CN115381801A - 维生素a用于改善动物肉质的新用途 - Google Patents
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Abstract
本发明提出了一种维生素A用于改善动物肉质的新用途，即所述维生素A用于制备提升动物主要是肉羊的骨骼肌生长速度，并改善肉质的注射剂。具体为通过注射的方式将维生素A棕榈酸酯溶于玉米油直接注射到初生羔羊的股二头肌处，从而避免经口进入瘤胃中发生微生物代谢降低维生素A的生物学效价。本申请的方法能够极大的提早维生素A作用的介入时间，同时避免维生素A脂溶性的特点导致机体吸收不充分等问题，直接作用于骨骼肌靶点，满足骨骼肌早期发育需求，有效快速提高羔羊的生长速度以及肉质品质。
Description
技术领域
本发明涉及畜牧生物技术领域，具体涉及一种维生素A用于改善动物肉质的新用途。
背景技术
肉类是人们重要的蛋白质来源之一，随着生产技术的改进以及人们需求的变化，羊肉的产量连年持续增加用以满足人们不断的消费需求。虽然我国作为养羊与羊肉生产、消费大国，肉羊存栏量较高，但单产水平仍然较低，出栏重及胴体重远低于发达国家水平。
理论上讲，牛、羊等家畜根据其习性可从绿色牧场中获取充足的β-胡萝卜素以保持健康。但结合实际情况，用于饲料的草料由于干旱和长期储存，容易导致维生素A缺乏。近年来，随着肉羊养殖向舍饲、半舍饲过度，缺乏青绿饲料摄入，更容易导致维生素A的缺乏。然而，VA是动物生长、发育等生命活动必需维生素，因此家畜补充维生素A对其生长发育至关重要。现有的补充维生素A的方法都是在饲料中添加，以饲料经口的方式进行补充。本申请的团队经过研究发现这种形式效果并不理想，并且具有一些弊端和应用局限。首先，对于初生动物，饲料的方式并不适用，而早期的器官生长发育决定生长后期的潜能。；第二，对反刍动物而言，维生素A经口进入瘤胃中可能发生微生物代谢，饲料中的VA难以保证全部被吸收，难以作用于实际需要的靶点(例如骨骼肌)，而且并且进入机体后VA主要储存于肝脏，最后作用效果一般甚至可能出现和预期相反的结果。
因此，我们提出一种新的维生素A用于改善动物肉质的方法用途。
发明内容
本申请的发明人提出一种维生素A用于改善动物肉质的新用途的用法，从而实现作用于肌肉的靶点效果，提高骨骼肌的生长速度，提高动物肉质性能。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种维生素A用于改善动物肉质的新用途，所述维生素A用于制备改善动物肉质的注射剂。
优选的，所述维生素A溶于有机介质后以注射剂的方式注入到动物肌肉中。
优选的，所述有机溶剂为玉米油。
优选的，所述注射剂中维生素A以维生素A棕榈酸酯的化合态存在。
优选的，所述动物为反刍动物。
优选的，所述动物为绵羊。
优选的，所述注射剂的维生素A注射剂量为2500IU/kg。
优选的，所述注射剂的注射时机为首次注射为初生3天的羔羊，共注射4次，每次间隔7天，注射位置为股二头肌处。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
(1)本申请使用维生素A的方式，摒弃了传统加入饲料的方法，采用作为注射剂的方式直接作用于靶点(肌肉)，能够避免维生素A经(反刍动物)瘤胃后的代谢，提高作用效果，从而保证肌肉接收足够的维生素A，发挥其作用。
(2)提前了其发挥生理作用的时间。本申请以注射剂方式使用维生素A，能够提早让动物接收，从而满足骨骼肌早期发育，利于后期生长，本申请发明的技术内容能够有效快速提高羔羊的生长速度以及肉质品质，使羊的出栏重显著增加，产肉率显著提高。
附图说明
图1为视黄酸作用机理验证图；
图2为初生羔羊注射维生素A棕榈酸酯的对照体重变化图；
图3为断奶羔羊注射维生素A棕榈酸酯的对照体重变化图；
图4为维生素A棕榈酸酯对羔羊血清中视黄酸含量及生长因子的影响；
图5为维生素A棕榈酸酯对羔羊肌纤维的影响；
图6为维生素A棕榈酸酯对羔羊成肌基因的影响；
图7为维生素A棕榈酸酯对羔羊相关蛋白的影响。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例进一步的阐述本发明应用的科学论证，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
请参阅图1-7，本发明提供一种技术方案，维生素A用于改善动物肉质的新用途，即所述维生素A用于制备改善动物肉质的注射剂。从而避免以饲料的方式经口进入瘤胃发生微生物代谢，而被肝脏吸收，降低维生素A的应用效果，采用注射的形式直接注射于肌肉靶点，可以保证肌肉接收足够的VA，发挥其作用。
根据本申请的技术方案，对初生羔羊多次注射维生素A发现注射维生素A棕榈酸酯组羔羊的生长速度明显加快，肌纤维直径明显增大。在8月龄屠宰之后，发现处理组羊的总增重、胴体重及眼肌面积等都显著增加。
经过多次反复的试验，将注射计量确定为2500IU/kg，其中采用的注射剂为维生素A棕榈酸酯，经换算后，确定维生素A棕榈酸酯的剂量为1375μg/kg，注射位置选择在股二头肌处一次性注射计量的维生素A棕榈酸酯，每只羔羊注射4次，每次间隔7天。
为更加明显证明本申请方法的有效性，进行对照组实验。
选择健康状况良好，体重在3kg左右的公羔羊并分配在不同组中，注射时用酒精擦拭羔羊股二头肌处并一次性注射7500IU维生素A当量的玉米油溶解的维生素A棕榈酸酯，而在对照组中注射相同体积的玉米油，实验组和对照组均是同样的分4次注射，每次间隔7天，为了降低误差，每次注射时间都选择为上午的10点，采取棚舍饲养温度保持在10℃，每次在注射完后要观察羔羊的活动状态，确保没有异常。并且每周监测羔羊体重变化。
进行颈静脉采血及活体采集骨骼肌样本，用来检测不同处理组中羔羊的生长状况指标。
注意，采血时第一步要将羔羊固定，然后用真空采血管在其颈静脉处采血，之后将血液倾斜放到37℃的水浴锅中，待血清自动析出。第二步，分离血清，方法：4℃下经4000r/min离心1min，收集上清即为试验用血清，血清于-80℃中保存，待测，测定前4℃下解冻，避免反复冻融。
为了选取关键指标从而表征方法的有效性，实验分离初生羔羊的骨骼肌肌肉前体细胞，并进行体外培养，如图1-A所示发现培养基中加入10nM及100nM视黄酸可以有效促进细胞的成肌分化，促进肌管的形成，同时如图1-B所示关键基因Myogenin表达呈视黄酸浓度依赖式变化，即10nM视黄酸即可以促进成肌分化的标志蛋白MHC表达。而视黄酸是维生素A的进入体内后代谢活性物质，维生素A要转换为视黄酸才可以发挥生理功能，视黄酸促进羔羊骨骼肌前体细胞体外分化，这不仅证明了维生素A的注入能够有效促进初生羔羊肌肉前体细胞的成肌分化，也提供了视黄酸可作为重要的检测指标。
具体的，视黄酸的检测方法为：通过高效液相色谱检测不同组羔羊血清中视黄酸的含量情况。
将血清做预处理：取400μl血清，加入400μl乙醇，涡旋1min，加入800μl正己烷；
涡旋3min，1000r/min离心10min，取600μl上清液，残渣中再加600μl正己烷，涡旋3min，1000r/min离心10min，取上清液；
合并两次上清液，氮气吹干，加入400μl甲醇溶解，涡旋1min，经0.22μm的微孔滤膜过滤后，上机检测。
液箱色谱参数为：甲醇为流动相，流速1ml/min，检测波长325nm，柱温35℃，进样20μl。另外还用Elisa检测试剂盒检测血清中的生长因子IGF1、IGF2及GH的含量。
除此之外，活体采集骨骼肌样本进行表征。
准备75％酒精、生理盐水、肾上腺素和手术器械。
首先，用利多卡因将羔羊麻醉，然后将其后腿股二头肌处的毛剃干净，区域面积为10cm×10cm，然后碘伏擦拭后用手术刀在皮肤上做一个3cm左右的切口，收集1-2g的骨骼肌样本，缝合皮肤并清洁伤口，定期检查，防止感染。
之后收集的样本进行以下处理：
(1)冻存于液氮中用来提取RNA，q-PCR检测成肌基因的表达，
Western Blotting检测肌肉合成相关蛋白的表达；
(2)用4％多聚甲醛固定制作石蜡切片，苏木精伊红染色观察肌纤维大小的分布。
通过体重变化的分析，如图2所示，注射维生素A棕榈酸酯组羔羊的生长速度明显加快。
另外为了更加具有参考意义，还做了在羔羊12周(断奶)后开始注射维生素A棕榈酸酯的第二个对照组，注射的时间和频次与之前相同，其体重变化如图3所示，可以发现在断奶后再对羔羊注射维生素A棕榈酸酯对提高羔羊的生长速度作用并不大，所以对初生羔羊进行注射的时机尤为重要。
通过分析血清中视黄酸含量及生长因子比较维生素A棕榈酸酯的作用。
如图4-A所示，3周和12周注射维生素A棕榈酸酯后的羔羊血清中视黄酸的含量均升高。如图4-B、C、D，通过Elisa试剂盒检测生长激素(GH)、胰岛素样生长因子1(IGF1)及胰岛素样生长因子2(IGF2)可以看出，初生羔羊注射维生素A棕榈酸酯能有效增加血清中生长因子(包括GH、IGF1和IGF2)的含量。
通过手术采集骨骼肌样品后经固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片及染色后镜检拍照，如图5-A发现在3周龄时两组肌纤维直径没有明显差异。而经过12周龄后再次染色后镜检拍照，能够发现注射过维生素A棕榈酸酯的肌纤维直径明显增大，如图5-B。之后在屠宰后对骨骼肌样品染色后镜检拍照，仍然发现注射过维生素A棕榈酸酯的肌纤维直径明显大于对照组，如图5-C。
同样的在初生羔羊注射维生素A棕榈酸酯后，通过检测肌基因的表达并且MyoG的蛋白含量也增加，如图6所示，3周龄、12周龄时注射过维生素A棕榈酸酯的实验组生肌基因MyoD和MyoG的表达量显著升高。同时如图7所示，MyoG的蛋白表达量也明显增加。可以表面在早期对羔羊维生素A棕榈酸酯能够促进羔羊的肌肉发育。
综上，本申请的技术方案提供了维生素A尤其是维生素A棕榈酸酯在改善动物肉质尤其是羊肉上的新用途，并提出了具体的用法，即作为注射剂直接注射用于羔羊骨骼肌，不仅让维生素A避免进入瘤胃发生微生物代谢，而且相比传统的方式能够提早介入，能够有效改善羔羊肉质和产量，使羊的出栏重显著增加，产肉率显著提高。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (8)
1.维生素A用于改善动物肉质的新用途，其特征在于：所述维生素A用于制备改善动物肉质的注射剂。
2.根据权利要求1所述的维生素A用于改善动物肉质的新用途，其特征在于：所述维生素A溶于有机介质后以注射剂的方式注入到动物肌肉中。
3.根据权利要求1所述的维生素A用于改善动物肉质的新用途，其特征在于：所述有机溶剂为玉米油。
4.根据权利要求1所述的维生素A用于改善动物肉质的新用途，其特征在于：所述注射剂中维生素A以维生素A棕榈酸酯的化合态存在。
5.根据权利要求1所述的维生素A用于改善动物肉质的新用途，其特征在于：所述动物为反刍动物。
6.根据权利要求5所述的维生素A用于改善动物肉质的新用途，其特征在于：所述动物为绵羊。
7.根据权利要求6所述的维生素A用于改善动物肉质的新用途，其特征在于：所述注射剂的维生素A注射剂量为2500IU/kg。
8.根据权利要求7所述的维生素A用于改善动物肉质的新用途，其特征在于：所述注射剂的注射时机为首次注射为初生3天的羔羊，共注射4次，每次间隔7天，注射位置为股二头肌处。
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| JPH07274898A (ja) * | 1994-02-18 | 1995-10-24 | Fuji Seiyaku Kk | 改善食肉とその製造方法 |
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| CN103947888A (zh) * | 2014-05-09 | 2014-07-30 | 山东新希望六和集团有限公司 | 一种用于改善肉质风味的羔羊饲料及其制备方法 |
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2022
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