CN115491329B - 一种母乳源植物乳杆菌hm-p2及其应用 - Google Patents
一种母乳源植物乳杆菌hm-p2及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115491329B CN115491329B CN202211142331.XA CN202211142331A CN115491329B CN 115491329 B CN115491329 B CN 115491329B CN 202211142331 A CN202211142331 A CN 202211142331A CN 115491329 B CN115491329 B CN 115491329B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- lactobacillus plantarum
- breast milk
- mice
- derived
- results
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 title claims abstract description 86
- 235000013965 Lactobacillus plantarum Nutrition 0.000 title claims abstract description 82
- 229940072205 lactobacillus plantarum Drugs 0.000 title claims abstract description 82
- 235000020256 human milk Nutrition 0.000 title claims abstract description 51
- 210000004251 human milk Anatomy 0.000 title claims abstract description 51
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000002068 microbial inoculum Substances 0.000 claims abstract description 7
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims description 7
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 claims description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 6
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 claims description 6
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims description 6
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000021001 fermented dairy product Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000015141 kefir Nutrition 0.000 claims description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 4
- 235000013618 yogurt Nutrition 0.000 claims description 4
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 claims description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 2
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000015155 buttermilk Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 claims description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 abstract description 16
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 abstract description 6
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 abstract description 6
- 238000012216 screening Methods 0.000 abstract description 6
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 abstract description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 4
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 abstract description 4
- 235000013305 food Nutrition 0.000 abstract description 3
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 abstract description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 37
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 20
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 19
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 16
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 15
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 13
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 13
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 13
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 11
- 235000000177 Indigofera tinctoria Nutrition 0.000 description 10
- 102000004459 Nitroreductase Human genes 0.000 description 10
- 229940097275 indigo Drugs 0.000 description 10
- COHYTHOBJLSHDF-UHFFFAOYSA-N indigo powder Natural products N1C2=CC=CC=C2C(=O)C1=C1C(=O)C2=CC=CC=C2N1 COHYTHOBJLSHDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 108020001162 nitroreductase Proteins 0.000 description 10
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 10
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 10
- 102000004031 Carboxy-Lyases Human genes 0.000 description 8
- 108090000489 Carboxy-Lyases Proteins 0.000 description 8
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 8
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 8
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 8
- 230000007923 virulence factor Effects 0.000 description 8
- 239000000304 virulence factor Substances 0.000 description 8
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 description 7
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 6
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 6
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 6
- 241000186604 Lactobacillus reuteri Species 0.000 description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 5
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 5
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- XJRPTMORGOIMMI-UHFFFAOYSA-N ethyl 2-amino-4-(trifluoromethyl)-1,3-thiazole-5-carboxylate Chemical compound CCOC(=O)C=1SC(N)=NC=1C(F)(F)F XJRPTMORGOIMMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 4
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 4
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 3
- 231100000460 acute oral toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 3
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 3
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 3
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 3
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 3
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 description 3
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 3
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 3
- RUFPHBVGCFYCNW-UHFFFAOYSA-N 1-naphthylamine Chemical compound C1=CC=C2C(N)=CC=CC2=C1 RUFPHBVGCFYCNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WBQJTPDOGLYTBE-VIFPVBQESA-N 1-nitroso-L-tryptophan Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CN(N=O)C2=C1 WBQJTPDOGLYTBE-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001360526 Escherichia coli ATCC 25922 Species 0.000 description 2
- 238000003794 Gram staining Methods 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- 241000218588 Lactobacillus rhamnosus Species 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 206010058667 Oral toxicity Diseases 0.000 description 2
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 2
- VHRGRCVQAFMJIZ-UHFFFAOYSA-N cadaverine Chemical compound NCCCCCN VHRGRCVQAFMJIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 2
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 2
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 231100000418 oral toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N putrescine Chemical compound NCCCCN KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NGVDGCNFYWLIFO-UHFFFAOYSA-N pyridoxal 5'-phosphate Chemical compound CC1=NC=C(COP(O)(O)=O)C(C=O)=C1O NGVDGCNFYWLIFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000007682 pyridoxal 5'-phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000011589 pyridoxal 5'-phosphate Substances 0.000 description 2
- PFNFFQXMRSDOHW-UHFFFAOYSA-N spermine Chemical compound NCCCNCCCCNCCCN PFNFFQXMRSDOHW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 231100000041 toxicology testing Toxicity 0.000 description 2
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 2
- 230000009278 visceral effect Effects 0.000 description 2
- GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4,6-dichloropyrimidine-5-carbaldehyde Chemical group NC1=NC(Cl)=C(C=O)C(Cl)=N1 GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 206010070545 Bacterial translocation Diseases 0.000 description 1
- 238000009631 Broth culture Methods 0.000 description 1
- 241000588921 Enterobacteriaceae Species 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 206010048723 Multiple-drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102100030569 Nuclear receptor corepressor 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710153660 Nuclear receptor corepressor 2 Proteins 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 239000005700 Putrescine Substances 0.000 description 1
- 241000220317 Rosa Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N Thiamine Natural products CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 231100000215 acute (single dose) toxicity testing Toxicity 0.000 description 1
- 238000011047 acute toxicity test Methods 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- GGFOZRQCNXQCLO-UHFFFAOYSA-N aniline;methanesulfonic acid Chemical compound CS(O)(=O)=O.NC1=CC=CC=C1 GGFOZRQCNXQCLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 230000007375 bacterial translocation Effects 0.000 description 1
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 1
- 238000012742 biochemical analysis Methods 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000005252 bulbus oculi Anatomy 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006114 decarboxylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N dimethyl 2-(3-ethyl-3-methylpentyl)propanedioate Chemical class CCC(C)(CC)CCC(C(=O)OC)C(=O)OC AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 1
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 235000020774 essential nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000003304 gavage Methods 0.000 description 1
- 230000015784 hyperosmotic salinity response Effects 0.000 description 1
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 150000002475 indoles Chemical class 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000002262 irrigation Effects 0.000 description 1
- 238000003973 irrigation Methods 0.000 description 1
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 231100000636 lethal dose Toxicity 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002932 luster Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 229940066779 peptones Drugs 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 231100000572 poisoning Toxicity 0.000 description 1
- 230000000607 poisoning effect Effects 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 229960001327 pyridoxal phosphate Drugs 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000007711 solidification Methods 0.000 description 1
- 230000008023 solidification Effects 0.000 description 1
- 229940063675 spermine Drugs 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N thiamine Chemical compound CC1=C(CCO)SCN1CC1=CN=C(C)N=C1N KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003495 thiamine Drugs 0.000 description 1
- 235000019157 thiamine Nutrition 0.000 description 1
- 239000011721 thiamine Substances 0.000 description 1
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 1
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 238000012070 whole genome sequencing analysis Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
- A23C17/00—Buttermilk; Buttermilk preparations
- A23C17/02—Buttermilk; Buttermilk preparations containing, or treated with, microorganisms or enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
- A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
- A23C9/12—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes
- A23C9/123—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt
- A23C9/1234—Fermented milk preparations; Treatment using microorganisms or enzymes using only microorganisms of the genus lactobacteriaceae; Yoghurt characterised by using a Lactobacillus sp. other than Lactobacillus Bulgaricus, including Bificlobacterium sp.
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12G—WINE; PREPARATION THEREOF; ALCOHOLIC BEVERAGES; PREPARATION OF ALCOHOLIC BEVERAGES NOT PROVIDED FOR IN SUBCLASSES C12C OR C12H
- C12G3/00—Preparation of other alcoholic beverages
- C12G3/02—Preparation of other alcoholic beverages by fermentation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/02—Separating microorganisms from their culture media
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
- A23V2400/169—Plantarum
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
- C12R2001/25—Lactobacillus plantarum
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及微生物领域,具体涉及一种母乳源植物乳杆菌HM‑P2、包含其的菌剂、组合物及其应用。本发明提供的母乳源植物乳杆菌HM‑P2是从健康母乳中筛选得到的,具有极高的耐胆盐能力,可以很好地抵御人体高胆盐环境(如小肠),并且对致病性大肠杆菌和/或金黄色葡萄球菌具有较强的抑菌作用,同时对生物体具有一定的安全性,因此,有望被开发并应用于食品行业。
Description
技术领域
本发明涉及微生物领域,具体涉及一种母乳源植物乳杆菌HM-P2、包含其的菌剂、组合物及其应用。
背景技术
母乳作为婴儿成长初期必不可少的营养来源,对婴儿的成长发育起着至关重要的作用。母乳现已被证实存在活菌,母乳中具有益生特性的微生物是婴儿初步构建免疫系统并抵御疾病的基础,它通过竞争排斥,将占据在婴儿肠道内的病原菌替代并定植,通过发挥其益生特性改善婴儿肠道环境。目前有研究表明乳酸菌存在多重耐药性并且携带耐药基因,同时耐药基因可以水平转移给致病菌,从而导致致病菌具有耐药性,对人体产生危害。
植物乳杆菌也是母乳微生物中乳酸菌的一种,被广泛的应用于食品、医药和农业等领域。
公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解,而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
发明内容
发明目的
为解决上述技术问题,本发明的目的在于提供一种母乳源植物乳杆菌HM-P2、包含其的菌剂、组合物及其应用。
解决方案
为实现本发明目的,本发明采用如下技术方案。
第一方面,本发明提供了一种母乳源植物乳杆菌HM-P2,所述母乳源植物乳杆菌分类命名为植物乳杆菌HM-P2,保藏编号为CGMCC NO.23651。
上述母乳源植物乳杆菌HM-P2已于2021年10月25日保藏在中国普通微生物菌种保藏管理中心;保藏单位地址:中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所;保藏编号为CGMCC NO.23651。
上述母乳源植物乳杆菌在一种可能的实现方式中,所述母乳源植物乳杆菌在0.3%胆盐条件下存活1h后存活率≥118.2%,和/或,在0.3%胆盐条件下存活3h后存活率≥172.4%;这说明,所述母乳源植物乳杆菌具有极高的耐胆盐能力,明显高于现有的商业菌,可以很好抵御人体的高胆盐环境。
上述母乳源植物乳杆菌在一种可能的实现方式中,所述母乳源植物乳杆菌对致病性大肠杆菌和/或金黄色葡萄球菌具有很好的抑菌特性,其抑菌能力明显高于商业菌;在一个具体实施方案中,所述母乳源植物乳杆菌对于致病性大肠杆菌的抑菌圈直径为26.21±0.52cm,对于金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径为24.30±0.52cm。
上述母乳源植物乳杆菌在一种可能的实现方式中,所述母乳源植物乳杆菌被证实具有以下特性:
1)无色氨酸分解能力;2)无氨基酸脱羧酶活性;3)无硝基还原酶活性;4)在毒力因子数据库检索中未注释到有毒性的毒力因子。
对于上述植物乳杆菌,在具体的实施方案中,通过灌服高剂量的上述植物乳杆菌HM-P2的菌液进行急性毒性试验,结果未发现小鼠的行为等有异常,也未出现死亡现象,得出所述母乳源植物乳杆菌对于小鼠的LD50>10g/kg。
对于上述植物乳杆菌,在具体的实施方案中,通过对小鼠进行28天灌服上述植物乳杆菌HM-P2的菌液后发现,关于体重变化,实验组与对照组间无显著性差异(P>0.05);关于脏器指数,实验组与对照组间无显著性差异(P>0.05);此外,将小鼠脏器涂布在MRS培养基上培养后未发现菌落生长,即未产生细菌易位现象;灌胃结束后,检测小鼠血液和血清生化参数,发现植物乳杆菌HM-P2所有剂量组的血液和血清生化参数维持正常;由此可知,本发明所述母乳源植物乳杆菌HM-P2具有一定安全性。
本发明还提供了上述母乳源植物乳杆菌的制备方法,所述制备方法包括下述步骤:
选择新鲜母乳样品,用灭过菌的PBS进行梯度稀释后,涂布于含有1%CaCO3的MRS培养基上,于37℃厌氧培养箱中培养48h,挑取具有明显透明圈的呈白色或乳白色的、长势良好的单菌落进行革兰氏染色并镜检,选择杆状且为革兰氏阳性菌的菌株,于37℃厌氧培养箱中进行富集培养;将菌液与灭过菌的30%甘油按照1:1的比例进行混合后于-80℃的冰箱保存待用;乳杆菌与其他种类的乳酸菌相比,益生特性相对来讲更具优势,因此,本发明将筛选目标定在乳酸菌中的乳杆菌上;
对筛选出来的菌株进行耐胆盐和抑菌性测试,筛选得到一株耐胆盐性最优,同时其耐酸性能、抑菌性能均较好的植物乳杆菌。
第二方面,本发明提供了一种菌剂,所述菌剂的活性成分包括如上述第一方面所述的母乳源植物乳杆菌HM-P2。
第三方面,本发明提供了一种组合物,所述组合物包含如上述第一方面所述的母乳源植物乳杆菌HM-P2,或者包含如上述第二方面所述的菌剂。
第四方面,本发明提供了如上述第一方面所述的母乳源植物乳杆菌HM-P2、如上述第二方面所述的菌剂或者如上述第三方面所述的组合物在制备乳制品中的应用。
在优选的实施方案中,所述乳制品选自乳粉和发酵乳制品。
在优选的具体实施方案中,所述发酵乳制品选自酸奶、开菲尔、发酵酪乳、酸奶酒、乳酒和乳酸菌饮料。
有益效果
本发明提供的母乳源植物乳杆菌HM-P2,是从健康母乳中筛选得到的;所述植物乳杆菌HM-P2具有极高的耐胆盐能力,可以很好地抵御人体高胆盐环境(如小肠),同时,所述植物乳杆菌HM-P2还具有较好的耐酸性(在pH值为3.0的环境中的1h存活率和3h存活率分别为166%,139%),并且对致病性大肠杆菌和/或金黄色葡萄球菌具有较强的抑菌作用,同时对生物体具有一定的安全性,有望被开发并应用于食品行业。
附图说明
一个或多个实施例通过与之对应的附图中的图片进行示例性说明,这些示例性说明并不构成对实施例的限定。在这里专用的词“示例性”意为“用作例子、实施例或说明性”。这里作为“示例性”所说明的任何实施例不必解释为优于或好于其它实施例。
图1是本发明实施例1中记载的、母乳源植物乳杆菌HM-P2的耐胆盐实验结果;
图2是本发明实施例2中记载的、母乳源植物乳杆菌HM-P2的鉴定结果图;
图3是本发明实施例3中记载的、母乳源植物乳杆菌HM-P2的耐酸性测定结果图;
图4是本发明实施例4中记载的、母乳源植物乳杆菌HM-P2的抑菌能力测定结果图。
本发明提供的母乳源植物乳杆菌HM-P2分类命名为植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum),保藏日期:2021年10月25日;保藏单位:中国普通微生物菌种保藏管理中心;保藏地址:中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所;保藏编号为CGMCCNO.23651。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚,下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。除非另有其它明确表示,否则在整个说明书和权利要求书中,术语“包括”或其变换如“包含”或“包括有”等等将被理解为包括所陈述的元件或组成部分,而并未排除其它元件或其它组成部分。
另外,为了更好的说明本发明,在下文的具体实施方式中给出了众多的具体细节。本领域技术人员应当理解,没有某些具体细节,本发明同样可以实施。在一些实施例中,对于本领域技术人员熟知的原料、元件、方法、手段等未作详细描述,以便于凸显本发明的主旨。
下述实施例中,
MRS固体培养基购自北京陆桥技术股份有限公司,货号为CM188;
MRS肉汤培养基购自北京陆桥技术股份有限公司,货号为CM187;
营养琼脂购自北京陆桥技术股份有限公司,货号为CM107;
Kovacs氏靛基质试剂购自青岛海博生物;
对照菌株L.plantarum299253、L.reuteri254476、L.gasseri339385均购自北纳创联生物科技有限公司,L.reuteri DSM17938购自拜奥,L.rhamnosusLGG购自康萃乐。
实施例1:母乳源植物乳杆菌HM-P2的筛选
选择新鲜母乳样品,用灭过菌的PBS缓冲液(购自广州洁特生物过滤股份有限公司)进行梯度稀释后,涂布于含有1%CaCO3的MRS固体培养基上,于37℃厌氧培养箱中培养48h,挑取具有明显透明圈的呈白色或乳白色的单菌落进行革兰氏染色并镜检,选择杆状且为革兰氏阳性菌的菌株,从众多菌株中选择长势较好的菌株,于37℃厌氧培养箱中进行富集培养;对筛选出来的菌株进行耐胆盐测试,筛选得到一株耐胆盐性最优的植物乳杆菌,即为本发明的植物乳杆菌HM-P2;将菌液与灭过菌的30%甘油按照1:1的比例进行混合后于-80℃的冰箱保存待用。
所述耐胆盐测试采用如下方法:
在无菌条件下,将待测菌株在MRS液体培养基中传代培养3代以进行活化,用空培养基稀释菌液至活菌数为108CFU/mL;将活化好的菌液转移至灭菌的离心管中,3000prm,10min离心收集第3代菌体,将其重悬于含0.3%胆盐的MRS液体培养基中,调整菌体浓度至108CFU/mL,37℃厌氧培养,分别于0、1、3h小时取样,用灭菌的PBS缓冲液进行10倍梯度稀释,选3个适宜稀释度各取100μL涂布于MRS固体培养基平板中,37℃培养48小时后计数。
测试结果如图1所示,由图1可知,母乳源植物乳杆菌HM-P2在0.3%胆盐条件下存活1h和3h后,存活率分别达到118.2%和172.4%,显著高于商业菌株。
实施例2:母乳源植物乳杆菌HM-P2的鉴定
本实施例中,对实施例1筛选出的植物乳杆菌HM-P2进行全基因测序分析.
具体地,采用Pacbio(10Kb SMRT Bell文库)和Illumina PE150(350bp小片段文库)测序平台,对其进行全基因组测序,然后对测序结果进行NR(Non-Redundant ProteinDatabase)数据库注释(用于物种信息鉴定,可作为物种分类用),结果如图2所示。
由图2可知,植物乳杆菌HM-P2中86.68%的基因符合植物乳杆菌属,结合HM-P2的形态学特征(圆端直杆菌,短链状,革兰氏阳性菌),将HM-P2鉴定为植物乳杆菌。
实施例3:母乳源植物乳杆菌HM-P2的耐酸性测定
在无菌条件下,将待测菌株(包括本发明植物乳杆菌HM-P2和作为对照的L.plantarum BNCC299253、L.reuteri BNCC254476、L.gasseri BNCC339385、L.reuteriDSM17938、L.rhamnosus LGG)在MRS液体培养基中传代培养3代,用空培养基稀释菌液至活菌数为108CFU/mL。将活化好的菌液转移至灭菌的离心管中,3000rpm,离心10min收集菌体,液体MRS培养基洗涤2次,重悬于pH为3.0的MRS液体培养基中,37℃厌氧培养,分别于0、1、3h取样,用灭菌PBS缓冲液10倍稀释,在适宜稀释度取100μL涂布于MRS平板,每个稀释度2个平行,37℃培养48h后计数。
测试结果如图3所示,图3显示:母乳源植物乳杆菌HM-P2在pH3.0的条件下存活1h和3h后,存活率分别达到165.66%和139.4%,远远高于对照菌株,特别是显著高于其同种菌株L.plantarum BNCC299253。
实施例4:母乳源植物乳杆菌HM-P2的抑菌能力测定
1)指示菌:
大肠杆菌ATCC 25922和金黄色葡萄球菌ATCC 25923
2)方法:
将待测菌株(包括本发明植物乳杆菌HM-P2和作为对照的L.plantarumBNCC299253、L.reuteri BNCC254476、L.gasseri BNCC339385、L.reuteri DSM 17938、L.rhamnosus LGG)培养活化三代后,将第三代菌液在4℃,5000rpm,离心20min,将上清液于4℃保存备用。
将指示菌按2%的接种量接种于营养肉汤培养液中,37℃培养24h,连续活化三代,调整菌体浓度为106CFU/mL(大约10的-3次方梯度),吸取200μL涂布于营养琼脂平板中;打开平板盖,置于无菌空气中0.5h,使平板培养基散失一定量的水分,利于抑菌物质的扩散。
参考牛津杯琼脂扩散法进行抑菌实验。具体地,用无菌镊子将牛津杯(直径8mm)轻轻放置在培养皿中,并轻轻加压,每个平皿上等距离放置4个牛津杯;再加入10毫升营养琼脂(45℃)固定牛津杯,待凝固后取出牛津杯;向其中3个加入200μL发酵上清液,另一个牛津杯中加入等量的MRS液体培养基作为阴性对照;将平板在室温下扩散3小时后置于37℃培养12小时,观察抑菌圈的出现并记录抑菌直径,结果以平均值±标准差表示。
测定结果见图4,由图4可知,植物乳杆菌HM-P2对于大肠的抑菌圈直径为26.21±0.52cm,对于金色葡萄球菌的抑菌圈直径为24.30±0.52cm,显著高于其他商业菌的抑菌性能,特别是显著高于其同种菌株L.plantarum BNCC299253。
实施例5:母乳源植物乳杆菌HM-P2的毒力因子预测
将植物乳杆菌HM-P2的基因组序列与毒力因子数据库VFDB(Virulence Factorsof Pathogenic Bacteria)进行对比,将相似率70%以上作为可信预测。
结果见以下表1。
表1、植物乳杆菌HM-P2的基因组中预测的毒力因子
由表1可知,植物乳杆菌HM-P2在VFDB毒力因子数据库检索中未注释到真正具有毒性的毒力因子。
实施例6:母乳源植物乳杆菌HM-P2的体外毒性研究
1)氨基酸脱羧酶实验
实验原理:具有氨基酸脱羧酶的细菌,能分解氨基酸使其脱羧生成胺(赖氨酸→尸胺,鸟氨酸→腐胺,精氨酸→精胺)和二氧化碳,使培养基变碱,使指示剂(溴甲酚紫)保持紫色,为阳性;如果不发生脱羧反应,则肠杆科的细菌能分解葡萄糖,产生酸,使指示剂溴甲酚紫变成黄色,为阴性。
实验过程:将植物乳杆菌HM-P2在MRS培养基中活化2次(即,传代培养2代);然后,在含0.1%前体氨基酸(赖氨酸、精氨酸、鸟氨酸,各含0.1%)和0.005%磷酸吡哆醛-5-磷酸的MRS培养基中传代培养5次(以此诱导脱羧酶);之后接入含指示剂(溴甲酚紫)的脱羧酶培养基,进行4天的培养,观察培养基颜色及测定培养基pH值。所用脱羧酶培养基的配制方法为:胰蛋白胨5g、酵母粉5g、牛肉膏5g、氯化钠2g、葡萄糖0.5g、吐温80 1g、MnSO4 0.5g、MgSO40.2g、FeSO4 0.04g、硫胺素0.01g、K2HPO4 2g、CaCO30.1g、溴甲酚紫0.06g、5'-磷酸吡哆醛0.05g、前体氨基酸(赖氨酸、精氨酸、鸟氨酸)各5g,加去离子水至1L,即得。
实验结果见以下表2;结果显示,作为阳性对照的大肠杆菌ATCC 25922培养基显示为紫色(即,为阳性),而植物乳杆菌HM-P2培养基则呈黄色(即,为阴性),这说明:植物乳杆菌HM-P2无氨基酸脱羧酶活性。
表2、氨基酸脱羧酶实验结果
注:“+”为阳性,“-”为阴性
2)靛基质实验:
实验原理:某些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸,生成吲哚。吲哚的存在可用显色反应表现出来。吲哚与对二甲基氨基苯醛结合,形成玫瑰吲哚,为红色化合物。
实验过程:将活化的植物乳杆菌HM-P2与质控菌ATCC 25922(作为阳性对照)按3%的接种量分别接入到靛基质试验培养基中,于37℃恒温下培养72h。为了提取和浓缩靛基质,可将少量乙醚加入培养液中,震荡混匀,待乙醚层浮于培养液表面后,缓慢加入Kovacs氏靛基质试剂8~10滴,出现红色圆环则为靛基质反应阳性。
结果见以下表3;结果显示,在滴加Kovacs氏靛基质试剂后,质控菌大肠杆菌ATCC25922(作为阳性对照)测定管中出现玫瑰色圆环,即靛基质反应阳性,而在植物乳杆菌HM-P2测定管中均未出现圆环,即靛基质反应阴性;这些结果说明:植物乳杆菌HM-P2无色氨酸分解能力。
表3、靛基质实验结果
注:“+”为阳性,“-”为阴性
3)硝基还原酶实验:
实验原理:细菌的硝基还原酶可以激活硝基类药物,使其产生细胞毒性。
实验过程:将活化的植物乳杆菌HM-P2与质控菌ATCC 25922(作为阳性对照)按3%的接种量分别接入硝基还原酶试验培养基中,于37℃恒温下培养72h;然后将α-萘胺溶液和对氨基苯甲磺酸溶液的混合溶液依次加入培养液中,培养基变红则表明硝基还原酶检测结果阳性,否则为阴性。
结果见以下表4;结果显示,质控菌株大肠杆菌ATCC 25922呈硝基还原酶阳性,植物乳杆菌HM-P2培养液未出现红色,即硝基还原酶阴性;由此可以得出,本发明植物乳杆菌HM-P2无硝基还原酶活性。
表4、硝基还原酶检测结果
注:“+”为阳性,“-”为阴性
实施例7:母乳源植物乳杆菌HM-P2的体内安全性研究
1)灌胃菌液制备:
将植物乳杆菌HM-P2从-80℃超低温冰箱中取出,接种于MRS液体培养基中,传代培养活化三代;取活化的第三代菌液以2%接种量接入MRS培养基中,在37℃培养条件下培养12h;12h后,将菌液稀释10-1-10-7系列梯度,取100μL合适稀释梯度的菌液涂布于MRS固体培养基上,37℃培养48h;最后,选取计算菌落数在30~300之间的平板。
采用以下公式计算活菌数:
CFU/mL=(菌落数平均值*稀释倍数)/涂布量
2)试验小鼠适应性喂养:
将SPF级C57BL/6JNifdc小鼠放在37*26*17cm3的塑料笼子里面,每只塑料笼子5~6只小鼠,自由进食饮水;饲养房的温度设置为(22±2)℃,相对湿度为50%-60%,光照和黑暗均为12h,喂养7天后进行试验。
3)急性经口毒性试验:
参照GB15193.3-2014《急性经口毒性试验》中最大极限的方法,随机取自适应喂养7天的小鼠,将其分为实验组和对照组,每组小鼠5-6只;对照组灌以0.85%浓度的生理盐水/天,实验组灌以高浓度1010cfu/mL的待测菌液/天,灌胃量为0.2mL/只,期间保证进食和饮水充足,连续灌胃7天,灌胃期间观察和记录小鼠生理状态和有无死亡情况,以推出半数致死量LD50。
4)28天经口毒性试验:
参照GB15193.22-2014《28d经口毒性试验》进行毒性研究,具体地,随机取自适应喂养7天的小鼠,将其分成3组实验组和1组对照组,每组由5~6只小鼠组成,实验分组见以下表5;对照组灌以0.85%浓度的生理盐水,实验组则分别灌以高浓度(1010CFU/mL)、中浓度(109CFU/mL)和低浓度(108CFU/mL)的HM-P2菌液,灌胃量为0.2mL/只,期间保证进食和饮水充足,连续喂养28天,在此期间每周记录小鼠体重以研究小鼠在灌胃期间体重变化趋势,在第28天晚上对小鼠进行进食,第29天早晨8点处死。
表5、28d灌胃喂养分组及灌胃剂量
5)小鼠脏器指数:
在第29天处死小鼠后对其进行解剖,观察小鼠心、肝、脾、肺和肾的色泽以及是否有明显的变化;具体地,用无菌手术刀将心、肝、脾、肺和肾取出并放在无菌平皿上,用无菌的生理盐水冲洗再用滤纸吸干,对每种脏器称重,按照以下公式计算小鼠的脏体比。
脏体比=脏器质量(g)/小鼠体重质量(g)
6)小鼠血液学和血清生化指标测定:
小鼠喂养28天后,禁食过夜,次日于眼球采血,进行血液和血清生化分析。具体地,取150μL小鼠全血置于装有抗凝剂的离心管中,并于4℃条件下送至检测机构,再使用全自动血细胞分析仪检测小鼠的血液参数;剩下的血液在4℃下凝结,然后在4℃下3000rpm离心10min获得血清,在-80℃条件下将血清送至检测机构,使用全自动生化分析仪来检测小鼠肝脏、肾脏、血糖、血脂和胆固醇水平,结果以平均数±标准差表示。
7)细菌异位实验:
将实验小鼠各脏器涂布在MRS培养基上进行培养,观察有无菌落生长情况。
上述实验的实验结果如下:
急性经口毒性试验结果:
连续灌胃7天,观察小鼠各项日常指标,显示:小鼠未中毒也没有出现死亡现象,因此,计算得出LD50>10g/kg。小鼠行为动作等项目的观察结果见以下表6。
表6、小鼠中毒表现观察项目
小鼠脏器指数结果:
在28天喂养后,对小鼠进行大体解剖,观察各脏器情况,结果显示:各脏器均未发生器质性病变,颜色正常,质软并且无肿块等;同时,收集了各脏器并称重计算其相应的脏器指数,结果如以下表7所示。
计算试验菌株不同浓度组别的小鼠的心体比、肝体比、脾体比、肺体比,并将其与对照组相比,结果显示:试验菌株组与对照组并无显著性差异(P>0.05),说明:灌服植物乳杆菌HM-P2对小鼠的脏器并无影响。
表7、小鼠脏器指数
注:P>0.05
小鼠血常规及血清生化参数检测结果:
小鼠的血液参数检测结果如以下表8所示,由表8可以看出,小鼠的各项血液参数都有升高或降低但与对照组相比并无显著性差异(P>0.05);这说明:灌服植物乳杆菌HM-P2对小鼠的血液参数并无不利影响。
表8、试验菌株对小鼠血液参数影响
注:P>0.05
小鼠的血清参数检测结果如以下表9所示,由表9可以看出,小鼠的各项血清生化参数与对照组相比并无显著性差异(P>0.05);这说明:灌服植物乳杆菌HM-P2对小鼠的血清生化参数并无不利影响。
表9、试验菌株对小鼠血清生化参数影响
注:P>0.05
细菌异位实验结果:
将各脏器涂布在MRS培养基上进行培养后,未观察到菌落生长,这说明:植物乳杆菌HM-P2在小鼠体内未发生易位现象,不会给机体带来相应的安全问题。
上述体内实验结果显示,本发明的植物乳杆菌HM-P2在生物体内具有极高的安全性。
最后应说明的是:以上实施例仅用以说明本发明的技术方案,而非对其限制;尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明,本领域的普通技术人员应当理解:其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分技术特征进行等同替换;而这些修改或者替换,并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
Claims (6)
1.一种母乳源植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)HM-P2,其特征在于:所述母乳源植物乳杆菌于2021年10月25日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心,保藏编号为CGMCC NO.23651。
2.一种菌剂,其特征在于,所述菌剂的活性成分包括如权利要求1所述的母乳源植物乳杆菌HM-P2。
3.一种组合物,其特征在于,所述组合物包含如权利要求1所述的母乳源植物乳杆菌HM-P2,或者包含如权利要求2所述的菌剂。
4.根据权利要求1所述的母乳源植物乳杆菌HM-P2、根据权利要求2所述的菌剂或者根据权利要求3所述的组合物在制备乳制品中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用,其特征在于:所述乳制品选自乳粉和发酵乳制品。
6.根据权利要求5所述的应用,其特征在于:所述发酵乳制品选自酸奶、开菲尔、发酵酪乳、酸奶酒、乳酒和乳酸菌饮料。
Priority Applications (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202211142331.XA CN115491329B (zh) | 2022-09-20 | 2022-09-20 | 一种母乳源植物乳杆菌hm-p2及其应用 |
PCT/CN2023/104423 WO2024060768A1 (zh) | 2022-09-20 | 2023-06-30 | 一种母乳源植物乳杆菌hm-p2及其应用 |
AU2023226655A AU2023226655B8 (en) | 2022-09-20 | 2023-06-30 | Breast Milk-Derived Lactobacillus Plantarum HM-P2 and Use Thereof |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202211142331.XA CN115491329B (zh) | 2022-09-20 | 2022-09-20 | 一种母乳源植物乳杆菌hm-p2及其应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN115491329A CN115491329A (zh) | 2022-12-20 |
CN115491329B true CN115491329B (zh) | 2023-06-16 |
Family
ID=84470189
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202211142331.XA Active CN115491329B (zh) | 2022-09-20 | 2022-09-20 | 一种母乳源植物乳杆菌hm-p2及其应用 |
Country Status (2)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN115491329B (zh) |
WO (1) | WO2024060768A1 (zh) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN115491329B (zh) * | 2022-09-20 | 2023-06-16 | 北京三元食品股份有限公司 | 一种母乳源植物乳杆菌hm-p2及其应用 |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR101772872B1 (ko) * | 2016-02-05 | 2017-08-30 | 명지대학교 산학협력단 | 프로바이오틱 활성을 갖는 신규 락토바실러스 플란타럼 및 이의 용도 |
CN111235070B (zh) * | 2020-03-18 | 2022-03-08 | 河北农业大学 | 一株母乳婴儿源植物乳杆菌bf_15及其应用 |
CN111778180B (zh) * | 2020-06-12 | 2021-12-14 | 北京三元食品股份有限公司 | 一种母乳源植物乳杆菌及其应用 |
CN115491329B (zh) * | 2022-09-20 | 2023-06-16 | 北京三元食品股份有限公司 | 一种母乳源植物乳杆菌hm-p2及其应用 |
-
2022
- 2022-09-20 CN CN202211142331.XA patent/CN115491329B/zh active Active
-
2023
- 2023-06-30 WO PCT/CN2023/104423 patent/WO2024060768A1/zh active Application Filing
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN115491329A (zh) | 2022-12-20 |
WO2024060768A1 (zh) | 2024-03-28 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN110373342B (zh) | 罗伊氏乳杆菌及其用途 | |
CN106957810B (zh) | 一种乳酸片球菌及其用途 | |
CN111534446A (zh) | 罗伊氏乳杆菌及其应用 | |
CN110577912B (zh) | 一种格氏乳杆菌及其在制备发酵乳中的应用 | |
CN108707565B (zh) | 一种两歧双歧杆菌及其应用 | |
CN111778180B (zh) | 一种母乳源植物乳杆菌及其应用 | |
CN110628663B (zh) | 一株鼠李糖乳杆菌及其高密度培养方法和应用 | |
CN107964524B (zh) | 一种具有乳酸活性的乳酸乳球菌hks2及其分离筛选方法和应用 | |
CN111925961A (zh) | 一株植物乳杆菌Lp2及其应用 | |
CN112812999B (zh) | 一株对阴沟肠杆菌具有抑制作用的植物乳杆菌slb01及其衍生产品和应用 | |
CN115491329B (zh) | 一种母乳源植物乳杆菌hm-p2及其应用 | |
CN112375696B (zh) | 一种驴乳源戊糖片球菌及其应用 | |
CN113736683A (zh) | 一株抑制幽门螺杆菌的嗜热链球菌及其应用 | |
CN114009784A (zh) | 一种耐酸耐胆汁盐定植能力强的益生菌组合物及其制备方法和应用 | |
CN110028560B (zh) | 一种凝结芽孢杆菌产的细菌素及其应用 | |
WO2021248440A1 (zh) | 一种母乳源植物乳杆菌及其应用 | |
CN117143767B (zh) | 可调节肠道菌群的母乳源发酵粘液乳杆菌msjk0025及其应用 | |
CN112063566B (zh) | 一株屎肠球菌及其应用 | |
CN111088181B (zh) | 短双歧杆菌菌株bk55及在抑制艰难梭菌中的应用 | |
CN116396890B (zh) | 用于防治结肠癌的植物乳杆菌zjuids15及其应用 | |
CN113913334B (zh) | 一株粪肠球菌ef-za1107-06及其应用 | |
CN114806944B (zh) | 植物乳杆菌lp11、其发酵液及制备方法和应用 | |
CN114717150B (zh) | 一种植物乳杆菌crs33及其应用 | |
Ebnetorab et al. | Isolation, biochemical and molecular detection of Bacillus subtilis and Bacillus licheniformis from the digestive system of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) and its inhibitory effect on Aeromonas hydrophila | |
AU2023226655B8 (en) | Breast Milk-Derived Lactobacillus Plantarum HM-P2 and Use Thereof |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant | ||
REG | Reference to a national code |
Ref country code: HK Ref legal event code: DE Ref document number: 40085002 Country of ref document: HK |