CN115337363B - 一种治疗肾炎血尿的中药组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种治疗肾炎血尿的中药组合物，由活性成分和药学上可接受的辅料组成，所述活性成分由以下配比的原料药制成：女贞子3～9重量份，牛蒡子3～9重量份，墨旱莲3～9重量份，白茅根9～27重量份，石韦6～12重量份，黄芪6～12重量份，胡枝子6～12重量份，凤尾草6～12重量份，侧柏叶6～12重量份和紫草3～9重量份。本发明提供一种中药组合物，具有滋肾益气凉血、化瘀止血、解毒利湿等功效，可用于治疗各类肾炎血尿，疗效显著，安全无毒，且制备方法简便，适合工业化生产。

Description

一种治疗肾炎血尿的中药组合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及生物医药领域，尤其涉及一种治疗肾炎血尿的中药组合物及其制备方法和应用。
背景技术
在急性肾小球肾炎、急进性肾小球肾炎、慢性肾小球肾炎、隐匿性肾小球疾病、肾病综合征、狼疮性肾炎和过敏性紫癜性肾炎等多种肾病中，尿血是经常出现的症状，这是由于红细胞通过有病理改变的肾小球基底膜时受到挤压，使红细胞发生形态学改变而致病。
目前对于肾炎的治疗，西医对其发病机制尚未提出明确的认识，大多数学者认为该病的发生可能与自由基损伤、免疫功能紊乱、血流改变等相关，往往采取抗生素、利尿剂、免疫抑制剂、细胞毒类药物和抗凝治疗等方法，甚至需要采用透析方法，但是较少单独针对血尿加以治疗。
肾炎血尿属中医“尿血”、“溺血”等证范畴，又称“溲血”、“小便出血”或“小便血”等。中医药在消除血尿、改善临床症状等方面逐渐表现出了独特的优势，与西药相比，中医药治疗肾炎血尿，在改善整体症状和保证用药的安全性上具有独特的优势，其研制开发受到越来越广泛的重视。中医药治疗肾炎血尿，往往以辨证论治理论作为基础。受牵连脏腑往往是脾、肾与膀胱，常见病机是脾肾及虚、肝肾阴虚、湿热内蕴、热毒内阻或气血瘀滞等。由于肾炎血尿的成因复杂，目前医界尚无明确分类，因此治疗肾炎血尿药物也是形形色色，目前没有明确的治疗药物，多联合用药，如应用健脾补肾中药加服雷公藤多苷片，采用清解凉利药加川芎嗪，补肾养阴方加激素、免疫抑制剂等药物，活血化瘀方加维生素E，肾宁合剂加强的松治疗，等等。
在长期的医疗实践中，我们发现，肾炎血尿病位在肾与膀胱，但可涉及肝、心、脾、肺等五脏六腑，病机不外气不摄血与血热妄行两类。以肾阴不足、湿毒内蕴、瘀血阻络之证最为常见，见小便短少，色红或深，腰痛酸软，五心烦热，口干咽痛，大使干结，头昏重痛，舌红少苔，脉细数。在总结中医治疗尿血证的历史经验的基础上，为该型确定了滋肾益气凉血，化瘀止血，利湿解毒的治法，并最终确定了该中药组合物的上述组成。
此外，中国专利数据库中涉及治疗肾炎的专利申请很多，但是治疗肾炎血尿的专利申请几乎没有，所涉及到的中药有黄芪、大黄、白茅根、丹参、茜草、白及、防已、茯苓、淮山药、雷公藤等数百种之多。常用的中成药主要有肾炎四味片、肾炎康复片、肾炎舒片等。中国专利“CN201110003208.5一种治疗肾炎血尿的中药组合物”公开了一种中药组合物，由下述物质组成：由活性成分和药学上可接受的辅料组成，其特征在于，所述的活性成分由女贞子3～9重量份、牛蒡子3～9重量份、墨旱莲3～9重量份、白茅根9～27重量份、马鞭草6～18重量份、白花蛇舌草6～12重量份、石韦6～12重量份、益母草12～24重量份、侧柏叶6～12重量份和紫草3～9重量份的原料药制成。本发明药物全方诸药相伍，共奏滋肾凉血、化瘀止血、解毒利湿之功。但是近年来方中益母草(孙晓倩.益母草总生物碱肾毒性研究与机制探讨[D].山东中医药大学,2017.)、白花蛇舌草(胡梦云,黄德红,付烊,莫天栩.白花蛇舌草致急性肾损伤1例[J].医药导报,2018,37(11):1424-1425.)屡有肾毒性等毒性报道。
发明内容
鉴于上述现有技术存在的缺陷，本发明的目的是提出一种治疗肾炎血尿的中药组合物及其制备方法和应用，以克服现有技术中的不良副作用。
本发明的目的将通过以下技术方案得以实现：
本发明的目的之一在于，提供一种治疗肾炎血尿的中药组合物，由活性成分和药学上可接受的辅料组成，所述活性成分由以下配比的原料药制成：
女贞子3～9重量份，牛蒡子3～9重量份，墨旱莲3～9重量份，白茅根9～27重量份，石韦6～12重量份，黄芪6～12重量份，胡枝子6～12重量份，凤尾草6～12重量份，侧柏叶6～12重量份和紫草3～9重量份。
进一步的，所述活性成分由以下配比的原料药制成：女贞子5～7重量份，牛蒡子5～7重量份，墨旱莲5～7重量份，白茅根15～20重量份，石韦8～10重量份，黄芪8～10重量份，胡枝子8～10重量份，凤尾草8～10重量份，侧柏叶8～10重量份和紫草5～7重量份。
进一步的，所述活性成分由以下配比的原料药制成：女贞子6重量份，牛蒡子6重量份，墨旱莲6重量份，白茅根18重量份，石韦9重量份，黄芪9重量份，胡枝子9重量份，凤尾草9重量份，侧柏叶9重量份和紫草6重量份。
本发明的另一个目的在于，提供一种治疗肾炎血尿的中药组合物的制备方法，包括以下步骤：
步骤1、将紫草粉碎成粗粉，按照渗漉法进行提取，收集渗漉液，回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1.30～1.35的稠膏，药渣备用；
步骤2、将女贞子、胡枝子用70％乙醇回流提取，合并乙醇提取液，放置过夜，过滤后的滤液回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1.30～1.35的稠膏，药渣备用；
步骤3、将其余原料药与步骤1的紫草药渣、步骤2的女贞子、胡枝子药渣合并，水煎提取，合并煎液，减压浓缩至相对密度为1.10，离心，取上清液，减压浓缩至相对密度为1.30～1.35的稠膏；
步骤4、将步骤1-3所得的稠膏合并，加入相当干膏粉约10％的β-CD，真空干燥，得到所述中药组合物的干膏粉；
上述相对密度是在55℃～60℃条件下测得。
进一步的，所述步骤1中，渗漉法的具体步骤为，在所述紫草粗粉中加入90％乙醇浸渍24小时后，加入10倍质量90％乙醇，进行渗漉，漉速为3ml/min·kg。
进一步的，所述步骤2中，将女贞子、胡枝子用70％乙醇回流提取二次，第一次加8倍质量70％乙醇，提取2.0小时，第二次加6倍质量70％乙醇，提取1.5小时。
进一步的，所述步骤3中，将其余原料药与步骤1的紫草药渣、步骤2的女贞子、胡枝子药渣合并，加水浸泡1.0小时，煎煮两次，第一次加12倍质量水，提取2.5小时，第二次加10倍质量水，提取2.0小时。
进一步的，所述步骤3中，以16000转/分管式离心。
进一步的，所述步骤4中，真空干燥的干燥温度为55℃～60℃，真空度为-0.07Mpa～-0.08Mpa。
本发明的另一个目的在于，上述的任意一种中药组合物在治疗肾炎血尿中的应用。
本发明的突出效果为：
本发明所述原料药中，以女贞子滋补肝肾、兼清虚热；墨旱莲补肾益阴、凉血止血，二者共为君药，具滋阴清热、凉血止血之功。黄芪补气升阳，利水消肿，生津养血，行滞通痹，托毒排脓；侧柏叶苦寒清热、涩能收敛，为清热凉血、收涩止血之品；石韦凉血止血、利尿通淋；紫草清热凉血、化瘀止血；四药助君药益气凉血止血、清热解毒、利尿消肿、活血化瘀之功，共为臣药。牛蒡子清热解毒；胡枝子润肺清热，利水通淋；凤尾草清热利湿，解毒止痢，凉血止血；白茅根清热利尿、凉血止血；四药共助君药解毒利湿、清热凉血、活血散瘀，为佐药。诸药共奏滋肾益气凉血，化瘀止血，利湿解毒之功，对肾炎血尿见肾阴不足、湿毒内蕴、瘀血阻络之尿血证最为适宜。本发明所述的药物组合物可用于肾阴不足，湿毒内蕴，灼伤血脉，瘀血阻络，血不归经，溢于脉外所致尿血证，见小便短少，色红或深，腰痛酸软，五心烦热，大便干结，口干咽痛，头昏重痛，舌红少苔，脉细数；或西医诊断为肾炎血尿见上述症状，属肾阴不足，湿毒内蕴，瘀血阻络者。
本发明的一种治疗肾炎血尿的中药组合物，具有滋肾益气凉血、化瘀止血、解毒利湿等功效，可用于治疗各类肾炎血尿，疗效显著，安全无毒，且制备方法简便，适合工业化生产。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
实施例1
1、处方：女贞子6g，墨旱莲6g，黄芪9g，牛蒡子6g，白茅根18g，胡枝子9g，凤尾草9g，石韦9g，侧柏叶9g，紫草6g。
2、制备方法：
a、将紫草粉碎成粗粉，照渗漉法，加90％乙醇，浸渍24小时后，加10倍质量90％乙醇，进行渗漉(漉速为3ml/min·kg)，收集渗漉液，回收乙醇，减压浓缩至相对密度约为1.30～1.35(55℃～60℃测)的稠膏，药渣备用；
b、将女贞子、胡枝子用70％的乙醇回流提取二次，第一次加8倍质量70％乙醇，提取2.0小时，第二次加6倍质量70％乙醇，提取1.5小时，合并醇提取液，放置过夜，滤过，滤液回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1.30～1.35(55℃～60℃测)的稠膏，药渣备用；
c、将牛蒡子等七味药材与紫草药渣、女贞子和胡枝子药渣合并，加水浸泡1.0小时，煎煮两次，第一次加12倍质量水，提取2.5小时，第二次加10倍质量水，提取2.0小时，合并煎液，减压浓缩至相对密度为1.10(55℃～60℃测),以16000转/分管式离心，取上清液，减压浓缩至相对密度为1.30～1.35(55℃～60℃测)的稠膏；
d、将步骤a、b和c所得稠膏合并，加入相当干膏粉约10％的β-CD，真空干燥(干燥温度为55℃～60℃，真空度为－0.07～－0.08Mpa)得干膏粉。
e、将步骤d的干膏粉加入相当干膏粉重量20％的糊精混匀，用95％乙醇制粒，干燥，整粒，装袋，即制备成颗粒剂。
3、服用方法：口服，一次5g，一日3次。
实施例2
1、处方：女贞子6g，墨旱莲6g，黄芪9g，牛蒡子6g，白茅根18g，胡枝子9g，凤尾草9g，石韦9g，侧柏叶9g，紫草6g。
2、制备方法：
a、将紫草粉碎成粗粉，照渗漉法，加90％乙醇，浸渍24小时后，加10倍质量90％乙醇，进行渗漉(漉速为3ml/min·kg)，收集渗漉液，回收乙醇，减压浓缩至相对密度约为1.30～1.35(55℃～60℃测)的稠膏，药渣备用；
b、将女贞子、胡枝子用70％的乙醇回流提取二次，第一次加8倍质量70％乙醇，提取2.0小时，第二次加6倍质量70％乙醇，提取1.5小时，合并醇提取液，放置过夜，滤过，滤液回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1.30～1.35(55℃～60℃测)的稠膏，药渣备用；
c、将牛蒡子等七味药材与紫草药渣、女贞子和胡枝子药渣合并，加水浸泡1.0小时，煎煮两次，第一次加12倍质量水，提取2.5小时，第二次加10倍质量水，提取2.0小时，合并煎液，减压浓缩至相对密度为1.10(55℃～60℃测),以16000转/分管式离心，取上清液，减压浓缩至相对密度为1.30～1.35(55℃～60℃测)的稠膏；
d、将步骤a、b和c所得稠膏合并，加入相当干膏粉约10％的β-CD，真空干燥(干燥温度为55℃～60℃，真空度为－0.07～－0.08Mpa)得干膏粉。
e、将步骤d的干膏粉加入相当干膏粉重量10％的预胶化淀粉，混匀，用95％乙醇制粒，干燥，再加入制得颗粒重量0.5％的硬脂酸镁混匀，压片，包薄膜衣，即制备成片剂。
3、服用方法：口服，一次5片，一日3次。
实施例3
1、处方：女贞子6g，墨旱莲6g，黄芪9g，牛蒡子6g，白茅根18g，胡枝子9g，凤尾草9g，石韦9g，侧柏叶9g，紫草6g。
2、制备方法：
a、将紫草粉碎成粗粉，照渗漉法，加90％乙醇，浸渍24小时后，加10倍质量90％乙醇，进行渗漉(漉速为3ml/min·kg)，收集渗漉液，回收乙醇，减压浓缩至相对密度约为1.30～1.35(55℃～60℃测)的稠膏，药渣备用；
b、将女贞子、胡枝子用70％的乙醇回流提取二次，第一次加8倍质量70％乙醇，提取2.0小时，第二次加6倍质量70％乙醇，提取1.5小时，合并醇提取液，放置过夜，滤过，滤液回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1.30～1.35(55℃～60℃测)的稠膏，药渣备用；
c、将牛蒡子等七味药材与紫草药渣、女贞子和胡枝子药渣合并，加水浸泡1.0小时，煎煮两次，第一次加12倍质量水，提取2.5小时，第二次加10倍质量水，提取2.0小时，合并煎液，减压浓缩至相对密度为1.10(55℃～60℃测),以16000转/分管式离心，取上清液，减压浓缩至相对密度为1.30～1.35(55℃～60℃测)的稠膏；
d、将步骤a、b和c所得稠膏合并，加入相当干膏粉约10％的β-CD，真空干燥(干燥温度为55℃～60℃，真空度为－0.07～－0.08Mpa)得干膏粉。
e、将步骤d的干膏粉加入相当干膏粉重量10％的预胶化淀粉，混匀，用95％乙醇制粒，干燥，装胶囊，即制备成胶囊剂。
3、服用方法：口服，一次5粒，一日3次。
实施例4
1、处方：女贞子9g，墨旱莲9g，黄芪12g，牛蒡子3g，白茅根9g，胡枝子8g，凤尾草12g，石韦7g，侧柏叶6g，紫草9g。
2、制备方法：
a、将紫草粉碎成粗粉，照渗漉法，加90％乙醇，浸渍24小时后，加10倍质量90％乙醇，进行渗漉(漉速为3ml/min·kg)，收集渗漉液，回收乙醇，减压浓缩至相对密度约为1.30～1.35(55℃～60℃测)的稠膏，药渣备用；
b、将女贞子、胡枝子用70％的乙醇回流提取二次，第一次加8倍质量70％乙醇，提取2.0小时，第二次加6倍质量70％乙醇，提取1.5小时，合并醇提取液，放置过夜，滤过，滤液回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1.30～1.35(55℃～60℃测)的稠膏，药渣备用；
c、将牛蒡子等七味药材与紫草药渣、女贞子和胡枝子药渣合并，加水浸泡1.0小时，煎煮两次，第一次加12倍质量水，提取2.5小时，第二次加10倍质量水，提取2.0小时，合并煎液，减压浓缩至相对密度为1.10(55℃～60℃测),以16000转/分管式离心，取上清液，减压浓缩至相对密度为1.30～1.35(55℃～60℃测)的稠膏；
d、将步骤a、b和c所得稠膏合并，加入相当干膏粉约10％的β-CD，真空干燥(干燥温度为55℃～60℃，真空度为－0.07～－0.08Mpa)得干膏粉。
e、将步骤d的干膏粉加入相当干膏粉重量20％的糊精混匀，用95％乙醇制粒，干燥，整粒，装袋，即制备成颗粒剂。
3、服用方法：口服，一次5g，一日3次。
实施例5
1、处方：女贞子6g，墨旱莲3g，黄芪10g，牛蒡子3g，白茅根27g，胡枝子10g，凤尾草6g，石韦12g，侧柏叶12g，紫草3g。
2、制备方法：
a、将紫草粉碎成粗粉，照渗漉法，加90％乙醇，浸渍24小时后，加10倍质量90％乙醇，进行渗漉(漉速为3ml/min·kg)，收集渗漉液，回收乙醇，减压浓缩至相对密度约为1.30～1.35(55℃～60℃测)的稠膏，药渣备用；
b、将女贞子、胡枝子用70％的乙醇回流提取二次，第一次加8倍质量70％乙醇，提取2.0小时，第二次加6倍质量70％乙醇，提取1.5小时，合并醇提取液，放置过夜，滤过，滤液回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1.30～1.35(55℃～60℃测)的稠膏，药渣备用；
c、将牛蒡子等七味药材与紫草药渣、女贞子和胡枝子药渣合并，加水浸泡1.0小时，煎煮两次，第一次加12倍质量水，提取2.5小时，第二次加10倍质量水，提取2.0小时，合并煎液，减压浓缩至相对密度为1.10(55℃～60℃测),以16000转/分管式离心，取上清液，减压浓缩至相对密度为1.30～1.35(55℃～60℃测)的稠膏；
d、将步骤a、b和c所得稠膏合并，加入相当干膏粉约10％的β-CD，真空干燥(干燥温度为55℃～60℃，真空度为－0.07～－0.08Mpa)得干膏粉。
e、将步骤d的干膏粉加入相当干膏粉重量10％的预胶化淀粉，混匀，用95％乙醇制粒，干燥，再加入制得颗粒重量0.5％的硬脂酸镁混匀，压片，包薄膜衣，即制备成片剂。
3、服用方法：口服，一次5片，一日3次。
实施例6
1、处方：女贞子3g，墨旱莲9g，黄芪6g，牛蒡子9g，白茅根20g，胡枝子8g，凤尾草11g，石韦6g，侧柏叶12g，紫草6g。
2、制备方法：
a、将紫草粉碎成粗粉，照渗漉法，加90％乙醇，浸渍24小时后，加10倍质量90％乙醇，进行渗漉(漉速为3ml/min·kg)，收集渗漉液，回收乙醇，减压浓缩至相对密度约为1.30～1.35(55℃～60℃测)的稠膏，药渣备用；
b、将女贞子、胡枝子用70％的乙醇回流提取二次，第一次加8倍质量70％乙醇，提取2.0小时，第二次加6倍质量70％乙醇，提取1.5小时，合并醇提取液，放置过夜，滤过，滤液回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1.30～1.35(55℃～60℃测)的稠膏，药渣备用；
c、将牛蒡子等七味药材与紫草药渣、女贞子和胡枝子药渣合并，加水浸泡1.0小时，煎煮两次，第一次加12倍质量水，提取2.5小时，第二次加10倍质量水，提取2.0小时，合并煎液，减压浓缩至相对密度为1.10(55℃～60℃测),以16000转/分管式离心，取上清液，减压浓缩至相对密度为1.30～1.35(55℃～60℃测)的稠膏；
d、将步骤a、b和c所得稠膏合并，加入相当干膏粉约10％的β-CD，真空干燥(干燥温度为55℃～60℃，真空度为－0.07～－0.08Mpa)得干膏粉。
e、将步骤d的干膏粉加入相当干膏粉重量10％的预胶化淀粉，混匀，用95％乙醇制粒，干燥，装胶囊，即制备成胶囊剂。
3、服用方法：口服，一次5粒，一日3次。
实验例
下面将通过动物实验来证明本发明具有的技术效果。
一、对葡萄球菌肠毒素诱发的大鼠免疫复合型肾炎IgA肾病的药效观察
1、实验对象：普通级Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠84只，体重160-220g，随机分为7组，每组12只，其分别为空白对照组(正常组)、模型对照组、肾炎四味片阳性对照组、专利对照组(邓虹珠，易延逵.一种治疗肾炎血尿的中药组合物：中国，CN102048975A[P].2012-02-01.)及药物实施例1低、中、高剂量组。
病理模型的建立：
除空白对照组外，各组隔日口服含0.1％牛血清白蛋白(BSA)的酸化水，第6周起定期尾静脉注射含1％BSA2mmol/L PBS缓冲液1ml(每日1次，连续3次，第8周起定期复加尾静脉注射SEB，每周1次，连续3周，剂量分别为0.4、0.5、0.6mg/kg，然后观察至第12周末。
2、受试药品：
受试药品1(药物组)：为下述实施例1的颗粒剂。
受试药品2(专利对照组)：为专利CN102048975A中下述实施例1的颗粒剂。
受试药品3(肾炎四味片组)：为市售的肾炎四味片。
3、观察项目及测定方法
3.1尿液检查
3.1.1尿蛋白定性：试纸法；全自动生化分析仪。
3.1.2血尿测定：定期晨起膀胱区压迫取尿，涂片在光镜下观察血尿情况。
3.2肾功能检查
3.2.1血肌酐(Scr)测定：Corning全自动生化分析仪。
3.2.2尿素氮(BUN)测定，同上。
3.3血清IgA、IgG和IgM测定：采用放免法。
4、受试药品的分配方法：
药物组1给受试药品1低剂量，药物组2给受试药品1中剂量，药物组3给受试药品1高剂量，2个对照组给受试药品2和3。上述分别按人用剂量换算(采用通用的剂量换算方法，具体参见：陈奇.中药药理研究方法学.北京：人民卫生出版社[M].2006：116)为大鼠用剂量加适量水溶解灌胃使用。模型对照组及各给药组按上述方法造模，各组动物在实验过程中自由饮用0.1％BSA酸化水，空白及模型对照组大鼠在实验第8周起，每日灌服生理盐水，其它4组灌服阳性对照药及受试药物，每日1次，连续4周。
5、实验方法：
5.1一般情况
对各组动物一般情况进行了观察。静脉注射1％BSA缓冲液后，各组大鼠均有不同程度的精神萎靡、厌食等表现，经2－3天后基本恢复正常，但在静脉注射SEB后，病理组大部分大鼠出现拱背、竖毛、食量减少、体重减轻等表现。治疗组上述表现较模型对照组轻，而空白对照大鼠饮食、活动、状态良好。体重造模后有所下降，至12周时，模型组与正常组比较有显著性差异(P<0.05)；肾炎四味片组、专利组及药物低、中、高剂量组与模型组比较有显著性差异(P<0.05)；专利组及药物低、中、高剂量组与肾炎四味片组比较有增加体重趋势；药物低、中、高剂量组与专利组比较有增加体重趋势。各组大鼠体重见表1。
表1各组大鼠体重变化(x±s，n＝10)
与正常组比较△P<0.05；与模型组比较*P<0.05
4.2尿红细胞及尿蛋白定量测定
实验第12周，除空白对照组，各组动物出现血尿与蛋白尿，表明造模成功。尿红细胞指标中，除肾炎四味片组外，各组与模型组比较有极显著性差异(P<0.01)，肾炎四味片组与模型组比较有降低趋势，尿蛋白指标中，各组与模型组比较有极显著性差异(P<0.01)；尿红细胞指标中，药物高剂量组与肾炎四味片组比较有显著性差异(P<0.05)，药物各组与专利组比较有降低趋势，尿蛋白指标中，药物中、高剂量组与专利组比较有显著性差异(P<0.05)，药物低剂量组与专利组比较有明显降低趋势，药物组与肾炎四味片组比较有降低趋势。结果见表2。
表2中药组合物对对IgA肾病大鼠尿红细胞、蛋白的影响
与正常组比较，△，△△P＜0.05，0.01；与模型组比较，*，**P＜0.05，0.01；与肾炎四味片组比较，□P<0.05；与专利组比较，#P<0.05
4.3血清IgA、IgG和IgM测定
模型组的血清IgA、IgG和IgM明显高于正常组(p<0.01)；IgA、IgG指标中，肾炎四味片组与模型组比较有显著性差异(P<0.05)，专利组和药物各组与模型组比较有极显著性差异(P<0.01)；IgM指标中，肾炎四味片组、专利组与模型组比较有显著性差异(P<0.05)，药物各组与模型组比较有极显著性差异(P<0.01)；各指标药物各组与肾炎四味片组和专利组比较有降低趋势。结果见表3。
表3中药组合物对IgA肾病大鼠血清IgA、IgG和IgM的影响
与正常组比较，△，△△P<0.05，0.01；与模型组比较，*，**P<0.05，0.01；与肾炎四味片组比较，□P<0.05；与专利组比较，#P<0.05
4.4肾功能(Bun、Scr)测定
各组肾功能测定结果见表4。如表所示模型组和各给药组的Bun、Scr均高于空白对照组。BUN指标中，各组与模型组比较有显著性差异(P<0.05)；Scr指标中，肾炎四味片组、专利组与模型组比较有显著性差异(P<0.05)，药物各组与模型组比较有极显著性差异(P<0.01)；各指标药物各组与肾炎四味片组和专利组比较有降低趋势。
表4中药组合物对IgA肾病大鼠肾功能的影响
与正常组比较，△，△△P<0.05，0.01；与模型组比较，*，**P<0.05，0.01；
与肾炎四味片组比较，□P<0.05；与专利组比较，#P<0.05
本实验结果表明：该中药组合物能明显改善IgA肾病大鼠的症状，使IgA肾病大鼠的活动、外观更接近正常大鼠且体重增长较模型组快；使血尿和尿蛋白明显低于模型对照组；对肾功能改善作用，降低Bun、Scr；降低IgA、IgG、IgM的含量，说明该中药组合物对葡萄球菌肠毒素诱发的大鼠IgA肾病有治疗作用。同时跟对照组肾炎四味片组和专利组比较，各指标都有改善趋势，尤其尿红细胞指标中，中药组合物高剂量组与肾炎四味片组比较有显著性差异(P<0.05)，尿蛋白指标中，中药组合物中、高剂量组与专利组比较有显著性差异(P<0.05)，说明中药组合物在降低尿蛋白和改善尿血症状方面有突出的功效。
二、中药组合物对大鼠系膜增生性肾小球肾炎的影响
1、实验对象：普通级Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠84只，体重160-220g，随机分为7组，每组12只，其分别为空白对照组、模型对照组、肾炎四味片阳性对照组、专利对照组(邓虹珠，易延逵.一种治疗肾炎血尿的中药组合物：中国，CN102048975A[P].2012-02-01.)及药物1、2、3剂量组。
病理模型的建立：
大鼠胸腺细胞免疫抗原液的制备：常规摘取1周龄SD大鼠胸腺，去除其表面的淋巴结和血管后，置200目不锈钢网筛上，用解剖针轻轻划破胸腺游离出胸腺细胞，并随时用PBS冲冼，收集胸腺细胞悬液，经1000r/min，离心10min后得胸腺细胞沉淀块，重新用PBS悬浮至1×108～2×108个细胞/ml，然后按1:2(v/v)比例混合胸腺细胞悬液和福氏完全佐剂，充分混匀制成大鼠胸腺细胞免疫抗原液。抗大鼠胸腺细胞血清的制备：将含有5×107个胸腺细胞的福氏完全佐剂背部皮下多奌注射于大白兔2～3周后，耳静脉注射1×107个胸腺细胞，7d后收集兔血清，用免疫扩散法测抗胸腺细胞血清效价为1:32，抗胸腺细胞血清(ATS)于56℃，30min灭活后，分别用同个体大鼠红细胞和肝细胞膜吸附以去除非特异性抗体。红细胞吸附试验：按1:1比例混合红细胞和ATS，吸附后离心1次，然后，按比例混和红细胞和ATS，同上述吸附离心，并重复此过程至红细胞不凝集，肝细胞膜吸附实验：按比例混合肝细胞膜和ATS，37℃吸附30min后离心，重复吸附2次，分装所得ATS，－20℃保存备用。
系膜增殖性肾炎模型的制备：除空白对照组外，各组实验前经尿蛋白检测均为阳性。一次性尾静脉注射ATS，1ml/100g体重。空白对照组注射同体积的PBS。
2、受试药品：
受试药品1(药物组)：为下述实施例1的颗粒剂。
受试药品2(专利对照组)：为专利CN102048975A中下述实施例1的颗粒剂。
受试药品3(肾炎四味片组)：为市售的肾炎四味片。
3、观察项目及测定方法
2.1 尿蛋白定量测定
2.2 尿潜血测定
2.3血液生化指标测定：血清白蛋白(ALB)、血清尿素氮(BUN)、血清肌酐(Scr)
2.4血液流变学测定，采用R80全血粘度仪测定。
4、受试药品的分配方法：
药物组1给受试药品1低剂量，药物组2给受试药品1中剂量，药物组3给受试药品1高剂量，2个对照组给受试药品2和3。上述分别按人用剂量换算(采用通用的剂量换算方法，具体参见：陈奇.中药药理研究方法学.北京：人民卫生出版社[M].2006：116)为大鼠用剂量加适量水溶解灌胃使用。模型对照组及各给药组按上述方法造模，各组动物在实验过程中自由饮用0.1％BSA酸化水，于造模当日空白对照和模型对照组灌服生理盐水，其它5组灌服对照药及受试药物，每日1次，连续2周。
5、实验方法：
5.1中药组合物对膜性肾炎大鼠尿蛋白、红细胞的影响
造模型2周后，模型组大鼠出现尿蛋白与尿红细胞，与正常对照组比较，有非常显著差异。尿红细胞指标中，除肾炎四味片组外，各组与模型组比较有极显著性差异(P<0.01)，肾炎四味片组与模型组比较有降低趋势，尿蛋白指标中，各组与模型组比较有极显著性差异(P<0.01)；尿红细胞指标中，专利组、药物各剂量组与肾炎四味片组比较有显著性差异(P<0.05)，尿蛋白指标中，药物中、高剂量组与肾炎四味片组、专利组比较有显著性差异(P<0.05)，药物低剂量组与肾炎四味片组、专利组比较有明显降低趋势。结果见表5。
表5中药组合物对膜性肾炎大鼠尿蛋白、红细胞的影响(x±S)
与正常组比较，△，△△P＜0.05，0.01；与模型组比较，*，**P＜0.05，0.01；与肾炎四味片组比较，□P<0.05；与专利组比较，#P<0.05
5.2血BUN、Scr的测定
造模2周后，模型组BUN、Scr明显高于正常对照组，给药各组的BUN、Scr有不同程度降低，效果明显；BUN、Scr指标中，各组与模型组比较有极显著性差异(P<0.01)，各指标药物各组与肾炎四味片组和专利组比较有降低趋势。结果见表6。
表6中药组合物对膜性肾炎大鼠BUN、Scr的影响
与正常组比较，△，△△P<0.05，0.01；与模型组比较，*，**P<0.05，0.01；与肾炎四味片组比较，□P<0.05；与专利组比较，#P<0.05
5.3血清白蛋白的测定
结果见表7。模型组ALB值明显低于正常对照组，给药各组的BUN、Scr有不同程度升高，效果明显；各组与模型组比较有极显著性差异(P<0.01)。
表7中药组合物对对膜性肾炎大鼠血清ALB的影响
与正常组比较，△，△△P<0.05，0.01；与模型组比较，*，**P<0.05，0.01；与肾炎四味片组比较，□P<0.05；与专利组比较，#P<0.05
5.4血液流变学指标测定
结果见表8。模型组全血粘度各指标、血浆粘度明显高于正常对照组，给药各组的全血粘度各指标、血浆粘度有不同程度降低，效果明显；全血粘度各指标、血浆粘度指标中，各组与模型组比较，全血粘度(50s-1)有极显著性差异(P<0.01)，其余各指标有显著性差异(P<0.05)；各指标药物各组与肾炎四味片组和专利组比较有降低趋势。
表8中药组合物对膜性肾炎大鼠血液流变学的影响(x±s，n＝10)
与正常组比较，△，△△P<0.05，0.01；与模型组比较，*，**P<0.05，0.01；
与肾炎四味片组比较，□P<0.05；与专利组比较，#P<0.05
由上可见本发明所述的药物能明显减少抗胸腺细胞诱发的系膜增殖性肾炎模型大鼠24小时尿中蛋白量及红细胞数，并能提高血清白蛋白含量；降低BUN、Scr水平；降低模型大鼠全血高低切粘度和血浆粘度。以上结果说明该中药组合物能减轻膜性肾炎大鼠肾小球及系膜基质病变，稳定并改善肾功能。同时本发明所述的药物使IgA肾病大鼠的活动、外观更接近正常大鼠且体重长快；能明显减少模型大鼠24小时蛋白含量及红细胞数，特别是在实验第12周更为显著；给药4周降低BUN、Scr；降低血清IgA、IgG、IgM的含量。同时跟对照组肾炎四味片组和专利组比较，各指标都有改善趋势，尤其尿红细胞指标中，中药组合物各剂量组与肾炎四味片组比较有显著性差异(P<0.05)，尿蛋白指标中，中药组合物中、高剂量组与专利组比较有显著性差异(P<0.05)，说明中药组合物在降低尿蛋白和改善尿血症状方面有突出的功效。以上实验结果为临床治疗IgA肾炎血尿提供良好的药效学基础。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种治疗肾炎血尿的中药组合物，由活性成分和药学上可接受的辅料组成，其特征在于，所述活性成分由以下配比的原料药制成：
女贞子3～9重量份，牛蒡子3～9重量份，墨旱莲3～9重量份，白茅根9～27重量份，石韦6～12重量份，黄芪6～12重量份，胡枝子6～12重量份，凤尾草6～12重量份，侧柏叶6～12重量份和紫草3～9重量份。
2.如权利要求1所述的一种治疗肾炎血尿的中药组合物，其特征在于：所述活性成分由以下配比的原料药制成：女贞子5～7重量份，牛蒡子5～7重量份，墨旱莲5～7重量份，白茅根15～20重量份，石韦8～10重量份，黄芪8～10重量份，胡枝子8～10重量份，凤尾草8～10重量份，侧柏叶8～10重量份和紫草5～7重量份。
3.如权利要求1所述的一种治疗肾炎血尿的中药组合物，其特征在于：所述活性成分由以下配比的原料药制成：女贞子6重量份，牛蒡子6重量份，墨旱莲6重量份，白茅根18重量份，石韦9重量份，黄芪9重量份，胡枝子9重量份，凤尾草9重量份，侧柏叶9重量份和紫草6重量份。
4.如权利要求1-3任意一项所述的一种治疗肾炎血尿的中药组合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
步骤1、将紫草粉碎成粗粉，按照渗漉法进行提取，收集渗漉液，回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1.30～1.35的稠膏，药渣备用；
步骤2、将女贞子、胡枝子用70％乙醇回流提取，合并乙醇提取液，放置过夜，过滤后的滤液回收乙醇，减压浓缩至相对密度为1.30～1.35的稠膏，药渣备用；
步骤3、将其余原料药与步骤1的紫草药渣、步骤2的女贞子、胡枝子药渣合并，水煎提取，合并煎液，减压浓缩至相对密度为1.10，离心，取上清液，减压浓缩至相对密度为1.30～1.35的稠膏；
步骤4、将步骤1-3所得的稠膏合并，加入相当干膏粉10％的β-CD，真空干燥，得到所述中药组合物的干膏粉；
上述相对密度是在55℃～60℃条件下测得。
5.如权利要求4所述的一种治疗肾炎血尿的中药组合物的制备方法，其特征在于：所述步骤1中，渗漉法的具体步骤为，在所述紫草粗粉中加入90％乙醇浸渍24小时后，加入10倍质量90％乙醇，进行渗漉，漉速为3ml/min·kg。
6.如权利要求4所述的一种治疗肾炎血尿的中药组合物的制备方法，其特征在于：所述步骤2中，将女贞子、胡枝子用70％乙醇回流提取二次，第一次加8倍质量70％乙醇，提取2.0小时，第二次加6倍质量70％乙醇，提取1.5小时。
7.如权利要求4所述的一种治疗肾炎血尿的中药组合物的制备方法，其特征在于：所述步骤3中，将其余原料药与步骤1的紫草药渣、步骤2的女贞子、胡枝子药渣合并，加水浸泡1.0小时，煎煮两次，第一次加12倍质量水，提取2.5小时，第二次加10倍质量水，提取2.0小时。
8.如权利要求4所述的一种治疗肾炎血尿的中药组合物的制备方法，其特征在于：所述步骤3中，以16000转/分管式离心。
9.如权利要求4所述的一种治疗肾炎血尿的中药组合物的制备方法，其特征在于：所述步骤4中，真空干燥的干燥温度为55℃～60℃，真空度为-0.07Mpa～-0.08Mpa。
10.如权利要求1-3任意一项所述的一种治疗肾炎血尿的中药组合物在制备治疗肾炎血尿药物中的应用。
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