CN115491398B - 一种红景天中分离得到红景天苷的方法 - Google Patents
一种红景天中分离得到红景天苷的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115491398B CN115491398B CN202211363409.0A CN202211363409A CN115491398B CN 115491398 B CN115491398 B CN 115491398B CN 202211363409 A CN202211363409 A CN 202211363409A CN 115491398 B CN115491398 B CN 115491398B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- salidroside
- tyrosol
- eluent
- glucosidase
- beta
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- ILRCGYURZSFMEG-UHFFFAOYSA-N Salidroside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCCC1=CC=C(O)C=C1 ILRCGYURZSFMEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 160
- ILRCGYURZSFMEG-RQICVUQASA-N salidroside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)OC1OCCC1=CC=C(O)C=C1 ILRCGYURZSFMEG-RQICVUQASA-N 0.000 title claims abstract description 160
- 244000042430 Rhodiola rosea Species 0.000 title claims abstract description 77
- 235000003713 Rhodiola rosea Nutrition 0.000 title claims abstract description 77
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 61
- YCCILVSKPBXVIP-UHFFFAOYSA-N 2-(4-hydroxyphenyl)ethanol Chemical compound OCCC1=CC=C(O)C=C1 YCCILVSKPBXVIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 216
- DBLDQZASZZMNSL-QMMMGPOBSA-N L-tyrosinol Natural products OC[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 DBLDQZASZZMNSL-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims abstract description 108
- 235000004330 tyrosol Nutrition 0.000 claims abstract description 108
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 106
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims abstract description 86
- 102000006995 beta-Glucosidase Human genes 0.000 claims abstract description 70
- 108010047754 beta-Glucosidase Proteins 0.000 claims abstract description 70
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 67
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 claims abstract description 21
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 claims abstract description 21
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract description 20
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims abstract description 20
- -1 1-vinyl-3-butyl imidazole thiocyanate Chemical compound 0.000 claims abstract description 17
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims abstract description 16
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims abstract description 12
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims abstract description 12
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims abstract description 11
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 claims abstract description 6
- 238000002386 leaching Methods 0.000 claims abstract description 4
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 32
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 claims description 28
- 239000008107 starch Substances 0.000 claims description 28
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 claims description 28
- 229920000881 Modified starch Polymers 0.000 claims description 22
- 239000004368 Modified starch Substances 0.000 claims description 22
- 235000019426 modified starch Nutrition 0.000 claims description 22
- CFOAUYCPAUGDFF-UHFFFAOYSA-N tosmic Chemical compound CC1=CC=C(S(=O)(=O)C[N+]#[C-])C=C1 CFOAUYCPAUGDFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 20
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 17
- 241001165494 Rhodiola Species 0.000 claims description 16
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 16
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 claims description 15
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims description 15
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 13
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 13
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 13
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 11
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 claims description 11
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 claims description 11
- 239000001814 pectin Substances 0.000 claims description 11
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 10
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 10
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 claims description 8
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 claims description 8
- WGLUMOCWFMKWIL-UHFFFAOYSA-N dichloromethane;methanol Chemical compound OC.ClCCl WGLUMOCWFMKWIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 5
- 238000007873 sieving Methods 0.000 claims description 5
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 5
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 claims 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 abstract description 20
- TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N oxo(oxoalumanyloxy)alumane Chemical compound O=[Al]O[Al]=O TWNQGVIAIRXVLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 26
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 25
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 25
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 21
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 19
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 9
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 9
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 9
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 8
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 7
- 238000007711 solidification Methods 0.000 description 7
- 230000008023 solidification Effects 0.000 description 7
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 6
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 6
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 5
- 239000002608 ionic liquid Substances 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 3
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 3
- 229920001592 potato starch Polymers 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 3
- WRMNZCZEMHIOCP-UHFFFAOYSA-N 2-phenylethanol Chemical compound OCCC1=CC=CC=C1 WRMNZCZEMHIOCP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000208340 Araliaceae Species 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 244000017020 Ipomoea batatas Species 0.000 description 2
- 235000002678 Ipomoea batatas Nutrition 0.000 description 2
- 235000005035 Panax pseudoginseng ssp. pseudoginseng Nutrition 0.000 description 2
- 235000003140 Panax quinquefolius Nutrition 0.000 description 2
- 241000997135 Rhodiola crenulata Species 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 2
- 235000008434 ginseng Nutrition 0.000 description 2
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 2
- 206010001497 Agitation Diseases 0.000 description 1
- TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N Aglycone of yadanzioside D Natural products COC(=O)C12OCC34C(CC5C(=CC(O)C(O)C5(C)C3C(O)C1O)C)OC(=O)C(OC(=O)C)C24 TWCMVXMQHSVIOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N Astrantiagenin E-methylester Natural products CC12CCC(O)C(C)(CO)C1CCC1(C)C2CC=C2C3CC(C)(C)CCC3(C(=O)OC)CCC21C PLMKQQMDOMTZGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010010774 Constipation Diseases 0.000 description 1
- 241000220284 Crassulaceae Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 125000002843 carboxylic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001735 carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 210000000750 endocrine system Anatomy 0.000 description 1
- 238000002481 ethanol extraction Methods 0.000 description 1
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 description 1
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 description 1
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 235000008216 herbs Nutrition 0.000 description 1
- PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N homoegonol Natural products C1=C(OC)C(OC)=CC=C1C1=CC2=CC(CCCO)=CC(OC)=C2O1 PFOARMALXZGCHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 229930015704 phenylpropanoid Natural products 0.000 description 1
- 125000001474 phenylpropanoid group Chemical group 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/14—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of a carbohydrase (EC 3.2.x), e.g. by alpha-amylase, e.g. by cellulase, hemicellulase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
- C07H1/06—Separation; Purification
- C07H1/08—Separation; Purification from natural products
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
- C07H15/18—Acyclic radicals, substituted by carbocyclic rings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B30/00—Preparation of starch, degraded or non-chemically modified starch, amylose, or amylopectin
- C08B30/12—Degraded, destructured or non-chemically modified starch, e.g. mechanically, enzymatically or by irradiation; Bleaching of starch
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
- C12N11/04—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier entrapped within the carrier, e.g. gel or hollow fibres
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
- C12N11/10—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a carbohydrate
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2405—Glucanases
- C12N9/2434—Glucanases acting on beta-1,4-glucosidic bonds
- C12N9/2445—Beta-glucosidase (3.2.1.21)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01021—Beta-glucosidase (3.2.1.21)
Abstract
本申请涉及红景天提取领域，具体公开了一种红景天中分离得到红景天苷的方法，包括以下步骤：S1、得到红景天粉末；S2、采用乙醇浸提后得到粗洗脱液，然后过大孔树脂柱；S3、洗脱得到红景天苷/酪醇粗洗脱液；采用65‑90%乙醇溶液的洗脱液洗脱得到络塞维粗洗脱液；S4、分别得到红景天苷粗洗脱液和酪醇粗洗脱液；S5、在酪醇粗洗脱液中添加葡萄糖和固化β‑葡萄糖苷酶，添加磷酸盐缓冲液和1‑乙烯基‑3‑丁基咪唑硫氰酸盐，得到红景天苷生成液；S6、将红景天苷生成液与红景天苷粗洗脱液过三氧化二铝柱，洗脱得到红景天苷洗脱液，浓缩干燥后得到红景天苷提取物。本申请具有从红景天中分离得到更高含量的红景天苷的特点。
Description
技术领域
本申请涉及红景天提取的技术领域，更具体地说，它涉及一种红景天中分离得到红景天苷的方法。
背景技术
红景天为景天科植物，属多年生草本或灌木植物。药用部位主要以根、根茎入药，全株也可入药。经研究发现，红景天具有与人参、刺五加类似的功效作用，而且不会出现人参的过度兴奋作用和刺五加致便秘的作用。因而越来越受到人们的广泛重视。
红景天的品种较多，目前发现共有90余个品种，不同品种的红景天因含有的活性成分种类以及含量差异而具有不同的用途及价值。近年来，对红景天化学成分的研究表明，如玫瑰红景天中的主要化学成分有苯乙醇类如红景天苷、酪醇；苯丙素类如络塞维；黄酮类、多糖等，红景天苷、洛塞维是红景天中的主要活性成分，主要从根茎中提取。其中红景天苷是红景天的主要有效成分之一，现代药理研究表明，其具有抗疲劳、抗辐射、抗衰老、抗肿瘤的功效，在保护心脑血管系统、免疫系统、内分泌系统、调节神经等方面具有确切的作用。红景天苷和洛塞维和酪醇的结构式如下：如何从红景天中分离红景天苷对于红景天苷的应用具有重要的意义。
当前对于红景天苷的分离方法研究较多，但是都是仅仅只实现了从红景天中的分离提取，而红景天中红景天苷的含量通常较少，无法满足当前对于红景天苷的需求，而采用化学合成方法合成红景天苷，工艺繁琐，且收率较低。因此对于红景天中有效成分转化为红景天苷后提取分离对于红景天苷提取量会有很大的帮助。
发明内容
为了从红景天中分离得到更高含量的红景天苷，本申请提供一种红景天中分离得到红景天苷的方法。
本申请提供的一种红景天中分离得到红景天苷的方法采用如下的技术方案：
一种红景天中分离得到红景天苷的方法，包括以下步骤：
S1、将红景天根粉碎，过筛，得到红景天粉末；
S2、采用乙醇浸提后得到提取液，将提取液浓缩至无醇，然后过大孔树脂柱；
S3、采用15-20％乙醇溶液洗脱得到红景天苷/酪醇洗脱液；
采用65-90％乙醇溶液洗脱得到络塞维洗脱液；
S4、将红景天苷/酪醇洗脱液分离分别得到红景天苷洗脱液和酪醇洗脱液，将两者分别浓缩，得到酪醇浓缩膏和红景天苷浓缩膏；
S5、在酪醇浓缩膏中加入乙醇分散，得到酪醇分散液，然后添加葡萄糖和固化β-葡萄糖苷酶，然后添加磷酸盐缓冲液和1-乙烯基-3-丁基咪唑硫氰酸盐，混合后在45-55℃下恒温振荡反应24h，得到红景天苷生成液；
其中，所述固化β-葡萄糖苷酶由以下方法制得：
将天然淀粉预糊化后冷冻处理得到改性淀粉，取改性淀粉与对甲基苯磺酰甲基异腈和酸溶液以及β-葡萄糖苷酶，搅拌混合，得到混合物，加入高酯果胶，搅拌后干燥，得到固化β-葡萄糖苷酶；
S6、将红景天苷生成液浓缩至无醇，然后与步骤S4中的红景天苷浓缩膏合并，然后过大孔树脂柱，再采用10-20％的乙醇溶液洗脱得到红景天苷洗脱液，浓缩干燥后得到红景天苷提取物。
通过采用上述技术方案，本申请中首先将红景天粉末采用乙醇浸提后得到含有红景天苷、酪醇和络塞维的混合液，然后用不同浓度乙醇洗脱，实现红景天苷和络塞维的分离，得到红景天苷/酪醇粗洗脱液，然后将红景天苷和酪醇进行分离，然后以葡萄糖和醇酪为底物，β-葡萄糖苷酶催化，葡萄糖与酪醇缩合，脱去水分子形成糖苷键，从而通过酶化学将酪醇转化成红景天苷，不仅可以提高红景天原料中红景天苷的原有含量，同时，通过酶化学转化，更利于后续的分离纯化。将上述得到的红景天苷合并，通过大孔树脂进一步分离，从而实现高含量红景天苷的纯化。
本申请在酶催化生成红景天苷的体系中，添加有1-乙烯基-3-丁基咪唑硫氰酸盐，使得酶催化合成过程在离子液体体系中进行，只有少量乙醇溶液浸提时引入的少量水，抑制了水解反应，使得酶催化反应向正向进行，提高产物收率，而且酶催化过程在该体系中具有更好的稳定性。
β-葡萄糖苷酶的添加选用固化酶的方式，首先对天然淀粉预糊化后冷冻处理，构建特定孔隙结构，使得β-葡萄糖苷酶分布在天然淀粉孔隙结构中，由于物理吸附作用形成对于β-葡萄糖苷酶的固化作用，更加重要的是对甲基苯磺酰甲基异腈和酸溶液的添加，使得对甲基苯磺酰甲基异腈在酸溶液的作用下，与β-葡萄糖苷酶的羟基作用生成亚胺酯盐，实现化学键合，而且该过程对于酶的活性影响较小；随着反应的进行，对甲基苯磺酰甲基异腈在该体系下水解生成羧酸，羧酸基团又与天然淀粉表面的羟基键合。从而形成β-葡萄糖苷酶存在于天然淀粉孔隙结构中，同时β-葡萄糖苷酶与对甲基苯磺酰甲基异腈直接键合，另外对甲基苯磺酰甲基异腈水解后羧基与天然淀粉羟基键合，使得β-葡萄糖苷酶的羟基通过对甲基苯磺酰甲基异腈与天然淀粉键合，对于β-葡萄糖苷酶的固定效果更好，而且对于酶活性影响更小，产物得率更高，最终红景天苷提取量更高。β-葡萄糖苷酶与改性淀粉和对甲基苯磺酰甲基异腈作用后再通过高酯果胶包覆，对于β-葡萄糖苷酶的固化效果更好。
可选的，步骤S4中红景天苷/酪醇粗洗脱液的分离方法为：
将红景天苷/酪醇粗洗脱液过聚酰胺柱，然后以10-30％的乙醇洗脱，收集洗脱液，得到红景天苷粗洗脱液；
以40-70％的乙醇洗脱，收集洗脱液，得到酪醇粗洗脱液。
通过采用上述技术方案，采用聚酰胺柱和不同浓度乙醇洗脱分离酪醇和红景天苷，分离效果更好，而且操作更加简单。
可选的，步骤S4中红景天苷/酪醇粗洗脱液的分离方法为：
将红景天苷/酪醇粗洗脱液过硅胶柱，然后以体积比为(50-70)：1的二氯甲烷-甲醇洗脱，收集洗脱液，得到酪醇粗洗脱液；
以体积比为(10-19)：1的二氯甲烷-甲醇洗脱，收集洗脱液，得到红景天苷粗洗脱液。
可选的，所述固化β-葡萄糖苷酶制备时，改性淀粉由以下方法得到：
取质量比为1：(5-8)的天然淀粉与水在65-75℃下加热搅拌糊化，然后冷却至(-40)-(-30)℃下预冻2-3h，然后在(-25)-(-15)℃下冷冻12-15h，再在(-90)-(-80)℃的冷冻干燥机冷柜中冷冻1-2h，然后在40-60min内升温至25-30℃，得到改性淀粉。
通过采用上述技术方案，通过上述方法处理天然淀粉，实现对天然淀粉的改性，改变天然淀粉的孔隙结构，从而使得有更多的β-葡萄糖苷酶和对甲基苯磺酰甲基异腈分布在天然淀粉孔隙结构中，孔隙结构增多和扩大使得天然淀粉表面有更多的羟基活性点位与对甲基苯磺酰甲基异腈键合，对于β-葡萄糖苷酶的固化效果更好。
可选的，所述固化β-葡萄糖苷酶制备时，以固化β-葡萄糖苷酶为基准，改性淀粉添加量为15-20重量份，对甲基苯磺酰甲基异腈添加量为10-15重量份，β-葡萄糖苷酶添加量为7-12重量份，酸溶液添加调节使得混合物的pH值为5-6.5，高酯果胶添加量为18-25重量份。
可选的，步骤S5中，以1L酪醇粗洗脱液为基准，葡萄糖的添加量为5-10g/L，固化β-葡萄糖苷酶与葡萄糖的添加质量比为1：(0.5-0.7)，所述1-乙烯基-3-丁基咪唑硫氰酸盐的添加量为0.3-0.5g/L。
可选的，步骤S5中，添加有1-乙烯基-3-丁基咪唑硫氰酸盐的同时还添加有异丙醇，异丙醇与葡萄糖添加质量比为1：(3-5)。
通过采用上述技术方案，异丙醇的添加可以降低离子液体的粘度，更加有利于后续红景天苷生成液的过柱洗脱，有助于提高红景天苷洗脱得到产物量。
可选的，步骤S2中所述大孔树脂选用质量比为1：(0.5-0.8)的HP-20和D101的填料。
通过采用上述技术方案，选用上述复配填料的大孔树脂时，对于红景天苷/酪醇提取分效果更优。
可选的，步骤S2中乙醇浸提得到提取液的具体操作如下：
在红景天粉末中加入6-8体积倍数的80％乙醇常温搅拌提取3次，每次2h，然后合并洗脱液，得到提取液。
综上所述，本申请具有以下有益效果：
1、本申请方法将红景天粉末过柱洗脱分离得到红景天苷/酪醇粗洗脱液，然后将红景天苷/酪醇粗洗脱液分离得到红景天苷粗洗脱液和酪醇粗洗脱液，然后对酪醇进行酶催化得到红景天苷，实现红景天中红景天苷的提取，而且更加重要的是将红景天中的酪醇物质酶化学合成红景天苷，不仅可以提高红景天苷的回收率，同时利于后续的分离纯化；
2、本申请中采用改性淀粉和对甲基苯磺酰甲基异腈在酸溶液的作用下，实现对于β-葡萄糖苷酶的固定，形成β-葡萄糖苷酶存在于天然淀粉孔隙结构中，同时β-葡萄糖苷酶与对甲基苯磺酰甲基异腈直接键合，另外对甲基苯磺酰甲基异腈水解后羧基与天然淀粉羟基键合，使得β-葡萄糖苷酶的羟基通过对甲基苯磺酰甲基异腈与天然淀粉键合，对于β-葡萄糖苷酶的固定效果更好，而且对于酶活性影响更小，产物得率更高，最终红景天苷提取量更高；
3、本申请中采用聚酰胺柱配合不同浓度的乙醇洗脱分离酪醇和红景天苷，对于酪醇和红景天苷的分离效果更好；
4、本申请步骤S5中酶催化反应体系中异丙醇的添加可以降低离子液体的粘度，更加有利于后续红景天苷生成液的过柱洗脱，有助于提高红景天苷洗脱得到产物量。
具体实施方式
以下结合实施例对本申请作进一步详细说明，予以特别说明的是：以下实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行，以下实施例中所用原料除特殊说明外均可来源于普通市售。
本申请以下实施例和对比例中的红景天选用大花红景天，红景天苷含量为2％左右，酪醇含量为0.3％左右。
本申请提供的红景天中分离得到红景天苷的方法，从红景天中分离洛塞维与红景天苷/酪醇粗洗脱液，然后将红景天苷/酪醇粗洗脱液分离分别得到红景天苷粗洗脱液和酪醇粗洗脱液，然后对酪醇进行酶催化得到红景天苷，从而将红景天中酪醇转化生成红景天苷，提高从红景天中分离得到红景天苷的生成量。基于该方案，当在红景天苷/酪醇粗洗脱液中直接将酪醇酶催化生成红景天苷的时候，红景天苷含量较大，使得酶催化反应体系中反应产物浓度过大，反正逆向进行，不利于酪醇生成红景天苷，因此本申请中需要先将酪醇催化生成红景天苷首先需要将红景天苷与酪醇分离后，对酪醇进行酶催化。
以下制备例为固化β-葡萄糖苷酶的制备例
制备例1
一种固化β-葡萄糖苷酶的制备方法，包括以下步骤：
取质量比为1：6的天然淀粉与水在70℃下加热搅拌糊化，然后冷却至(-35)℃下预冻2h，然后在(-20)℃下冷冻14h，再在(-85)℃的冷冻干燥机冷柜中冷冻1h，然后在50min内升温至28℃，得到改性淀粉；
取18kg改性淀粉与12kg对甲基苯磺酰甲基异腈和酸溶液以及10kgβ-葡萄糖苷酶，搅拌混合，得到混合物，酸溶液选用柠檬酸，柠檬酸添加量使得混合物pH值为5.5，最后加入22kg高酯果胶，搅拌后干燥，得到固化β-葡萄糖苷酶；
其中天然淀粉选用质量比为1:1的玉米淀粉和甘薯淀粉。
制备例2
一种固化β-葡萄糖苷酶的制备方法，包括以下步骤：
取质量比为1：5的天然淀粉与水在65℃下加热搅拌糊化，然后冷却至(-40)℃下预冻2h，然后在(-25)℃下冷冻12h，再在(-90)℃的冷冻干燥机冷柜中冷冻1h，然后在40min内升温至25℃，得到改性淀粉；
取15kg改性淀粉与10kg对甲基苯磺酰甲基异腈和酸溶液以及7kgβ-葡萄糖苷酶，搅拌混合，得到混合物，酸溶液选用柠檬酸，柠檬酸添加量使得混合物pH值为5，最后加入18kg高酯果胶，搅拌后干燥，得到固化β-葡萄糖苷酶。
其中，天然淀粉选用玉米淀粉。
制备例3
一种固化β-葡萄糖苷酶的制备方法，包括以下步骤：
取质量比为1：8的天然淀粉与水在75℃下加热搅拌糊化，然后冷却至(-30)℃下预冻3h，然后在(-15)℃下冷冻15h，再在(-80)℃的冷冻干燥机冷柜中冷冻2h，然后在60min内升温至30℃，得到改性淀粉；
取20kg改性淀粉与15kg对甲基苯磺酰甲基异腈和酸溶液以及12kgβ-葡萄糖苷酶，搅拌混合，得到混合物，酸溶液选用柠檬酸，柠檬酸添加量使得混合物pH值为6.5，最后加入25kg高酯果胶，搅拌后干燥，得到固化β-葡萄糖苷酶。
其中，天然淀粉选用土豆淀粉。
对比制备例1
一种固化β-葡萄糖苷酶的制备方法，按照制备例1中的方法进行，不同之处在于，将改性淀粉等量替换为天然淀粉，天然淀粉选用质量比为1:1的玉米淀粉和甘薯淀粉。
对比制备例2
一种固化β-葡萄糖苷酶的制备方法，按照制备例1中的方法进行，不同之处在于，原料中未添加高酯果胶，混合物直接干燥得到固化β-葡萄糖苷酶。
对比制备例3
一种固化β-葡萄糖苷酶的制备方法，按照制备例1中的方法进行，不同之处在于，原料中未添加对甲基苯磺酰甲基异腈。
实施例1
一种红景天中分离得到红景天苷的方法，包括以下步骤：
S1、将红景天根粉碎，过60目筛，得到红景天粉末；
S2、称取200kg红景天粉末，在红景天粉末中加入8体积倍数的80％乙醇常温搅拌提取3次，每次2h，然后合并洗脱液得到提取液，提取液浓缩至无醇后以3BV/h的流速通过填充有1kg填料(质量比为1：0.6的HP-20和D101的填料)的大孔树脂柱；
S3、采用15％乙醇溶液的洗脱液以2BV/h的流速洗脱6BV，得到红景天苷/酪醇洗脱液；采用85％乙醇溶液的洗脱液以2BV/h的流速洗脱3BV，得到络塞维洗脱液；
S4、将红景天苷/酪醇洗脱液分离分别得到红景天苷洗脱液和酪醇洗脱液，然后两者分别浓缩至无醇，得到酪醇浓缩膏和红景天苷浓缩膏，分离的具体方法为：
将红景天苷/酪醇洗脱液以2BV/h的流速通过填充有1kg填料的聚酰胺柱，然后以15％乙醇溶液以2BV/h的流速洗脱6BV，收集洗脱液，得到红景天苷洗脱液；
以60％乙醇溶液以2BV/h的流速洗脱3BV，收集洗脱液，得到酪醇洗脱液；
S5、在酪醇浓缩膏中加入7质量倍数的15％乙醇进行分散，得到酪醇分散液，以1L酪醇分散液为基准，在酪醇分散液中添加8g/L的葡萄糖和制备例1中制得的固化β-葡萄糖苷酶，固化β-葡萄糖苷酶与葡萄糖的添加质量比为1：0.6；
然后添加4g/L pH值为6的磷酸盐缓冲液和0.4g/L1-乙烯基-3-丁基咪唑硫氰酸盐，混合后在50℃下恒温振荡反应24h，得到红景天苷生成液；
S6、将红景天苷生成液浓缩至无醇，然后与步骤S4中的红景天苷浓缩膏合并，然后以3BV/h的流速通过填充有1kg填料的三氧化二铝柱，采用15％的乙醇溶液以2BV/h的流速洗脱6BV，得到红景天苷洗脱液，红景天苷洗脱液浓缩干燥后得到红景天苷提取物。
实施例2
一种红景天中分离得到红景天苷的方法，包括以下步骤：
S1、将红景天根粉碎，过60目筛，得到红景天粉末；
S2、称取200kg红景天粉末，在红景天粉末中加入6体积倍数的80％乙醇常温搅拌提取3次，每次2h，然后合并洗脱液得到提取液，提取液浓缩至无醇后以3BV/h的流速通过填充有1kg填料(质量比为1：0.5的HP-20和D101的填料)的大孔树脂柱；
S3、采用15％乙醇溶液的洗脱液以2BV/h的流速洗脱6BV，得到红景天苷/酪醇洗脱液；采用65％乙醇溶液的洗脱液以2BV/h的流速洗脱3BV，得到络塞维洗脱液；
S4、将红景天苷/酪醇洗脱液分离分别得到红景天苷洗脱液和酪醇洗脱液，然后两者分别浓缩至无醇，得到酪醇浓缩膏和红景天苷浓缩膏，分离的具体方法为：
将红景天苷/酪醇洗脱液以2BV/h的流速通过填充有1kg填料的聚酰胺柱，然后以10％乙醇溶液以2BV/h的流速洗脱6BV，收集洗脱液，得到红景天苷洗脱液；
以60％乙醇溶液以2BV/h的流速洗脱3BV，收集洗脱液，得到酪醇洗脱液；
S5、在酪醇浓缩膏中加入8质量倍数的10％乙醇进行分散，得到酪醇分散液，以1L酪醇分散液为基准，在酪醇分散液中添加5g/L的葡萄糖和制备例2中制得的固化β-葡萄糖苷酶，固化β-葡萄糖苷酶与葡萄糖的添加质量比为1：0.5；
然后添加3g/L pH值为6的磷酸盐缓冲液和0.3g/L 1-乙烯基-3-丁基咪唑硫氰酸盐，混合后在45℃下恒温振荡反应24h，得到红景天苷生成液；
S6、将红景天苷生成液浓缩至无醇，然后与步骤S4中的红景天苷浓缩膏合并，然后以3BV/h的流速通过填充有1kg填料的三氧化二铝柱，采用15％的乙醇溶液以2BV/h的流速洗脱6BV，得到红景天苷洗脱液，红景天苷洗脱液浓缩干燥后得到红景天苷提取物。
实施例3
一种红景天中分离得到红景天苷的方法，包括以下步骤：
S1、将红景天根粉碎，过60目筛，得到红景天粉末；
S2、称取200kg红景天粉末，在红景天粉末中加入8体积倍数的80％乙醇常温搅拌提取3次，每次2h，然后合并洗脱液得到提取液，提取液浓缩至无醇后以3BV/h的流速通过填充有1kg填料(质量比为1：0.8的HP-20和D101的填料)的大孔树脂柱；
S3、采用20％乙醇溶液的洗脱液以2BV/h的流速洗脱6BV，得到红景天苷/酪醇洗脱液；
采用90％乙醇溶液的洗脱液以2BV/h的流速洗脱3BV，得到络塞维洗脱液；
S4、将红景天苷/酪醇洗脱液分离分别得到红景天苷洗脱液和酪醇洗脱液，然后两者分别浓缩至无醇，得到酪醇浓缩膏和红景天苷浓缩膏，分离的具体方法为：
将红景天苷/酪醇洗脱液以2BV/h的流速通过填充有1kg填料的聚酰胺柱，然后以30％乙醇溶液以2BV/h的流速洗脱6BV，收集洗脱液，得到红景天苷洗脱液；
以40％乙醇溶液以2BV/h的流速洗脱3BV，收集洗脱液，得到酪醇洗脱液；
S5、在酪醇浓缩膏中加入8质量倍数的10％乙醇进行分散，得到酪醇分散液，以1L酪醇分散液为基准，在酪醇分散液中添加10g/L的葡萄糖和制备例3中制得的固化β-葡萄糖苷酶，固化β-葡萄糖苷酶与葡萄糖的添加质量比为1：0.7；
然后添加5g/L pH值为6的磷酸盐缓冲液和0.5g/L 1-乙烯基-3-丁基咪唑硫氰酸盐，混合后在55℃下恒温振荡反应24h，得到红景天苷生成液；
S6、将红景天苷生成液浓缩至无醇，然后与步骤S4中的红景天苷浓缩膏合并，然后以3BV/h的流速通过填充有1kg填料的三氧化二铝柱，采用15％的乙醇溶液以2BV/h的流速洗脱6BV，得到红景天苷洗脱液，红景天苷洗脱液浓缩干燥后得到红景天苷提取物。
实施例4
一种红景天中分离得到红景天苷的方法，按照实施例1中的方法进行，不同之处在于，步骤S4中红景天苷/酪醇洗脱液的分离方法为：
将红景天苷/酪醇洗脱液过硅胶柱，然后以体积比为60：1的二氯甲烷-甲醇洗脱，收集洗脱液，得到酪醇洗脱液；
以体积比为15：1的二氯甲烷-甲醇洗脱，收集洗脱液，得到红景天苷洗脱液。
实施例5
一种红景天中分离得到红景天苷的方法，按照实施例1中的方法进行，不同之处在于，步骤S5中，添加有1-乙烯基-3-丁基咪唑硫氰酸盐的同时还添加有异丙醇，异丙醇与葡萄糖添加质量比为1：4。
实施例6
一种红景天中分离得到红景天苷的方法，按照实施例1中的方法进行，不同之处在于，步骤S5中，添加有1-乙烯基-3-丁基咪唑硫氰酸盐的同时还添加有异丙醇，异丙醇与葡萄糖添加质量比为1：3。
实施例7
一种红景天中分离得到红景天苷的方法，按照实施例1中的方法进行，不同之处在于，步骤S5中，添加有1-乙烯基-3-丁基咪唑硫氰酸盐的同时还添加有异丙醇，异丙醇与葡萄糖添加质量比为1：5。
对比例1
一种红景天中分离得到红景天苷的方法，按照实施例1中的方法进行，不同之处在于，步骤S5中，原料中未添加1-乙烯基-3-丁基咪唑硫氰酸盐。
对比例2
一种红景天中分离得到红景天苷的方法，按照实施例1中的方法进行，不同之处在于，步骤S5中，原料中固化β-葡萄糖苷酶等量替换为β-葡萄糖苷酶。
对比例3
一种红景天中分离得到红景天苷的方法，按照实施例1中的方法进行，不同之处在于，步骤S5中的固化β-葡萄糖苷酶选用对比制备例1中制得的固化β-葡萄糖苷酶。
对比例4
一种红景天中分离得到红景天苷的方法，按照实施例1中的方法进行，不同之处在于，步骤S5中的固化β-葡萄糖苷酶选用对比制备例2中制得的固化β-葡萄糖苷酶。
对比例5
一种红景天中分离得到红景天苷的方法，按照实施例1中的方法进行，不同之处在于，步骤S5中的固化β-葡萄糖苷酶选用对比制备例3中制得的固化β-葡萄糖苷酶。
性能检测
对同一批次的玫瑰红景天进行以上方法操作，对以上实施例和对比例方法中步骤S4中的红景天苷和酪醇的含量和回收率进行统计，再对步骤S6中红景天苷的含量和回收率进行统计，其中步骤S6处理后红景天苷的含量和回收率检测结果如下表1所示：
表1：
由上表1可知，本申请实施例相较于对比例，红景天苷的提取率显著提升。
参照实施例1与实施例4的检测结果，可以看出，将红景天苷/酪醇洗脱液过聚酰胺柱后采用乙醇提取，相较于现有过硅胶柱后采用二氯甲烷-甲醇洗脱提取，最终红景天苷的提取率显著提高，是由于采用实施例1中分离方法对于红景天苷和酪醇的分离效率更高，酪醇洗脱液中红景天苷含量更低，促进红景天苷正向进行。
再结合实施例1与实施例5-7的检测结果，可以看出，步骤S5中还添加有异丙醇的时候，最终红景天苷的提取率更高，是由于异丙醇的添加可以降低步骤S5中酪醇转化生成红景天苷在离子液体体系中的粘度，从而步骤S6中更加方便过柱分离。
参照实施例1和对比例1的检测结果，可以看出，对比例1相较于实施例1，红景天苷提取率显著降低，是由于对比例1中未添加离子液体时，对于水解反应体系抑制作用弱，不利于生成红景天苷；再结合对比例2的检测结果，可以看出，采用本申请中酶固定方法固定化酶后添加在体系中的时候，红景天苷的提取率更高，是由于本申请提供的酶固定方式固定效果更好的同时，对于酶活性影响更小。
再结合对比例3-5的检测结果，对β-葡萄糖苷酶固化时将改性淀粉替换为天然淀粉的时候，红景天苷的提取率显著降低，是由于改性淀粉可以改变淀粉孔隙结构建立，从而使得β-葡萄糖苷酶更好的被吸附于淀粉孔隙结构中，再配合化学键合，对于β-葡萄糖苷酶固化效果更好，对比例4中酶固化时未添加高酯果胶，对比例5中酶固化时未添加对甲基苯磺酰甲基异腈，最终红景天苷的提取率也显著降低，可见，本申请中通过对于β-葡萄糖苷酶固化方式的改善，相较于普通利用β-葡萄糖苷酶的氨基进行化学键合固化，但是会导致酶活降低，本申请中利用对甲基苯磺酰甲基异腈与β-葡萄糖苷酶的羟基作用，再配合改性淀粉和高酯果胶的作用，最终对于酶活性影响情况下，还具有优异的固化作用，最终红景天苷的回收率更高。
另外，对实施例1和实施例4步骤S4中红景天苷洗脱液中红景天苷含量和回收率也进行检测，结果如下表2所示。
表2：
由上表可以看出，通过将红景天苷/酪醇洗脱液中酪醇转化生成红景天苷，最终红景天苷的含量显著增大。而且采用实施例1中方式将红景天苷/酪醇洗脱液分离后对于红景天苷的提取率更高，对于红景天苷的分离效果更好，而且实施例4中最终红景天苷提取率更低，是由于酪醇溶液中红景天苷抑制了反应正向生成，导致酪醇转化红景天苷的产物得率更低。
本具体实施例仅仅是对本申请的解释，其并不是对本申请的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本申请的权利要求范围内都受到专利法的保护。
Claims (6)
1.一种红景天中分离得到红景天苷的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、将红景天根粉碎，过筛，得到红景天粉末；
S2、采用乙醇浸提后得到提取液 ，将提取液浓缩至无醇，然后过大孔树脂柱；
S3、采用15-20%乙醇溶液洗脱得到红景天苷/酪醇洗脱液；
采用65-90%乙醇溶液洗脱得到络塞维洗脱液；
S4、将红景天苷/酪醇洗脱液分离，分别得到红景天苷洗脱液和酪醇洗脱液，将两者分别浓缩，得到红景天苷浓缩膏和酪醇浓缩膏；
S5、在酪醇浓缩膏中加入乙醇分散，得到酪醇分散液，然后添加葡萄糖和固化β-葡萄糖苷酶，然后添加磷酸盐缓冲液和1-乙烯基-3-丁基咪唑硫氰酸盐，混合后在45-55℃下恒温振荡反应24h，得到红景天苷生成液；
其中，所述固化β-葡萄糖苷酶由以下方法制得：
将天然淀粉预糊化后冷冻处理得到改性淀粉，取改性淀粉与对甲基苯磺酰甲基异腈和酸溶液以及β-葡萄糖苷酶，搅拌混合，得到混合物，加入高酯果胶，搅拌后干燥，得到固化β-葡萄糖苷酶；
S6、将红景天苷生成液浓缩至无醇，然后与步骤S4中的红景天苷浓缩膏合并，然后过大孔树脂柱，再采用10-20%的乙醇溶液洗脱得到红景天苷洗脱液，浓缩干燥后得到红景天苷提取物；
其中，步骤S4中红景天苷/酪醇粗洗脱液的分离方法为：
将红景天苷/酪醇粗洗脱液过聚酰胺柱，然后以10-30%的乙醇洗脱，收集洗脱液，得到红景天苷粗洗脱液；
以40-70%的乙醇洗脱，收集洗脱液，得到酪醇粗洗脱液；
或，将红景天苷/酪醇粗洗脱液过硅胶柱，然后以体积比为（50-70）：1的二氯甲烷-甲醇洗脱，收集洗脱液，得到酪醇粗洗脱液；
以体积比为（10-19）：1的二氯甲烷-甲醇洗脱，收集洗脱液，得到红景天苷粗洗脱液；
所述固化β-葡萄糖苷酶制备时，改性淀粉由以下方法得到：取质量比为1：（5-8）的天然淀粉与水在65-75℃下加热搅拌糊化，然后冷却至（-40）-（-30）℃下预冻2-3h，然后在（-25）-（-15）℃下冷冻12-15h，再在（-90）-（-80）℃的冷冻干燥机冷柜中冷冻1-2h，然后在40-60min内升温至25-30℃，得到改性淀粉。
2.根据权利要求1所述的一种红景天中分离得到红景天苷的方法，其特征在于：所述固化β-葡萄糖苷酶制备时，以固化β-葡萄糖苷酶为基准，改性淀粉添加量为15-20重量份，对甲基苯磺酰甲基异腈添加量为10-15重量份，β-葡萄糖苷酶添加量为7-12重量份，酸溶液添加调节使得混合物的pH值为5-6.5，高酯果胶添加量为18-25重量份。
3.根据权利要求1所述的一种红景天中分离得到红景天苷的方法，其特征在于：步骤S5中，以1L酪醇分散液为基准，葡萄糖的添加量为5-10g/L，固化β-葡萄糖苷酶与葡萄糖的添加质量比为1：（0.5-0.7），所述1-乙烯基-3-丁基咪唑硫氰酸盐的添加量为0.3-0.5g/L。
4.根据权利要求1所述的一种红景天中分离得到红景天苷的方法，其特征在于：步骤S5中，添加有1-乙烯基-3-丁基咪唑硫氰酸盐的同时还添加有异丙醇，异丙醇与葡萄糖添加质量比为1：（3-5）。
5.根据权利要求1所述的一种红景天中分离得到红景天苷的方法，其特征在于：步骤S2中所述大孔树脂选用质量比为1：（0.5-0.8）的HP-20和D101的填料。
6.根据权利要求1所述的一种红景天中分离得到红景天苷的方法，其特征在于：步骤S2中乙醇浸提得到提取液 的具体操作如下：
在红景天粉末中加入6-8体积倍数的80%乙醇常温搅拌提取3次，每次2h，合并得到提取液 。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211363409.0A CN115491398B (zh) | 2022-11-02 | 2022-11-02 | 一种红景天中分离得到红景天苷的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211363409.0A CN115491398B (zh) | 2022-11-02 | 2022-11-02 | 一种红景天中分离得到红景天苷的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115491398A CN115491398A (zh) | 2022-12-20 |
| CN115491398B true CN115491398B (zh) | 2023-05-26 |
Family
ID=85115687
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202211363409.0A Active CN115491398B (zh) | 2022-11-02 | 2022-11-02 | 一种红景天中分离得到红景天苷的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115491398B (zh) |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102526165B (zh) * | 2010-12-07 | 2016-09-14 | 中国医学科学院药物研究所 | 一种红景天有效部位、其制备方法、其药物组合物及用途 |
| CN102174620A (zh) * | 2011-03-02 | 2011-09-07 | 福州大学 | 一种酶催化直接糖基化合成红景天苷的方法 |
| JP6358422B2 (ja) * | 2013-04-12 | 2018-07-18 | 池田食研株式会社 | イワベンケイ属植物エキスの製造方法 |
| CN106222218B (zh) * | 2016-07-31 | 2019-06-28 | 山西大学 | 一种酶法制备红景天苷的方法 |
| CN107312047B (zh) * | 2017-08-06 | 2020-05-01 | 中国科学院兰州化学物理研究所 | 一种从红景天中同步分离制备红景天苷和络塞维的方法 |
| CN109280681B (zh) * | 2018-09-26 | 2020-10-30 | 西安惠博生物科技有限公司 | 一种红景天苷的制备方法 |
-
2022
- 2022-11-02 CN CN202211363409.0A patent/CN115491398B/zh active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN115491398A (zh) | 2022-12-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR100329259B1 (ko) | 효소(酵素)로 인삼 사포닌 당기(糖基)를 변화시켜서 희소한 인삼사포닌을 제조하는 방법 | |
| KR100377546B1 (ko) | 효소적 방법에 의한 진세노사이드 컴파운드 케이의 제조방법 | |
| JP6544475B2 (ja) | 酸性キシロオリゴ糖の製造方法及び酸性キシロオリゴ糖 | |
| KR101566589B1 (ko) | 진세노사이드 f2의 함량이 증가된 발효 홍삼의 제조방법 및 상기 방법으로 제조된 발효 홍삼 추출물 | |
| WO2004054595A1 (fr) | Procede de preparation de ginsenoside a faible polarite et son aglucone de ginsenoside par pyrolyse catalytique | |
| CN106800586A (zh) | 一种辣木蛋白质高效提取的方法 | |
| CN110801024A (zh) | 降低血糖血脂及糖化血红蛋白的多糖复合多肽及制备方法 | |
| CN115491398B (zh) | 一种红景天中分离得到红景天苷的方法 | |
| CN106889625B (zh) | 一种菊粉颗粒的制备方法 | |
| JP6177803B2 (ja) | デンプンからの固体マルチトール製造方法 | |
| JPH0670075B2 (ja) | １―ケストース結晶およびその製造方法 | |
| CN110484587B (zh) | 一种提高萝卜花青素抗氧化性能的方法 | |
| KR100424438B1 (ko) | 효소적 방법에 의한 진세노사이드 알디의 제조방법 | |
| KR100420451B1 (ko) | 셀룰라제 또는 락타제 조성물 와이-에이오를 이용한진세노사이드 컴파운드 케이의 제조방법 | |
| CN107714746A (zh) | 一种制备含11种人参皂苷混合物的方法 | |
| KR101959848B1 (ko) | 장수버섯 균사체를 이용한 희귀 인삼 사포닌의 제조방법 | |
| KR20020058153A (ko) | 효소적 방법에 의한 진세노사이드 ｆ₂의 제조방법 | |
| CN110551777A (zh) | 一种芦荟多糖的制备方法 | |
| JP6902758B2 (ja) | マンノース抽出方法 | |
| JP2630783B2 (ja) | 抗腫瘍作用を有する中性多糖体の製法 | |
| KR102574218B1 (ko) | 진세노사이드 컴파운드 케이 추출방법 | |
| CN105001273B (zh) | 一种甘露糖的制备方法 | |
| CN112294857A (zh) | 一种富含芥子油苷的玛咖粉及其制备方法 | |
| KR100444370B1 (ko) | 나린지나제 효소를 이용한 진세노사이드 에프원의 제조방법 | |
| KR100688075B1 (ko) | 수용성 대두 올리고당류 분말의 제조방법 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract |
Application publication date: 20221220 Assignee: SHAANXI JIAHE PHARMACEUTICAL CO.,LTD. Assignor: SHAANXI JIAHE PHYTOCHEM Co.,Ltd. Contract record no.: X2023980049450 Denomination of invention: A method for separating salidroside from Rhodiola rosea Granted publication date: 20230526 License type: Common License Record date: 20231201 |
|
| EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract |