CN115521889A - 一株产γ-氨基丁酸的植物乳杆菌WL02及其用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一株高产γ‑氨基丁酸的植物乳杆菌WL02及其用途,属于生物技术领域。所述菌株为植物乳杆菌Lactobacillus plantarum WL02,该菌株于2021年12月27日保藏于中国微生物菌种保藏中心,保藏编号为:CGMCC NO:24200。通过优化培养基与发酵条件,经高效液相色谱法测定发酵液中γ‑氨基丁酸的含量,筛选出具有高产γ‑氨基丁酸能力和较高产酸能力及活力的乳酸菌;经16rDNA测序分析将筛选出的菌株WL02鉴定为植物乳杆菌。本发明的菌株的耐酸耐胆盐能力较强,可用于制作富含γ‑氨基丁酸的功能食品。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域,特别涉及一株产γ-氨基丁酸的植物乳杆菌WL02及其用途。
背景技术
γ-氨基丁酸,是一种广泛分布于自然界的非蛋白质氨基酸。GABA具有抗疲劳、降血压、改善睡眠以及提高人体记忆力等生理功能,是一种兼具药理作用和保健功能的新型功能因子,现已被国家卫生部批准为“新资源食品”,可用于乳制品、饮料和焙烤等食品中,在食品领域具有良好的应用前景。
乳酸菌作为公认的安全微生物,具有合成γ-氨基丁酸的能力。生物合成的γ-氨基丁酸具有安全性、经济性等优点,因此,使乳酸菌发酵食品成为人们日常γ-氨基丁酸营养强化的补充剂可进一步为人类健康事业添砖加瓦。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有乳酸菌发酵获得γ-氨基丁酸含量较低的不足和缺陷,提供一种高产γ-氨基丁酸的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)WL02并用于制备富含γ-氨基丁酸的谷物饮料。
所述高产γ-氨基丁酸的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)WL02,于2021年12月27日保藏于中国微生物菌种保藏中心,保藏编号为:CGMCC NO:24200。
所述植物乳杆菌WL02是从广西长寿村人群肠道中分离所得,可利用常见的用于培养乳酸菌的培养基培养,例如MRS培养基。
所述植物乳杆菌WL02在MRS培养基或脱脂牛乳基质培养基中37℃发酵24h后,发酵液的pH值分别为3.70和3.83,活菌数大于109CFU/mL,可见植物乳杆菌WL02有较高的产酸能力及活力。在pH为3.0的人工胃液中存活率大于65.5%,在胆盐浓度为0.10%、0.30%、0.50%的MRS培养基中培养3h存活率分别大于73.3%、41.5%及10.6%。
所述植物乳杆菌WL02在MRS培养基中37℃发酵24h,发酵液中γ-氨基丁酸含量超过18mg/100mL;在脱脂牛乳基质培养基中37℃发酵24h后,发酵液中γ-氨基丁酸含量超过12mg/100mL;在优化后的MRS培养基中37℃发酵24h后,发酵液中γ-氨基丁酸含量大于190mg/100mL;在藜麦基质培养基中37℃发酵24h后,发酵液中γ-氨基丁酸含量大于350mg/100mL。
所述植物乳杆菌WL02在添加了5%的谷氨酸钠及0.2%的维生素B6的MRS培养基中,于37℃进行培养48-60h,再按照5%的接菌量接入藜麦培养基,于37℃进行培养48-60h,发酵液中γ-氨基丁酸含量501.86mg/100mL。
本发明提供了利用所述植物乳杆菌WL02制备GABA的方法,主要包括以下步骤:
(1)菌株活化:将植物乳杆菌WL02涂布于平板培养基上进行活化培养,
平板培养基配方为:蛋白胨10.0g,三水醋酸钠3.0g,牛肉膏8.0g,柠檬酸三铵2.0g,酵母浸膏4.0g,七水硫酸镁0.2g,葡萄糖10.0g,一水硫酸锰0.04g,吐温-80 1.0mL,磷酸氢二钾2.0g,琼脂15g,蒸馏水1000mL,调pH至6.4,
活化培养温度为37℃,培养时间为24~48h;
(2)发酵产GABA:将活化后的植物乳杆菌WL02转接到发酵培养基中培养,
发酵培养基配方为:蛋白胨10.0g,三水醋酸钠3.0g,牛肉膏8.0g,柠檬酸三铵2.0g,酵母浸膏4.0g,七水硫酸镁0.2g,葡萄糖10.0g,一水硫酸锰0.04g,吐温-80 1.0mL,磷酸氢二钾2.0g,L-谷氨酸钠50g,维生素B6 2g,蒸馏水1000mL,
发酵培养温度为37℃,培养时间为48-60h。
本发明还提供了利用所述植物乳杆菌WL02制备藜麦发酵饮料的方法,所述方法包括以下步骤:
(1)菌株活化:将植物乳杆菌WL02涂布于平板培养基上进行活化培养,
(2)扩大培养:从平板培养基上挑取菌株置于添加了5%的谷氨酸钠及0.2%的维生素B6的MRS液体培养基中,37℃培养12-24h;
(3)制备藜麦培养基
将藜麦原料,按照料水比为1:1.5,配置成藜麦质量分数为40%的藜麦培养基,再进行冷冲击前处理,所述冷冲击前处理的条件为:于30℃浸泡12h,-20℃冷冻藜麦24h,然后在30℃冻融24h;
(4)发酵藜麦
向藜麦培养基中按3%~5%(m/v,g/100mL)比例接种植物乳杆菌WL02,并于37℃,发酵48h-60h。
本发明还提供了使用植物乳杆菌WL02制备的功能补充剂,是将植物乳杆菌WL02于-40℃~-60℃冷冻,经干燥至含水量为3%~5%,再压碎成粉末状,可向粉末状植物乳杆菌WL02中加入奶粉、低聚糖、麦芽糊精或风味剂等制成粉末状或片状产品,用于日常食用。
[有益效果]
相比于现有其它植物乳杆菌,本发明植物乳杆菌WL02的GABA产量提高了100mg/mL左右。除此之外,本发明植物乳杆菌WL02还具有较强的抗氧化活性及抑菌的优势。
本发明利用植物乳杆菌WL02产GABA时,向培养基中添加L-谷氨酸钠、维生素有助于GABA含量的提高。
本发明制备藜麦发酵饮料时,对藜麦进行冷冲预处理,有助于提高藜麦中GAD酶活性,促进GABA合成能力。
本发明综合利用物理、发酵和不同底物添加优化,使菌株代谢利用添加物合成GABA,与原有菌株相比,其GABA合成能力显著提高。
生物材料保藏
植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)WL02,于2021年12月27日保藏于中国微生物菌种保藏中心,保藏编号为:CGMCC NO:24200,保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
附图说明
图1为本发明植物乳杆菌WL02的16S rDNA PCR扩增产物电泳图。
图2本发明植物乳杆菌WL02的16S rDNA序列。
图3为在MRS液体培养基中不同植物乳杆菌产GABA含量图。
具体实施方式
相关培养基及试剂配方
平板培养基:蛋白胨10.0g,三水醋酸钠3.0g,牛肉膏8.0g,柠檬酸三铵2.0g,酵母浸膏4.0g,七水硫酸镁0.2g,葡萄糖10.0g,一水硫酸锰0.04g,吐温-80 1.0mL,磷酸氢二钾2.0g,琼脂15g,蒸馏水1000mL,调pH至6.4。
MRS培养基:蛋白胨10.0g,三水醋酸钠3.0g,牛肉膏8.0g,柠檬酸三铵2.0g,酵母浸膏4.0g,七水硫酸镁0.2g,葡萄糖10.0g,一水硫酸锰0.04g,吐温-80 1.0mL,磷酸氢二钾2.0g,蒸馏水1000mL。调pH至6.4,121℃灭菌15min,冷却备用。
发酵培养基(即优化后的MRS培养基):蛋白胨10.0g,三水醋酸钠3.0g,牛肉膏8.0g,柠檬酸三铵2.0g,酵母浸膏4.0g,七水硫酸镁0.2g,葡萄糖10.0g,一水硫酸锰0.04g,吐温-80 1.0mL,磷酸氢二钾2.0g,L-谷氨酸钠50g,维生素B6 2g,蒸馏水1000mL。调pH至6.4,121℃灭菌15min,冷却备用。
藜麦基质培养基:将藜麦原料,按照料水比为1:1.5,配置成藜麦质量分数为40%的藜麦植物基培养基,再进行冷冲击前处理,冷冲击前处理的条件为:于30℃浸泡12h,于-20℃冷冻藜麦24h,然后在30℃冻融24h,用于接种培养。
未经冷冲击前处理过的藜麦培养基:将藜麦原料,按照料水比为1:1.5,配置成藜麦质量分数为40%的藜麦植物基培养基。
脱脂牛乳基质培养基:脱脂乳粉120g,蒸馏水1000mL。
实施例1植物乳杆菌WL02的分离与鉴定方法
1.乳酸菌的分离
该乳酸菌分离于广西长寿村长寿老人的肠道中,将采集的样品经梯度稀释后,分别接种于MRS固体培养基,M17固体培养基中,37℃培养48h,挑取平板上的典型菌落,划线分离培养得到纯菌落。挑取各平板上的纯菌落于MRS液体培养基中,37℃厌氧培养24h后,4℃冰箱冷藏备用或冻干保藏。
2.乳酸菌的产酸能力
取活化后乳酸菌株,按质量百分比为3%的比例接种到MRS液体培养基中,于37℃下培养24h,测定发酵液pH。结果表明,植物乳杆菌WL02在MRS基质中经过24h的发酵后发酵液pH值为3.76,表明该菌株具有良好的产酸能力。
3.乳酸菌的鉴定
16s rDNA序列测定进行菌株的鉴定:将制备的乳酸菌基因组DNA作为PCR扩增的模板,采用50μL反应体系进行PCR扩增。模板DNA 2uL,10mmol上下游引物各1.5μL,2×Taq酶25μL,以ddH2O补至50μL。PCR循环参数为:94℃预变性5min;94℃变性1min,64℃退火45s,72℃延伸1min,循环35次;72℃延伸8min。吸取PCR产物5μL与1mL Loading buffer混合,用1.0%琼脂糖凝胶电泳,电压为80V。电泳结束后用溴化乙锭EB染色20-30min,拍照,见图2。电泳检测扩增产物后,送至上海生工生物工程技术服务有限公司进行测序。将测序得到的序列与GenBank数据库中的序列进行比对分析,其结果显示菌株WL02与植物乳杆菌的同源性分别为99%。结果表明,本发明菌株WL02为植物乳杆菌。
4.筛选具有高产γ-氨基丁酸能力的乳酸菌
4.1发酵液的制备
(1)制备菌液
取菌种接种于MRS液体培养基中,于37℃培养12-24h。
(2)发酵产GABA
将供试菌液按3%的体积比加入到10mL的MRS培养基、发酵培养基、脱脂牛乳基质培养基或藜麦基质培养基中。在37℃的恒温培养箱中培养48-60h后,于4000rmp离心10min后取上清发酵液,过0.22μm水系滤膜后上机测定。
4.2发酵液中GABA的测定
4.2.1液相色谱分析条件
A相:8g结晶乙酸钠,PH 7.20,1000mL;B相:8g乙酸钠,PH 7.20,200mL;甲醇400mL;乙腈400mL。
衍生试剂:0.1g OPA,1mL乙腈,130μL巯基乙醇,0.4mol/L的硼酸缓冲液定容至10mL。
梯度洗脱程序见表A.1。
色谱柱:Aligent,(4.6nm*250nm,5μl)柱温40℃
柱温:40℃。
流速:1.0mL/min。
检测波长:338nm。
表A.1梯度洗脱表
时间/min | A/% | B/% | 流速/(mL/min) |
0 | 92 | 8 | 1.0 |
20 | 60 | 40 | 1.0 |
24 | 0 | 100 | 1.5 |
24.5 | 0 | 100 | 1.5 |
26.5 | 100 | 0 | 1.0 |
28 | 92 | 8 | 1.0 |
结果计算:
样品中GABA含量按下式计算:
X=[(A1*m2/V2)/A2*m1/V1]*1000
式中:
X:样品中γ-氨基丁酸含量,mg/100g;
A1:样品中γ-氨基丁酸的峰面积;
m2:γ-氨基丁酸标准品的质量,g;
V:提取液定容后的体积,mL;
m1:样品的质量,g;
A2:γ-氨基丁酸标准品的峰面积
4.2.2标准溶液的处理
将γ-氨基丁酸标准品用超纯水配置成1mg/mL的标准储备溶液,用0.22μm滤膜过滤,收集滤液,于4℃冰箱内保存备用。取少量γ-氨基丁酸标准储备液稀释、定容配置成标准溶液,标准溶液浓度为0.5mg/mL,过0.22μm水系滤膜后上机测定,依次进样1、10、20、30、40、和50μL。根据峰面积和进样量制得标准回归方程。
4.2.3样品前处理
取1mL上述4.1中上清发酵液,过0.22μm水系膜后上机测定。
4.2.4数据处理
对本实验中18株乳酸菌产γ-氨基丁酸产量的比较,发现植物乳杆菌WL02产γ-氨基丁酸含量最高。在MRS培养基发酵液中检测到超18mg/100mL的γ-氨基丁酸,在脱脂牛乳基质培养基发酵液中检测到超12mg/100mL的γ-氨基丁酸,在发酵培养基发酵液中检测到190mg/100mL的γ-氨基丁酸,在藜麦基质培养基发酵液中检测到350mg/100mL的γ-氨基丁酸。
5.植物乳杆菌WL02耐酸耐胆盐能力测定
将植物乳杆菌WL02涂布于平板培养基上进行活化培养,再从平板培养基上挑取菌株置于MRS液体培养基中,37℃培养12-24h;
将植物乳杆菌菌株WL02培养物于10000×g离心5min收集菌体,并用PBS洗涤2次,用生理盐水将菌体重悬浮,取1mL菌悬液接种到9mL的pH3.0的模拟胃液中,震荡均匀,于37℃培养箱中进行培养,在0h和3h取样涂板,测定活菌数,计算其存活率;
将植物乳杆菌菌株WL02培养物于10000×g离心5min收集菌体,并用PBS洗涤2次,用生理盐水将菌体重悬浮,取1mL菌悬液接种到含有0%、0.1%、0.3%和0.5%(w/v)胆盐的MRS液体培养基中,37℃培养3h,在0h和3h取样涂板,测定活菌数,计算其存活率。
结果表明,植物乳杆菌WL02在pH为3.0的人工胃液中存活率大于65.5%,在胆盐浓度为0.10%、0.30%、0.50%的MRS培养基中培养3h存活率分别大于73.3%、41.5%及10.6%。
6.植物乳杆菌WL02抗氧化能力测定
(1)DPPH清除率测定
将植物乳杆菌WL02涂布于平板培养基上进行活化培养,再从平板培养基上挑取菌株置于MRS液体培养基中,37℃培养12-24h;将植物乳杆菌菌株WL02培养物于10000×g离心5min,取上清,作为样品。
准确量取0.5mL样品溶液添加到具塞试管中,再添加0.2mL DPPH溶液(0.2mmol/LDPPH溶于95%乙醇溶液),混匀后,在40℃条件下避光反应20min,于波长517nm处测定吸光度,记为Ai;空白组:准确量取0.5ml样品溶液添加到具塞试管中,用0.2mL 95%乙醇溶液代替DPPH溶液,混匀后,在波长517nm处测定吸光度,记为Aj;对照组:在具塞试管中,分别添加2.0mL DPPH溶液,2mL 95%乙醇溶液,在波长517nm处测定吸光度,记为Ac。
以上实验组反应总体积为4mL,用95%乙醇溶液补足,DPPH自由基清除率按以下公式计算:清除率(%):=[1-(Ai-Aj)]/Ac*100
结果表明,该植物乳杆菌WL02的DPPH清除率达79.8%。
(2)还原能力测定
将植物乳杆菌WL02涂布于平板培养基上进行活化培养,再从平板培养基上挑取菌株置于MRS液体培养基中,37℃培养12-24h;将植物乳杆菌菌株WL02培养物于10000×g离心5min,取上清,作为样品。
取1.0mL样品于离心管中,再分别加入2.5mL 0.2mol/L的磷酸盐缓冲溶液(pH6.6)和1%铁氰化钾溶液,充分混匀,在50℃条件下水浴保温20min,快速冷却至室温,再加入2.5mL10%的三氯乙酸溶液,3500r/min条件下离心10min,准确吸取2.5ml上清液于具塞试管中,再依次添加2.5mL蒸馏水、0.5mL 0.1%三氯化铁溶液,充分混匀,在波长200nm处测定溶液的吸光度。以VC为对照样品。
结果表明,该植物乳杆菌WL02的还原能力达0.96,以VC还原能力(1.26)为对比。
以上结果表明,该植物乳杆菌具有较高的抗氧化活性。
7.植物乳杆菌WL02抑菌能力测定
将植物乳杆菌WL02接种于培养基中37℃培养24h,利用牛津杯法测定乳酸菌对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、枯草芽孢杆菌的抑菌能力。将大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、枯草芽孢杆菌的菌悬液涂布到LB培养基中,往牛津杯中加入200μL乳酸菌发酵液,恒温培养48h,观察抑菌圈。
结果表明,植物乳杆菌WL02对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、枯草芽孢杆菌具有较高的抑菌能力,抑菌圈直径分别为21.32mm,18.96mm,18.62mm,17.92mm。
实施例2含植物乳杆菌WL02的发酵藜麦饮料的制作方法
(1)菌株活化:将植物乳杆菌WL02涂布于平板培养基上进行活化培养,
(2)扩大培养:将植物乳杆菌WL02按5%的接菌量接种于优化后MRS培养基,于37℃培养24-48h。
(3)制备藜麦培养基
将藜麦原料,按照料水比为1:1.5,配置成40%的藜麦植物基培养基,再进行冷冲击前处理,冲击条件为:于30℃浸泡12h,-20℃冷冻藜麦24h,然后在30℃冻融24h,用于接种培养。
(4)发酵藜麦
将冷冲击之后的藜麦进行接菌处理,接菌量3%~5%,37℃发酵时间48h-60h。
发酵结束后,用杀菌冷却后的水,将藜麦发酵液稀释3~5倍,添加适量的甜味剂和酸味剂,制成可直接饮用的乳酸菌谷物饮料。该谷物饮料酸甜可口,风味良好,γ-氨基丁酸含量大于100mg/100mL。
实施例3含植物乳杆菌WL02的功能补充剂的制作方法
(1)菌株活化:将植物乳杆菌WL02涂布于平板培养基上进行活化培养,
(2)扩大培养:将植物乳杆菌WL02按5%的接菌量接种于优化后MRS培养基,于37℃培养24-48h。
(3)冻干复配
将植物乳杆菌WL02冷冻至-40℃~-60℃,经干燥,至含水量为3%~5%,压碎成粉末状,可将粉末状产品加入奶粉、低聚糖、麦芽糊精、风味剂等制成粉末状或片状产品,用于日常食用。
对比例1L-谷氨酸钠、维生素的添加策略对GABA产量的影响
(1)将植物乳杆菌WL02涂布于平板培养基上进行活化培养,将活化后的植物乳杆菌WL02按5%的接菌量接种于添加了谷氨酸钠的MRS培养基中,于37℃培养48-60h,所述谷氨酸钠的MRS培养基中分别添加3%、4%、5%、6%、7%、8%的谷氨酸钠。培养结束后,离心收取上清液,用0.45μm滤膜过滤,检测得到添加5%的谷氨酸钠时GABA含量最高,为150.65mg/100mL。
(2)将植物乳杆菌WL02涂布于平板培养基上进行活化培养,将活化后的植物乳杆菌WL02按5%的接菌量接种于添加了维生素B6的MRS培养基中,于37℃培养48-60h,添加了维生素B6的MRS培养基中分别添加0.1%、0.2%、0.3%、0.4%、0.5%的维生素B6。培养结束后,离心收取上清液,用0.45μm滤膜过滤,检测得到添加0.2%的维生素B6时,GABA含量最高,为140.81mg/100mL。
(3)将植物乳杆菌WL02涂布于平板培养基上进行活化培养,将活化后的植物乳杆菌WL02按5%的接菌量接种于添加了5%的谷氨酸钠及0.2%的维生素B6的MRS培养基中,于37℃进行培养48-60h。离心收取上清液0.45μm过滤,检测GABA含量190.53mg/100mL。
(4)将植物乳杆菌WL02涂布于平板培养基上进行活化培养,将活化后的植物乳杆菌WL02按5%的接菌量接种于添加了5%的谷氨酸钠及0.2%的维生素B6的MRS培养基中,于37℃进行培养48-60h。按照5%的接菌量接入藜麦培养基,于37℃进行培养48-60h。离心收取上清液0.45μm过滤,检测得到GABA含量501.86mg/100mL。
对比例2藜麦预处理策略对GABA产量的影响
(1)将植物乳杆菌WL02涂布于平板培养基上进行活化培养,将活化后的植物乳杆菌WL02按5%的接菌量接种于MRS培养基中,于37℃培养48-60h,按照5%的接菌量接入未经冷冲击前处理过的藜麦培养基中,于37℃进行培养48-60h。离心收取上清液0.45μm过滤,检测得到GABA含量为15mg/100mL。
(2)将植物乳杆菌WL02涂布于平板培养基上进行活化培养,将活化后的植物乳杆菌WL02按5%的接菌量接种于MRS培养基中,于37℃培养48-60h,按照5%的接菌量接入藜麦培养基,于37℃进行培养48-60h。离心收取上清液0.45μm过滤,检测GABA得到含量125.36mg/100mL。
(3)将植物乳杆菌WL02涂布于平板培养基上进行活化培养,将活化后的植物乳杆菌WL02按5%的接菌量接种于添加了5%的谷氨酸钠的MRS培养基中,于37℃培养48-60h,按照5%的接菌量接入藜麦培养基,于37℃进行培养48-60h。离心收取上清液0.45μm过滤,检测GABA含量210.62mg/100mL。
(4)将植物乳杆菌WL02涂布于平板培养基上进行活化培养,将活化后的植物乳杆菌WL02按5%的接菌量接种于添加了0.2%的维生素B6的MRS培养基中,于37℃培养48-60h,按照5%的接菌量接入藜麦培养基,于37℃进行培养48-60h。离心收取上清液0.45μm过滤,检测GABA含量195.29mg/100mL。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上,但其并非用以限定本发明,任何熟悉此技术的人,在不脱离本发明的精神和范围内,都可做各种的改动与修饰,因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
Claims (10)
1.高产γ-氨基丁酸的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)WL02,于2021年12月27日保藏于中国微生物菌种保藏中心,保藏编号为:CGMCC NO:24200,保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
2.权利要求1所述植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)WL02在制备谷物饮料中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用,其特征在于,所述谷物是藜麦。
4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,包括以下步骤:
(1)菌株活化:将植物乳杆菌WL02涂布于平板培养基上进行活化培养,
(2)扩大培养:从平板培养基上挑取菌株置于添加了5%的谷氨酸钠及0.2%的维生素B6的MRS液体培养基中,于37℃培养12-24h;
(3)制备藜麦培养基
将藜麦原料,按照料水比为1:1.5,配置成40%的藜麦培养基,再进行冷冲击前处理,所述冷冲击前处理的条件为:于30℃用水浸泡12h,于-20℃冷冻24h,然后于30℃冻融24h;用于接种培养;
(4)发酵藜麦
向藜麦培养基中按3%~4%比例接种植物乳杆菌WL02,并于37℃,发酵48-60h。
5.利用权利要求1所述植物乳杆菌WL02制备GABA的方法,其特征在于,主要包括以下步骤:
(1)菌株活化:将植物乳杆菌WL02涂布于平板培养基上进行活化培养,
(2)发酵产GABA:将活化后的植物乳杆菌WL02转接到发酵培养基中培养,
所述发酵培养基配方为:蛋白胨10.0g,三水醋酸钠3.0g,牛肉膏8.0g,柠檬酸三铵2.0g,酵母浸膏4.0g,七水硫酸镁0.2g,葡萄糖10.0g,一水硫酸锰0.04g,吐温-80 1.0mL,磷酸氢二钾2.0g,L-谷氨酸钠50g,维生素B6 2g,蒸馏水1000mL,
发酵培养温度为37℃,培养时间为48-60h。
6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,所述平板培养基配方为:蛋白胨10.0g,三水醋酸钠3.0g,牛肉膏8.0g,柠檬酸三铵2.0g,酵母浸膏4.0g,七水硫酸镁0.2g,葡萄糖10.0g,一水硫酸锰0.04g,吐温-80 1.0mL,磷酸氢二钾2.0g,琼脂15g,蒸馏水1000mL,调pH至6.4,
活化培养温度为37℃,培养时间为24~48h。
7.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,将发酵培养基替换为脱脂牛乳基质培养基,脱脂牛乳基质培养基配方为脱脂乳粉120g、蒸馏水1000mL。
8.权利要求1所述植物乳杆菌WL02在制备微生物制剂中的应用。
9.使用权利要求1所述植物乳杆菌WL02制备的功能补充剂的方法,其特征在于,是将植物乳杆菌WL02于-40℃~-60℃冷冻,经干燥至含水量为3%~5%,再压碎成粉末状,可向粉末状植物乳杆菌WL02中加入奶粉、低聚糖、麦芽糊精或风味剂等制成粉末状或片状产品,用于日常食用。
10.含有权利要求1所述植物乳杆菌WL02的微生物制剂或功能补充剂。
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