能力较强，可用于制作富含γ‑氨基丁酸的功能食品。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，特别涉及一株产γ-氨基丁酸的植物乳杆菌WL02及其用途。
背景技术
γ-氨基丁酸，是一种广泛分布于自然界的非蛋白质氨基酸。GABA具有抗疲劳、降血压、改善睡眠以及提高人体记忆力等生理功能，是一种兼具药理作用和保健功能的新型功能因子，现已被国家卫生部批准为“新资源食品”，可用于乳制品、饮料和焙烤等食品中，在食品领域具有良好的应用前景。
乳酸菌作为公认的安全微生物，具有合成γ-氨基丁酸的能力。生物合成的γ-氨基丁酸具有安全性、经济性等优点，因此，使乳酸菌发酵食品成为人们日常γ-氨基丁酸营养强化的补充剂可进一步为人类健康事业添砖加瓦。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有乳酸菌发酵获得γ-氨基丁酸含量较低的不足和缺陷，提供一种高产γ-氨基丁酸的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)WL02并用于制备富含γ-氨基丁酸的谷物饮料。
所述高产γ-氨基丁酸的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)WL02，于2021年12月27日保藏于中国微生物菌种保藏中心，保藏编号为：CGMCC NO:24200。
所述植物乳杆菌WL02是从广西长寿村人群肠道中分离所得，可利用常见的用于培养乳酸菌的培养基培养，例如MRS培养基。
所述植物乳杆菌WL02在MRS培养基或脱脂牛乳基质培养基中37℃发酵24h后，发酵液的pH值分别为3.70和3.83，活菌数大于109CFU/mL，可见植物乳杆菌WL02有较高的产酸能力及活力。在pH为3.0的人工胃液中存活率大于65.5％，在胆盐浓度为0.10％、0.30％、0.50％的MRS培养基中培养3h存活率分别大于73.3％、41.5％及10.6％。
所述植物乳杆菌WL02在MRS培养基中37℃发酵24h，发酵液中γ-氨基丁酸含量超过18mg/100mL；在脱脂牛乳基质培养基中37℃发酵24h后，发酵液中γ-氨基丁酸含量超过12mg/100mL；在优化后的MRS培养基中37℃发酵24h后，发酵液中γ-氨基丁酸含量大于190mg/100mL；在藜麦基质培养基中37℃发酵24h后，发酵液中γ-氨基丁酸含量大于350mg/100mL。
所述植物乳杆菌WL02在添加了5％的谷氨酸钠及0.2％的维生素B6的MRS培养基中，于37℃进行培养48-60h，再按照5％的接菌量接入藜麦培养基，于37℃进行培养48-60h，发酵液中γ-氨基丁酸含量501.86mg/100mL。
本发明提供了利用所述植物乳杆菌WL02制备GABA的方法，主要包括以下步骤：
(1)菌株活化：将植物乳杆菌WL02涂布于平板培养基上进行活化培养，
平板培养基配方为：蛋白胨10.0g，三水醋酸钠3.0g，牛肉膏8.0g，柠檬酸三铵2.0g，酵母浸膏4.0g，七水硫酸镁0.2g，葡萄糖10.0g，一水硫酸锰0.04g，吐温-80 1.0mL，磷酸氢二钾2.0g，琼脂15g，蒸馏水1000mL，调pH至6.4，
活化培养温度为37℃，培养时间为24～48h；
(2)发酵产GABA：将活化后的植物乳杆菌WL02转接到发酵培养基中培养，
发酵培养基配方为：蛋白胨10.0g，三水醋酸钠3.0g，牛肉膏8.0g，柠檬酸三铵2.0g，酵母浸膏4.0g，七水硫酸镁0.2g，葡萄糖10.0g，一水硫酸锰0.04g，吐温-80 1.0mL，磷酸氢二钾2.0g，L-谷氨酸钠50g，维生素B6 2g，蒸馏水1000mL，
发酵培养温度为37℃，培养时间为48-60h。
本发明还提供了利用所述植物乳杆菌WL02制备藜麦发酵饮料的方法，所述方法包括以下步骤：
(1)菌株活化：将植物乳杆菌WL02涂布于平板培养基上进行活化培养，
(2)扩大培养：从平板培养基上挑取菌株置于添加了5％的谷氨酸钠及0.2％的维生素B6的MRS液体培养基中，37℃培养12-24h；
(3)制备藜麦培养基
将藜麦原料，按照料水比为1:1.5，配置成藜麦质量分数为40％的藜麦培养基，再进行冷冲击前处理，所述冷冲击前处理的条件为：于30℃浸泡12h，-20℃冷冻藜麦24h，然后在30℃冻融24h；
(4)发酵藜麦
向藜麦培养基中按3％～5％(m/v，g/100mL)比例接种植物乳杆菌WL02，并于37℃，发酵48h-60h。
本发明还提供了使用植物乳杆菌WL02制备的功能补充剂，是将植物乳杆菌WL02于-40℃～-60℃冷冻，经干燥至含水量为3％～5％，再压碎成粉末状，可向粉末状植物乳杆菌WL02中加入奶粉、低聚糖、麦芽糊精或风味剂等制成粉末状或片状产品，用于日常食用。
[有益效果]
相比于现有其它植物乳杆菌，本发明植物乳杆菌WL02的GABA产量提高了100mg/mL左右。除此之外，本发明植物乳杆菌WL02还具有较强的抗氧化活性及抑菌的优势。
本发明利用植物乳杆菌WL02产GABA时，向培养基中添加L-谷氨酸钠、维生素有助于GABA含量的提高。
本发明制备藜麦发酵饮料时，对藜麦进行冷冲预处理，有助于提高藜麦中GAD酶活性，促进GABA合成能力。
本发明综合利用物理、发酵和不同底物添加优化，使菌株代谢利用添加物合成GABA，与原有菌株相比，其GABA合成能力显著提高。
生物材料保藏
植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)WL02，于2021年12月27日保藏于中国微生物菌种保藏中心，保藏编号为：CGMCC NO:24200，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
附图说明
图1为本发明植物乳杆菌WL02的16S rDNA PCR扩增产物电泳图。
图2本发明植物乳杆菌WL02的16S rDNA序列。
图3为在MRS液体培养基中不同植物乳杆菌产GABA含量图。
具体实施方式
相关培养基及试剂配方
平板培养基：蛋白胨10.0g，三水醋酸钠3.0g，牛肉膏8.0g，柠檬酸三铵2.0g，酵母浸膏4.0g，七水硫酸镁0.2g，葡萄糖10.0g，一水硫酸锰0.04g，吐温-80 1.0mL，磷酸氢二钾2.0g，琼脂15g，蒸馏水1000mL，调pH至6.4。
MRS培养基：蛋白胨10.0g，三水醋酸钠3.0g，牛肉膏8.0g，柠檬酸三铵2.0g，酵母浸膏4.0g，七水硫酸镁0.2g，葡萄糖10.0g，一水硫酸锰0.04g，吐温-80 1.0mL，磷酸氢二钾2.0g，蒸馏水1000mL。调pH至6.4，121℃灭菌15min，冷却备用。
发酵培养基(即优化后的MRS培养基)：蛋白胨10.0g，三水醋酸钠3.0g，牛肉膏8.0g，柠檬酸三铵2.0g，酵母浸膏4.0g，七水硫酸镁0.2g，葡萄糖10.0g，一水硫酸锰0.04g，吐温-80 1.0mL，磷酸氢二钾2.0g，L-谷氨酸钠50g，维生素B6 2g，蒸馏水1000mL。调pH至6.4，121℃灭菌15min，冷却备用。
藜麦基质培养基：将藜麦原料，按照料水比为1:1.5，配置成藜麦质量分数为40％的藜麦植物基培养基，再进行冷冲击前处理，冷冲击前处理的条件为：于30℃浸泡12h，于-20℃冷冻藜麦24h，然后在30℃冻融24h，用于接种培养。
未经冷冲击前处理过的藜麦培养基：将藜麦原料，按照料水比为1:1.5，配置成藜麦质量分数为40％的藜麦植物基培养基。
脱脂牛乳基质培养基：脱脂乳粉120g，蒸馏水1000mL。
实施例1植物乳杆菌WL02的分离与鉴定方法
1.乳酸菌的分离
该乳酸菌分离于广西长寿村长寿老人的肠道中，将采集的样品经梯度稀释后，分别接种于MRS固体培养基，M17固体培养基中，37℃培养48h，挑取平板上的典型菌落，划线分离培养得到纯菌落。挑取各平板上的纯菌落于MRS液体培养基中，37℃厌氧培养24h后，4℃冰箱冷藏备用或冻干保藏。
2.乳酸菌的产酸能力
取活化后乳酸菌株，按质量百分比为3％的比例接种到MRS液体培养基中，于37℃下培养24h，测定发酵液pH。结果表明，植物乳杆菌WL02在MRS基质中经过24h的发酵后发酵液pH值为3.76，表明该菌株具有良好的产酸能力。
3.乳酸菌的鉴定
16s rDNA序列测定进行菌株的鉴定：将制备的乳酸菌基因组DNA作为PCR扩增的模板，采用50μL反应体系进行PCR扩增。模板DNA 2uL，10mmol上下游引物各1.5μL，2×Taq酶25μL，以ddH2O补至50μL。PCR循环参数为：94℃预变性5min；94℃变性1min，64℃退火45s，72℃延伸1min，循环35次；72℃延伸8min。吸取PCR产物5μL与1mL Loading buffer混合，用1.0％琼脂糖凝胶电泳，电压为80V。电泳结束后用溴化乙锭EB染色20-30min，拍照，见图2。电泳检测扩增产物后，送至上海生工生物工程技术服务有限公司进行测序。将测序得到的序列与GenBank数据库中的序列进行比对分析，其结果显示菌株WL02与植物乳杆菌的同源性分别为99％。结果表明，本发明菌株WL02为植物乳杆菌。
4.筛选具有高产γ-氨基丁酸能力的乳酸菌
4.1发酵液的制备
(1)制备菌液
取菌种接种于MRS液体培养基中，于37℃培养12-24h。
(2)发酵产GABA
将供试菌液按3％的体积比加入到10mL的MRS培养基、发酵培养基、脱脂牛乳基质培养基或藜麦基质培养基中。在37℃的恒温培养箱中培养48-60h后，于4000rmp离心10min后取上清发酵液，过0.22μm水系滤膜后上机测定。
4.2发酵液中GABA的测定
4.2.1液相色谱分析条件
A相：8g结晶乙酸钠，PH 7.20，1000mL；B相：8g乙酸钠，PH 7.20，200mL；甲醇400mL；乙腈400mL。
衍生试剂：0.1g OPA，1mL乙腈，130μL巯基乙醇，0.4mol/L的硼酸缓冲液定容至10mL。
梯度洗脱程序见表A.1。
色谱柱：Aligent，(4.6nm*250nm，5μl)柱温40℃
柱温：40℃。
流速：1.0mL/min。
检测波长：338nm。
表A.1梯度洗脱表
| 时间/min | A/％ | B/％ | 流速/(mL/min) |
| 0 | 92 | 8 | 1.0 |
| 20 | 60 | 40 | 1.0 |
| 24 | 0 | 100 | 1.5 |
| 24.5 | 0 | 100 | 1.5 |
| 26.5 | 100 | 0 | 1.0 |
| 28 | 92 | 8 | 1.0 |
结果计算：
样品中GABA含量按下式计算：
X＝[(A1*m2/V2)/A2*m1/V1]*1000
式中：
X：样品中γ-氨基丁酸含量，mg/100g；
A1：样品中γ-氨基丁酸的峰面积；
m2：γ-氨基丁酸标准品的质量，g；
V：提取液定容后的体积，mL；
m1：样品的质量，g；
A2：γ-氨基丁酸标准品的峰面积
4.2.2标准溶液的处理
将γ-氨基丁酸标准品用超纯水配置成1mg/mL的标准储备溶液，用0.22μm滤膜过滤，收集滤液，于4℃冰箱内保存备用。取少量γ-氨基丁酸标准储备液稀释、定容配置成标准溶液，标准溶液浓度为0.5mg/mL，过0.22μm水系滤膜后上机测定，依次进样1、10、20、30、40、和50μL。根据峰面积和进样量制得标准回归方程。
4.2.3样品前处理
取1mL上述4.1中上清发酵液，过0.22μm水系膜后上机测定。
4.2.4数据处理
对本实验中18株乳酸菌产γ-氨基丁酸产量的比较，发现植物乳杆菌WL02产γ-氨基丁酸含量最高。在MRS培养基发酵液中检测到超18mg/100mL的γ-氨基丁酸，在脱脂牛乳基质培养基发酵液中检测到超12mg/100mL的γ-氨基丁酸，在发酵培养基发酵液中检测到190mg/100mL的γ-氨基丁酸，在藜麦基质培养基发酵液中检测到350mg/100mL的γ-氨基丁酸。
5.植物乳杆菌WL02耐酸耐胆盐能力测定
将植物乳杆菌WL02涂布于平板培养基上进行活化培养，再从平板培养基上挑取菌株置于MRS液体培养基中，37℃培养12-24h；
将植物乳杆菌菌株WL02培养物于10000×g离心5min收集菌体，并用PBS洗涤2次，用生理盐水将菌体重悬浮，取1mL菌悬液接种到9mL的pH3.0的模拟胃液中，震荡均匀，于37℃培养箱中进行培养，在0h和3h取样涂板，测定活菌数，计算其存活率；
将植物乳杆菌菌株WL02培养物于10000×g离心5min收集菌体，并用PBS洗涤2次，用生理盐水将菌体重悬浮，取1mL菌悬液接种到含有0％、0.1％、0.3％和0.5％(w/v)胆盐的MRS液体培养基中，37℃培养3h，在0h和3h取样涂板，测定活菌数，计算其存活率。
结果表明，植物乳杆菌WL02在pH为3.0的人工胃液中存活率大于65.5％，在胆盐浓度为0.10％、0.30％、0.50％的MRS培养基中培养3h存活率分别大于73.3％、41.5％及10.6％。
6.植物乳杆菌WL02抗氧化能力测定
(1)DPPH清除率测定
将植物乳杆菌WL02涂布于平板培养基上进行活化培养，再从平板培养基上挑取菌株置于MRS液体培养基中，37℃培养12-24h；将植物乳杆菌菌株WL02培养物于10000×g离心5min，取上清，作为样品。
准确量取0.5mL样品溶液添加到具塞试管中，再添加0.2mL DPPH溶液(0.2mmol/LDPPH溶于95％乙醇溶液)，混匀后，在40℃条件下避光反应20min，于波长517nm处测定吸光度，记为Ai；空白组：准确量取0.5ml样品溶液添加到具塞试管中，用0.2mL 95％乙醇溶液代替DPPH溶液，混匀后，在波长517nm处测定吸光度，记为Aj；对照组：在具塞试管中，分别添加2.0mL DPPH溶液，2mL 95％乙醇溶液，在波长517nm处测定吸光度，记为Ac。
以上实验组反应总体积为4mL，用95％乙醇溶液补足，DPPH自由基清除率按以下公式计算：清除率(％)：＝[1-(Ai-Aj)]/Ac*100
结果表明，该植物乳杆菌WL02的DPPH清除率达79.8％。
(2)还原能力测定
将植物乳杆菌WL02涂布于平板培养基上进行活化培养，再从平板培养基上挑取菌株置于MRS液体培养基中，37℃培养12-24h；将植物乳杆菌菌株WL02培养物于10000×g离心5min，取上清，作为样品。
取1.0mL样品于离心管中，再分别加入2.5mL 0.2mol/L的磷酸盐缓冲溶液(pH6.6)和1％铁氰化钾溶液，充分混匀，在50℃条件下水浴保温20min，快速冷却至室温，再加入2.5mL10％的三氯乙酸溶液，3500r/min条件下离心10min，准确吸取2.5ml上清液于具塞试管中，再依次添加2.5mL蒸馏水、0.5mL 0.1％三氯化铁溶液，充分混匀，在波长200nm处测定溶液的吸光度。以VC为对照样品。
结果表明，该植物乳杆菌WL02的还原能力达0.96，以VC还原能力(1.26)为对比。
以上结果表明，该植物乳杆菌具有较高的抗氧化活性。
7.植物乳杆菌WL02抑菌能力测定
将植物乳杆菌WL02接种于培养基中37℃培养24h，利用牛津杯法测定乳酸菌对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、枯草芽孢杆菌的抑菌能力。将大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、枯草芽孢杆菌的菌悬液涂布到LB培养基中，往牛津杯中加入200μL乳酸菌发酵液，恒温培养48h，观察抑菌圈。
结果表明，植物乳杆菌WL02对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、枯草芽孢杆菌具有较高的抑菌能力，抑菌圈直径分别为21.32mm，18.96mm，18.62mm，17.92mm。
实施例2含植物乳杆菌WL02的发酵藜麦饮料的制作方法
(1)菌株活化：将植物乳杆菌WL02涂布于平板培养基上进行活化培养，
(2)扩大培养：将植物乳杆菌WL02按5％的接菌量接种于优化后MRS培养基，于37℃培养24-48h。
(3)制备藜麦培养基
将藜麦原料，按照料水比为1:1.5，配置成40％的藜麦植物基培养基，再进行冷冲击前处理，冲击条件为：于30℃浸泡12h，-20℃冷冻藜麦24h，然后在30℃冻融24h，用于接种培养。
(4)发酵藜麦
将冷冲击之后的藜麦进行接菌处理，接菌量3％～5％，37℃发酵时间48h-60h。
发酵结束后，用杀菌冷却后的水，将藜麦发酵液稀释3～5倍，添加适量的甜味剂和酸味剂，制成可直接饮用的乳酸菌谷物饮料。该谷物饮料酸甜可口，风味良好，γ-氨基丁酸含量大于100mg/100mL。
实施例3含植物乳杆菌WL02的功能补充剂的制作方法
(1)菌株活化：将植物乳杆菌WL02涂布于平板培养基上进行活化培养，
(2)扩大培养：将植物乳杆菌WL02按5％的接菌量接种于优化后MRS培养基，于37℃培养24-48h。
(3)冻干复配
将植物乳杆菌WL02冷冻至-40℃～-60℃，经干燥，至含水量为3％～5％，压碎成粉末状，可将粉末状产品加入奶粉、低聚糖、麦芽糊精、风味剂等制成粉末状或片状产品，用于日常食用。
对比例1L-谷氨酸钠、维生素的添加策略对GABA产量的影响
(1)将植物乳杆菌WL02涂布于平板培养基上进行活化培养，将活化后的植物乳杆菌WL02按5％的接菌量接种于添加了谷氨酸钠的MRS培养基中，于37℃培养48-60h，所述谷氨酸钠的MRS培养基中分别添加3％、4％、5％、6％、7％、8％的谷氨酸钠。培养结束后，离心收取上清液，用0.45μm滤膜过滤，检测得到添加5％的谷氨酸钠时GABA含量最高，为150.65mg/100mL。
(2)将植物乳杆菌WL02涂布于平板培养基上进行活化培养，将活化后的植物乳杆菌WL02按5％的接菌量接种于添加了维生素B6的MRS培养基中，于37℃培养48-60h，添加了维生素B6的MRS培养基中分别添加0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％的维生素B6。培养结束后，离心收取上清液，用0.45μm滤膜过滤，检测得到添加0.2％的维生素B6时，GABA含量最高，为140.81mg/100mL。
(3)将植物乳杆菌WL02涂布于平板培养基上进行活化培养，将活化后的植物乳杆菌WL02按5％的接菌量接种于添加了5％的谷氨酸钠及0.2％的维生素B6的MRS培养基中，于37℃进行培养48-60h。离心收取上清液0.45μm过滤，检测GABA含量190.53mg/100mL。
(4)将植物乳杆菌WL02涂布于平板培养基上进行活化培养，将活化后的植物乳杆菌WL02按5％的接菌量接种于添加了5％的谷氨酸钠及0.2％的维生素B6的MRS培养基中，于37℃进行培养48-60h。按照5％的接菌量接入藜麦培养基，于37℃进行培养48-60h。离心收取上清液0.45μm过滤，检测得到GABA含量501.86mg/100mL。
对比例2藜麦预处理策略对GABA产量的影响
(1)将植物乳杆菌WL02涂布于平板培养基上进行活化培养，将活化后的植物乳杆菌WL02按5％的接菌量接种于MRS培养基中，于37℃培养48-60h，按照5％的接菌量接入未经冷冲击前处理过的藜麦培养基中，于37℃进行培养48-60h。离心收取上清液0.45μm过滤，检测得到GABA含量为15mg/100mL。
(2)将植物乳杆菌WL02涂布于平板培养基上进行活化培养，将活化后的植物乳杆菌WL02按5％的接菌量接种于MRS培养基中，于37℃培养48-60h，按照5％的接菌量接入藜麦培养基，于37℃进行培养48-60h。离心收取上清液0.45μm过滤，检测GABA得到含量125.36mg/100mL。
(3)将植物乳杆菌WL02涂布于平板培养基上进行活化培养，将活化后的植物乳杆菌WL02按5％的接菌量接种于添加了5％的谷氨酸钠的MRS培养基中，于37℃培养48-60h，按照5％的接菌量接入藜麦培养基，于37℃进行培养48-60h。离心收取上清液0.45μm过滤，检测GABA含量210.62mg/100mL。
(4)将植物乳杆菌WL02涂布于平板培养基上进行活化培养，将活化后的植物乳杆菌WL02按5％的接菌量接种于添加了0.2％的维生素B6的MRS培养基中，于37℃培养48-60h，按照5％的接菌量接入藜麦培养基，于37℃进行培养48-60h。离心收取上清液0.45μm过滤，检测GABA含量195.29mg/100mL。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
Claims (10)
1.高产γ-氨基丁酸的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)WL02，于2021年12月27日保藏于中国微生物菌种保藏中心，保藏编号为：CGMCC NO:24200，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
2.权利要求1所述植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)WL02在制备谷物饮料中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述谷物是藜麦。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：
(1)菌株活化：将植物乳杆菌WL02涂布于平板培养基上进行活化培养，
(2)扩大培养：从平板培养基上挑取菌株置于添加了5％的谷氨酸钠及0.2％的维生素B6的MRS液体培养基中，于37℃培养12-24h；
(3)制备藜麦培养基
将藜麦原料，按照料水比为1:1.5，配置成40％的藜麦培养基，再进行冷冲击前处理，所述冷冲击前处理的条件为：于30℃用水浸泡12h，于-20℃冷冻24h，然后于30℃冻融24h；用于接种培养；
(4)发酵藜麦
向藜麦培养基中按3％～4％比例接种植物乳杆菌WL02，并于37℃，发酵48-60h。
5.利用权利要求1所述植物乳杆菌WL02制备GABA的方法，其特征在于，主要包括以下步骤：
(1)菌株活化：将植物乳杆菌WL02涂布于平板培养基上进行活化培养，
(2)发酵产GABA：将活化后的植物乳杆菌WL02转接到发酵培养基中培养，
所述发酵培养基配方为：蛋白胨10.0g，三水醋酸钠3.0g，牛肉膏8.0g，柠檬酸三铵2.0g，酵母浸膏4.0g，七水硫酸镁0.2g，葡萄糖10.0g，一水硫酸锰0.04g，吐温-80 1.0mL，磷酸氢二钾2.0g，L-谷氨酸钠50g，维生素B6 2g，蒸馏水1000mL，
发酵培养温度为37℃，培养时间为48-60h。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述平板培养基配方为：蛋白胨10.0g，三水醋酸钠3.0g，牛肉膏8.0g，柠檬酸三铵2.0g，酵母浸膏4.0g，七水硫酸镁0.2g，葡萄糖10.0g，一水硫酸锰0.04g，吐温-80 1.0mL，磷酸氢二钾2.0g，琼脂15g，蒸馏水1000mL，调pH至6.4，
活化培养温度为37℃，培养时间为24～48h。
7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，将发酵培养基替换为脱脂牛乳基质培养基，脱脂牛乳基质培养基配方为脱脂乳粉120g、蒸馏水1000mL。
8.权利要求1所述植物乳杆菌WL02在制备微生物制剂中的应用。
9.使用权利要求1所述植物乳杆菌WL02制备的功能补充剂的方法，其特征在于，是将植物乳杆菌WL02于-40℃～-60℃冷冻，经干燥至含水量为3％～5％，再压碎成粉末状，可向粉末状植物乳杆菌WL02中加入奶粉、低聚糖、麦芽糊精或风味剂等制成粉末状或片状产品，用于日常食用。
10.含有权利要求1所述植物乳杆菌WL02的微生物制剂或功能补充剂。
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